Den orofaciale smertevurderingsenhed eller OPAD er et værdifuldt værktøj til præklinisk smerteforskning, da den bruger et operant belønningskonfliktparadigme. Dette omfatter nociception, læring og motivation, som er vigtige i den menneskelige smerteoplevelse og forbedret translationel validitet. En væsentlig fordel ved OPAD i forhold til traditionelle refleksbaserede assays er, at den er fuldt automatiseret, hvilket eliminerer behovet for at begrænse dyr, der forhindrer relaterede stresseffekter, og det reducerer også eksperimentets bias.
Darrice Montgomery, en laborant fra mit laboratorium, demonstrerer CCI-operationen af infraorbitalnerven. Begynd med at konfigurere den orofaciale smertevurderingsenhed eller OPAD ved at placere mælkedrypbakker, plexiglasbure og metalgulvriste. Fastgør ledninger til burene, og slip flaskeholderen på metalstangen bag på enheden.
Placer derefter belønningsmælkeflaskerne på flaskeholderen på en måde, så tuden kan nås af dyret. Spænd holderens venstre sideknap for at fastgøre flasken på plads. Tænd derefter frontpanelet og tænd burene.
For at konfigurere protokollen skal du åbne softwaren, indtaste adgangskoden og klikke på Log mig på eller trykke på Enter. Klik på Nyt tomt eksperiment og menuen Protokol. Under Apparatur skal du klikke på Unavngiven protokol og vælge den tilstand, som denne protokol vil bruge.
Under Udstyrsspecifikke tilstande skal du vælge OPAD Mechanical Cage Mode og navngive protokollen. Når du har sikret dig, at alle burene er tændt, skal du tilføje OPAD-burene ved at klikke på Apparatur og Tilføj element øverst i protokolruden efterfulgt af at vælge Ny OPAD-bur og Tilføj alle tilsluttede OPAD-bure. Hvis du vil tilføje eksperimenttestfaserne, skal du gå til fanen Test for at vælge faserne og fanerne Første fase og derefter navngive fasen.
Tilføj 10 minutter som testens varighed. Tilføj flere faser ved at klikke på Tilføj emnefane efterfulgt af Ny fase. Tildel derefter grupperne ved at klikke på Yderligere oplysninger og behandlingsgrupper.
Kontroller brugte behandlingsgrupper efterfulgt af at vælge indstillingen Brugeren vil manuelt tildele dyrene til deres grupper. Tildel dyreidentifikationer ved at klikke på menuen Protokol. Under Yderligere oplysninger skal du klikke på Animal ID og markere indstillingen Brug mine id'er til at henvise til dyr.
Indstil eksperimentet ved at indtaste eksperimentets titel, før du klikker på Vis behandlinger og skriver behandlingsnavnene. Tilføj dyr, og tildel behandlinger og dyre-id'er ved at klikke på Vis dyr og Tilføj dyr. Indtast antallet af dyr, der skal testes, efterfulgt af Okay.
Når dyrelisten vises, skal du tilføje dyre-ID og behandling for hver rotte. Gem protokollen ved at klikke på menuen Protokol efterfulgt af Gem protokol. Indtast filnavnet og softwareadgangskoden, og klik på Gem.
Gem derefter eksperimentfilen ved at klikke på filen, derefter Gem, skrive softwareadgangskoden og klikke på fanen Gem. Når du har tændt burene, skal du kigge efter det grønne lys på buret, der angiver, at buret er klar til test. Åbn den gemte eksperimentfil med et dobbeltklik.
Indtast adgangskoden, klik på Log mig på, eller tryk på Enter. På venstre side af skærmen skal du notere antallet af dyr og det tilsvarende bur, scenen, der kører den dag og teststatus. Overhold testdyrets ID på burets skærm.
Placer rotten i buret og tryk på knappen på det tilsvarende bur. Bemærk, at det grønne lys bliver til et orange lys, når testen starter. Sørg for, at dyret kan få adgang til belønningsflasken, mens det får tilstrækkelig kontakt med de mekaniske pigge.
På højre side af skærmen skal du observere diagrammet for hvert dyr, der viser antallet af slik og kontakter. Der høres en advarselslyd, når testsessionen er slut. Placer den bedøvede rotte på et kirurgisk arbejdsbord og begræns den.
Hold kropstemperaturen ved 37 grader Celsius ved hjælp af en varmepude. Påfør oftalmisk salve på øjnene for at forhindre dem i at tørre ud. Brug skalpelblad 15 til at lave et lille snit mellem rygmarven og læben.
Fjern blødt væv ved hjælp af skalpelbladet og afslør grenen af de infraorbitale nerver eller ION. Ved hjælp af en stump bøjet sprøjtenål skal du placere to 5-O kromiske tarmligaturer omkring ION og derefter lukke såret ved hjælp af vævslim. Kontaktforsøg og slikkende data for en enkelt CCI ION og Sham opereret rotte under standard 10 minutters testsession ved baseline og to uger, fire uger og seks uger efter operationen præsenteres her.
Modellen afslørede, at rotter i de ikke-skadelige perioder har lange drikkesessioner. Efter skaden kan dyret ikke opretholde ansigtskontakt med de piggede stænger i lang tid, hvilket resulterer i et nedsat sliknummer. I Sham-gruppen blev der ikke observeret signifikante ændringer i drikkeperioden.
Det gennemsnitlige antal slik mellem CCI ION og Sham-opererede rotter ved baseline viste ingen signifikante forskelle. CCI ION reducerede imidlertid signifikant slikketallet indtil fire uger efter operationen og øgede latenstiden for det første slik i ugen efter operationen og en uge efter nerveskade, hvilket indikerer mekanisk hyperalgesi. Der var ingen væsentlig ændring i Sham-opererede rotter.
Mens du bruger OPAD, skal du optimere mælkeflaskens afstand og piggenes bredde. Det er vigtigt at holde dette konsekvent for at reducere fejl under dataindsamlingen.
