Den orofaciale smertevurderingsenheten, eller OPAD, er et verdifullt verktøy for preklinisk smerteforskning, da den bruker et operant belønningskonfliktparadigme. Dette omfatter nociception, læring og motivasjon, som er viktige i den menneskelige smerteopplevelsen og forbedret translasjonsgyldighet. En betydelig fordel med OPAD i forhold til tradisjonelle refleksbaserte analyser er at den er helautomatisk, noe som eliminerer behovet for å begrense dyr som forhindrer relaterte stresseffekter, og det reduserer også eksperimentets skjevhet.
Demonstrere CCI kirurgi av infraorbital nerve vil være Darrice Montgomery, en laboratorietekniker fra laboratoriet mitt. Begynn med å sette opp orofacial smertevurderingsenheten, eller OPAD, ved å plassere melkedråpebrettene, plexiglassburene og metallgulvristene. Fest ledninger til burene og slipp flaskeholderen på metallstangen på baksiden av enheten.
Plasser deretter belønningsmelkflaskene på flaskeholderen på en slik måte at tuten kan nås av dyret. Stram knappen på venstre side på holderen for å feste flasken på plass. Slå deretter på frontpanelet og slå på burene.
For å sette opp protokollen, åpne programvaren, skriv inn passordet og klikk Logg meg på eller trykk Enter. Klikk Nytt tomt eksperiment og Protokoll-menyen. Under Apparat klikker du på Ikke navngitt protokoll og velger modusen denne protokollen skal bruke.
Under Utstyrsspesifikke moduser velger du OPAD Mechanical Cage Mode og navngir protokollen. Etter å ha forsikret deg om at alle burene er slått på, legger du til OPAD-burene ved å klikke på Apparat og Legg til element øverst i protokollruten, etterfulgt av å velge Nytt OPAD-bur og Legg til alle tilkoblede OPAD-bur. Hvis du vil legge til eksperimentteststadiene, går du til Testing-fanen for å velge trinnene og Første fase-fanene, og deretter gir du stadiet et navn.
Legg til 10 minutter som testvarighet. Legg til flere stadier ved å klikke på Legg til elementfane, etterfulgt av Nytt trinn. Deretter tilordner du gruppene ved å klikke på Tilleggsinformasjon og behandlingsgrupper.
Merk av for Brukte behandlingsgrupper etterfulgt av å velge alternativet Brukeren vil manuelt tilordne dyrene til gruppene sine. Tilordne dyreidentifikasjoner ved å klikke på Protokoll-menyen. Under Tilleggsinformasjon klikker du på Dyre-ID og merker av for alternativet Bruk mine ID-er for å referere til dyr.
Angi eksperimentet ved å skrive inn eksperimenttittelen før du klikker Vis behandlinger og skriver inn behandlingsnavnene. Legg til dyr og tilordne behandlinger og dyre-ID-er ved å klikke på Vis dyr og legg til dyr. Skriv inn antall dyr som skal testes, etterfulgt av OK.
Når dyrelisten vises, legg til dyre-ID og behandling for hver rotte. Lagre protokollen ved å klikke på Protokoll-menyen etterfulgt av Lagre protokoll. Skriv inn filnavnet og programvarepassordet, og klikk Lagre.
Deretter lagrer du eksperimentfilen ved å klikke på filen, deretter Lagre, skrive inn programvarepassordet og klikke på Lagre-fanen. Etter å ha slått på merdene, se etter det grønne lyset på buret som angir at buret er klart til å teste. Åpne den lagrede eksperimentfilen med et dobbeltklikk.
Skriv inn passordet, klikk Logg meg på, eller trykk Enter. På venstre side av skjermen noterer du antall dyr og det tilhørende buret, scenen som går den dagen og teststatusen. Observer testdyrets ID på burets skjerm.
Plasser rotta i buret og trykk på knappen på det tilsvarende buret. Vær oppmerksom på at det grønne lyset blir til et oransje lys når testingen starter. Sørg for at dyret får tilgang til belønningsflasken mens du får tilstrekkelig kontakt med de mekaniske piggene.
På høyre side av skjermen observerer du diagrammet over hvert dyr som viser antall slikker og kontakter. En advarselslyd høres når testøkten er over. Plasser den bedøvede rotten på en kirurgisk arbeidsbenk og hold den fast.
Oppretthold kroppstemperaturen ved 37 grader Celsius ved hjelp av en varmepute. Påfør oftalmisk salve i øynene for å forhindre at de tørker ut. Bruk skalpellblad 15 for å lage et lite snitt mellom dorsalgummi og leppe.
Fjern bløtvevet ved hjelp av skalpellbladet og avslør grenen av infraorbitale nerver, eller ION. Ved hjelp av en stump bøyd sprøytenål, plasser to 5-O kromiske tarmligaturer rundt ION, og lukk deretter såret ved hjelp av vevslim. Kontaktforsøkene og slikkedataene til en enkelt CCI ION og Sham opererte rotte under standard 10 minutters testøkt ved baseline, og to uker, fire uker og seks uker etter operasjonen presenteres her.
Modellen avslørte at rotter i løpet av de ikke-skadelige periodene har lange økter med drikking. Etter skaden kan dyret ikke opprettholde ansiktskontakt med de piggede stengene i lang tid, noe som resulterer i et redusert slikketall. I Sham-gruppen ble det ikke observert signifikante endringer for drikkeperioden.
Gjennomsnittlig antall slikker mellom CCI ION og Sham-opererte rotter ved baseline viste ingen signifikante forskjeller. Imidlertid reduserte CCI ION signifikant slikketall til fire uker etter operasjonen og økte ventetiden for den første slikken i løpet av uken etter operasjonen og en uke etter nerveskade som indikerer mekanisk hyperalgesi. Det var ingen signifikant endring i Sham-opererte rotter.
Mens du bruker OPAD, optimaliser avstanden til melkeflasken og bredden på piggene. Det er viktig å holde dette konsistent for å redusere feil under datainnsamlingen.