Name: in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents
Uploaded: 2022-09-07T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av et tilskudd fra National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK) til JMB (DK117884).

Alle prosedyrer som utføres hos gnagere må følge gjeldende retningslinjer og godkjennes av den lokale institusjonelle etiske vurderingskomiteen. Forsøkene som ble utført for dette manuskriptet ble utført i samsvar med National Research Council's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals og godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved University of Pittsburgh School of Medicine. Se figur 1 for en modifisert versjon av standard cystometrioppsett for gnagere ...

<ol>
	<li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+in+the+urinary+tract+in+health+and+disease.">Purinergic signalling in the urinary tract in health and disease.</a> Purinergic Signalling. 10 (1), 103-155 (2014).</li><li>Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+signaling.">Urothelial signaling.</a> Autonomic Neuroscience: Basic &amp; Clinical. 153 (1-2), 33-40 (2010).</li><li>Silva-Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+may+be+a+dynamic+biomarker+of+detrusor+overactivity+in+women+with+overactive+bladder+syndrome.">Urinary ATP may be a dynamic biomarker of detrusor overactivity in women with overactive bladder syndrome.</a> PLoS One. 8 (5), 64696 (2013).</li><li>Sun, Y., Chai, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+extracellular+ATP+signaling+in+bladder+urothelial+cells+from+patients+with+interstitial+cystitis.">Augmented extracellular ATP signaling in bladder urothelial cells from patients with interstitial cystitis.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 290 (1), 27-34 (2006).</li><li>Gill, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+as+an+indicator+of+infection+and+inflammation+of+the+urinary+tract+in+patients+with+lower+urinary+tract+symptoms.">Urinary ATP as an indicator of infection and inflammation of the urinary tract in patients with lower urinary tract symptoms.</a> BMC Urology. 15 (1), 7 (2015).</li><li>S&#228;ve, S., Persson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+and+P2Y+receptor+activation+induce+a+proinflammatory+host+response+in+the+human+urinary+tract.">Extracellular ATP and P2Y receptor activation induce a proinflammatory host response in the human urinary tract.</a> Infection and Immunity. 78 (8), 3609-3615 (2010).</li><li>Munoz, A., Smith, C. P., Boone, T. B., Somogyi, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overactive+and+underactive+bladder+dysfunction+is+reflected+by+alterations+in+urothelial+ATP+and+NO+release.">Overactive and underactive bladder dysfunction is reflected by alterations in urothelial ATP and NO release.</a> Neurochemistry International. 58 (3), 295-300 (2011).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> The Journal of Physiology. 593 (8), 1857-1871 (2015).</li><li>Zhang, Y. Y., Ludwikowski, B., Hurst, R., Frey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+long-term+culture+of+differentiated+normal+rat+urothelial+cells+in+vitro.">Expansion and long-term culture of differentiated normal rat urothelial cells in vitro.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 37 (7), 419-429 (2001).</li><li>Lee, S., Carrasco, A., Meacham, R. B., Malykhina, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+instillation+procedure+in+adult+male+mouse.">Transurethral instillation procedure in adult male mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56663 (2017).</li><li>Zychlinsky Scharff, A., Albert, M. L., Ingersoll, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+tract+infection+in+a+small+animal+model:+Transurethral+catheterization+of+male+and+female+mice.">Urinary tract infection in a small animal model: Transurethral catheterization of male and female mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e54432 (2017).</li><li>Uvin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cystometry+in+small+rodents:+a+study+of+bladder+chemosensation.">The use of cystometry in small rodents: a study of bladder chemosensation.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e3869 (2012).</li><li>Leitao, J. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+luciferase+inhibition.">Firefly luciferase inhibition.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B. 101 (1), 1-8 (2010).</li><li>Auld, D. S., Thorne, N., Nguyen, D. T., Inglese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+mechanism+for+nonspecific+activation+in+reporter-gene+assays.">A specific mechanism for nonspecific activation in reporter-gene assays.</a> ACS Chemical Biology. 3 (8), 463-470 (2008).</li><li>Harvey, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+oxidation+of+luciferin+without+luciferase+and+the+mechanism+of+bioluminescence.">Studies on the oxidation of luciferin without luciferase and the mechanism of bioluminescence.</a> Journal of Biological Chemistry. 78 (2), 369-375 (1928).</li><li>Wang, J., Jackson, D. G., Dahl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+food+dye+FD&amp;C+Blue+No.+1+is+a+selective+inhibitor+of+the+ATP+release+channel+Panx1.">The food dye FD&amp;C Blue No. 1 is a selective inhibitor of the ATP release channel Panx1.</a> The Journal of General Physiology. 141 (5), 649-656 (2013).</li><li>Avazpour, M., Shiri, S., Delpisheh, A., Abbasi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+brilliant+blue+FCF+and+carmoisine+in+food+samples+by+aqueous+two-phase+system+and+spectrophometric+detection.">Simultaneous determination of brilliant blue FCF and carmoisine in food samples by aqueous two-phase system and spectrophometric detection.</a> Journal of Basic Research in Medical Sciences. 1 (1), 56-65 (2014).</li></ol>

