Name: in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents
Uploaded: 2022-09-07T13:20:00
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इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ डायबिटीज एंड डाइजेस्टिव एंड किडनी डिजीज (एनआईडीडीके) से जेएमबी (डीके 117884) को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।

कृन्तकों में की गई सभी प्रक्रियाओं को लागू दिशानिर्देशों का पालन करना चाहिए और स्थानीय संस्थागत नैतिकता समीक्षा समिति द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए। इस पांडुलिपि के लिए किए गए प्रयोगों को प्रयोग?...

<ol>
	<li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+in+the+urinary+tract+in+health+and+disease.">Purinergic signalling in the urinary tract in health and disease.</a> Purinergic Signalling. 10 (1), 103-155 (2014).</li><li>Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+signaling.">Urothelial signaling.</a> Autonomic Neuroscience: Basic &amp; Clinical. 153 (1-2), 33-40 (2010).</li><li>Silva-Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+may+be+a+dynamic+biomarker+of+detrusor+overactivity+in+women+with+overactive+bladder+syndrome.">Urinary ATP may be a dynamic biomarker of detrusor overactivity in women with overactive bladder syndrome.</a> PLoS One. 8 (5), 64696 (2013).</li><li>Sun, Y., Chai, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+extracellular+ATP+signaling+in+bladder+urothelial+cells+from+patients+with+interstitial+cystitis.">Augmented extracellular ATP signaling in bladder urothelial cells from patients with interstitial cystitis.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 290 (1), 27-34 (2006).</li><li>Gill, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+as+an+indicator+of+infection+and+inflammation+of+the+urinary+tract+in+patients+with+lower+urinary+tract+symptoms.">Urinary ATP as an indicator of infection and inflammation of the urinary tract in patients with lower urinary tract symptoms.</a> BMC Urology. 15 (1), 7 (2015).</li><li>S&#228;ve, S., Persson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+and+P2Y+receptor+activation+induce+a+proinflammatory+host+response+in+the+human+urinary+tract.">Extracellular ATP and P2Y receptor activation induce a proinflammatory host response in the human urinary tract.</a> Infection and Immunity. 78 (8), 3609-3615 (2010).</li><li>Munoz, A., Smith, C. P., Boone, T. B., Somogyi, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overactive+and+underactive+bladder+dysfunction+is+reflected+by+alterations+in+urothelial+ATP+and+NO+release.">Overactive and underactive bladder dysfunction is reflected by alterations in urothelial ATP and NO release.</a> Neurochemistry International. 58 (3), 295-300 (2011).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> The Journal of Physiology. 593 (8), 1857-1871 (2015).</li><li>Zhang, Y. Y., Ludwikowski, B., Hurst, R., Frey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+long-term+culture+of+differentiated+normal+rat+urothelial+cells+in+vitro.">Expansion and long-term culture of differentiated normal rat urothelial cells in vitro.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 37 (7), 419-429 (2001).</li><li>Lee, S., Carrasco, A., Meacham, R. B., Malykhina, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+instillation+procedure+in+adult+male+mouse.">Transurethral instillation procedure in adult male mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56663 (2017).</li><li>Zychlinsky Scharff, A., Albert, M. L., Ingersoll, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+tract+infection+in+a+small+animal+model:+Transurethral+catheterization+of+male+and+female+mice.">Urinary tract infection in a small animal model: Transurethral catheterization of male and female mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e54432 (2017).</li><li>Uvin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cystometry+in+small+rodents:+a+study+of+bladder+chemosensation.">The use of cystometry in small rodents: a study of bladder chemosensation.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e3869 (2012).</li><li>Leitao, J. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+luciferase+inhibition.">Firefly luciferase inhibition.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B. 101 (1), 1-8 (2010).</li><li>Auld, D. S., Thorne, N., Nguyen, D. T., Inglese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+mechanism+for+nonspecific+activation+in+reporter-gene+assays.">A specific mechanism for nonspecific activation in reporter-gene assays.</a> ACS Chemical Biology. 3 (8), 463-470 (2008).</li><li>Harvey, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+oxidation+of+luciferin+without+luciferase+and+the+mechanism+of+bioluminescence.">Studies on the oxidation of luciferin without luciferase and the mechanism of bioluminescence.</a> Journal of Biological Chemistry. 78 (2), 369-375 (1928).</li><li>Wang, J., Jackson, D. G., Dahl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+food+dye+FD&amp;C+Blue+No.+1+is+a+selective+inhibitor+of+the+ATP+release+channel+Panx1.">The food dye FD&amp;C Blue No. 1 is a selective inhibitor of the ATP release channel Panx1.</a> The Journal of General Physiology. 141 (5), 649-656 (2013).</li><li>Avazpour, M., Shiri, S., Delpisheh, A., Abbasi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+brilliant+blue+FCF+and+carmoisine+in+food+samples+by+aqueous+two-phase+system+and+spectrophometric+detection.">Simultaneous determination of brilliant blue FCF and carmoisine in food samples by aqueous two-phase system and spectrophometric detection.</a> Journal of Basic Research in Medical Sciences. 1 (1), 56-65 (2014).</li></ol>

