تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنح 31972908 و 81991500 و 81991502 و 81771093 و 81974151) ومؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (منحة 7202082).

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات البحوث الحيوانية ، مركز العلوم الصحية بجامعة بكين ، وامتثلت لدليل رعاية واستخدام المختبر (منشور المعاهد الوطنية للصحة رقم 85-23 ، المنقح عام 1996). تم استخدام ذكور الفئران البرية (WT) في الفئة العمرية من 8-10 أسابيع للدراسة الحالية. ع?...

<ol>
	<li>Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+secretion,+components,+and+properties+of+saliva.">The secretion, components, and properties of saliva.</a> Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).</li><li>Garrett, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proper+role+of+nerves+in+salivary+secretion:+A+review.">The proper role of nerves in salivary secretion: A review.</a> Journal of Dental Research. 66 (2), 387-397 (1987).</li><li>Berndt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junction+proteins+at+the+blood-brain+barrier:+Far+more+than+claudin-5.">Tight junction proteins at the blood-brain barrier: Far more than claudin-5.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (10), 1987-2002 (2019).</li><li>Cong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+endothelial+barrier+function+is+linked+with+hyposecretion+and+lymphocytic+infiltration+in+salivary+glands+of+Sj&#246;gren's+syndrome.">Disruption of endothelial barrier function is linked with hyposecretion and lymphocytic infiltration in salivary glands of Sj&#246;gren's syndrome.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1864 (10), 3154-3163 (2018).</li><li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nature Methods. 2 (12), 932-940 (2005).</li><li>Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+magic:+Multiphoton+microscopy+in+the+biosciences.">Nonlinear magic: Multiphoton microscopy in the biosciences.</a> Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).</li><li>Masedunskas, A., Sramkova, M., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostasis+of+the+apical+plasma+membrane+during+regulated+exocytosis+in+the+salivary+glands+of+live+rodents.">Homeostasis of the apical plasma membrane during regulated exocytosis in the salivary glands of live rodents.</a> Bioarchitecture. 1 (5), 225-229 (2011).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (33), 13552-13557 (2011).</li><li>Balda, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+dissociation+of+paracellular+permeability+and+transepithelial+electrical+resistance+and+disruption+of+the+apical-basolateral+intramembrane+diffusion+barrier+by+expression+of+a+mutant+tight+junction+membrane+protein.">Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein.</a> The Journal of Cell Biology. 134 (4), 1031-1049 (1996).</li><li>Enis, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction,+differentiation,+and+remodeling+of+blood+vessels+after+transplantation+of+Bcl-2-transduced+endothelial+cells.">Induction, differentiation, and remodeling of blood vessels after transplantation of Bcl-2-transduced endothelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (2), 425-430 (2005).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+digital+subtraction+angiography+in+canine+hindlimb+arteriography.">Application of digital subtraction angiography in canine hindlimb arteriography.</a> Vascular. 30 (3), 474-480 (2022).</li><li>Trani, M., Dejana, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+in+the+control+of+vascular+permeability:+vascular+endothelial-cadherin+and+other+players.">New insights in the control of vascular permeability: vascular endothelial-cadherin and other players.</a> Current Opinion in Hematology. 22 (3), 267-272 (2015).</li><li>Viazzi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+permeability,+blood+pressure,+and+organ+damage+in+primary+hypertension.">Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension.</a> Hypertension Research. 31 (5), 873-879 (2008).</li><li>Scheppke, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vascular+permeability+suppression+by+topical+application+of+a+novel+VEGFR2/Src+kinase+inhibitor+in+mice+and+rabbits.">Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits.</a> The Journal of Clinical Investigation. 118 (6), 2337-2346 (2008).</li><li>Blanchet, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+CD34+leads+to+exacerbated+autoimmune+arthritis+through+increased+vascular+permeability.">Loss of CD34 leads to exacerbated autoimmune arthritis through increased vascular permeability.</a> Journal of Immunology. 184 (3), 1292-1299 (2010).</li><li>Egawa, G., Ono, S., Kabashima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+Imaging+of+vascular+permeability+by+two-photon+microscopy.">Intravital Imaging of vascular permeability by two-photon microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 2223, 151-157 (2021).</li><li>Vestweber, D., Wessel, F., Nottebaum, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarities+and+differences+in+the+regulation+of+leukocyte+extravasation+and+vascular+permeability.">Similarities and differences in the regulation of leukocyte extravasation and vascular permeability.</a> Seminars in Immunopathology. 36 (2), 177-192 (2014).</li><li>Schulte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilizing+the+VE-cadherin-catenin+complex+blocks+leukocyte+extravasation+and+vascular+permeability.">Stabilizing the VE-cadherin-catenin complex blocks leukocyte extravasation and vascular permeability.</a> The EMBO Journal. 30 (20), 4157-4170 (2011).</li><li>Uhl, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+experimental+approach+for+in+vivo+analyses+of+the+salivary+gland+microvasculature.">A novel experimental approach for in vivo analyses of the salivary gland microvasculature.</a> Frontiers in Immunology. 11, 604470 (2020).</li></ol>

