Detta protokoll testar desinfektionseffekten av varmvattentvätt. Det kan hjälpa till att bedöma om en tvättmaskin och torktumlare är lämpliga för rengöring av kläder som är förorenade av ett virus. Den största fördelen med denna tvättteknik är att den kan replikeras i andra laboratorier i mindre skala med hjälp av procedurer som har genomgått kvalitetssäkringsprocessen.
Demonstrerar proceduren kommer att vara Ahmed Abdel-Hady, en mikrobiolog, Mariela Monge och Jonathan Sawyer, forskare och andra från vårt laboratorium. För att börja, förbered den modifierade tryptiska sojaagaren genom att väga och blanda ingredienserna i avjoniserat vatten som beskrivs i texten. Tillsätt sedan en milliliter outspädd, koncentrerad Phi6-alikvot till mjuk agar och 100 mikroliter av en stockfas pseudomonas syringae-odling.
Häll sedan mjuk agar på ytan av en stelnad modifierad tryptisk sojaagarplatta med en diameter av 100 millimeter. Förhindra bubblor eller spill genom att virvla plattorna försiktigt och fördela den mjuka agaren jämnt över den fasta agarytan. Efter inkubation över natten vid rumstemperatur, skrapa försiktigt innehållet i de tre plattorna med en steril cellspridare i ett sterilt 50 ml kronikrör innehållande 15 ml SM-buffert.
Vortex rören vid maximal inställning i en till två minuter för att bryta agar och centrifugera dem sedan i 15 minuter vid 7 000 gånger G.Samla sedan supernatanten och filtrera den genom ett 0,2 mikron sprutfilter. Förvara den filtrerade supernatanten som en milliliter alikvoter i kryovialer vid 80 grader Celsius tills vidare användning. Utför visuell bedömning före testet genom att mäta och registrera längden och bredden på otvättad personlig skyddsutrustning eller personlig skyddsutrustning på olika platser.
För ympning, förbered en 10% nötköttsextraktlösning genom att lösa ett gram nötköttsextrakt i en total volym av 10 ml 1X PBS. Filtrera sterilisera hela volymen av lösningen med ett 0,2 mikron sprutfilter. Därefter inuti biosäkerhetsskåpet, inokulera testet och positiva kontrollkuponger med cirka 10 till den sjunde plackbildande enheterna per prov genom att pipettera en 10 mikroliter mängd av lösningen på PPE-artikeln som flera droppar och sprida droppen med pipettens spets.
Värm tvättlösningen till 50 grader Celsius med en kokplatta och rör om stången. Mät sedan och registrera tvättlösningens pH och temperatur och samla 10 ml lösning för sterilitetskontroll. Häll sedan 3,25 liter tvättlösning i en steriliserad bricka.
Placera PPE-föremål, ett inokulerat ansiktsskydd och fyra icke-förorenade filmmasker utan kuponger i brickan. Efter tvättning av PPE-föremål i 18 minuter, töm brickan och trippelskölj med fem liter kranvatten i rumstemperatur varje gång för att ta bort skummet. Tillsätt 3,25 liter steriliserat kranvatten i rumstemperatur i brickan och utför en nio minuter lång sköljcykel.
Flytta sedan PPE-föremålen till brickans rotationssida för att snurra i fem minuter. Torka PPE-föremålen i 80 minuter på den höga värmeinställningen på 93 grader Celsius i torken. Flytta sedan PPE-föremålen från torken till den sterila arbetsytan.
Ta bort kupongerna aseptiskt från de inokulerade föremålen och placera dem i koniska rör. Extrahera sedan kupongerna i 10 ml 10% Dey-Engley neutraliserande buljong genom att virvla i två minuter vid utrustningens maximala inställning. För att plätera extrakten med en konventionell mjuk toppagaröverlagringsmetod, tillsätt alikvoter för testprov till det mjuka agarröret som innehåller sex milliliter mjuk agar och 100 mikroliter av loggfas P-sprutan.
Häll sedan den mjuka agaren på ytan av en stelnad modifierad tryptisk sojaagarplatta och fördela den mjuka agaren jämnt över den fasta agarytan genom att virvla plattan. Efter inkubation över natten vid rumstemperatur, räkna upp plattformsenheterna manuellt på varje platta. De systematiska laboratorietesterna för att bedöma tvätteffektiviteten av virusdesinfektion från fullstor personlig skyddsutrustning eller kläder visade att plattformsenheten eller PFU-plattan och den extraherade provvolymen möjliggjorde beräkningen av antalet plattformsenheter per testkupong.
Resultaten av den representativa virala återhämtningen erhölls för ett ansiktsskyddstest. Tvätttesterna gav information om materialegenskaperna som sträckning eller krympning av klädesplaggen och kvalitetskontrollerade data i protokollet. Effekten av varmvattentvätt vid desinfektion av ansiktsskydd, denim och skrubba PPE-material från Phi6 visades i denna graf där stjärnorna betecknar fullständig desinfektion.
Det är viktigt att använda aseptiska tekniker under hela denna procedur för att förhindra korskontaminering. Dessutom är torkningstider för inokulum för kuponger unika för varje material och fastställs före testning. Andra kompletterande metoder inkluderar mikroskopi och vätskepenetrationstester för att utforska materialnedbrytning eller ytterligare storleksbedömningar som säkerställer att barriärskyddet fortfarande passar bäraren.
Denna teknik utgjorde grunden för att skala upp tvätteffektivitet och materialtestning för fullskaliga kläder och PPE-föremål. Det kan också hjälpa till att upprätta effektiva tvättförfaranden under en annan smitthändelse eller pandemi.