यूरोथेलियल एटीपी रिलीज में अधिकांश शोध सुसंस्कृत कोशिकाओं में आयोजित किया जाता है, या तो अमर सेल लाइनों या कृंतक यूरोथेलियल कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृतियों का उपयोग करके। जबकि इन मॉडलों में अपेक्ष?...

मूत्र एटीपी को माइक्रोट्यूरियन1 के नियंत्रण में एक महत्वपूर्ण संवेदी भूमिका निभाने के लिए माना जाता है। उदाहरण के लिए, यह माना जाता है कि एटीपी को डिस्टेंशन के जवाब में यूरोथेलियम से जारी किया जाता है जहां यह मूत्राशय अभिवाही नसों पर रिसेप्टर्स पर उनकी उत्तेजना बढ़ाने के लिए कार्य कर सकता है, जिससे परिपूर्णता की संवेदनाएंहोती हैं। इस प्रकार, यह भी सोचा जाता है कि मूत्राशय की विकृति के विकास में मूत्र एटीपी एक महत्वपूर्ण खिलाड़ी हो सकता है। इस परिकल्पना के समर्थन में, अतिसक्रिय मूत्राशय (ओएबी) 3, मूत्राशय दर्द सिंड्रोम / अंतरालीय सिस्टिटिस (बीपीएस / आईसी) 4, या मूत्र पथ के संक्रमण (यूटीआई) 5,6 से पीड़ित रोगियों में मूत्र एटीपी सांद्रता में काफी वृद्धि हुई है, सभी स्थितियां बढ़ी हुई तात्कालिकता, आवृत्ति और, कभी-कभी, दर्द की विशेषता है। इसके विपरीत, अंडरएक्टिव मूत्राशय (यूएबी) से पीड़ित रोगियों, जो किसी के मूत्राशय को खाली करने में असमर्थता की विशेषता है और कभी-कभी मूत्राशय की परिपूर्णता को समझने की क्षमता में कमी आ सकती है, को मूत्र एटीपी सांद्रता में कमी देखी गईहै। प्रयोगात्मक रूप से, मूत्र एटीपी सांद्रता का हेरफेर चूहे में मूत्राशय की सजगता को बदल सकता है; मूत्राशय लुमेन में अंतर्जात एटीपीस को अवरुद्ध करके एटीपी सांद्रता में वृद्धि शून्य आवृत्ति को बढ़ा सकती है, जबकि मूत्राशय में बहिर्जात एटीपीस डालकर एटीपी सांद्रता को कम करने से शून्य आवृत्तिकम हो जाती है। इस प्रकार, मूत्राशय समारोह के लिए मूत्र एटीपी का महत्व स्पष्ट है।
मूत्राशय विकृति के लिए मूत्र एटीपी के स्पष्ट महत्व को देखते हुए, यूरोथेलियल एटीपी रिलीज का सटीक माप रिलीज को नियंत्रित करने वाले तंत्र को समझने में एक महत्वपूर्ण कदम है। यूरोथेलियल एटीपी रिलीज को मापने के लिए विभिन्न प्रयोगात्मक मॉडल का उपयोग करके कई अध्ययन पूरे किए गए हैं। इनमें से सबसे महत्वपूर्ण सेल संस्कृतियां हैं, या तो प्राथमिक संस्कृतियां या सेल लाइनें। हालांकि, सुसंस्कृत यूरोथेलियल कोशिकाओं का उपयोग इस तथ्य से जटिल है कि यूरोथेलियल कोशिकाएं अपने शारीरिक ध्रुवीकृत आकृति विज्ञान को तब तक नहीं लेती हैं जब तक कि वे विशेष पारगम्य झिल्ली (जैसे ट्रांसवेल तकनीक [अच्छी तरह से सम्मिलित]) पर नहीं उगाई जाती हैं। इस प्रकार, शरीर विज्ञान से मापा गया किसी भी एटीपी रिलीज से संबंधित होना मुश्किल है। अच्छी तरह से डालने पर उगाई गई यूरोथेलियल कोशिकाएं ध्रुवीकरण कर सकती हैं और विवो में देखी जाने वाली बाधा बना सकती हैं; हालांकि, पूरी तरह से विभेदित यूरोथेलियम के विकास में दिन या सप्ताह लग सकते हैं। इसके अतिरिक्त, जबकि एक यूसिंग कक्ष में अच्छी तरह से सम्मिलित करना और खिंचाव पैदा करने के लिए एपिकल साइड पर दबाव लागू करना संभव है, पैथोलॉजी के दौरान मूत्राशय के अंदर स्थितियों की नकल करने के लिए पर्याप्त दबाव लागू करना मुश्किल है (यानी, 30 सेमी एच2ओ या उससे ऊपर का दबाव)। खिंचाव प्रयोगों के लिए पूरे मूत्राशय के ऊतकों को एक यूसिंग कक्ष में भी रखा जा सकता है, लेकिन यह मूत्राशय को मूत्राशय को यूरोथेलियल सेल स्वास्थ्य को बनाए रखने वाले ट्रॉफिक कारकों के साथ-साथ जीव से हटा देता है और इसलिए, यूरोथेलियल बैरियर फ़ंक्शन। इसलिए, खिंचाव या दबाव के जवाब में यूरोथेलियम से एटीपी की रिहाई का अध्ययन करने का सबसे शारीरिक रूप से प्रासंगिक तरीका विवो में है। प्रयोग को स्थापित करने के लिए आवश्यक सर्जिकल तकनीक आमतौर पर पशु सिस्टोमेट्री में उपयोग की जाने वाली तकनीकों के समान हैं और इसलिए, उस तकनीक से परिचित किसी भी व्यक्ति द्वारा आसानी से किया जाना चाहिए।