Flertallet av forskningen på urotelial ATP-frigjøring utføres i dyrkede celler, ved bruk av enten immortaliserte cellelinjer eller primære kulturer av gnagere urotelceller. Selv om disse modellene har fordelen av å være relativt høy gjennomstrømning (dvs. en kultur / passasje kan lage mange plater / tallerkener av celler), blir deres fysiologiske relevans redusert på grunn av: 1) urotelcellers manglende evne til å vokse polarisert med mindre de dyrkes på spesielle støtter og 2) vanskeligheten med å utsette d...

ATP i urin antas å spille en betydelig sensorisk rolle i kontrollen av vannlating1. For eksempel antas det at ATP frigjøres fra urotelet som respons på distensjon der det kan virke på reseptorer på blæreafferente nerver for å øke spenningen, noe som fører til følelser av fylde2. Dermed er det også antatt at urin ATP kan være en viktig aktør i utviklingen av blærepatologier. Til støtte for denne hypotesen er ATP-konsentrasjonene i urin signifikant økt hos pasienter som lider av overaktiv blære (OAB)3, blæresmertesyndrom/interstitiell cystitt (BPS/IC)4 eller urinveisinfeksjon (UVI)5,6, alle tilstander karakterisert ved økt haster, frekvens og noen ganger smerter. Omvendt, pasienter som lider av underaktiv blære (UAB), som er preget av en manglende evne til å tømme ens blære og kan noen ganger inkludere en redusert evne til å føle blæren fylde, har vist seg å ha redusert urin ATP konsentrasjoner7. Eksperimentelt kan manipulering av ATP-konsentrasjoner i urin endre blærereflekser hos rotter; økende ATP-konsentrasjoner ved å blokkere endogene ATPaser i blærelumen kan øke tømmingsfrekvensen, mens reduksjon av ATP-konsentrasjoner ved å sette inn eksogene ATPaser i blæren reduserer tømmingsfrekvensen8. Dermed er viktigheten av urin ATP til blærefunksjon klar.
Gitt den tilsynelatende betydningen av urin ATP til blærepatologi, er nøyaktig måling av urotelial ATP-frigjøring et viktig skritt i å forstå mekanismene som kontrollerer frigjøring. Mange studier har blitt gjennomført ved hjelp av forskjellige eksperimentelle modeller for å måle urotelial ATP-frigjøring. Fremst blant disse er cellekulturer, enten primære kulturer eller cellelinjer. Imidlertid kompliseres bruken av dyrkede urotelceller av det faktum at urotelceller ikke tar på seg sin fysiologiske polariserte morfologi med mindre de dyrkes på spesielle permeable membraner (som Transwell-teknologi [brønninnsatser])9. Dermed er det vanskelig å relatere noen ATP-frigjøring målt til fysiologi. Urotelceller dyrket på brønninnsatser kan polarisere og danne en barriere som ligner på det som ses in vivo; Imidlertid kan veksten av et fullt differensiert urotel ta dager eller uker. I tillegg, mens det er mulig å montere brønninnlegg i et Ussing-kammer og legge trykk på den apikale siden for å forårsake strekk, er det vanskelig å påføre nok trykk for å etterligne forholdene i blæren under patologi (dvs. trykk på 30 cm H2O eller høyere). Hele blærevevet kan også monteres i et Ussing-kammer for strekkeksperimenter, men dette fjerner blæren fra organismen sammen med de trofiske faktorene som opprettholder urotelcellehelsen og dermed urotelbarrierefunksjonen. Derfor er den mest fysiologisk relevante måten å studere frigjøring av ATP fra urotelet som respons på strekk eller trykk, in vivo. De kirurgiske teknikkene som trengs for å sette opp eksperimentet, er identiske med de som vanligvis brukes i cystometri hos dyr, og bør derfor enkelt utføres av alle som er kjent med den teknikken.
I denne protokollen vil vi beskrive teknikken som brukes til å undersøke luminal ATP hos kvinnelige Sprague Dawley-rotter som veier ca. 200-250 g, da transuretral kateterisering beskrevet nedenfor er mye lettere hos kvinner; Imidlertid kan transuretral kateterisering også utføres hos mannlige gnagere10. Siden transuretral kateterisering nå er utført hos mus av begge kjønn også11, kan disse forsøkene enkelt tilpasses mus eller rotter av begge kjønn eller av varierende størrelse, avhengig av forskerteamets behov.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>amplifier</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>SYS-TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP assay kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>FLAA-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>data acquisition system/ software</td>
			<td>DataQ Instruments</td>
			<td>DI-1100</td>
			<td>Software included, requires Windows-based computer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium bromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>H0879</td>
			<td>20 mg/kg dose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lidocaine</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>2468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock plugs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0455253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>luminometer (GloMax 20/20)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene (PE50) tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-170-12B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump 33 DDS syringe pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>703333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pressure transducers</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>BLPR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical instruments (scissors, hemostats, forceps, etc.)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>multiple numbers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical lubricant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sur-Vet I.V. catheter&#160;</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>50603</td>
			<td>20 G x 1 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tiltable surgical table (Plas Labs)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-288-30A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-19E</td>
			<td>allows Luer-Lock connectors to attach to tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>U2500</td>
			<td>0.5 g/mL conc., 1.2 g/kg dose</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents

