Het orofaciale pijnbeoordelingsapparaat, of OPAD, is een waardevol hulpmiddel voor preklinisch pijnonderzoek omdat het een operant beloningsconflictparadigma gebruikt. Dit omvat nociceptie, leren en motivatie, die belangrijk zijn in de menselijke pijnervaring en verbeterde translationele validiteit. Een belangrijk voordeel van de OPAD ten opzichte van traditionele reflexgebaseerde testen is dat het volledig geautomatiseerd is, waardoor het niet meer nodig is om dieren te beperken en gerelateerde stresseffecten te voorkomen, en het vermindert ook de vooringenomenheid van experimentatoren.
De CCI-operatie van de infraorbitale zenuw wordt gedemonstreerd door Darrice Montgomery, een laborant uit mijn lab. Begin met het opzetten van het orofaciale pijnbeoordelingsapparaat, of OPAD, door de melkdruppelbakken, plexiglas kooien en metalen vloerroosters te plaatsen. Bevestig de bedrading aan de kooien en schuif de flessenhouder op de metalen paal aan de achterkant van het apparaat.
Plaats vervolgens de beloningsmelkflessen op de flessenhouder op een manier dat de tuit door het dier kan worden bereikt. Draai de linkerknop van de houder vast om de fles op zijn plaats te houden. Schakel vervolgens het voorpaneel in en schakel de kooien in.
Als u het protocol wilt instellen, opent u de software, voert u het wachtwoord in en klikt u op Aanmelden of klikt u op Enter. Klik op Nieuw leeg experiment en het menu Protocol. Klik onder Apparaat op Naamloos protocol en selecteer de modus die dit protocol zal gebruiken.
Selecteer onder Uitrustingsspecifieke modi de optie OPAD Mechanical Cage Mode (OpAD Mechanical Cage Mode) en geef het protocol een naam. Nadat u ervoor hebt gezorgd dat alle kooien zijn ingeschakeld, voegt u de OPAD-kooien toe door te klikken op Apparaat en Item toevoegen bovenaan het protocolvenster, gevolgd door Nieuwe OPAD-kooi en Alle aangesloten OPAD-kooien toevoegen te selecteren. Als u de testfasen van het experiment wilt toevoegen, gaat u naar het tabblad Testen om de fasen en de tabbladen Eerste fase te selecteren en geeft u de fase een naam.
Voeg 10 minuten toe als duur van de test. Voeg meer fasen toe door op Itemtabblad toevoegen te klikken, gevolgd door Nieuwe fase. Wijs vervolgens de groepen toe door op Aanvullende informatie en behandelingsgroepen te klikken.
Controleer gebruikte behandelingsgroepen gevolgd door de optie De gebruiker zal de dieren handmatig toewijzen aan hun groepen te selecteren. Wijs dieridentificaties toe door op het menu Protocol te klikken. Klik onder Aanvullende informatie op Dier-ID en vink de optie Mijn ID's gebruiken om naar dieren te verwijzen aan.
Stel het experiment in door de titel van het experiment in te typen voordat u op Behandelingen weergeven klikt en de namen van de behandeling typt. Voeg dieren toe en wijs de behandelingen en dier-ID's toe door op Dieren bekijken en Dieren toevoegen te klikken. Voer het aantal te testen dieren in, gevolgd door Okay.
Zodra de dierenlijst verschijnt, voegt u de dier-ID en behandeling voor elke rat toe. Sla het protocol op door op het menu Protocol te klikken, gevolgd door Protocol opslaan. Voer de bestandsnaam en het softwarewachtwoord in en klik op Opslaan.
Sla vervolgens het experimentbestand op door op het bestand te klikken, vervolgens op Opslaan, het softwarewachtwoord te typen en op het tabblad Opslaan te klikken. Zoek na het inschakelen van de kooien naar het groene licht op de kooi dat aangeeft dat de kooi klaar is om te testen. Open het opgeslagen experimentbestand met een dubbelklik.
Voer het wachtwoord in, klik op Aanmelden of druk op Enter. Noteer aan de linkerkant van het scherm het aantal dieren en de bijbehorende kooi, de fase die op die dag loopt en de teststatus. Bekijk de ID van het proefdier op het scherm van de kooi.
Plaats de rat in de kooi en druk op de knop op de bijbehorende kooi. Houd er rekening mee dat het groene lampje verandert in een oranje lampje zodra het testen begint. Zorg ervoor dat het dier toegang heeft tot de beloningsfles terwijl u voldoende contact maakt met de mechanische spikes.
Bekijk aan de rechterkant van het scherm de grafiek van elk dier met het aantal likjes en contacten. Er klinkt een waarschuwingsgeluid wanneer de testsessie is afgelopen. Plaats de verdoofde rat op een chirurgische werkbank en houd hem in bedwang.
Houd de lichaamstemperatuur op 37 graden Celsius met behulp van een verwarmingskussen. Breng oogheelkundige zalf aan op de ogen om te voorkomen dat ze uitdrogen. Gebruik scalpelblad 15 om een kleine incisie te maken tussen het dorsale tandvlees en de lip.
Verwijder het zachte weefsel met behulp van het scalpelblad en onthul de tak van de infraorbitale zenuwen of ION. Plaats met behulp van een stompe gebogen spuitnaald twee 5-Ochrome darmligaturen rond de ION en sluit vervolgens de wond met weefsellijm. De contactpogingen en likgegevens van een enkele CCI ION en Sham geopereerde rat tijdens de standaard testsessie van 10 minuten bij baseline en twee weken, vier weken en zes weken na de operatie worden hier gepresenteerd.
Het model onthulde dat ratten tijdens de niet-schadelijke periodes lange sessies van drinken hebben. Na het letsel kan het dier gedurende een lange duur geen gezichtscontact houden met de spiked bars, wat resulteert in een verminderd likgetal. In de Sham-groep werden geen significante veranderingen waargenomen voor de drinkperiode.
Het gemiddelde aantal likjes tussen CCI ION en Sham geopereerde ratten bij de baseline vertoonde geen significante verschillen. CCI ION verminderde echter aanzienlijk het aantal likken tot vier weken na de operatie en verhoogde de latentie voor de eerste lik tijdens de week na de operatie en een week na zenuwletsel, wat wijst op mechanische hyperalgesie. Er was geen significante verandering in Sham-bediende ratten.
Optimaliseer tijdens het gebruik van de OPAD de afstand van de melkfles en de breedte van de spikes. Het is belangrijk om dit consistent te houden om fouten tijdens het verzamelen van gegevens te verminderen.