इस प्रोटोकॉल में, हम लगभग 200-250 ग्राम वजन वाले मादा स्प्राग डॉवले चूहों में ल्यूमिनल एटीपी की जांच करने के लिए उपयोग की जाने वाली तकनीक का वर्णन करेंगे, क्योंकि नीचे वर्णित ट्रांसयूरेथ्रल कैथीटेराइजेशन महिलाओं में बहुत आसान है; हालांकि, ट्रांसयूरेथ्रल कैथीटेराइजेशन नर कृन्तकों में भी किया जा सकता है। चूंकि ट्रांसयूरेथ्रल कैथीटेराइजेशन अब दोनों लिंगों के चूहों के साथ-साथ11 में भी किया गया है, इन प्रयोगों को अनुसंधान टीम की जरूरतों के आधार पर आसानी से चूहों या या तो लिंग या अलग-अलग आकार के चूहों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>amplifier</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>SYS-TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP assay kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>FLAA-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>data acquisition system/ software</td>
			<td>DataQ Instruments</td>
			<td>DI-1100</td>
			<td>Software included, requires Windows-based computer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium bromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>H0879</td>
			<td>20 mg/kg dose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lidocaine</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>2468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock plugs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0455253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>luminometer (GloMax 20/20)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene (PE50) tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-170-12B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump 33 DDS syringe pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>703333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pressure transducers</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>BLPR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical instruments (scissors, hemostats, forceps, etc.)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>multiple numbers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical lubricant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sur-Vet I.V. catheter&#160;</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>50603</td>
			<td>20 G x 1 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tiltable surgical table (Plas Labs)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-288-30A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-19E</td>
			<td>allows Luer-Lock connectors to attach to tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>U2500</td>
			<td>0.5 g/mL conc., 1.2 g/kg dose</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents

