Name: separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis
Uploaded: 2022-09-07T13:00:00
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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82002130), la Fundación de Ciencias Naturales de Beijing (7222059) y el Fondo de Innovación CAMS para Ciencias Médicas (2019-I2M-5-026).

Se obtuvieron muestras de sangre de pacientes con MI (n = 3), portadores sanos del VEB (n = 3) y niños no infectados por el VEB (n = 3). Se reclutaron voluntarios del Hospital de Niños de Beijing, la Universidad Médica Capital, y todos los estudios fueron aprobados éticamente. La aprobación ética fue obtenida por el Comité de Ética del Hospital de Niños de Beijing, Capital Medical University (Número de aprobación: [2021]-E-056-Y). Se renunció al consentimiento informado de los pacientes ya que el estudio solo...

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	<li>Kwok, H., Chiang, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+conventional+to+next+generation+sequencing+of+Epstein-Barr+virus+genomes.">From conventional to next generation sequencing of Epstein-Barr virus genomes.</a> Viruses. 8 (3), 60 (2016).</li><li>Bu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+components+of+the+viral+fusion+apparatus+elicits+antibodies+that+neutralize+Epstein-Barr+virus+in+B+cells+and+epithelial+cells.">Immunization with components of the viral fusion apparatus elicits antibodies that neutralize Epstein-Barr virus in B cells and epithelial cells.</a> Immunity. 50 (5), 1305-1316 (2019).</li><li>Balfour, H. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+expression+signature+that+correlates+with+CD8++T+cell+expansion+in+acute+EBV+infection.">A gene expression signature that correlates with CD8+ T cell expansion in acute EBV infection.</a> Journal of Immunology. 195 (9), 4185-4197 (2015).</li><li>Xia, Y., Gao, Y., Wang, B., Zhang, H., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+the+method+of+cell+separation+from+bile+of+patients+with+cholangiocarcinoma+for+flow+cytometry.">Optimizing the method of cell separation from bile of patients with cholangiocarcinoma for flow cytometry.</a> Gastroenterology Research and Practice. , 5436961 (2019).</li><li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+controls,+instrument+setup,+and+the+determination+of+positivity.">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry Part A. 69 (9), 1037-1042 (2006).</li><li>Byford, E., Carr, M., Pinon, L., Ahearne, M. J., Wagner, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD4++T-cells+and+analysis+of+circulating+T-follicular+helper+(cTfh)+cell+subsets+from+peripheral+blood+using+6-color+flow+cytometry.">Isolation of CD4+ T-cells and analysis of circulating T-follicular helper (cTfh) cell subsets from peripheral blood using 6-color flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. 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B., Zuo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome-wide+analysis+of+CD8++T+cell+responses+to+EBV+reveals+differences+between+primary+and+persistent+infection.">Proteome-wide analysis of CD8+ T cell responses to EBV reveals differences between primary and persistent infection.</a> PLoS Pathogens. 14 (9), 1007110 (2018).</li><li>Zamai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Synergy+of+NKp46+and+co-activating+signals+in+various+NK+cell+subpopulations:+paving+the+way+for+more+successful+NK-cell-based+immunotherapy.">Understanding the Synergy of NKp46 and co-activating signals in various NK cell subpopulations: paving the way for more successful NK-cell-based immunotherapy.</a> Cells. 9 (3), 753 (2020).</li><li>Lam, J. K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+CD4++and+CD8++polyfunctional+T+cell+responses+against+immunodominant+lytic+and+latent+EBV+antigens+in+children+with+primary+EBV+infection.">Emergence of CD4+ and CD8+ polyfunctional T cell responses against immunodominant lytic and latent EBV antigens in children with primary EBV infection.</a> Frontiers In Microbiology. 9, 416 (2018).</li><li>Choi, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+by+the+Epstein-Barr+virus+LMP1+protein+induces+potent+cytotoxic+CD4(+)+and+CD8(+)+T+cell+responses.">Signaling by the Epstein-Barr virus LMP1 protein induces potent cytotoxic CD4(+) and CD8(+) T cell responses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 686-695 (2018).</li></ol>

Este protocolo representa una forma eficiente de clasificar las subpoblaciones de células inmunes de sangre periférica. En este estudio, se seleccionaron muestras de sangre venosa de pacientes con MI, portadores sanos del VEB y niños no infectados por el VEB como objetivo de la investigación. Este trabajo utilizando la sangre periférica de pacientes de IM se centra principalmente en analizar y determinar las proporciones de diferentes subconjuntos celulares a través de la citometría de flujo multicolor. La secuenc...