ATP, frigjort fra urotelet som respons på blæredistensjon, antas å spille en betydelig sensorisk rolle i kontrollen av vannlating. Derfor er nøyaktig måling av urotelial ATP-frigjøring i en fysiologisk setting et viktig første skritt i å studere mekanismene som styrer purinerg signalering i urinblæren. Eksisterende teknikker for å studere mekanisk fremkalt urotelial ATP-frigjøring benytter dyrkede celler belagt på fleksible støtter eller blærevev festet i Ussing-kamre; Imidlertid etterligner hver av disse teknikkene ikke fullt ut forholdene i den intakte blæren. Derfor ble det utviklet et eksperimentelt oppsett for direkte å måle ATP-konsentrasjoner i lumen i urinblæren hos gnagere.
I dette oppsettet blir blærene til bedøvede gnagere perfusert gjennom katetre i både blærekuppelen og via den eksterne urinrøråpningen. Trykket i blæren økes ved å kappe urinrørskateteret mens du perfuserer steril væske inn i blæren gjennom kuppelen. Måling av intravesikalt trykk oppnås ved hjelp av en trykktransduser festet til blærekuppelkateteret, beslektet med oppsettet som brukes til cystometri. Når ønsket trykk er nådd, fjernes urinkateterets hette, og væske oppsamles for ATP-kvantifisering ved luciferin-luciferase-analyse. Gjennom dette eksperimentelle oppsettet kan mekanismene som styrer både mekanisk og kjemisk stimulering av urotelial ATP-frigjøring undersøkes ved å inkludere forskjellige agonister eller antagonister i perfusatet eller ved å sammenligne resultater mellom villtype og genetisk modifiserte dyr.

Den beskrevne protokollen tillater nøyaktig måling av urotelial ATP-frigjøring in vivo fra blærens lumen, ved bruk av en modifisert versjon av standard cystometrioppsett for gnagere (se figur 1). Dette gjør det mulig for forskeren å undersøke effekten av legemidler på strekkmediert ATP-frigjøring i en fysiologisk setting.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64227/64227fig01.jpg"><b...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents at JoVE.com

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

Denne protokollen beskriver prosedyren for å måle ATP-konsentrasjoner i blærens lumen i en bedøvet gnager.