मूत्राशय के विघटन के जवाब में यूरोथेलियम से जारी एटीपी को माइक्रोट्यूरियन के नियंत्रण में एक महत्वपूर्ण संवेदी भूमिका निभाने के लिए माना जाता है। इसलिए, एक शारीरिक सेटिंग में यूरोथेलियल एटीपी रिलीज का सटीक माप मूत्राशय में प्यूरीनर्जिक सिग्नलिंग को नियंत्रित करने वाले तंत्र का अध्ययन करने में एक महत्वपूर्ण पहला कदम है। यांत्रिक रूप से उत्पन्न यूरोथेलियल एटीपी रिलीज का अध्ययन करने के लिए मौजूदा तकनीकें लचीले समर्थन या मूत्राशय के ऊतकों पर चढ़ाई गई सुसंस्कृत कोशिकाओं का उपयोग करती हैं; हालांकि, इनमें से प्रत्येक तकनीक बरकरार मूत्राशय में स्थितियों का पूरी तरह से अनुकरण नहीं करती है। इसलिए, कृंतक मूत्राशय के लुमेन में एटीपी सांद्रता को सीधे मापने के लिए एक प्रयोगात्मक सेटअप विकसित किया गया था।
इस सेटअप में, एनेस्थेटाइज्ड कृन्तकों के मूत्राशय को मूत्राशय के गुंबद और बाहरी मूत्रमार्ग छिद्र दोनों में कैथेटर के माध्यम से संक्रमित किया जाता है। गुंबद के माध्यम से मूत्राशय में बाँझ तरल पदार्थ डालने के दौरान मूत्रमार्ग कैथेटर को कैप करके मूत्राशय में दबाव बढ़ जाता है। इंट्रावेसिक दबाव का माप मूत्राशय गुंबद कैथेटर से जुड़े दबाव ट्रांसड्यूसर का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है, जो सिस्टोमेट्री के लिए उपयोग किए जाने वाले सेटअप के समान है। एक बार वांछित दबाव तक पहुंचने के बाद, मूत्रमार्ग कैथेटर की टोपी को हटा दिया जाता है, और ल्यूसिफेरिन-लूसिफेरस परख द्वारा एटीपी परिमाणीकरण के लिए तरल पदार्थ एकत्र किया जाता है। इस प्रयोगात्मक सेटअप के माध्यम से, यूरोथेलियल एटीपी रिलीज के यांत्रिक और रासायनिक उत्तेजना दोनों को नियंत्रित करने वाले तंत्र को विभिन्न एगोनिस्ट या विरोधी को पर्फ्यूसेट में शामिल करके या वाइल्डटाइप और आनुवंशिक रूप से संशोधित जानवरों के बीच परिणामों की तुलना करके पूछताछ की जा सकती है।

वर्णित प्रोटोकॉल मानक कृंतक सिस्टोमेट्री सेटअप के एक संशोधित संस्करण का उपयोग करके मूत्राशय के लुमेन से विवो में यूरोथेलियल एटीपी रिलीज के सटीक माप की अनुमति देता है ( चित्रा 1 देखें)। य?...

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In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

यह प्रोटोकॉल एक एनेस्थेटाइज्ड कृंतक में मूत्राशय के लुमेन में एटीपी सांद्रता को मापने की प्रक्रिया का वर्णन करता है।

Vivo में कृन्तकों में डिस्टेंशन-इवोकेटेड यूरोथेलियल एटीपी रिलीज का ल्यूमिनल माप

ATP, released from the urothelium in response to bladder distension, is thought to play a significant sensory role in the control of micturition. ...