El virus de Epstein-Barr (VEB), un γ-herpesvirus también conocido como virus del herpes humano tipo 4, es ubicuo en la población humana y establece una infección latente de por vida en más del 90% de la población adulta1. La mayoría de las infecciones primarias por VEB ocurren durante la infancia y la adolescencia, con una fracción de pacientes que se manifiestan con mononucleosis infecciosa (IM)2, mostrando inmunopatología característica, incluida una respuesta inmune activada con células T CD8 + en sangre y una proliferación transitoria de células B infectadas por VEB en la orofaringe3. El curso de la IM puede durar de 2 a 6 semanas y la mayoría de los pacientes se recuperan bien4. Sin embargo, algunos individuos desarrollan síntomas persistentes o recurrentes similares a los IM con alta morbilidad y mortalidad, que se clasifica como infección crónica activa por VEB (VEB)5. Además, el VEB es un virus oncogénico importante, que está estrechamente relacionado con una variedad de neoplasias malignas, incluidas las neoplasias epitelioides y linfoides como el carcinoma nasofaríngeo, el linfoma de Burkitt, el linfoma de Hodgkin (LH) y el linfoma de células T/NK6. Aunque el VEB se ha estudiado durante más de 50 años, su patogénesis y el mecanismo por el cual induce la proliferación de linfocitos no se han dilucidado completamente.
Varios estudios han investigado las firmas moleculares para la inmunopatología de la infección por VEB mediante secuenciación del transcriptoma. Zhong et al. analizaron el perfil del transcriptoma completo de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de niños chinos con IM o CAEBV para encontrar que la expansión de las células T CD8 + se encontró predominantemente en el grupo IM7, lo que sugiere que las células T CD8 + pueden desempeñar un papel importante en la IM. Del mismo modo, otro estudio encontró menores proporciones de células T y CD19+ B citotóxicas específicas del VEB y mayores porcentajes de linfocitos T CD8+ en pacientes con MI causada por infección primaria por VEB que en pacientes con MI causada tanto por reactivación del VEB como por otros agentes8. Las células B están involucradas primero en la IM porque los receptores de EBV se presentan en su superficie. Al Tabaa et al. encontraron que las células B se activaron policlonalmente y se diferenciaron en plasmablastos (CD19+, CD27+ y CD20−, y células CD138−) y células plasmáticas (CD19+, CD27+ y CD20−, y CD138+) durante IM9. Además, Zhong et al. encontraron que los marcadores de monocitos CD14 y CD64 estaban regulados al alza en CAEBV, lo que sugiere que los monocitos pueden desempeñar un papel importante en la respuesta inmune celular de CAEBV a través de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y fagocitosis hiperactiva7. Alka et al. caracterizaron el transcriptoma de células NK CD56dim CD16+ clasificadas por MACS de cuatro pacientes de IM o HL y encontraron que las células NK de IM y HL tenían inmunidad innata regulada a la baja y genes de señalización de quimiocinas, que podrían ser responsables de la hiporeactividad de las células NK10. Además, Greenough et al. analizaron la expresión génica de células T CD8 + clasificadas de 10 PBMC de individuos con IM. Informaron que una gran proporción de células T CD8 + en IM eran específicas del virus, activadas, en división y preparadas para ejercer actividades efectoras11. Tanto las respuestas mediadas por células T, específicas del VEB, como las respuestas no específicas mediadas por células NK desempeñan funciones esenciales durante la infección primaria por VEB. Sin embargo, estos estudios solo investigaron los resultados del transcriptoma de la mezcla diversa de células inmunes o solo una cierta subpoblación de linfocitos, lo que no es suficiente para la comparación exhaustiva de las características moleculares y funciones de diferentes subpoblaciones de células inmunes en niños con MI en el mismo estado de enfermedad.
Este documento describe un método que combina perlas inmunomagnéticas y clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) para aislar y analizar subpoblaciones definidas de células inmunes de PBMC (monocitos, células T CD4 +, células T CD8 +, células B y células NK). Usando este método, las células magnéticas y marcadas con fluorescencia pueden purificarse usando un separador magnético y FACS o analizarse por citometría de flujo. El ARN se puede extraer de las células purificadas para la secuenciación del transcriptoma. Este método permitirá la caracterización y expresión génica de diferentes células inmunes en los mismos estados de enfermedad de individuos con MI, lo que ampliará nuestra comprensión de la inmunopatología de la infección por VEB.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD16</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302012</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD56 (NCAM)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>362504</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cyanine7 anti-human CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344616</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>TC20</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria fluorescence-activated&#160;flow&#160;cell&#160;sorter-cytometer (BD FACSAria II)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>644832</td>
			<td>Cell sort</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD14 MicroBeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-050-201</td>
			<td>microbeads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell ctng slides</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>1450016</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35209715</td>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (&#8805;99%, BioPremium)</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST1303</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) anticoagulant tubes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>&#160;367862&#160;</td>
			<td>EDTA anticoagulant tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD19</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302206</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16000-044</td>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;3K15</td>
			<td>Cell centrifugation for 15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td>Cell centrifugation for 1.5 mL Eppendorf (EP) tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human lymphocyte separation medium</td>
			<td>Dakewe</td>
			<td>DKW-KLSH-0100</td>
			<td>Ficoll-Paque</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS&#160;Separation&#160;columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Separation&#160;columns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td>Magnetic bead separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD8</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344706</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD3</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344808</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>BI</td>
			<td>02-024-1ACS</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td>5 mL tube for FACS flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol reagent</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>15596024</td>
			<td>Lyse cells for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0011</td>
			<td>Trypan Blue Staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis

