Name: syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer
Uploaded: 2022-10-04T15:00:00
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Wir bedanken uns bei der TUM Tierklinik und der bildgebenden Core Facility der Klinik für Nuklearmedizin, Klinikum rechts der Isar, für die hervorragende technische Unterstützung. Diese Studie wurde gefördert durch das Deutsche Konsortium für Translationale Krebsforschung (DKTK), die Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SA 1374/4-2, DFG SA 1374/6-1, SFB 1321 Projekt-ID 329628492 P06, P11 und S01) bis D.S., die Wilhelm Sander-Stiftung (2020.174.1 und 2017.091.2) bis D.S. und den Europäischen Forschungsrat (ERC CoG Nr. 648521, bis D.S.).

Die Tierversuche wurden von den Institutional Animal Care and Use Committees (IACUCs) der Kommunen der Technischen Universität München und der Regierung von Oberbayern genehmigt.
1. Informationen, die vor dem Eingriff zu beachten sind
<ol><li>Stellen Sie sicher, dass das Tierprotokoll und das Personal von den örtlichen Behörden genehmigt werden, bevor Sie mit Tierversuchen beginnen.</li>
	<li>Wählen Sie Empfängermäuse aus.<ol><li>Wählen Sie Mäuse ähnlichen Alters f...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2020.">Cancer statistics, 2020.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 70 (1), 7-30 (2020).</li><li>Quaresma, M., Coleman, M. P., Rachet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=40-year+trends+in+an+index+of+survival+for+all+cancers+combined+and+survival+adjusted+for+age+and+sex+for+each+cancer+in+England+and+Wales,+1971-2011:+A+population-based+study.">40-year trends in an index of survival for all cancers combined and survival adjusted for age and sex for each cancer in England and Wales, 1971-2011: A population-based study.</a> Lancet. 385 (9974), 1206-1218 (2015).</li><li>Rahib, L., Wehner, M. R., Matrisian, L. M., Nead, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+projection+of+US+cancer+incidence+and+death+to+2040.">Estimated projection of US cancer incidence and death to 2040.</a> JAMA Network Open. 4 (4), 214708 (2021).</li><li>Schneider, G., Schmidt-Supprian, M., Rad, R., Saur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+tumorigenesis:+Context+matters.">Tissue-specific tumorigenesis: Context matters.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (4), 239-253 (2017).</li><li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Hedgehog+signaling+enhances+delivery+of+chemotherapy+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Science. 324 (5933), 1457-1461 (2009).</li><li>Ruscetti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-induced+vascular+remodeling+creates+therapeutic+vulnerabilities+in+pancreas+cancer.">Senescence-induced vascular remodeling creates therapeutic vulnerabilities in pancreas cancer.</a> Cell. 181 (2), 424-441 (2020).</li><li>Aung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomics-driven+precision+medicine+for+advanced+pancreatic+cancer:+Early+results+from+the+COMPASS+trial.">Genomics-driven precision medicine for advanced pancreatic cancer: Early results from the COMPASS trial.</a> Clinical Cancer Research. 24 (6), 1344-1354 (2018).</li><li>Chan-Seng-Yue, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+phenotypes+of+pancreatic+cancer+are+driven+by+genomic+events+during+tumor+evolution.">Transcription phenotypes of pancreatic cancer are driven by genomic events during tumor evolution.</a> Nature Genetics. 52 (2), 231-240 (2020).</li><li>Kalimuthu, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+classification+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+that+predicts+molecular+subtypes+and+correlates+with+clinical+outcome.">Morphological classification of pancreatic ductal adenocarcinoma that predicts molecular subtypes and correlates with clinical outcome.</a> Gut. 69 (2), 317-328 (2020).</li><li>Hayashi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unifying+paradigm+for+transcriptional+heterogeneity+and+squamous+features+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">A unifying paradigm for transcriptional heterogeneity and squamous features in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Nature Cancer. 1 (1), 59-74 (2020).</li><li>Mueller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+routes+and+KRAS+dosage+define+pancreatic+cancer+phenotypes.">Evolutionary routes and KRAS dosage define pancreatic cancer phenotypes.</a> Nature. 554 (7690), 62-68 (2018).</li><li>Falcomata, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+multi-kinase+inhibition+sensitizes+mesenchymal+pancreatic+cancer+to+immune+checkpoint+blockade+by+remodeling+the+tumor+microenvironment.">Selective multi-kinase inhibition sensitizes mesenchymal pancreatic cancer to immune checkpoint blockade by remodeling the tumor microenvironment.</a> Nature Cancer. 3 (3), 318-336 (2022).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li><li>von Burstin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cadherin+regulates+metastasis+of+pancreatic+cancer+in+vivo+and+is+suppressed+by+a+SNAIL/HDAC1/HDAC2+repressor+complex.">E-cadherin regulates metastasis of pancreatic cancer in vivo and is suppressed by a SNAIL/HDAC1/HDAC2 repressor complex.</a> Gastroenterology. 137 (1), 361-371 (2009).</li><li>Mallya, K., Gautam, S. K., Aithal, A., Batra, S. K., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pancreatic+cancer+in+mice+for+experimental+therapeutics.">Modeling pancreatic cancer in mice for experimental therapeutics.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1876 (1), 188554 (2021).</li></ol>