हमारा प्रोटोकॉल एटीपी को मापता है, मूत्राशय में एक महत्वपूर्ण ट्रांसमीटर, जो हमें इसकी रिहाई को नियंत्रित करने वाले तंत्र से पूछताछ करने की अनुमति देगा। हमारी तकनीक मूत्राशय लुमेन से सीधे एटीपी को मापती है, जिससे यह सुसंस्कृत कोशिकाओं या मूत्राशय के ऊतकों का उपयोग करने वाली तकनीकों की तुलना में अधिक शारीरिक रूप से प्रासंगिक हो जाता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन मेरी प्रयोगशाला में अनुसंधान तकनीशियन केरा हीली और स्टेफ़नी डौगर्टी करेंगे।शुरू करने के लिए, जानवर को ऑक्सीजन में 4% से 5% आइसोफ्लुरेन के साथ गैस वाले एक बंद बॉक्स में रखकर प्रारंभिक संज्ञाहरण को प्रेरित करें। चमड़े के नीचे यूरेथेन को द्विपक्षीय रूप से प्रशासित किया जाता है, फिर जानवर को एक पिंजरे में रखा जाता है ताकि यूरेथेन लगभग दो घंटे तक प्रभावी हो सके। यूरेथेन के प्रभावी होने की प्रतीक्षा करने के बाद, बल का उपयोग करके जानवर के पैर को चुटकी लेकर संज्ञाहरण के उचित विमान के लिए परीक्षण करें।प्रयोग के दौरान डिस्टेंशन के जवाब में मूत्राशय के संकुचन को रोकने के लिए, जानवर को गैंग्लियनिक ब्लॉकिंग एजेंट, हेक्सामेथोनियम के साथ इंजेक्ट करें। इसके बाद, प्रयोग के दौरान सूखने से रोकने के लिए जानवर की आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें। अब जानवर के पेट को शेव करें और मूत्राशय को उजागर करने के लिए एक मिडलाइन लैप्रोटॉमी करें।एक लौ का उपयोग करके, पीई 50 इंट्रामेडिक टयूबिंग की छोटी लंबाई के एक छोर को फ्लेयर करें, टयूबिंग के दूसरे छोर में 22-गेज सुई रखें, और इसे क्रेब्स समाधान से भरें। मूत्राशय के गुंबद के ऊपर 3-0 रेशम सीवन का एक छोटा लूप रखें और कैथेटर के भड़के हुए छोर को डालने के लिए एक छोटा सिस्टोस्टोमी करें। कैथेटर को एक हाथ से पकड़ते समय, दूसरे हाथ से कैथेटर को सुरक्षित करने के लिए सीवन लूप को कस लें।सीवन में दो समुद्री मील बांधकर कैथेटर को सुरक्षित करना समाप्त करें। कैथेटर को वापस खींचें जब तक कि भड़के हुए सिर मूत्राशय की दीवार के संपर्क में न हो। कैथेटर के माध्यम से क्रेब्स समाधान की थोड़ी मात्रा को शामिल करके लीक के लिए सेटअप का परीक्षण करें।सर्जिकल स्नेहक में एक आईवी कैथेटर के अंत को डुबोएं। बाहरी मूत्रमार्ग के मांस को बल की एक जोड़ी के साथ धीरे से पकड़ें, और कैथेटर की नोक को पूंछ की दिशा में मूत्रमार्ग छिद्र में डालें, जैसा कि पांडुलिपि में वर्णित है। कैथेटर को 90 डिग्री घुमाएं और धीरे से आगे बढ़ें।कैथेटर डालें जब तक कि ल्यूर लॉक हब बाहरी मूत्रमार्ग खोलने से पांच मिलीमीटर दूर न हो। कैथेटर को सुरक्षित करें और बाहरी मूत्रमार्ग मीटस के चारों ओर 3-0 रेशम सीवन की छोटी लंबाई को लूप करके कैथेटर के चारों ओर रिसाव को रोकें और इसे कसकर बांध दें। कैथेटर को टेप के साथ पूंछ में सुरक्षित करें ताकि इसे गलती से बाहर खींचने से रोका जा सके।एक बार कैथेटरीकृत होने के बाद, धीरे से सुप्राप्यूबिक मूत्राशय कैथेटर के माध्यम से मूत्राशय में क्रेब्स समाधान डालें, और पुष्टि करें कि द्रव मूत्रमार्ग कैथेटर से बाहर निकलता है और इसके आसपास नहीं। 