La mononucleosis infecciosa (IM) es un síndrome agudo asociado principalmente con la infección primaria por el virus de Epstein-Barr (VEB). Los principales síntomas clínicos incluyen fiebre irregular, linfadenopatía y aumento significativo de linfocitos en sangre periférica. El mecanismo patogénico de la MI aún no está claro; No existe un método de tratamiento eficaz para ello, con terapias principalmente sintomáticas disponibles. La pregunta principal en la inmunobiología del VEB es por qué solo un pequeño subconjunto de individuos infectados muestra síntomas clínicos graves e incluso desarrolla neoplasias malignas asociadas al VEB, mientras que la mayoría de los individuos son asintomáticos de por vida con el virus.
Las células B están involucradas primero en la IM porque los receptores de EBV se presentan en su superficie. Las células asesinas naturales (NK) son linfocitos innatos citotóxicos que son importantes para matar las células infectadas por el VEB. La proporción de células T CD4 + disminuye, mientras que la de células T CD8 + se expande dramáticamente durante la infección aguda por VEB, y la persistencia de las células T CD8 + es importante para el control de por vida de la IM. Esas células inmunes juegan un papel importante en la IM, y sus funciones deben identificarse por separado. Para este propósito, los monocitos se separan primero de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de individuos IM utilizando microperlas CD14, una columna y un separador magnético.
Los PBMC restantes se tiñen con peridina-clorofila-proteína (PerCP)/Cyanine 5.5 anti-CD3, aloficocianina (APC)/cianina 7 anti-CD4, ficoeritrina (PE) anti-CD8, isotiocianato de fluoresceína (FITC) anti-CD19, anticuerpos APC anti-CD56 y anticuerpos APC anti-CD16 para clasificar las células T CD4+, las células T CD8+, las células B y las células NK utilizando un citómetro de flujo. Además, se realizó la secuenciación del transcriptoma de cinco subpoblaciones para explorar sus funciones y mecanismos patogénicos en IM.

