Name: in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents
Uploaded: 2022-09-07T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантом Национального института диабета и заболеваний пищеварительной системы и почек (NIDDK) JMB (DK117884).

Все процедуры, проводимые на грызунах, должны соответствовать применимым руководящим принципам и быть одобрены местным институциональным комитетом по проверке этики. Эксперименты, проведенные для этой рукописи, были проведены в соответствии с Руководством Национального исследовате...

<ol>
	<li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinergic+signalling+in+the+urinary+tract+in+health+and+disease.">Purinergic signalling in the urinary tract in health and disease.</a> Purinergic Signalling. 10 (1), 103-155 (2014).</li><li>Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urothelial+signaling.">Urothelial signaling.</a> Autonomic Neuroscience: Basic &amp; Clinical. 153 (1-2), 33-40 (2010).</li><li>Silva-Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+may+be+a+dynamic+biomarker+of+detrusor+overactivity+in+women+with+overactive+bladder+syndrome.">Urinary ATP may be a dynamic biomarker of detrusor overactivity in women with overactive bladder syndrome.</a> PLoS One. 8 (5), 64696 (2013).</li><li>Sun, Y., Chai, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+extracellular+ATP+signaling+in+bladder+urothelial+cells+from+patients+with+interstitial+cystitis.">Augmented extracellular ATP signaling in bladder urothelial cells from patients with interstitial cystitis.</a> American Journal of Physiology - Cell Physiology. 290 (1), 27-34 (2006).</li><li>Gill, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+ATP+as+an+indicator+of+infection+and+inflammation+of+the+urinary+tract+in+patients+with+lower+urinary+tract+symptoms.">Urinary ATP as an indicator of infection and inflammation of the urinary tract in patients with lower urinary tract symptoms.</a> BMC Urology. 15 (1), 7 (2015).</li><li>S&#228;ve, S., Persson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+and+P2Y+receptor+activation+induce+a+proinflammatory+host+response+in+the+human+urinary+tract.">Extracellular ATP and P2Y receptor activation induce a proinflammatory host response in the human urinary tract.</a> Infection and Immunity. 78 (8), 3609-3615 (2010).</li><li>Munoz, A., Smith, C. P., Boone, T. B., Somogyi, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overactive+and+underactive+bladder+dysfunction+is+reflected+by+alterations+in+urothelial+ATP+and+NO+release.">Overactive and underactive bladder dysfunction is reflected by alterations in urothelial ATP and NO release.</a> Neurochemistry International. 58 (3), 295-300 (2011).</li><li>Beckel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin+1+channels+mediate+the+release+of+ATP+into+the+lumen+of+the+rat+urinary+bladder.">Pannexin 1 channels mediate the release of ATP into the lumen of the rat urinary bladder.</a> The Journal of Physiology. 593 (8), 1857-1871 (2015).</li><li>Zhang, Y. Y., Ludwikowski, B., Hurst, R., Frey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+and+long-term+culture+of+differentiated+normal+rat+urothelial+cells+in+vitro.">Expansion and long-term culture of differentiated normal rat urothelial cells in vitro.</a> In Vitro Cellular &amp; Developmental Biology. Animal. 37 (7), 419-429 (2001).</li><li>Lee, S., Carrasco, A., Meacham, R. B., Malykhina, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+instillation+procedure+in+adult+male+mouse.">Transurethral instillation procedure in adult male mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56663 (2017).</li><li>Zychlinsky Scharff, A., Albert, M. L., Ingersoll, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+tract+infection+in+a+small+animal+model:+Transurethral+catheterization+of+male+and+female+mice.">Urinary tract infection in a small animal model: Transurethral catheterization of male and female mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), e54432 (2017).</li><li>Uvin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cystometry+in+small+rodents:+a+study+of+bladder+chemosensation.">The use of cystometry in small rodents: a study of bladder chemosensation.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e3869 (2012).</li><li>Leitao, J. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+luciferase+inhibition.">Firefly luciferase inhibition.</a> Journal of Photochemistry and Photobiology B. 101 (1), 1-8 (2010).</li><li>Auld, D. S., Thorne, N., Nguyen, D. T., Inglese, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+mechanism+for+nonspecific+activation+in+reporter-gene+assays.">A specific mechanism for nonspecific activation in reporter-gene assays.</a> ACS Chemical Biology. 3 (8), 463-470 (2008).</li><li>Harvey, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+oxidation+of+luciferin+without+luciferase+and+the+mechanism+of+bioluminescence.">Studies on the oxidation of luciferin without luciferase and the mechanism of bioluminescence.</a> Journal of Biological Chemistry. 78 (2), 369-375 (1928).</li><li>Wang, J., Jackson, D. G., Dahl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+food+dye+FD&amp;C+Blue+No.+1+is+a+selective+inhibitor+of+the+ATP+release+channel+Panx1.">The food dye FD&amp;C Blue No. 1 is a selective inhibitor of the ATP release channel Panx1.</a> The Journal of General Physiology. 141 (5), 649-656 (2013).</li><li>Avazpour, M., Shiri, S., Delpisheh, A., Abbasi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+brilliant+blue+FCF+and+carmoisine+in+food+samples+by+aqueous+two-phase+system+and+spectrophometric+detection.">Simultaneous determination of brilliant blue FCF and carmoisine in food samples by aqueous two-phase system and spectrophometric detection.</a> Journal of Basic Research in Medical Sciences. 1 (1), 56-65 (2014).</li></ol>

