Name: collection and long-term maintenance of leaf-cutting ants (atta) in laboratory conditions
Uploaded: 2022-08-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants Atta in Laboratory Conditions at JoVE.com

Mario Autuori (anısına) ve Walter Hugo de Andrade Cunha'ya adanmıştır ve yaprak kesme karınca çalışmalarına büyük katkıda bulunmuştur. São Paulo Eyalet Üniversitesi ve Biyoloji Bilimleri Enstitüsü'nün desteğini kabul ediyoruz. Bu çalışma kısmen Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) - Finance Code 001, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) ve Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (Fundunesp) tarafından finanse edilmiştir.

1. Kraliçelerin toplanması
<ol><li>İlgilenilen bölgede Atta üreme mevsimi dönemi için literatürde arama yapın. Evlilik uçuşlarının üreme mevsimi oluşumu, sıklığı ve gündüz saatleri, bölgesel iklim koşullarına göre değişmektedir (Tablo 1). Genellikle ilkbaharda gerçekleşmekle birlikte, bu bilgilerin toplamanın gerçekleşmesi amaçlanan yer için toplanması gerekir 37,38,39,40,41,42,43,44,45,46....

Yaprak kesen karınca kolonilerini korumak için burada açıklanan protokol, otuz yılı aşkın bir süredir iddialı ve tekrarlanabilir bir şekilde geliştirilmiş ve uygulanmıştır. Saha koşullarıyla sınırlı olacak araştırmaların geliştirilmesine izin verdi. Böylece, sağlıklı karıncalar ve koloniler, bireysel ve koloni düzeyinde karşılaştırmalı morfoloji, toksikoloji51,52, histoloji 53 ve mikrobiyoloji54,55,56<su...