In vivo Luminal måling av distensjon-fremkalt urotelial ATP-frigjøring hos gnagere

ATP, released from the urothelium in response to bladder distension, is thought to play a significant sensory role in the control of micturition. ...

Vår protokoll måler ATP, en viktig transmitter i urinblæren, som vil tillate oss å ytterligere forhøre mekanismene som styrer frigjøringen. Vår teknikk måler ATP direkte fra blærelumen, noe som gjør det mer fysiologisk relevant enn teknikker som bruker dyrkede celler eller blærevev. Demonstrere prosedyren vil være Keara Healy og Stephanie Daugherty, forskningsteknikere i laboratoriet mitt.For å begynne, indusere første anestesi ved å plassere dyret i en lukket boks gasset med 4% til 5% isofluran i oksygen. Subkutant administrer uretan bilateralt, og legg deretter dyret i et bur for å la uretanen tre i kraft i nesten to timer. Etter å ha ventet på at uretan skal tre i kraft, test for et riktig anestesiplan ved å klemme foten av dyret ved hjelp av tang.For å forhindre sammentrekning av blæren som respons på distensjon under forsøket, injiser dyret med et ganglionisk blokkeringsmiddel, heksametanium. Deretter påføres oftalmisk salve på dyrets øyne for å forhindre tørking under forsøket. Barber nå dyrets mage og utfør en midtlinje laparotomi for å avsløre urinblæren.Bruk en flamme, bluss den ene enden av en kort lengde av PE50 intramedisk slange, plasser en 22-gauge nål i den andre enden av slangen, og fyll den med Krebs løsning. Plasser en liten sløyfe med 3-0 silkesutur over blærekuppelen og utfør en liten cystostomi for å sette inn den blussede enden av kateteret. Mens du holder kateteret med den ene hånden, stram sutursløyfen for å feste kateteret på plass med den andre hånden.Avslutt sikringen av kateteret ved å binde to knuter i suturen. Trekk kateteret tilbake til det blussede hodet er i kontakt med blæreveggen. Test oppsettet for lekkasjer ved å infusere en liten mengde Krebs-løsning gjennom kateteret.Dypp enden av et IV-kateter i kirurgisk smøremiddel. Hold den ytre urinrørsåpningen forsiktig med en tang, og sett spissen av kateteret inn i urinrøråpningen i retning av halen, som beskrevet i manuskriptet. Roter kateteret 90 grader og gå forsiktig videre.Sett inn kateteret til luerlåsnavet er fem millimeter distalt fra den eksterne urinrørsåpningen. Fest kateteret og forhindre lekkasje rundt kateteret ved å sløyfe en kort lengde på 3-0 silkesutur rundt den eksterne urinrørsmeatus og binde den tett. Fest kateteret til halen med tape for å forhindre at det ved et uhell blir trukket ut.Når kateterisert, fyll forsiktig Krebs-oppløsningen inn i blæren gjennom det suprapubiske blærekateteret, og bekreft at væsken strømmer ut av urinrørskateteret og ikke rundt det. Lukk magesnittet over blæren ved hjelp av en 3-0 silke sutur. Plasser en absorberende underpad på en varmepute for å opprettholde kroppsvarmen og absorbere væske.Fest dyret på det skrånende brettet for å hjelpe til med å drenere intravesikal væske gjennom urinrørskateteret, og slå deretter på varmeputen. Koble det suprapubiske kateteret til en treveis stoppkran som forbinder kateteret med en sprøytepumpe og en trykktransduser. Koble trykktransduseren til en datamaskin via en forsterker og et datainnsamlingssystem.Infiser Krebs-løsningen gjennom det suprapubiske kateteret med en hastighet på 0,1 milliliter per minutt, og la væsken renne gjennom urinrørskateteret i en time for å vaske ut eventuell gjenværende ATP frigjort under kateterimplantasjonene. Etter denne utvaskingsperioden, sett lokk på urinrørskateteret med en luer-låseplugg. Mål trykket i blæren og se etter en langsom økning i det intravesikale trykket til et trykk på 30 centimeter vann uten en kraftig økning i trykk, noe som indikerer en blærekontraksjon.Fjern pluggen fra urinrørskateteret når trykket når 30 centimeter vann