Большинство исследований высвобождения уротелиального АТФ проводится в культивируемых клетках с использованием либо увековеченных клеточных линий, либо первичных культур уротелиальных клеток грызунов. Хотя эти модели имеют преимущество в том, что они имеют относительно высокую про...

Считается, что АТФ в моче играет значительную сенсорную роль в контроле мочеиспускания1. Например, считается, что АТФ высвобождается из уротелия в ответ на растяжение, где он может воздействовать на рецепторы афферентных нервов мочевого пузыря, чтобы увеличить их возбудимость, что приводит к ощущениям полноты2. Таким образом, также считается, что атФ мочи может быть важным игроком в развитии патологий мочевого пузыря. В подтверждение этой гипотезы концентрации АТФ в моче значительно повышены у пациентов, страдающих гиперактивным мочевым пузырем (ОАБ)3, синдромом боли в мочевом пузыре / интерстициальным циститом (BPS / IC) 4 или инфекцией мочевыводящих путей (ИМП) 5,6, все состояния характеризуются повышенной срочностью, частотой и, иногда, болью. И наоборот, было показано, что у пациентов, страдающих недостаточной активностью мочевого пузыря (UAB), который характеризуется неспособностью опорожнить мочевой пузырь и иногда может включать снижение способности чувствовать полноту мочевого пузыря, было показано снижение концентрации АТФв моче 7. Экспериментально манипуляции с концентрациями АТФ в моче могут изменить рефлексы мочевого пузыря у крыс; увеличение концентрации АТФ путем блокирования эндогенных АТФаз в просвете мочевого пузыря может увеличить частоту мочеиспускания, в то время как снижение концентрации АТФ путем закапывания экзогенных АТФаз в мочевой пузырь снижает частоту мочеиспускания8. Таким образом, важность АТФ в моче для функции мочевого пузыря очевидна.
Учитывая очевидную важность АТФ в моче для патологии мочевого пузыря, точное измерение высвобождения уротелиального АТФ является важным шагом в понимании механизмов, контролирующих высвобождение. Многие исследования были завершены с использованием различных экспериментальных моделей для измерения высвобождения уротелиального АТФ. Главными среди них являются клеточные культуры, либо первичные культуры, либо клеточные линии. Однако использование культивируемых уротелиальных клеток осложняется тем фактом, что уротелиальные клетки не приобретают свою физиологическую поляризованную морфологию, если они не выращиваются на специальных проницаемых мембранах (таких как технология Transwell [вставки колодца])9. Таким образом, трудно связать какое-либо высвобождение АТФ, измеренное с физиологией. Уротелиальные клетки, выращенные на колодцах, могут поляризоваться и образовывать барьер, похожий на то, что видно in vivo; однако рост полностью дифференцированного уротелия может занять дни или недели. Кроме того, хотя можно хорошо установить вставки в камеру Ussing и приложить давление к апикальной стороне, чтобы вызвать растяжение, трудно применить достаточное давление, чтобы имитировать условия внутри мочевого пузыря во время патологии (т. Е. Давление 30 см H2O или выше). Вся ткань мочевого пузыря также может быть установлена в камере Ussing для экспериментов с растяжкой, но это удаляет мочевой пузырь из организма вместе с трофическими факторами, поддерживающими здоровье уротелиальных клеток и, следовательно, функцию уротелиального барьера. Поэтому наиболее физиологически значимым способом изучения высвобождения АТФ из уротелия в ответ на растяжение или давление является in vivo. Хирургические методы, необходимые для проведения эксперимента, идентичны тем, которые обычно используются в цистометрии животных, и, следовательно, должны быть легко выполнены любым, кто знаком с этой техникой.
В этом протоколе мы опишем методику, используемую для исследования просветной АТФ у самок крыс Sprague Dawley массой примерно 200-250 г, так как трансуретральная катетеризация, описанная ниже, намного легче у самок; однако трансуретральная катетеризация также может быть выполнена у самцов грызунов10. Поскольку трансуретральная катетеризация в настоящее время проводится у мышей обоих полов, а также11, эти эксперименты могут быть легко адаптированы для мышей или крыс любого пола или различных размеров, в зависимости от потребностей исследовательской группы.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>amplifier</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>SYS-TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP assay kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>FLAA-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>data acquisition system/ software</td>
			<td>DataQ Instruments</td>
			<td>DI-1100</td>
			<td>Software included, requires Windows-based computer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethonium bromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>H0879</td>
			<td>20 mg/kg dose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>29404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lidocaine</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>2468</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock plugs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0455253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>luminometer (GloMax 20/20)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene (PE50) tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-170-12B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pump 33 DDS syringe pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>703333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pressure transducers</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>BLPR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical instruments (scissors, hemostats, forceps, etc.)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>multiple numbers</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical lubricant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sur-Vet I.V. catheter&#160;</td>
			<td>Covetrus North America</td>
			<td>50603</td>
			<td>20 G x 1 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tiltable surgical table (Plas Labs)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-288-30A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-19E</td>
			<td>allows Luer-Lock connectors to attach to tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>U2500</td>
			<td>0.5 g/mL conc., 1.2 g/kg dose</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo luminal measurement of distension-evoked urothelial atp release in rodents