Karıncalar, çoğu karasal ortam üzerinde etkisi olan çeşitli bir grup birey oluşturur1. Verimli dağıtıcılar 2,3,4, avcılar5 ve ekosistem mühendisleri 6,7,8,9,10 olarak hareket ederler ve doğal ekosistemler üzerindeki önemlerini ve ekolojik başarılarını vurgularlar. Tüm karınca türleri eusosyal böcekler olarak sınıflandırılır; Bununla birlikte, toplumsal örgütlenmeleri farklı tür grupları arasında, yani iş bölümü sistemleri, işlevsel gruplar, bireyler arasındaki iletişim, yem örgütlenmesi, koloni temeli ve üreme süreci arasında büyük farklılıklar gösterir11. Çok çeşitli bir grup olarak, çeşitli gıda kaynaklarına ve özel beslenme davranışlarına başvururlar. Nitekim, tarım sadece insan uygarlığı için değil, aynı zamanda karınca türleri için de büyük bir adımdı. Yaklaşık 55 ila 65 Ma önce12, attine karıncaları mantarları kültürlemeye ve onları neredeyse özel bir diyete dahil etmeye başladı. O kadar uzmanlaştılar ki, bir bireyin diğeri olmadan hayatta kalamayacağı simbiyoz olarak sınıflandırılan katı, bağımlı ve zorunlu etkileşimler geliştirdiler.
Düşük mantar yetiştiriciliği yapan karıncalar, karşılıklı mantarlarını büyütmek için çürüyen yaprak parçaları gibi ölü organik maddeleri toplar ve işler; daha yüksek mantar yetiştiren karıncalar taze bitki materyali toplarken, en başarılı simbiyotik doğal sistemlerden birini oluşturur13. Bu son derece uzmanlaşmış tarım tekniği, yeni bir niş yakalamalarına izin verdi. Daha yüksek attinli karıncalar, dört geçerli cinsten oluşan 19 Ma (15-24 Ma) ve 18 Ma (14-22 Ma)14,15,16 arasında uyanan monofiletik bir grup olan yaprak kesici karıncaları içerir: Atta Fabricius, Acromyrmex Mayr, Amoimyrmex Cristiano ve Pseudoatta Gallardo. Yaprak kesici karıncalar tarafından gerçekleştirilen yaprak kesici tarım sistemi, türetilmiş tarım sistemlerinden evrimleşmiştir17. Bu türlerin çoğu, yalnızca karşılıklı mantar türleri Leucoagaricus gongylophorus Singer18'den (Leucocoprinus gongylophorus Heim 19 olarak da adlandırılır) yararlanır ve önemli bir evrimsel geçişe işaret eder 11. Mantar çeşitleri, orijinal yuvalardan yavrulara dikey olarak iletilir, bu da klonal olarak yayıldıklarını düşündürür20.
Dikkat çekici bir şekilde, Atta toplumları, çevrelerinde muazzam öneme sahip ve mirmekologlar için büyük ilgi gören karmaşık bir organizasyon yapısı geliştirdiler. Nüfusları, çoğu vurgulanmış bir polimorfizm, yani farklı boyut ve anatomik morfoloji sergileyen steril kadın işçiler olan milyonlarca kişiden oluşabilir. Popülasyon, yaş, fizyolojik durum, morfolojik tip, davranışlar ve kolonideki uzmanlaşmış faaliyetlere göre kastlarla ayırt edilir21. İşçiler bahçıvanlara ve hemşirelere, yuva içi genelcilere, toplayıcılara ve ekskavatörlere ve savunuculara veya askerlere ayrımcılığa uğrayabilir21. Bu organizasyon, görevlerin işbirliği içinde yerine getirilmesine ve son derece yapılandırılmış kolektif davranışlar üretebilen, çevresel rahatsızlıklara verimli bir şekilde yanıt vermelerini sağlayan kendi kendini organize eden bir sisteme izin verir22.
Nüfusun yenilenmesinin rolü, yaşadığı sürece tek bir kraliçe (yani tek eşli) tarafından oynanır ve kalıcı üreme kastını oluşturur22. Atta kraliçelerinin 20 yıldan fazla yaşadıkları ve ömürleri boyunca yumurta bıraktıkları bilinmektedir23. Kraliçenin yeri doldurulamaz olduğundan, dayanıklılığı koloninin hayatta kalması için çok önemlidir 13,20,23,24. Yine de, üreme mevsimlerinde yuvada binlerce kanatlı üreme dişi ve erkek bulunabilir, ancak hiçbiri orijinal yuvada kalmaz ve geçici bir kastoluşturur 22. Atta sexdens kolonilerinde, yaklaşık 3.000 üreme dişi ve 14.000 üreme erkeği25 üretilir. Bir koloni cinsel olgunluğa ulaştığında, uygulanmasından yaklaşık 38 ay sonra ortaya çıkar ve söndürülene kadar her yıl tekrarlanır23,25. Yeni Atta kolonileri, bir kraliçenin yeni bir yuvaya başladığı haplometroz yoluyla kurulur.
