Denne protokol tester desinfektionseffektiviteten af hvidvaskning af varmt vand. Det kan hjælpe med at vurdere, om en vaskemaskine og tørretumbler er egnet til rengøring af tøj, der er forurenet af en virus. Den største fordel ved denne hvidvaskningsteknik er, at den kan replikeres i andre laboratorier i mindre skala ved hjælp af procedurer, der har været igennem kvalitetssikringsprocessen.
Ahmed Abdel-Hady, en mikrobiolog, Mariela Monge og Jonathan Sawyer, forskere og andre fra vores laboratorium demonstrerer proceduren. Til at begynde med skal du forberede den modificerede tryptiske sojaagar ved at veje og blande ingredienserne i deioniseret vand som beskrevet i teksten. Derefter tilsættes en milliliter ufortyndet, koncentreret Phi6 aliquot til blød agar og 100 mikroliter af en logfase pseudomonas syringae-kultur.
Hæld derefter blød agar på overfladen af en størknet modificeret tryptisk sojaagarplade med en diameter på 100 millimeter. Undgå bobler eller spild ved at hvirvle pladerne forsigtigt og fordele den bløde agar jævnt over den faste agaroverflade. Efter inkubation natten over ved stuetemperatur skrabes forsigtigt indholdet af de tre plader med en steril cellespreder i et sterilt 50 milliliter krønikerør indeholdende 15 ml SM-buffer.
Hvirvel rørene ved maksimal indstilling i et til to minutter for at bryde agaren og centrifugerer dem derefter i 15 minutter ved 7.000 gange G.Saml derefter supernatanten og filtrer den gennem et 0,2 mikron sprøjtefilter. Opbevar den filtrerede supernatant som en milliliter aliquot i cryovials ved 80 grader Celsius indtil yderligere brug. Udføre visuel vurdering før testen ved at måle og registrere længden og bredden af de uvaskede personlige værnemidler eller personlige værnemidler på forskellige steder.
Til podning fremstilles en 10% oksekødsekstraktopløsning ved at opløse et gram oksekødsekstrakt i et samlet volumen på 10 ml 1X PBS. Filter steriliser hele volumenet af opløsningen ved hjælp af et 0,2 mikron sprøjtefilter. Derefter inde i biosikkerhedsskabet podes test- og positive kontrolkuponer med ca. 10 til den syvende plakdannende enheder pr. prøve ved at pipettere en 10 mikroliter mængde af opløsningen på PPE-emnet som flere dråber og sprede dråben ved hjælp af pipettens spids.
Vaskeopløsningen opvarmes til 50 grader Celsius ved hjælp af en kogeplade og rørestang. Derefter måles og registreres pH og temperatur i vaskeopløsningen, og der opsamles 10 ml opløsning til sterilitetskontrol. Hæld derefter 3,25 liter vaskeopløsning i en steriliseret skive.
Placer PPE-genstande, en podet ansigtsbeklædning og fire ikke-forurenede filmmasker uden kuponer i vaskemaskinen. Efter vask af PPE-genstande i 18 minutter skal du dræne skiven og tredobbelt skylle med fem liter vandhanevand ved stuetemperatur hver gang for at fjerne skummet. Tilsæt 3,25 liter steriliseret ledningsvand ved stuetemperatur i skiven og udfør en ni minutter lang skyllecyklus.
Flyt derefter PPE-genstandene ind i skivens spinside for at dreje i fem minutter. Tør PPE-genstandene i 80 minutter ved den høje varmeindstilling på 93 grader Celsius i tørretumbleren. Flyt derefter PPE-elementerne fra tørretumbleren til det sterile arbejdsområde.
Fjern aseptisk kuponerne fra de podede genstande og læg dem i koniske rør. Derefter ekstraheres kuponerne i 10 ml 10% Dey-Engley, der neutraliserer bouillon ved hvirvel i to minutter ved maksimal indstilling af udstyret. For at plade ekstrakterne ved hjælp af en konventionel soft top agar overlay metode, tilsættes testprøve aliquots til det bløde agarrør indeholdende seks milliliter blød agar og 100 mikroliter af logfase P syringae.
Hæld derefter den bløde agar på overfladen af en størknet modificeret tryptisk sojaagarplade og fordel den bløde agar jævnt over den faste agaroverflade ved at hvirvle pladen. Efter inkubation natten over ved stuetemperatur skal du manuelt tælle platformenhederne på hver plade. Den systematiske laboratorietest til vurdering af effektiviteten af viral desinfektion fra PV eller tøj i fuld størrelse viste, at platformenheden eller PFU-pladetællingen og den ekstraherede prøvevolumen muliggjorde beregningen af antallet af platformenheder pr. Testkupon.
Resultaterne af det repræsentative virale opsving blev opnået til en ansigtsbeklædningstest. Hvidvaskningstestene gav oplysninger om materialets egenskaber som strækning eller krympning af beklædningsgenstande og kvalitetskontrollerede data i protokollen. Effekten af hvidvaskning af varmt vand ved desinfektion af ansigtsbeklædning, denim og skrubbe PPE-materialer fra Phi6 blev demonstreret i denne graf, hvor stjernerne angiver den fulde desinfektion.
Det er vigtigt at anvende aseptiske teknikker i hele denne procedure for at forhindre krydskontaminering. Tørretider for inokulum for kuponer er også unikke for hvert materiale og etableres inden test. Andre gratis metoder inkluderer mikroskopi og væskeindtrængningstest for at udforske materialeforringelse eller yderligere størrelsesvurderinger, der sikrer, at barrierebeskyttelsen stadig passer til bæreren.
Denne teknik dannede grundlag for at opskalere hvidvaskeffektivitet og materialetest for tøj og personlige værnemidler i fuld skala. Det kan også hjælpe med at etablere effektive hvidvaskningsprocedurer under en anden smittehændelse eller pandemi.
