Den orofaciala smärtbedömningsenheten, eller OPAD, är ett värdefullt verktyg för preklinisk smärtforskning eftersom den använder ett operant belöningskonfliktparadigm. Detta omfattar nociception, inlärning och motivation, vilket är viktigt för upplevelsen av mänsklig smärta och förbättrad translationell validitet. En betydande fördel med OPAD jämfört med traditionella reflexbaserade analyser är att den är helt automatiserad, vilket eliminerar behovet av att begränsa djur som förhindrar relaterade stresseffekter, och det minskar också experimentförspänningen.
Demonstrerar CCI-operationen hos den infraorbitala nerven kommer att vara Darrice Montgomery, en laboratorietekniker från mitt laboratorium. Börja med att ställa in den orofaciala smärtbedömningsenheten, eller OPAD, genom att placera mjölkdroppbrickorna, plexiglasburarna och metallgolvgallren. Fäst ledningarna i burarna och skjut flaskhållaren på metallstången på baksidan av enheten.
Placera sedan belöningsmjölkflaskorna på flaskhållaren på ett sätt så att pipen kan nås av djuret. Dra åt hållarens vänstra vred för att säkra flaskan på plats. Slå sedan på frontpanelen och slå på burarna.
För att ställa in protokollet, öppna programvaran, ange lösenordet och klicka på Logga in mig på eller tryck på Enter. Klicka på Nytt tomt experiment och på menyn Protokoll. Under Apparat klickar du på Namnlöst protokoll och väljer det läge som detta protokoll ska använda.
Under Utrustningsspecifika lägen väljer du OPAD Mechanical Cage Mode och namnger protokollet. När du har kontrollerat att alla burar är påslagna lägger du till OPAD-burarna genom att klicka på Apparat och Lägg till objekt högst upp i protokollrutan, följt av att välja Ny OPAD-bur och Lägg till alla anslutna OPAD-burar. Om du vill lägga till experimentteststegen går du till fliken Testning för att välja flikarna Stadier och Första steget och namnger sedan stadiet.
Lägg till 10 minuter som testvaraktighet. Lägg till fler steg genom att klicka på Lägg till objektflik, följt av Ny scen. Tilldela sedan grupperna genom att klicka på Ytterligare information och behandlingsgrupper.
Kontrollera Använda behandlingsgrupper följt av att välja alternativet Användaren tilldelar djuren manuellt till sina grupper. Tilldela djuridentifieringar genom att klicka på protokollmenyn. Under Ytterligare information klickar du på Djur-ID och markerar alternativet Använd mina ID för att hänvisa till djur.
Ange experimentet genom att skriva in experimentets titel innan du klickar på Visa behandlingar och skriver behandlingsnamnen. Lägg till djur och tilldela behandlingar och djur-ID genom att klicka på Visa djur och Lägg till djur. Ange antalet djur som ska testas, följt av Okej.
När djurlistan visas lägger du till djur-ID och behandling för varje råtta. Spara protokollet genom att klicka på protokollmenyn följt av Spara protokoll. Ange filnamnet och programvarulösenordet och klicka på Spara.
Spara sedan experimentfilen genom att klicka på filen, sedan Spara, skriv programvarulösenordet och klicka på fliken Spara. När du har slagit på burarna, leta efter det gröna ljuset på buret som anger att buret är klart att testa. Öppna den sparade experimentfilen med ett dubbelklick.
Ange lösenordet, klicka på Logga in mig eller tryck på Enter. Till vänster på skärmen noterar du antalet djur och motsvarande bur, scenen som pågår den dagen och teststatus. Observera försöksdjurets ID på burens skärm.
Placera råttan i buret och tryck på knappen på motsvarande bur. Observera att det gröna ljuset förvandlas till ett orange ljus när testningen startar. Se till att djuret kan komma åt belöningsflaskan samtidigt som du får tillräcklig kontakt med de mekaniska spikarna.
På höger sida av skärmen, observera diagrammet för varje djur som visar antalet slickar och kontakter. Ett varningsljud hörs när testsessionen är över. Placera den bedövade råttan på en kirurgisk arbetsbänk och håll fast den.
Håll kroppstemperaturen vid 37 grader Celsius med en värmedyna. Applicera oftalmisk salva på ögonen för att förhindra att de torkar ut. Använd skalpellblad 15 för att göra ett litet snitt mellan rygggummit och läppen.
Ta bort mjukvävnaden med skalpellbladet och avslöja grenen på de infraorbitala nerverna, eller ION. Med hjälp av en trubbig böjd sprutnål, placera två 5-O kroma tarmligaturer runt JONEN och stäng sedan såret med vävnadslim. Kontaktförsök och slickdata för en enda CCI ION och Sham-opererad råtta under standard 10 minuters testsession vid baslinjen och två veckor, fyra veckor och sex veckor efter operationen presenteras här.
Modellen avslöjade att råttor under de icke-skadliga perioderna har långa sessioner av att dricka. Efter skadan kan djuret inte upprätthålla ansiktskontakt med de spikade stängerna under lång tid vilket resulterar i ett minskat slicknummer. I Sham-gruppen observerades inte signifikanta förändringar för dricksperioden.
Det genomsnittliga antalet slickar mellan CCI ION och Sham-opererade råttor vid baslinjen visade inga signifikanta skillnader. CCI ION minskade dock signifikant slickantalet fram till fyra veckor efter operationen och ökade latensen för den första slickningen under veckan efter operationen och en vecka efter nervskada som indikerar mekanisk hyperalgesi. Det fanns ingen signifikant förändring i Sham-opererade råttor.
När du använder OPAD, optimera mjölkflaskans avstånd och spikarnas bredd. Det är viktigt att hålla detta konsekvent för att minska felen under datainsamlingen.