Çevresel koşullar uygun olduğunda, reprodüktörler evlilik uçuşuna başlamak için yeraltı yuvasını terk ederler. Oluşum dönemi, türlere bağlı olarak Brezilya toprakları boyunca yıl boyunca değişen bölgeye göre farklılık gösterir. Bununla birlikte, olaydan önce yağışlar ve nem yüksekliği26 gibi görünmektedir, bu da toprak nemi22 nedeniyle kazı kolaylaştırma ile ilişkili olabilir. Sıklıkla, evlilik uçuşundan 1-5 hafta önce, üreme bireylerinin ayrılmasını kolaylaştırmak için yuva girişleri ve kanalları genişletilir. Ana kolonilerini terk etmeden önce, kanatlı dişiler, karşılıklı mantarın bir kısmını toplar ve depolar20,27. Uçuş ortasında çoklu çiftleşmeler yapılır ve bir kraliçenin bazı türlerde üç ila sekiz erkek (yani poliandri) tarafından döllenebileceği hesaplanır28, genetik değişkenlik sağlar29. Daha sonra, kraliçeler toprağa ilerler ve kanatlarını çıkardıkları ve ilk yuva odalarını kazdıkları25 bitki örtüsü olmayan veya az olan yerleri tercih ederler. Bu, kraliçelerin yuvanın dışında görülebileceği tek dönemdir. Geçici kastın bireyleri yapay yuvalarda görülmüş olsa da, laboratuvar koşullarında başarılı bir çiftleşme (yani evlilik uçuşu) yapılıp yapılmadığı bilinmemektedir24.
İlk yuva yapısı, koloninin 6 saatten 8 saate kadar23,25 saat sürebilen en önemli dönemine karşılık gelir. Şu anda, kraliçe ilk odada kendini kapatır ve birkaç gün içinde yumurtlama başlar. İlk yumurtalar, kraliçenin yetersizlik yaptığı miselile beslenir ve koloninin mantar bahçesinin başlangıcını işaretler. İlk larvalar yaklaşık 25 gün22'de ortaya çıkar ve neredeyse ilk ayın sonunda, koloni, olgunlaşmamışların (yumurtalar, larvalar ve pupalar) yuvalandığı çoğalan bir mantar paspasından ve ilk yavrularını izole olarak yetiştiren kraliçeden oluşur23. Yumurtalar aynı zamanda ilk larvaların besin kaynağıdır ve kraliçe13 tarafından çok tüketilir. Ek olarak, kraliçe kendini yağ gövdesi rezervleri ve artık kullanılmayan kanat kaslarını katabolize ederek sürdürür13. İlk mantar kültürü, koloninin hayatta kalması gelişimine bağlı olduğu için tüketilmez ve bu süre zarfında kraliçe onu dışkı sıvısı13 ile döllenir. Ortaya çıktıktan günler sonra, ilk işçiler yuva girişini açar ve yuvanın13'ün hemen yakınında bir yiyecek arama faaliyetine başlar. Mantar bahçesinin substratı olarak toplanan malzemeyi içeriyorlar, bu da şimdi işçiler için yiyecek olarak hizmet veriyor13,22. Mantar kültürüne eklenmeden önce, işçiler tarafından taşınan bitki materyali küçük parçalar halinde kesilir ve dışkı sıvısı13 ile nemlendirilir. Karıncalar, büyümesini arttırmak ve kontrol etmek için mantar inokulumunu manipüle eder, bu da bahçenin 13,22,25 şartlandırılmasında uzmanlaşmış büyük toprak kazılmış odaların bölünmesine hizmet edecektir.
Evlilik uçuşundan yaklaşık 6 ay sonra, A. sexdens yuvaları bir mantar odası ve birkaç kanal içerir. Yaprak kesen karınca yuvalarının yapımındaki büyük uzmanlık, doğal düşmanlara ve olumsuz çevresel faktörlere karşı bir savunma mekanizması olarak çalışır22. Yaprak kesen karıncaların mantar bahçesini parçaladığı ve odalar kurumaya başladığında yüksek neme sahip odalara aktardığı bilinmektedir13. Böylece, yuvanın kazılmasına rağmen, önemli bir enerji maliyetine sahip olmasına rağmen, yatırılan enerji koloninin kendisi için faydalar olarak tersine çevrilir22. Birkaç istisna dışında, Atta türleri ayrıca koloninin atıkları için, çoğunlukla tükenmiş mantar substratından ve ölü karıncaların vücutlarından yapılmış, yuvanın geri kalanından izole edilen ve önemli bir sosyal bağışıklık stratejisi oluşturan özel odalar yapar30. Ek olarak, ayrı bir işçi grubu, diğer bireylerin kirlenmesini önlemek için reddi doğrudan manipüle eder. İşçiler, koloninin ana besin kaynağı olan mantarı beslemek için sürekli olarak beslenirler. Bununla birlikte, parçaları keserken bitki özü ile de beslenebilirler. Bitki materyali, mantar bahçesinin bakımı için özenle seçilir ve yaprak özellikleri ve ekosistemin özellikleri gibi birçok faktörden etkilenir13.
