Questo protocollo verifica l'efficacia della disinfezione del lavaggio dell'acqua calda. Può aiutare a valutare se una lavatrice e un'asciugatrice sono adatte per la pulizia degli indumenti contaminati da un virus. Il vantaggio principale di questa tecnica di lavaggio è che può essere replicata in altri laboratori su scala ridotta utilizzando procedure che sono state sottoposte al processo di garanzia della qualità.
A dimostrare la procedura saranno Ahmed Abdel-Hady, un microbiologo, Mariela Monge e Jonathan Sawyer, ricercatori e altri del nostro laboratorio. Per iniziare, preparare l'agar di soia triptico modificato pesando e mescolando gli ingredienti in acqua deionizzata come descritto nel testo. Quindi, aggiungere un millilitro di aliquota Phi6 concentrata e non diluita all'agar morbido e 100 microlitri di una coltura di siringe pseudomonas in fase logaritmica.
Quindi, versare l'agar morbido sulla superficie di una piastra di agar di soia triptica modificata solidificata avente un diametro di 100 millimetri. Evitare bolle o fuoriuscite ruotando delicatamente le piastre e distribuendo uniformemente l'agar morbido sulla superficie solida dell'agar. Dopo l'incubazione notturna a temperatura ambiente, raschiare delicatamente il contenuto delle tre piastre con uno spargitore di cellule sterili in una provetta sterile da 50 millilitri contenente 15 millilitri di tampone SM.
Vortice i tubi alla massima impostazione per uno o due minuti per rompere l'agar e quindi centrifugarli per 15 minuti a 7.000 volte G.Quindi raccogliere il surnatante e filtrarlo attraverso un filtro a siringa da 0,2 micron. Conservare il surnatante filtrato come aliquote da un millilitro in crioviali a 80 gradi Celsius fino a nuovo utilizzo. Eseguire la valutazione visiva pre-test misurando e registrando la lunghezza e la larghezza dei dispositivi di protezione individuale o degli articoli DPI non lavati in vari punti.
Per l'inoculazione, preparare una soluzione di estratto di manzo al 10% sciogliendo un grammo di estratto di manzo in un volume totale di 10 millilitri di 1X PBS. Filtrare sterilizzare l'intero volume della soluzione utilizzando un filtro a siringa da 0,2 micron. Successivamente, all'interno dell'armadio di biosicurezza, inoculare i tagliandi di test e di controllo positivi con circa 10-settima unità formanti placca per campione pipettando una quantità di 10 microlitri della soluzione sull'articolo DPI come goccioline multiple e diffondendo la goccia utilizzando la punta della pipetta.
Riscaldare la soluzione di lavaggio a 50 gradi Celsius utilizzando una piastra calda e mescolare la barra. Quindi misurare e registrare il pH e la temperatura della soluzione di lavaggio e raccogliere 10 millilitri di soluzione per il controllo della sterilità. Quindi, versare 3,25 litri di soluzione di lavaggio in una lavatrice sterilizzata.
Metti nella lavatrice i DPI, una copertura per il viso inoculata e quattro maschere di pellicola non contaminate senza tagliandi. Dopo aver lavato i DPI per 18 minuti, scaricare la lavatrice e risciacquare tre volte con cinque litri di acqua di rubinetto a temperatura ambiente ogni volta per rimuovere la schiuma. Aggiungere 3,25 litri di acqua di rubinetto sterilizzata a temperatura ambiente nella lavatrice ed eseguire un ciclo di risciacquo di nove minuti.
Quindi, spostare gli elementi DPI nel lato di rotazione della rondella per ruotare per cinque minuti. Asciugare i DPI per 80 minuti con l'impostazione a fuoco elevato di 93 gradi Celsius nell'essiccatore. Quindi spostare gli elementi DPI dall'essiccatore allo spazio di lavoro sterile.
Rimuovere asetticamente i tagliandi dagli articoli inoculati e metterli in tubi conici. Quindi, estrarre i tagliandi in 10 millilitri di brodo neutralizzante Dey-Engley al 10% vorticando per due minuti alla massima impostazione dell'attrezzatura. Per placcare gli estratti utilizzando un metodo convenzionale di sovrapposizione di agar soft top, aggiungere aliquote del campione di prova alla provetta di agar morbido contenente sei millilitri di agar morbido e 100 microlitri di siringa P della fase logaritmica.
Quindi, versare l'agar morbido sulla superficie di una piastra di agar di soia triptica modificata solidificata e distribuire uniformemente l'agar morbido sulla superficie dell'agar solido ruotando la piastra. Dopo l'incubazione notturna a temperatura ambiente, enumerare manualmente le unità di piattaforma su ciascuna piastra. I test di laboratorio sistematici per valutare l'efficacia di lavaggio della disinfezione virale da DPI o indumenti di dimensioni standard, hanno dimostrato che l'unità di piattaforma o il conteggio delle piastre PFU e il volume del campione estratto hanno consentito il calcolo del numero di unità di piattaforma per coupon di prova.
I risultati del recupero virale rappresentativo sono stati ottenuti per un test di copertura del viso. I test di lavaggio hanno fornito informazioni sulle proprietà del materiale come lo stiramento o il restringimento dei capi di abbigliamento e dati di qualità controllata del protocollo. L'efficacia del lavaggio con acqua calda nella disinfezione di rivestimenti per il viso, denim e materiali DPI scrub di Phi6 è stata dimostrata in questo grafico in cui le stelle indicano la disinfezione completa.
È importante utilizzare tecniche asettiche durante questa procedura per prevenire la contaminazione incrociata. Inoltre, i tempi di essiccazione dell'inoculo per i coupon sono unici per ogni materiale e vengono stabiliti prima del test. Altri metodi complementari includono microscopia e test di penetrazione dei liquidi per esplorare la degradazione del materiale o ulteriori valutazioni delle dimensioni che assicurano che la protezione barriera si adatti ancora a chi la indossa.
Questa tecnica ha fornito la base per aumentare l'efficacia del lavaggio e i test sui materiali per indumenti e DPI su vasta scala. Può anche aiutare a stabilire procedure di riciclaggio efficaci durante un altro evento di contagio o pandemia.