3-0 रेशम सीवन का उपयोग करके मूत्राशय पर पेट के चीरे को बंद करें। शरीर की गर्मी को बनाए रखने और तरल पदार्थ को अवशोषित करने के लिए हीटिंग पैड पर एक शोषक अंडरपैड रखें।मूत्रमार्ग कैथेटर के माध्यम से इंट्रावेसिक द्रव निकालने में सहायता के लिए झुके हुए बोर्ड पर जानवर को सुरक्षित करें, फिर हीटिंग पैड चालू करें। सुप्राप्यूबिक कैथेटर को तीन-तरफा स्टॉप कॉक से कनेक्ट करें जो कैथेटर को सिरिंज पंप और प्रेशर ट्रांसड्यूसर से जोड़ता है। एक एम्पलीफायर और एक डेटा अधिग्रहण प्रणाली के माध्यम से दबाव ट्रांसड्यूसर को कंप्यूटर से कनेक्ट करें।0.1 मिलीलीटर प्रति मिनट की दर से सुप्राप्यूबिक कैथेटर के माध्यम से क्रेब्स समाधान को इंजेक्ट करें, और कैथेटर प्रत्यारोपण के दौरान जारी किसी भी अवशिष्ट एटीपी को धोने के लिए तरल पदार्थ को मूत्रमार्ग कैथेटर के माध्यम से एक घंटे के लिए निकालने की अनुमति दें। इस वॉशआउट अवधि के बाद, एक ल्यूर लॉक प्लग का उपयोग करके मूत्रमार्ग कैथेटर को कैप करें। मूत्राशय में दबाव को मापें और दबाव में तेज वृद्धि के बिना 30 सेंटीमीटर पानी के दबाव में इंट्रावेसिकल दबाव में धीमी वृद्धि की तलाश करें, जो मूत्राशय के संकुचन का संकेत देता है।मूत्राशय को नुकसान को रोकने के लिए दबाव 30 सेंटीमीटर पानी तक पहुंचने पर मूत्रमार्ग कैथेटर से प्लग को हटा दें। मूत्राशय को इंजेक्ट करें और मूत्रमार्ग कैथेटर से एलुएंट एकत्र करें। एटीपी के लिए तुरंत एलुएंट के 100 माइक्रोलीटर एलिकोट का परीक्षण करें या बाद के बैच परिमाणीकरण के लिए फ्रीज करें।ल्यूमिनल एटीपी सांद्रता पर मूत्राशय के विघटन के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए, प्लग के साथ मूत्रमार्ग कैथेटर को कैप करें और वांछित स्तर तक पहुंचने तक मूत्राशय के दबाव की निगरानी करें, फिर मूत्रमार्ग कैथेटर को अनकैप करें और एटीपी माप या ठंड के लिए एलुएंट एकत्र करें, जैसा कि ऊपर वर्णित है। प्रत्येक डिस्टेंशन के बाद मूत्राशय को आराम करने दें और अतिरिक्त नमूने लेने से पहले 10 से 15 मिनट तक धो लें। एटीपी की रिहाई पर दवाओं के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए, मूत्राशय को क्रेब्स में शामिल करने वाले क्रेब्स समाधान को स्विच करें जिसमें पसंद की दवा होती है।दवा को प्रभाव डालने के लिए 10 से 15 मिनट के लिए उपयोग करें, और फिर गैर-अव्यवस्थित और अव्यवस्थित मूत्राशय से नमूने एकत्र करें, जैसा कि पहले दिखाया गया था। पढ़ने के लिए लुमिनोमीटर में परख मिश्रण के 50 माइक्रोलीटर के साथ परफ्यूसेट के 100 माइक्रोलीटर नमूने रखें। सापेक्ष प्रकाश इकाइयों से एटीपी एकाग्रता में परिवर्तित करने के लिए, क्रेब्स समाधान में एटीपी के सीरियल कमजोर पड़ने के लिए दस गुना कमजोर पड़ने में एक माइक्रोमोलर से 10 पिकोमोलर तक के सीरियल कमजोर पड़ने का निर्माण करें, और उन्हें ल्यूमिनोमीटर में पढ़ें।एक ग्राफ पर परिणामी रीडिंग को प्लॉट करें और जानवर से लिए गए नमूनों से सांद्रता को विस्तारित करने के लिए एक गैर-रैखिक प्रतिगमन करें। मूत्राशय में घोल का इन्फ्यूजन जबकि मूत्रमार्ग कैथेटर प्लग किया जाता है, मूत्राशय के सिकुड़ने के साथ इंट्रावेसिक दबाव तेजी से बढ़ जाता है। हेक्सामेथोनियम प्रशासन के बाद, इंट्रावेसिक दबाव में अधिक क्रमिक वृद्धि देखी गई, जिससे संकुचन के बिना दबाव 30 सेंटीमीटर पानी तक बढ़ गया।