Yaprak kesen karıncaların taze malzeme elde etmek için yiyecek arama stratejisi oldukça karmaşıktır ve yerleşik kolonilerin yüksek hasat talebi ile birleştiğinde, tarımsal üreticiler için önemli ekonomik kayıplara neden olur ve orman restorasyon alanlarını tehlikeye atar22,31. Bu nedenle, bu karıncalar, güney Amerika Birleşik Devletleri'nden kuzeydoğu Arjantin'e kadar 11,13,22,32 arasında karşılaşılabilecekleri çoğu alanda zararlılar olarak kategorize edilebilir. Sorunlu kolonilerin söndürülmesi, bu böceklerin biyolojisinde bulunan bir dizi adaptasyon nedeniyle zordur (yani, sosyal organizasyon, yiyecek arama, mantar yetiştiriciliği, hijyen ve karmaşık yuva yapıları)33. Bu nedenle, nüfus kontrol stratejileri genellikle diğer böcek zararlılarına uygulananlardan farklıdır ve esas olarak çekici kontamine yem tekliflerine başvurur33,34. Bununla birlikte, bu karıncalar hem mantar hem de koloni bireyleri için zararlı maddeleri reddedebildikleri ve ekili alanları tehlikeye atabildikleri için 33, yeni doğal bileşikler ve kontrol alternatifleri sürekli olarak test edilmektedir33,35,36. Deney sonuçları sahada test edilmiş koloniler üzerinde zorlukla izlenemediğinden, ön denemeler kontrollü bir ortamda yürütülür.
Bu nedenle, deneysel protokoller, karıncaların heterojen yaşam tarzını göz önünde bulundurarak, tür düzeyindeki çalışmaları destekleyen ve kolonileri bir karıncanın karmaşık bir süperorganizmanın bir unsuru olduğu operasyonel birimler olarak hesaba katan ilgi gruplarına uyarlanmalıdır11. Atta cinsi ile ilgili bugüne kadar toplanan raporlar, kolonilerin laboratuvar koşullarında başarılı bir şekilde toplanmasını ve sürdürülmesini ve temel ihtiyaçlarının ve genel işlevlerinin kabul edilmesini mümkün kılmıştır. Üreme, koloni kurma ve beslenme davranışları gibi doğal süreçlerine dayanarak, farklı yuva türlerinde kolonilerin uzun vadeli kurulmasına izin veren bir uygulama rutini geliştirilmiştir. Burada, yaprak kesen karıncaları laboratuvarda tutmak için prosedürel bir protokol tanımlanmıştır ve farklı deney amaçları ve bilimsel sosyal yardım ile olası genel araştırmaları vurgulamaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Entomologic forceps</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tank</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Tempered glass, custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hose</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Transparent, PVC 1/2 Inch x 2,0 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex gloves</td>
			<td>Descarpack</td>
			<td>550301</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrile gloves</td>
			<td>Descarpack</td>
			<td>433301</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Open arena</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Polypropylene crate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plaster pouder</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Plaster pouder used in construction, must be absorbant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Containers for collection</td>
			<td>Prafesta</td>
			<td>Natural C&#243;d.: 8231/Natural C&#243;d.: 8262</td>
			<td>Lidded, transparent , polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic containers for nests</td>
			<td>Prafesta</td>
			<td>Discontinued</td>
			<td>Polystyrene, hermetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon</td>
			<td>Dupont</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Polytetrafluoroethylene liquid (PTFE Dispertion 30)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