Referencia de la estrategia de compuerta La estrategia de gating utilizada para ordenar las cuatro subpoblaciones de linfocitos se muestra en la Figura 1. Brevemente, los linfocitos se seleccionan (P1) en un diagrama de puntos que muestra la granulosidad (SSC-A) versus el tamaño (FSC-A). Luego, se seleccionan celdas individuales (P2) en un diagrama de puntos que muestra el tamaño (FSC-A) frente a la dispersión directa (FSC-H), mientras que las celdas dobles se excluyen...

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Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Describimos un método que combina perlas inmunomagnéticas y clasificación celular activada por fluorescencia para aislar y analizar subpoblaciones de células inmunes definidas de células mononucleares de sangre periférica (monocitos, células T CD4 +, células T CD8 +, células B y células asesinas naturales). Usando este método, las células magnéticas y marcadas con fluorescencia pueden ser purificadas y analizadas.

Separación de subpoblaciones de células inmunitarias en muestras de sangre periférica de niños con mononucleosis infecciosa

Infectious mononucleosis (IM) is an acute syndrome mostly associated with primary Epstein&#8211;Barr virus (EBV) infection. The main clinical symptoms ...

Este método permitirá la caracterización de diferentes células inmunes en los mismos estados de enfermedad de individuos con MI, lo que ampliará nuestra comprensión del mecanismo de la infección por EBV. Demostrando el procedimiento estará Linlin Zhang, un médico de nuestro laboratorio. Para comenzar, tome los PBMC aislados previamente en un tubo de microcentrífuga de 1.5 mililitros, y gírelos a 300 G durante 10 minutos a temperatura ambiente.Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender las células con 80 microlitros del tampón preparado. A continuación, agregue 20 microlitros de microperlas CD 14 a la suspensión celular, mezcle bien con pipeteo e incube el tubo durante 15 minutos en hielo. Luego lave las PBMC con un mililitro de tampón y centrifugar a 300 G durante 10 minutos a temperatura ambiente.Deseche todo el sobrenadante y vuelva a suspender las células con 500 microlitros del tampón. Para la separación magnética, coloque una columna en el separador de perlas magnéticas y prepare la columna lavándola con tres mililitros del tampón. A continuación, agregue la suspensión de celdas a la columna.Deje que pase y recoja las células no marcadas en un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Lave la columna tres veces con tres mililitros del tampón y recoja todo el efluente en un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Ahora, coloque la columna en un nuevo tubo de centrífuga de 15 mililitros y agregue cinco mililitros de amortiguador a la columna.Empuje el émbolo firmemente en la columna para enjuagar las células marcadas magnéticamente en el tubo. Centrifugar las células marcadas magnéticamente a 300 G durante cinco minutos. Después de retirar el sobrenadante, vuelva a suspender las células en 500 microlitros de PBS y transfiera la suspensión celular a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros para su posterior secuenciación del transcriptoma.Granular las células recolectadas sin marcar centrifugando a 300 G durante cinco minutos y volver a suspender las células en 100 microlitros de PBS en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Luego, agregue dos microlitros de cada anticuerpo marcado a la suspensión celular e incube en hielo durante 30 minutos, protegido de la luz. A continuación, alícuota 100 microlitros de la suspensión de células PBMC en tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitros para configurar una muestra de control negativo CD 3, CD 4, CD 8 y CD 19, muestras de tinción única y una muestra de tinción CD 56 o CD 16.Luego agregue dos microlitros del anticuerpo marcado fluorescentemente correspondiente a cada tubo e incube en hielo durante 30 minutos, protegido de la luz. Después de la incubación, lave todas las células con PBS como se demostró anteriormente y vuelva a suspender en 500 microlitros de PBS. Abra el sistema de clasificación de celdas y ejecute el programa de encendido.Luego, instale la boquilla de 85 micrómetros y abra el flujo de clasificación. Establezca el voltaje de clasificación en 4, 500 voltios y la frecuencia en 47. Configure el espacio a 8 en la ventana de separación y active el modo de clasificación automática de punto óptimo para determinar automáticamente el valor de amplitud de gotas.Finalmente, ajuste el retardo de gota a 30.31 en la ventana de flujo lateral. Usando un diagrama de puntos de dispersión hacia adelante versus hacia el lado, dibuje la puerta de polígono P1 para identificar la población de linfocitos intacta. A continuación, utilizando un diagrama de puntos de área de dispersión hacia adelante frente a altura, dibuje la puerta de polígono P2 para