शानदार नीला एफसीएफ मानक वक्र के ढलान को काफी कम कर देता है, जो नमूने में एटीपी की एकाग्रता के लिए गणना किए गए मूल्यों को बदलने के लिए पर्याप्त है। शानदार नीले एफसीएफ वाले क्रेब्स मानक का उपयोग करके एक नमूने में एटीपी की एकाग्रता की गणना करने से मूत्राशय के 50% विचलन से एटीपी एकाग्रता का कम आकलन हो सकता है, जिससे ल्यूमिनल एटीपी सांद्रता बढ़ जाती है, जिसे एनटीपीडेस एपवेरेस की उपस्थिति में कम किया जा सकता है, या जब अंतर्जात एनटीपीडी एसीई को एआरएल 67156 के साथ बाधित किया जाता है। यूरोथेलियम से खिंचाव-प्रेरित एटीपी रिलीज का विश्लेषण किया गया था।डिस्टेंशन-इवोकेटेड एटीपी रिलीज को पैनेक्टिन चैनल विरोधी, शानदार ब्लू एफसीएफ और कार्बोनोक्सोलोन द्वारा अवरुद्ध किया जाता है, लेकिन एक कॉनेक्सन चैनल विरोधी, 18 अल्फा-ग्लाइसीरेटिनिक एसिड के साथ नहीं। यह जरूरी है कि सभी लुमिनोमीटर रीडिंग को उपयुक्त मानक वक्र का उपयोग करके एटीपी की सांद्रता में परिवर्तित किया जाए, क्योंकि लूसिफेरस प्रतिक्रिया विभिन्न एजेंटों की एक विस्तृत विविधता द्वारा हस्तक्षेप के लिए अतिसंवेदनशील है। हमारी तकनीक का उपयोग मूत्राशय के लुमेन में किसी भी अणु की विघटन-उत्प्रेरित रिहाई का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है, यह मानते हुए कि उस अणु के लिए एक उपयुक्त परख मौजूद है।

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

माउस पल्मोनरी endothelial सतह परत के vivo मापन में

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

सोडियम Hyaluronate के subretinal इंजेक्शन द्वारा कृंतक में रेटिना टुकड़ी मॉडल

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

सेल ट्रैकिंग के लिए विवो 19 एफ एमआरआई में

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

चूहा रेटिना को Elvax 40W के माध्यम से धीमी गति से जारी दवा वितरण: पुरानी शर्तों के उपचार के लिए निहितार्थ

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

रिमोट अंग इस्केमिक शर्त: कृन्तकों में एक न्यूरोप्रोटेक्टिव तकनीक

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

अंतर्गर्भाशयी टेलीमेटरी माउस सिकुड़ा दबाव मापने के लिए<em&gt; Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

होश में कृन्तकों में गुर्दे समारोह के Transcutaneous आकलन

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

मानव ट्यूमर Xenografts से माउस कोशिकाओं की कमी गौरतलब है कि लक्ष्य प्रकोष्ठों के डाउनस्ट्रीम विश्लेषण बढ़ाता

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

माउस रेटिना धमनियों में जेट की माप के लिए तैयारी चरण पूर्व Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

भ्रष्टाचार गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए एक रासायनिक बायोप्सी का उपयोग करना

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...