collection and long-term maintenance of leaf-cutting ants (atta) in laboratory conditions

Karıncalar, gezegendeki en biyolojik çeşitlilik gösteren hayvan gruplarından biridir ve farklı ortamlarda yaşarlar. Karınca kolonilerinin kontrollü ortamlarda korunması, uygulamalı araştırmalara katkıda bulunabilecek biyolojilerinin zenginleştirilmiş bir şekilde anlaşılmasını sağlar. Bu uygulama genellikle Atta karıncaları gibi ekonomik kayba neden olan türlerin nüfus kontrol çalışmalarında kullanılır. Karşılıklı mantarlarını yetiştirmek için, bu yaprak kesici karıncalar yaprak toplar ve bunun için Amerika kıtasında yaygın olarak dağılmış tarımsal zararlılar olarak kabul edilir. Son derece sosyal olarak organize olmuşlar ve çeşitli odalardan oluşan ayrıntılı yeraltı yuvalarında yaşıyorlar. Kontrollü bir ortamda bakımları, burada açıklanan çeşitli prosedürlerin ve sık bakımın günlük rutinine bağlıdır. Üreme mevsimi boyunca kraliçelerin toplanmasıyla başlar (yani, evlilik uçuşu), daha sonra ayrı ayrı plastik kaplara aktarılır. Kraliçelerin yüksek ölüm oranı nedeniyle, evlilik uçuşundan yaklaşık 6 ay sonra, gelişmiş mantar değnekleri olan yeni başlayan yuvalar kazıldığında, elle toplandığında ve plastik kaplara yerleştirildiğinde ikinci bir toplama gerçekleştirilebilir. Laboratuvarda, yapraklar günlük olarak kurulan kolonilere verilir ve karınca tarafından üretilen atıklar, kalan kuru bitki materyali ile birlikte haftalık olarak uzaklaştırılır. Mantar bahçesi büyümeye devam ettikçe, koloniler deneysel amaca göre farklı kaplara aktarılır. Yaprak kesen karınca kolonileri, doğada bu böcekler tarafından inşa edilen fonksiyonel odalarla organizasyon sistemini temsil eden birbirine bağlı kaplara yerleştirilir. Bu kurulum, atık miktarı, mantar bahçe sağlığı ve işçilerin ve kraliçenin davranışları gibi faktörleri izlemek için idealdir. Kolaylaştırılmış veri toplama ve daha ayrıntılı gözlemler, karınca kolonilerini kontrollü koşullarda tutmanın en büyük avantajı olarak kabul edilir.