تعد صيانة وظيفة الحاجز البطاني وتنظيمها ضرورية للتوازن الوعائي. تلعب الخلايا البطانية وتقاطعاتها بين الخلايا دورا مهما في الحفاظ على سلامة الأوعية الدموية والتحكم فيها12. يمكن أن تسبب قوة القص لتدفق الدم وعوامل النمو والعوامل الالتهابية تغيرات في نفاذية الأوعية الدموية ، وب...

تنتج الغدد اللعابية المختلفة اللعاب ، الذي يعمل في المقام الأول كخط دفاع أول ضد الالتهابات ويساعد على الهضم ، وبالتالي يلعب دورا أساسيا في صحة الفم والصحة العامة1. يعد إمداد الدم أمرا بالغ الأهمية لإفراز الغدد اللعابية لأنه يوفر باستمرار الماء والكهارل والجزيئات التي تشكل اللعاب الأساسي. وظيفة الحاجز البطاني ، التي ينظمها مجمع الوصلة الضيقة (TJ) ، تحد بشكل صارم ودقيق من تغلغل الشعيرات الدموية ، والتي تكون شديدة النفاذية للماء والمواد المذابة والبروتينات وحتى الخلايا التي تنتقل من الأوعية الدموية المتداولة إلى أنسجة الغدد اللعابية 2,3. لقد وجدنا سابقا أن فتح TJs البطانية استجابة لمحفز كوليني يسهل إفراز اللعاب ، في حين أن ضعف وظيفة الحاجز البطاني مرتبط بنقص الإفراز وتسلل اللمفاويات في الغدد تحت الفك السفلي (SMGs) في متلازمة سجوجرن4. تشير هذه البيانات إلى أن مساهمة وظيفة الحاجز البطاني تحتاج إلى إيلاء اهتمام كاف فيما يتعلق بمجموعة متنوعة من أمراض الغدد اللعابية.
يعد مجهر المسح بالليزر ثنائي الفوتون أداة قوية لمراقبة ديناميكيات الخلايا في الأنسجة السليمة في الجسم الحي. تتمثل إحدى مزايا هذه التقنية في أن ضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة (NIR) له اختراق أعمق للأنسجة من الضوء المرئي أو الأشعة فوق البنفسجية عندما تكون العينات متحمسة بواسطة NIR ولا تسبب أضرارا ضوئية واضحة للأنسجة في ظل الظروف المناسبة 5,6. في الواقع ، الغدد اللعابية هي نسيج متجانس وسطحي للغاية ، حيث تكون الخلايا العنيبية السطحية على بعد حوالي 30 ميكرومتر فقط من سطح الغدة 7,8. لقد ثبت أن الفحص المجهري متحد البؤر داخل الجسم يمكنه دراسة إفراز الإفرازات والهيكل الخلوي الأكتين في الغدد اللعابية للفأر الحية بدقةتحت الخلوية 8. ومع ذلك ، فإن الفحص المجهري بالليزر ثنائي الفوتون لا يتمتع فقط بميزة الفحص المجهري التقليدي متحد البؤر ولكن يمكن استخدامه أيضا للكشف عن الأنسجة العميقة والصورة بشكل أكثر وضوحا. هنا ، يمكن استخدام dextrans المسمى بالتألق ، والذي يستخدم بشكل متكرر كمتتبعات نفاذية شبه خلوية وله ميزة الأحجام المختلفة ، لاختبار حجم مسام TJ9. في هذه الدراسة ، تم إنشاء تقنية الفحص المجهري بالليزر في الوقت الحقيقي ثنائي الفوتون للتقييم في الموقع لوظيفة الحاجز البطاني في رشاشات الفئران. يتم وصف كل خطوة عمل للكشف عن نفاذية الأوعية الدموية في الجسم الحي في SMGs الماوس في البروتوكول الحالي. فيما يلي مثال على اكتشاف وظيفة الحاجز البطاني في نموذج ربط مجاري الهواء SMG للفأر.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-photon microscope (TCS-SP8 DIVE)</td>
			<td>Leica, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 kDa FITC-labeled dextran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 kDa rhodamine B-labeled dextran</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R9379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt tissue separation nickel</td>
			<td>Bejinghuabo Company</td>
			<td>NZW28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile syringe</td>
			<td>Zhiyu Company</td>
			<td></td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J software</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>0253316</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X software</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline 1x</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4207-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue scissors</td>
			<td>Bejinghuabo Company</td>
			<td>M286-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tribromoethanol</td>
			<td>JITIAN Bio</td>
			<td>JT0781</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo vascular permeability detection in mouse submandibular gland