identificar las celdas individuales y excluir dobletes.Luego, usando un diagrama de puntos de área FITC de CD 19 frente a CD 3 por CPCY 5.5 area, dibuje la puerta rectangular P3 para seleccionar células T positivas de CD 3 y células B positivas de CD 19. A continuación, utilizando un diagrama de puntos de área de CD 4 APCCY 7 frente a área de PE de CD 8, dibuje una puerta rectangular para seleccionar CD 4 y células T positivas para CD 8. Finalmente, usando un diagrama de puntos de área de dispersión lateral versus CD 56 o CD 16 APC, dibuje una puerta rectangular para seleccionar células asesinas naturales positivas para CD 56 o CD 16.Para el tubo de control negativo, haga clic en cargar en el panel de adquisición y seleccione la configuración del citómetro en el software. En la ventana del inspector, haga clic en la pestaña de parámetros y ajuste los voltajes de dispersión directa, dispersión lateral y diferentes tintes fluorescentes. Después de cargar los tubos teñidos individuales en el citómetro, haga clic en cargar en el panel de adquisición y, a continuación, haga clic en la pestaña de compensación para ajustar la compensación, como se describe en el texto.Vortex la suspensión celular suavemente, antes de cargar el tubo en el citómetro. Agregue 200 microlitros de FBS a cuatro tubos de flujo de recolección y voltee los tubos. Colóquelos en la cámara de recolección del citómetro.Recoja los diferentes tipos de células por separado en los cuatro tubos de flujo. Haga girar las células separadas a 300 G durante cinco minutos y agregue 200 microlitros de reactivo de aislamiento de ARN a la paleta de células para la secuenciación del transcriptoma. En el presente estudio, las subpoblaciones de células inmunes de sangre periférica de diferentes muestras se clasificaron de manera eficiente combinando las técnicas de perlas inmunomagnéticas y clasificación celular activada por fluorescencia.Es importante destacar que en este protocolo, el paso de clasificación celular se ha optimizado para mejorar la viabilidad celular. Las células inmunes clasificadas mostraron una mayor proporción de células T positivas para CD 3, CD 8 en pacientes con mononucleosis infecciosa en comparación con los portadores sanos del virus de Epstein-Barr y las muestras no infectadas. En contraste, se observó una disminución de las proporciones de células T CD 3, CD 4 positivas y células B positivas para CD 19 en pacientes con mononucleosis infecciosa en comparación con portadores sanos de VEB y niños no infectados por VEB.Además, se observó una disminución de las proporciones de células asesinas naturales CD 56 o CD 16 positivas en pacientes con mononucleosis infecciosa en comparación con niños no infectados por EBV. Mantener la viabilidad celular es vital para el experimento posterior. Mantener las células en hielo o en el refrigerador durante el proceso de clasificación es beneficioso para la viabilidad celular.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

La enumeración de las principales poblaciones de leucocitos de sangre periférica en ensayos clínicos multicéntricos utilizando un ensayo de sangre entera Fenotipado

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Investigación

Inmunología e Infección

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Aislamiento de los precursores de células B subconjuntos de Sangre del Cordón Umbilical

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

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Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

La detección de nanopartículas fluorescentes Interacciones con inmunodeficiencia primaria subpoblaciones celulares por citometría de flujo

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

La identificación rápida de bacterias gram negativas de Cultura sangre caldo de cultivo utilizando MALDI-TOF espectrometría de masas

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

La detección de glucógeno en las células mononucleares de sangre periférica con ácido periódico de Schiff tinción

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

Generación de células T humanas aloantígeno-específicos de la sangre periférica

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

Un enfoque semi-automatizado de preparación de cócteles de anticuerpos para el Análisis Inmunofenotípicos de la sangre periférica humana

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

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Análisis de linfocitos extravasación El uso de una<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelo de la barrera sangre-cerebro humano

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System

Aislar los linfocitos desde el sistema de inmune Intestinal pequeño ratón

The intestinal immune system plays an essential role in maintaining the barrier function of the gastrointestinal tract by generating tolerant responses to ...