Karınca toplama sürecini gösteren bir akış şeması Şekil 6'da gösterilmiştir. Burada, yukarıda açıklanan toplama, bakım ve yuva kurulumları protokolünü kullanarak elde edilen bazı sonuçlar gösterilmiştir.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64154/64154fig6v2.jpg"> Şekil 6: Yaprak kesen karınca kolonilerinin toplanması için akış şema...

Watch this Scientific Journal Video about Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants Atta in Laboratory Conditions at JoVE.com

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants Atta in Laboratory Conditions

Burada, sağlıklı Atta (Hymenoptera: Formicidae) karınca kolonilerini laboratuvar koşullarında başarılı bir şekilde toplamak ve sürdürmek için bir protokol açıklanmaktadır. Ek olarak, farklı yuva tipleri ve konfigürasyonları olası deneysel prosedürlerle birlikte detaylandırılmıştır.

Yaprak Kesici Karıncaların (Atta) Laboratuvar Koşullarında Toplanması ve Uzun Süreli Bakımı

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled ...

Laboratuvar koşullarında farklı yuva türlerinde kolonilerin başarılı bir şekilde toplanması ve sürdürülmesi, genel araştırmaların geliştirilmesine izin verir ve bilim erişimini teşvik edebilir. Dosyada test edilmiş kolonilerin izlenmesi zor olduğundan, bu protokol, tüm kolonileri operasyonel birimler olarak kullanarak, kontrollü bir ortamda ön deney koşullarına izin verir. Bu protokol, Acromimix cinsinin kendine özgü karıncaları gibi karınca türlerinin heterojen yaşam tarzlarını göz önünde bulundurarak diğer ilgi gruplarına uyarlanabilir.Bu tekniği hiç uygulamamış bir birey, olayların belirsizliğini ve karmaşık günlük bakım rutinini zorluklar olarak görebilir. İlk koleksiyon, kanatlarını çıkaran ve kazı başlatan kraliçelerin alçı tabanlı küçük kaplara yerleştirildiği evlilik uçuşundan hemen sonra yapılmalıdır. İkinci bir koleksiyon, koloni temeline başarıyla başlayan kraliçeler tarafından geliştirilen kolonilerin toplandığı evlilik uçuşundan altı ay sonra gerçekleşmelidir.Kolonilerin gelişmesinden sonra, daha büyük kaplara ve isteğe bağlı olarak farklı yuva kurulumlarına aktarılırlar. Kraliçeleri ayrı ayrı tutmak için plastik kapaklı kapları alt sıva tabakasıyla hazırlayın. Üreme mevsiminde, yaprak kesen karıncaların oluşumu alanlarında Atta yuvalarını tanımlayın ve kanatlı üreme karıncalarının yaklaşmakta olan ayrılışını gösteren dış özellikleri arayın.Yuva özellikleri arasında tünel girişlerinin genişletilmesi, tünel girişlerinde görünen kanatlı üreme karıncaları ve olası avcılara karşı daha agresif davranışlar gösteren artan işçi akışı bulunmaktadır. Evlilik uçuşundan sonra, dişi reprodüktörler toprağa döndüğünde, kanatlarını çıkarın ve yuva kazısına başlayın. Kraliçelerin koleksiyonuna başlayın.Bunları bir sıva tabakası ile hazırlanan plastik kaplara ayrı ayrı dikkatlice yerleştirin. Kraliçeleri kontrollü bir ortama yerleştirin ve stresi önlemek için yaklaşık üç gün boyunca manipüle etmeyin veya hareket ettirmeyin. Kapakları dikkatlice delin ve her iki günde bir kabın sıva tabakasına iğneli bir şırınga ile 2,5 mililitre su dökün.Mantar bahçesi su yokluğu ile kuru bir görünüm sergilediği sürece, sıva tabakasını sulayın. Kraliçelerin mantarı koleksiyondan iki hafta sonra yeniden üretip yetersizleştirdiğini kontrol edin. Mantar yoksa, sağlıklı ve yerleşik kolonilerin mantar bahçesinden iki gram toplayın ve bunları kraliçelerin kaplarına aktarın.Mantar gelişmese bile bu adımı uygulayın. İlk işçilerin ortaya çıkmasından sonra, koloninin kesme aktivitesine göre düzenli olarak genç ve ince yaprak parçaları sunmaya başlayın ve koloni atıklarını ve kuru yaprak parçalarını çıkarın. Koloninin gelişimini takip edin ve mantar bahçesi kap hacminin en az yarısına ulaştığında, koloniyi yapay, dayanıklı bir yuvaya aktarın.Son evlilik uçuşundan altı ay sonra, yaprak kesen karıncaların oluşum yerleri üzerinde yeni başlayan tanecikli toprak parçacıkları ile gösterge niteliğindeki kule şeklindeki höyükleri tanımlayın. Genç kolonilerin yuvalarının, evlilik uçuşundan altı ay sonra toprakta bir metre derinliğe kadar olduğu tahmin edilmektedir. Şu anda, genç koloniyi bir bahçe çapası ile tutan odaya ulaşana kadar yuva girişini kazın.Kraliçeyi, mantar bahçesini, olgunlaşmamış ve genç işçileri toplayın ve yaklaşık 500 mililitrelik plastik bir kaba koyun. Kolonileri tutan plastik kapaklı kapları belirlenen kontrollü ortama taşıyın. Stresi önlemek için kolonileri yaklaşık üç gün boyunca manipüle etmeyin veya hareket ettirmeyin.