يلعب اللعاب دورا مهما في صحة الفم والصحة العامة. تتيح وظيفة الحاجز البطاني السليمة للأوعية الدموية إفراز اللعاب ، في حين يرتبط خلل الحاجز البطاني بالعديد من اضطرابات إفراز الغدد اللعابية. يصف البروتوكول الحالي طريقة للكشف عن نفاذية الخلايا في الجسم الحي لتقييم وظيفة الوصلات الضيقة البطانية (TJs) في الغدد تحت الفك السفلي للفأر (SMG). أولا ، تم حقن dextrans المسمى بالتألق بأوزان جزيئية مختلفة (4 كيلو دالتون أو 40 كيلو دالتون أو 70 كيلو دالتون) في الأوردة الزاوية للفئران. بعد ذلك ، تم تشريح SMG أحادي الجانب وتثبيته في الحامل المخصص تحت مجهر المسح بالليزر ثنائي الفوتون ، ثم تم التقاط صور للأوعية الدموية والعنيبيات والقنوات. باستخدام هذه الطريقة ، تم رصد التسرب الديناميكي في الوقت الفعلي للمتتبعات ذات الأحجام المختلفة من الأوعية الدموية إلى الجوانب القاعدية للأسيني وحتى عبر ظهارة العنيب إلى القنوات لتقييم تغيير وظيفة الحاجز البطاني في ظل الظروف الفسيولوجية أو الفيزيولوجية المرضية.

بعد البروتوكول ، تم إرفاق SMG من جانب واحد بحامل مصنوع خصيصا ، وتم إبقاء الغدة بعيدا عن جسم الفأر قدر الإمكان لمنع التنفس من التسبب في قطع أثرية للحركة. لوحظ التدفق السريع لخلايا الدم الحمراء (النقاط السوداء) في الأوعية الدموية تحت المجهر. بعد العثور على حقل الأنسجة تحت عدسة العين ، يجب على ا?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Vascular Permeability Detection in Mouse Submandibular Gland at JoVE.com

In Vivo Vascular Permeability Detection in Mouse Submandibular Gland

في البروتوكول الحالي ، تم تقييم وظيفة الحاجز البطاني للغدة تحت الفك السفلي (SMG) عن طريق حقن مقتفيات فلورية مختلفة مرجحة جزيئيا في الأوردة الزاوية لنماذج الاختبار في الجسم الحي تحت مجهر المسح بالليزر ثنائي الفوتون.

في الجسم الحي كشف نفاذية الأوعية الدموية في الغدة تحت الفك السفلي للفأر

Saliva plays an important role in oral and overall health. The intact endothelial barrier function of blood vessels enables saliva secretion, whereas the ...