АТФ, высвобождаемый из уротелия в ответ на растяжение мочевого пузыря, как полагают, играет значительную сенсорную роль в контроле мочеиспускания. Поэтому точное измерение высвобождения уротелиальной АТФ в физиологических условиях является важным первым шагом в изучении механизмов, которые контролируют пуринергическую сигнализацию в мочевом пузыре. Существующие методы изучения механически вызванного высвобождения уротелиального АТФ используют культивируемые клетки, покрытые гибкими опорами или тканью мочевого пузыря, закрепленной в камерах Ussing; однако каждый из этих методов не полностью эмулирует состояния в неповрежденном мочевом пузыре. Поэтому была разработана экспериментальная установка для непосредственного измерения концентраций АТФ в просвете мочевого пузыря грызунов.
В этой установке мочевые пузыри анестезированных грызунов перфузируются через катетеры как в куполе мочевого пузыря, так и через наружное уретральное отверстие. Давление в мочевом пузыре увеличивается путем закрытия уретрального катетера при перфузии стерильной жидкости в мочевой пузырь через купол. Измерение внутрипузырного давления достигается с помощью датчика давления, прикрепленного к купольному катетеру мочевого пузыря, аналогично установке, используемой для цистометрии. Как только желаемое давление достигнуто, крышка уретрального катетера удаляется, а жидкость собирается для количественной оценки АТФ с помощью анализа люциферин-люциферазы. С помощью этой экспериментальной установки механизмы, контролирующие как механическую, так и химическую стимуляцию высвобождения уротелиального АТФ, могут быть опрошены путем включения различных агонистов или антагонистов в перфусат или путем сравнения результатов между диким типом и генетически модифицированными животными.

Описанный протокол позволяет точно измерять высвобождение уротелиальной АТФ in vivo из просвета мочевого пузыря с использованием модифицированной версии стандартной установки цистометрии грызунов (см. Рисунок 1). Это позволяет исследователю изучить влияние лекарст...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents at JoVE.com

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

Данный протокол описывает процедуру измерения концентраций АТФ в просвете мочевого пузыря у обезболенного грызуна.