İzin vermeye başlayın. Yeni yapraklar sunarken, kuru yaprakları ve koloni atıklarını çıkarın. Toprak kalıntılarını bir kaşık yardımıyla koleksiyondan çıkarın.Kolonilerin gelişimini takip edin ve mantar bahçesi konteyner hacminin en az yarısına ulaştığında, kolonileri yapay, dayanıklı yuvalara kapalı dikey yuvaya, örtülü yatay yuvaya ve açık arena yuvasına aktarın. Daha uygun kurulum örtülü dikey yuva, örtülü yatay yuva ve açık arena yuvası ile yapay, dayanıklı yuvalar hazırlayın. Bir yiyecek arama odası, atık odası ve bir mantar bahçesi odası ile örtülü bir dikey yuva kurulumu hazırlayın.Daha sonra bir yiyecek arama odası, atık odası ve bir mantar bahçesi odası ile örtülü bir yatay yuva kurulumu hazırlayın. Daha sonra, bir yiyecek arama ve atık odası ve buna bağlı bir mantar bahçesi odası ile açık bir arena yuva kurulumu hazırlayın. Arena ayrıca mantar odasını da tutabilir.Karıncaları içermek için arena sınırına tek bir hareketle bir kat politetrafloroetilen sıvı uygulayın. Sıvı ve nitril eldivenlerle ıslatılmış pamuk kullanın. Mantar bahçe hacminin bir litresi ile koloni başına yiyecek arama odasına günde en az bir büyük yaprak sunun.Teklif sıklığı, işçilerin bitki materyalini mantara dahil ettiği çevikliğe bağlıdır. Karıncaların kesme aktivitesi yoğunsa, yaprak sayısını arttırın. Örtülü yuvalarda, karıncaların yiyecek arama odasından kaçmasını önlemek için teklifi hızlı bir şekilde gerçekleştirin.Diğer kaynak türleri de sunulabilir. Açık arena yuvalarında, yaprakları litre mantar sayısına göre ve atıklardan uzak tutun. Atık odasının tüm içeriğini her iki haftada bir tüm kolonilerden ve dayanıklı yuvalar ve işçiler başına nüfus kontrolü amacıyla çıkarın.Bertaraf edilen atık miktarı yüksekse veya çok nemliyse, haftada bir kez çıkarın. İşçiler sağlıklı mantarı atık odasına aktarırsa, kraliçenin üzerinde olmadığından emin olun ve çıkarın. Yenilerini sunarken karıncalar tarafından alınmayan malzemeyi yiyecek arama odasından çıkarın ve her zaman temiz olduğundan emin olun.İşçiler sağlıklı mantarı yiyecek arama odasına aktarırsa, rahatsız edin, kap kapağını açık bırakın ve oda marjı yüzeyine nötr talk pudrası uygulayın. Bu şekilde, işçiler mantarı kaybetmeden veya olgunlaşmamış olmadan kabın içine geri aktaracaklardır. Daha fazla mantar bahçesi isteniyorsa, başka bir sıvalı kap ekleyin ve mantar süngerinin bir kısmını içine taşıyın.Mantar bahçesinin büyümesi, koloni dengesinden ödün vermemek için yavaş yavaş gerçekleşmelidir. Daha büyük bir kap isteniyorsa, mantarın aktarmadan önce en küçük kapların tüm alanını işgal etmesine izin verdiğinizden emin olun. Koloni atıkları mantar bahçe odasında birikmemelidir.Protokolde açıklandığı gibi kraliçeleri erken yaşam döngülerinin farklı anlarında toplayarak ve bireylerin ağzına naylon bir iplik sokarak, bakire kraliçeler, yakın zamanda çiftleşmiş kraliçeler ve altı ay boyunca çiftleşen kraliçeler arasındaki bireysel bağışıklık direncini değerlendirmek ve karşılaştırmak mümkün olmuştur. Enkapsülasyon düzeyleri, bireylerin gaster içine yerleştirilen naylon filamentlerin görüntülerinden elde edilen ortalama gri değer üzerinden değerlendirildi. En karanlık ipliklerin etkili bir hücresel savunmayı temsil ettiği düşünülüyordu.Atta laevigata yakın zamanda çiftleşmiş kraliçeler en yüksek kapsülleme seviyesini, dolayısıyla etkili bir bireysel bağışıklık savunmasını gösterdi. Nüfus kontrol yöntemlerini geliştirmek için, protokol aracılığıyla toplanan koloniler Bates çekicilik testlerine tabi tutuldu. Deney boyunca, her türün beş kolonisi, Atta laevigata ve Atta Sextens ile beş tekrar gerçekleştirildi.Farklı alt ürünlerle formüle edilen toksik olmayan yemler, tekrarlar içinde çeşitli şekillerde düzenlenmiştir. Atta laevigata ve Atta sexdens işçilerinin ortalama yükleme yüzdesi burada gösterilmiştir. Sitrik küspe, soya fasulyesi ve soya fasulyesi artı sitrik kağıt hamuru tedavileri her iki tür için de en yüklü olanlardı.Bununla birlikte, Atta sexdens için son yüklü tedavi% 60, Atta laevigata işçileri tarafından yüklendi. 2016-2019 yılları arasında, yaklaşık 34 okuldan yaklaşık 2.020 öğrenci, daha önce açıklanan protokolleri kullanarak toplanan ve sürdürülen karınca kolonilerini gözlemlemek için yaprak kesme karıncalarının laboratuvarını ziyaret edebildi. Eğitim kuruluşlarının, öğrenciler tarafından yakından gözlemlenmesini sağlayan karıncalar gibi canlı böceklerin sergilerinin yürütülmesine olan ilgisinde bir artış görmek mümkündür.Ziyaretlerin genel biyolojiden öğrencilerin eğitim düzeyine göre sosyal davranış öğrenimine kadar farklı amaçları vardı. Bu teknikteki bazı kritik adımlar, mantar bahçesinin büyümesini teşvik etmek, yuvaları temiz tutmak ve olası kaçışlardan kaçınmakla ilişkilidir. Protokol, örneğin erken evre koloni gelişimini ve toksik yem etkileşimleri araştırmalarını anlamak için diğer bilimsel ilgi alanlarına uygulanabilir.Bu teknik, karşılaştırmalı morfoloji, histoloji, toksikoloji ve mikrobiyoloji gibi çeşitli alanlardan araştırmacılar tarafından bireysel ve koloni seviyelerinde 22 yıldır kullanılmaktadır.