يصف البروتوكول الحالي مقياسا للكشف عن نفاذية الخلايا في الجسم الحي لتقييم وظيفة الوصلات البطانية الضيقة في الغدد تحت الفك السفلي للفأر. ومع ذلك ، فإن الفحص المجهري للمسح بالليزر الفوتوني لا يتمتع فقط بميزة الفحص المجهري التقليدي متحد البؤر ولكن يمكن استخدامه أيضا للكشف عن الأنسجة العميقة والصورة بشكل أكثر وضوحا. توفر هذه التجربة طريقة جيدة لتقييم نفاذية الأوعية الدموية للأنسجة المختلفة وخاصة الأنسجة السطحية وأعضاء الحيوانات.ابدأ باختيار أدوات التتبع المناسبة مثل الفلوريسئين ، الأيزوثيوسيانات ، المسمى ديكستران ورودامين ب ، المسمى ديكستران مع أطياف انبعاثات الإثارة المميزة ، لتقليل التداخل بين إشارات التألق لفحص النفاذية. قم بتخفيف الآثار إلى محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات إلى 100 ملليغرام لكل ملليلتر وتخزين القسمة المحمية من الضوء عند 20 درجة مئوية تحت الصفر. بعد تخدير ذكر الفأر البري البالغ من العمر 8 إلى 10 أسابيع ، أمسك رأس وعنق الفأر برفق لجعل جانب واحد من مقلة العين يبرز قليلا.أدخل حقنة الأنسولين التي تحتوي على 100 ميكرولتر من خليط محلول التتبع الفلوري على طول زاوية العين بزاوية قائمة على العين. بعد الحقن ، ضع الماوس بسرعة على الورق المقوى في وضع ضعيف مع تسجيل أطرافه ورأسه. بالنسبة للغدة تحت الفك السفلي أو عزل SMG ، تحت المجهر المجسم ، قم بقطع بشرة الرقبة بمقص الأنسجة العام لفضح جانبي SMGs.بعد ذلك ، استخدم إبرة فصل الأنسجة الحادة لفصل الكبسولة برفق عن سطح الغدة دون إتلاف أنسجة الغدة والأوعية الدموية والبنية الغدية. قم بتوصيل الحامل المخصص بجهاز الضغط السلبي وتحقق مما إذا كان تأثير الضغط السلبي قد تحقق بشكل صحيح مسبقا. ضع الرشاش المكشوف برفق على الحامل المخصص وامتص الأنسجة عن طريق شفط الضغط السلبي ، بعيدا عن جسم الفأر قدر الإمكان ، لتقليل آثار الحركة الناتجة عن التنفس والظروف الأخرى.ابدأ التصوير بعد وقت قصير من اختيار موقع الغدة. الحصول على صور متسلسلة على طول المحور Z صعدت اثنين ميكرون بعيدا عن سطح الغدة حتى 70 إلى 140 ميكرون في الأنسجة لتوليد بناء ثلاثي الأبعاد. بعد ذلك ، احصل على تصوير الفاصل الزمني للأوعية لقياس نفاذية الأوعية الدموية في SMG.في مربع حوار Explorer ، انقر فوق إضافة مجلد جديد "وقم بتغيير اسم الملف. بعد ذلك ، ارجع إلى عمود الاستحواذ. في XY ، التنسيق هو 512 × 512 ، والسرعة 400 هرتز.قم بتشغيل X ثنائي الاتجاه ، واضبط عامل التكبير / التصغير على 0.75 و 1.5 للتكبير. بعد ذلك ، حدد XYT ضمن وضع الاستحواذ "للحصول على تصوير الفاصل الزمني. اضبط المدة على 20 ثانية أو 30 دقيقة أو أكثر حسب الحاجة التجريبية.بعد ضبط الشروط ، انقر فوق "مباشر" لمراقبة تصوير الأوعية الدموية لقناتين وقنوات متداخلة في إطار تشكيل الصورة واختيار مجالات الاهتمام. انقر فوق ابدأ "لبدء التصوير". مقايسة نفاذية الأوعية الدموية في الجسم الحي ، وصور ثلاثية الأبعاد للأوعية الدموية في الفئران.الغدد تحت الفك السفلي موضحة هنا. في المجموعة الضابطة ، كان كل من المتتبعين موجودين في الأوعية الدموية للرشاش. نظرا لوزنه الجزيئي الصغير ، تمكن FD4 من التسرب من الأوعية الدموية إلى الجوانب القاعدية للأسيني والقنوات ، وبالتالي تصوير شكل الأسيني والقنوات بوضوح.تم توزيع RD70 في الأوعية الدموية كبيرة الحجم والأوعية الدقيقة. في مجموعة ربط القناة ، تم نقل كل من FD4 و RD70 إلى الجوانب القاعدية للأسيني ، مما يشير إلى أن ربط القناة يمكن أن يعطل وظيفة الحاجز البطاني ويزيد من نفاذية الجزيئات الكبيرة. علاوة على ذلك ، أكدت نتائج شدة التألق FD4 و RD70 شبه الكمية هذه الملاحظات.أظهرت الصور ثلاثية الأبعاد مضان أكثر غموضا ل FD4 و RD70 حول الأوعية الدموية في مجموعة الربط مقارنة بالمجموعة الضابطة. يعد عزل SMG الدقيق والتنسيب المناسب والمجهر من المتطلبات الأساسية للكشف الناجح. باتباع الإجراءات ، يمكن حساب معدل تدفق الدم عن طريق الزواج من حركة خلايا الدم الحمراء ويمكن مطاردة تسلل خلايا الدم الموسومة بالتألق.

in-vivo-vascular-permeability-detection-in-mouse-submandibular-gland

Research

JoVE Journal

Biology

In Vivo Vascular Permeability Detection in Mouse Submandibular Gland

1.8K Views.  Ministry of Education, and Beijing Key Laboratory of Cardiovascular Receptors Research. The present protocol describes an in vivo paracellular permeability detection measure to evaluate the function of tight endothelial junctions in mouse submandibular glands. Two photon laser scanning microscopy, nevertheless, not only has the advantage of conventional confocal microscopy but can also be used to detect deeper tissue and image more clearly. This experiment provides a good method measure for assessing the vascular permeability of different tissues especially the surface tissues a...