В городе Виво Просветное измерение высвобождения уротелиального АТФ, вызванного растяжением, у грызунов

ATP, released from the urothelium in response to bladder distension, is thought to play a significant sensory role in the control of micturition. ...

Наш протокол измеряет АТФ, важный передатчик в мочевом пузыре, который позволит нам дополнительно исследовать механизмы, контролирующие его высвобождение. Наша методика измеряет АТФ непосредственно из просвета мочевого пузыря, что делает его более физиологически значимым, чем методы, использующие культивируемые клетки или ткань мочевого пузыря. Продемонстрировать процедуру будут Кеара Хили и Стефани Догерти, техники-исследователи в моей лаборатории.Для начала индуцируйте начальную анестезию, помещая животное в закрытую коробку, отравленную газом от 4% до 5% изофлурана в кислороде. Подкожно вводят уретан двусторонне, затем поместите животное в клетку, чтобы уретан вступил в силу в течение почти двух часов. Дождавшись, пока уретан вступит в силу, проверьте правильную плоскость анестезии, зажав ногу животного с помощью щипцов.Чтобы предотвратить сокращение мочевого пузыря в ответ на растяжение во время эксперимента, вводите животному ганглионно-блокирующее средство, гексаметоний. Далее нанесите офтальмологическую мазь на глаза животного, чтобы предотвратить пересыхание во время эксперимента. Теперь побрить живот животного и выполнить лапаротомию средней линии, чтобы обнажить мочевой пузырь.Используя пламя, вспыхните один конец короткой длины интрамедицинской трубки PE50, поместите иглу 22-го калибра в другой конец трубки и заполните ее раствором Кребса. Наложите небольшую петлю из 3-0 шелкового шва на купол мочевого пузыря и выполните небольшую цистостомию, чтобы вставить расклешенный конец катетера. Удерживая катетер одной рукой, затяните шовную петлю, чтобы закрепить катетер на месте другой рукой.Закончите закрепление катетера, завязав два узла в шве. Оттяните катетер назад, пока расклешенная головка не соприкоснется со стенкой мочевого пузыря. Проверьте установку на наличие утечек, вливая небольшое количество раствора Кребса через катетер.Окуните конец внутривенного катетера в хирургическую смазку. Осторожно удерживайте наружный уретральный меатус парой щипцов и вставьте кончик катетера в уретральное отверстие в направлении хвоста, как описано в рукописи. Поверните катетер на 90 градусов и осторожно вперед.Вставьте катетер до тех пор, пока ступица замка люера не окажется в пяти миллиметрах дистально от наружного отверстия уретры. Закрепите катетер и предотвратите утечку вокруг катетера, закольцовав короткий шелковый шов длиной 3-0 вокруг наружного уретрального мяса и плотно завязав его. Закрепите катетер на хвосте с помощью ленты, чтобы предотвратить его случайное вытаскивание.После катетеризации осторожно вводят раствор Кребса в мочевой пузырь через надлобковый катетер мочевого пузыря и подтверждают, что жидкость течет из уретрального катетера, а не вокруг него. Закройте брюшной разрез над мочевым пузырем с помощью шелкового шва 3-0. Поместите абсорбирующую подкладку на грелку, чтобы поддерживать тепло тела и поглощать жидкость.Закрепите животное на наклонной доске, чтобы помочь в сливе внутрипузырной жидкости через уретральный катетер, затем включите грелку. Подключите надлобковый катетер к трехходовому стопорному крану, соединяющему катетер со шприцевым насосом и преобразователем давления. Подключите датчик давления к компьютеру через усилитель и систему сбора данных.Вводят раствор Кребса через надлобковый катетер со скоростью 0,1 миллилитра в минуту и дают жидкости стекать через уретральный катетер в течение одного часа, чтобы вымыть любую остаточную АТФ, высвобождаемую во время имплантации катетера. После этого периода смывания закройте уретральный катетер с помощью заглушки блокировки luer. Измерьте давление в мочевом пузыре и ищите медленное повышение внутрипузырного давления до давления 30 сантиметров воды без резкого повышения давления, свидетельствующего о сокращении мочевого пузыря.Снимите пробку из уретрального катетера, когда давление достигнет 30 сантиметров воды, чтобы предотвратить повреждение мочевого пузыря. Настойте мочевой пузырь и соберите элюент из уретрального катетера. Испытайте 100 микролитровых аликвот элюента немедленно на АТФ или заморозьте для последующей количественной оценки партии.