for å forhindre skade på blæren. Infiser blæren og samle eluenten fra urinrørskateteret. Test 100 mikroliter alikoter av eluenten umiddelbart for ATP eller frys for senere batchkvantifisering.For å teste effekten av blæredistensjon på luminale ATP-konsentrasjoner, kapp urethralkateteret med pluggen og overvåk blæretrykket til det når ønsket nivå, fjern deretter hetten på urinrørskateteret og samle eluenten for ATP-måling eller frysing, som beskrevet ovenfor. Etter hver distensjon, la blæren hvile og vaske ut i 10 til 15 minutter før du tar ytterligere prøver. For å teste effekten av legemidler på frigjøring av ATP, bytt Krebs-løsningen infusjon blæren til Krebs som inneholder det valgte stoffet.Perfuse stoffet i 10 til 15 minutter for å få effekt, og samle deretter prøvene fra ikke-distenderte og distenderte blærer, som vist tidligere. Plasser 100 mikroliter prøve av perfusat med 50 mikroliter av analyseblandingen i luminometeret for lesing. For å konvertere fra relative lette enheter til ATP-konsentrasjon, gjør serielle fortynninger av ATP i Krebs-oppløsning fra en mikromolar til 10 picomolar i ti ganger fortynninger for å skape en standardkurve, og les dem i luminometeret.Plott de resulterende avlesningene på en graf og utfør en ikke-lineær regresjon for å ekstrapolere konsentrasjoner fra prøvene tatt fra dyret. Infusjon av løsningen inn i blæren mens urinrørskateteret er plugget, forårsaker intravesikal trykk å stige kraftig når blæren trekker seg sammen. Etter administrering av heksametanium ble det observert en mer gradvis økning i intravesikalt trykk, slik at trykket kunne stige så høyt som 30 centimeter vann uten sammentrekning.Strålende blå FCF reduserer hellingen til standardkurven betydelig, tilstrekkelig til å endre de beregnede verdiene for konsentrasjonen av ATP i prøven. Beregning av konsentrasjonen av ATP i en prøve ved bruk av Krebs-standarden som inneholder strålende blå FCF kan resultere i en underestimering av ATP-konsentrasjonen med 50%Distensjon av blæren øker luminale ATP-konsentrasjoner, noe som kan reduseres i nærvær av NTPDase-apvrase, eller økes når endogene NTPD-ACE hemmes med ARL67156. Den strekkinduserte ATP-frigjøringen fra urotelet ble analysert.Distensjonsfremkalt ATP-frigjøring blokkeres av panektinkanalantagonistene, strålende blå FCF og karbonoksolon, men ikke med en connexonkanalantagonist, 18 alfa-glycyrrhetinsyre. Det er viktig at alle luminometeravlesninger konverteres til konsentrasjoner av ATP ved bruk av riktig standardkurve, da Lucifer Luciferase-reaksjonen er svært utsatt for interferens fra et bredt utvalg av forskjellige midler. Vår teknikk kan brukes til å studere den distensjonsfremkalte frigjøringen av et hvilket som helst molekyl i blærens lumen, forutsatt at en passende analyse for det molekylet eksisterer.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Måling av Mouse Pulmonal endotel Overflatesjikt

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Netthinneavløsning Model i Gnagere etter subretinal Injeksjon av Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Slow-release Drug Delivery gjennom Elvax 40W til Rat Retina: Konsekvenser for behandling av kroniske betingelser

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterin Telemetri å måle Mouse kontraktile Trykk<em&gt; I Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Transkutan vurdering av nyrefunksjonen hos bevisste Gnagere

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Nedbryting av museceller fra menneske tumorxenotransplantater forbedrer Nedstrøms Analyse av Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Forberedelsene for måling av reaktivitet i musen Retinal arterioler Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Bruke en kjemisk biopsi for graftkvalitetsvurdering

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...