Research

JoVE Journal

Biology

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants (Atta) in Laboratory Conditions

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Geniş Alan Mikroskop kullanarak Uzun vadeli Görüntüleme Memeli Hücreleri

Biyoloji

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Multilayer Mounting for Long-term Light Sheet Microscopy of Zebrafish

Çok katmanlı Zebra balığı uzun vadeli Işık Sayfalık Mikroskopi için Montaj

Light sheet microscopy is the ideal imaging technique to study zebrafish embryonic development. Due to minimal photo-toxicity and bleaching, it is ...

Isolation, Transfection, and Long-Term Culture of Adult Mouse and Rat Cardiomyocytes

İzolasyon, Transfeksiyon ve Yetişkin Fare ve Sıçan Kardiyomiyositlerinin Uzun Süreli Kültürü

Ex vivo culture of the adult mammalian cardiomyocytes (CMs) presents the most relevant experimental system for the in vitro study of cardiac biology. ...

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Long-Term Culture and Monitoring of Isolated Caenorhabditis elegans on Solid Media in Multi-Well Devices

Çok Kuyulu Cihazlarda Katı Ortamda İzole Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kültürü ve İzlenmesi

The nematode Caenorhabditis elegans is among the most common model systems used in aging research owing to its simple and inexpensive culture techniques, ...

Isolation Method for Long-Term and Short-Term Hematopoietic Stem Cells

Uzun Süreli ve Kısa Süreli Hematopoetik Kök Hücreler için İzolasyon Yöntemi

Self-renewal capacity and multi-lineage differentiation potential are generally regarded as the defining characteristics of hematopoietic stem cells ...