Чтобы проверить влияние растяжения мочевого пузыря на просветные концентрации АТФ, закройте уретральный катетер пробкой и контролируйте давление в мочевом пузыре, пока оно не достигнет желаемого уровня, затем отключите уретральный катетер и соберите элюент для измерения АТФ или замораживания, как описано выше. После каждого растяжения дайте мочевому пузырю отдохнуть и промыть его в течение 10-15 минут, прежде чем брать дополнительные пробы. Чтобы проверить влияние препаратов на высвобождение АТФ, переключите раствор Кребса, настояющий мочевой пузырь, на Кребс, содержащий препарат выбора.Перфьюируйте препарат в течение 10-15 минут, чтобы иметь эффект, а затем соберите образцы из нерастянутых и растянутых мочевых пузырей, как было продемонстрировано ранее. Поместите 100 микролитров образца перфусата с 50 микролитрами пробирной смеси в люминометр для считывания. Для преобразования из относительных световых единиц в концентрацию АТФ производят серийные разбавления АТФ в растворе Кребса в диапазоне от одного микромоляра до 10 пикомоларов в десятикратных разведениях для создания стандартной кривой и считывают их в люминометре.Нанесите полученные показания на график и выполните нелинейную регрессию для экстраполяции концентраций из образцов, взятых у животного. Инфузия раствора в мочевой пузырь, когда уретральный катетер закупорлен, вызывает резкое повышение внутрипузырного давления по мере сокращения мочевого пузыря. После введения гексаметония наблюдалось более постепенное повышение внутрипузырного давления, что позволяло давлению подниматься до 30 сантиметров воды без сокращения.Блестящий синий FCF значительно уменьшает наклон стандартной кривой, достаточный для изменения расчетных значений концентрации АТФ в образце. Расчет концентрации АТФ в образце с использованием стандарта Кребса, содержащего блестящий синий FCF, может привести к недооценке концентрации АТФ на 50% Растяжение мочевого пузыря увеличивает люминальные концентрации АТФ, которые могут быть уменьшены в присутствии апвразы NTPDase или увеличены, когда эндогенные NTPD ACEs ингибируются ARL67156. Анализировали индуцированное растяжением высвобождение АТФ из уротелия.Высвобождение АТФ, вызванное растяжением, блокируется антагонистами панектиновых каналов, блестящим синим FCF и карбоноксолоном, но не антагонистом канала коннексона, 18 альфа-глицирретиновой кислотой. Крайне важно, чтобы все показания люминометра преобразовывались в концентрации АТФ с использованием соответствующей стандартной кривой, поскольку реакция Люцифера Люциферазы очень восприимчива к интерференции со стороны широкого спектра различных агентов. Наш метод может быть использован для изучения вызванного растяжением высвобождения любой молекулы в просвете мочевого пузыря, предполагая, что для этой молекулы существует подходящий анализ.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

В естественных условиях измерения мышь легочных эндотелиальных поверхностного слоя

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Отслойки Модель в Грызуны по субретинальной инжекции гиалуронат натрия

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

В естественных условиях 19 F МРТ для отслеживания сотовых

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Замедленное высвобождение доставка лекарств через Elvax 40 Вт в сетчатке крыс: последствия для лечения хронических условий

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Удаленная конечностей Ишемическая Предварительная: Нейропротекторное Техника в Грызуны

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Внутриматочная телеметрии измерить мышь сократительной давления<em&gt; В Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Чрескожная Оценка функции почек в сознательном Грызуны

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Preparation Steps for Measurement of Reactivity in Mouse Retinal Arterioles Ex Vivo

Шаги подготовки для измерения реактивности в мыши артериол сетчатки Ex Vivo

Vascular insufficiency and alterations in normal retinal perfusion are among the major factors for the pathogenesis of various sight-threatening ocular ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Использование химической биопсии для оценки качества трансплантата

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...