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus stellen aufgrund ihrer Kosteneffektivität, Reproduzierbarkeit und relativ einfachen experimentellen Verfahren ein robustes Modell für präklinische Studiendar 13,15. Diese Modelle erlauben nicht nur die Untersuchung von Tumor-Wirt-Interaktionen, sondern garantieren auch den Erhalt der genetischen Heterogenität der Tumoren, aus denen sie stammen, wenn primäre Mauszellkulturen für das Experiment verwendet werden.</p...

In jüngster Zeit wurde PDAC zur dritthäufigsten krebsbedingten Todesursache in der westlichen Welt1. Es verursacht die höchste Sterblichkeitsrate unter allen Krebsarten und eine 10-Jahres-Gesamtüberlebensrate von ~1%, die sich seit Jahrzehnten nicht geändert hat2. Aufgrund des mangelnden Fortschritts bei der PDAC-Behandlung wird erwartet, dass diese Krankheit in den nächsten zehn Jahren die zweithäufigste krebsbedingte Todesursache sein wird3.
PDAC-Tumoren sind komplexe Einheiten, die durch eine vielfältige Tumormikroumgebung (TME) gekennzeichnet sind, die aus einer heterogenen Anordnung von Stroma-, vaskulären, immunen und extrazellulären Matrixkomponenten besteht4. Unterschiede in der Zusammensetzung der TME beeinflussen die Krankheitsprognose und das Ansprechen auf die Therapie 4,5,6. In der Tat haben viele Studien gezeigt, dass der basale, mesenchymale Subtyp der PDAC mit einem stark immunsuppressiven TME assoziiert ist und ein verringertes Überleben und mangelndes Ansprechen auf Therapien zeigt 7,8,9,10,11,12. Daher bleibt ein tieferes Verständnis der Unterschiede in der TME-Zusammensetzung und wie diese Merkmale die Tumorbiologie beeinflussen, ein wichtiger Faktor für die Entwicklung molekular präziser Therapien. Um die Biologie hinter diesem komplexen Phänotyp besser zu verstehen und therapeutische Strategien zu identifizieren, die in der Lage sind, die Barriere zu überwinden, die die TME von PDAC darstellt, sind In-vivo-Modelle unverzichtbar.
Ein Schlüsselaspekt für jedes präklinische Krebsmodellsystem ist, dass es menschliche Phänotypen nachahmen und sowohl die genetische Heterogenität als auch das Milieu rekapitulieren sollte, das die Vielzahl von Stroma- und Immunpopulationen umfasst, aus denen sich das TME zusammensetzt. Bei der Auswahl von Mausmodellen für die präklinische Forschung müssen daher mehrere Aspekte berücksichtigt werden. Um die Tumor-Immun-Interaktion zu untersuchen, können histokompatible Krebszelllinien in syngene immunkompetente Mäuse injiziert werden. In den meisten Fällen werden diese subkutan in die Flanke der Maus injiziert, was eine einfache Tumorüberwachung durch Abtasten oder visuelle Inspektion ermöglicht. Die resultierenden Modelle ahmen jedoch nicht das Wachstum von Tumorzellen in ihrem Ursprungsorgan nach. Daher wurden orthotope Transplantationen zum Goldstandard für Allotransplantatmodelle.
Orthotope Allotransplantate der Maus haben mehrere Vorteile: Sie sind kostengünstig, können mit einem relativ einfachen Verfahren erzeugt werden und führen zu Modellen mit bekannter molekularer Zusammensetzung sowie einer reproduzierbaren und vorhersagbaren Tumorprogression und einem Phänotyp. Während patientenabgeleitete Xenotransplantatmodelle das Verhalten menschlicher PDAC-Zellen genau repräsentieren, schränkt die Notwendigkeit der Implantation in immundefiziente Mäuse zur Vermeidung der Transplantatabstoßung die Analyse der Tumor-Immun- und Tumor-Stroma-Interaktionen ein, so dass die Forscher nur ein Teilbild der Komplexität dieser Tumore erfassen können. Syngene orthotope Allotransplantate von PDAC sind in dieser Hinsicht auch im Vergleich zu gentechnisch veränderten Mausmodellen (GEMMs) im Vorteil. GEMMs rekapitulieren genau die humane PDAC-Tumorgenese und die bei PDAC-Patienten beobachtete Heterogenität. Aufgrund dieser Merkmale können GEMM-Tumoren jedoch eine hohe Varianz in ihrer genetischen Ausstattung, Tumorprogression, Aggressivität, histologischen Differenzierung und TME-Zusammensetzung aufweisen. Während dies in bestimmten Studien von Vorteil sein kann, schränkt es Genotyp-zu-Phänotyp-Studien und die fokussierte Untersuchung von PDAC-Phänotypenein 13. Daher stellen orthotope Allotransplantate der Maus einen guten Kompromiss und ein gutes Modell dar, um Tumor-Wirts- und Behandlungsstudien in vivo durchzuführen. In dieser Arbeit wird ein Protokoll für orthotope Transplantationsexperimente von murinen PDAC-Zellen in die Bauchspeicheldrüse der Maus beschrieben.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>27 G cannula</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>08915992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole (Antisedan 5 mg/mL)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>23554.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclip Stainless Steel Wound Clips, 9 mm</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>NC9334081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco`s Modified Eagle Medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>1578675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl (50 &#181;g/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>9113473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile (Flumazenil-hameln 0.1 mg/mL)</td>
			<td>Hameln pharma</td>
			<td>09611975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine (Sedator 1 mg/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>400926.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam 5 mg/mL)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH</td>
			<td>3937902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HT80908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam (5 mg/mL)</td>
			<td>Hexal</td>
			<td>00886423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>2737756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone (Naloxon-hameln 0.4 mg/mL)</td>
			<td>hameln pharma</td>
			<td>04464535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7059-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture (Ethilon)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>9999034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypZean Solution 1x</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer

Das duktale Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse (PDAC) ist eine sehr komplexe Erkrankung, die durch eine heterogene Tumormikroumgebung gekennzeichnet ist, die aus einem vielfältigen Stroma, Immunzellen, Gefäßen, Nerven und Komponenten der extrazellulären Matrix besteht. Im Laufe der Jahre wurden verschiedene Mausmodelle von PDAC entwickelt, um die Herausforderungen zu bewältigen, die sich aus seiner Progression, seinem Metastasierungspotenzial und seiner phänotypischen Heterogenität ergeben. Immunkompetente orthotope Maus-Allotransplantate von PDAC haben sich aufgrund ihrer schnellen und reproduzierbaren Tumorprogression im Vergleich zu gentechnisch veränderten Mausmodellen als vielversprechend erwiesen. Darüber hinaus ermöglichen zelllinienbasierte orthotope Allotransplantat-Mausmodelle in Kombination mit ihrer Fähigkeit, die biologischen Merkmale nachzuahmen, die in autochthonen PDAC beobachtet wurden, groß angelegte In-vivo-Experimente . Daher werden diese Modelle in präklinischen Studien häufig für schnelle Genotyp-Phänotyp- und Drug-Response-Analysen eingesetzt. Das Ziel dieses Protokolls ist es, einen reproduzierbaren und robusten Ansatz zur erfolgreichen Injektion von primären PDAC-Zellkulturen der Maus in die Bauchspeicheldrüse von syngenen Empfängermäusen bereitzustellen. Neben den technischen Details werden wichtige Informationen gegeben, die vor der Durchführung dieser Experimente beachtet werden müssen.

Im Rahmen einer groß angelegten Drug-Response-Studie haben wir erfolgreich mehr als 170 Mäuse (C75Bl6/J-Empfängermäuse, männliches und weibliches Mäusegeschlecht, das auf die injizierten PDAC-Zelllinien abgestimmt ist) unter Verwendung des oben beschriebenen Protokolls implantiert, das in den Hauptschritten in Abbildung 112 beispielhaft dargestellt ist. In diesem Protokoll wurden drei KrasG12D-getriebene PDAC-Zelllinien (PDAC 1 und 2: Ptf...

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Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus des duktalen Adenokarzinoms der Bauchspeicheldrüse (PDAC) rekapitulieren die Biologie, die Phänotypen und das therapeutische Ansprechen von Krankheitssubtypen. Aufgrund ihrer schnellen, reproduzierbaren Tumorprogression sind sie in präklinischen Studien weit verbreitet. In dieser Arbeit zeigen wir gängige Praktiken zur Generierung dieser Modelle, indem wir syngene murine PDAC-Kulturen in die Bauchspeicheldrüse injizieren.

Syngene orthotope Allotransplantate der Maus zur Modellierung von Bauchspeicheldrüsenkrebs

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Dieses Protokoll bietet reproduzierbare, immunkompetente PDAC-In-vivo-Modelle, die für Genotyp-, Phänotyp- und Arzneimittelreaktionsstudien geeignet sind. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die Tumorprogression mit einer syngenen biologischen Tumormikroumgebung untersuchen kann, während die Reproduzierbarkeit des Experiments erhalten bleibt. Stefanie Barthel und Chiara Falcomata, beide aus unserem Labor, führen das Verfahren vor.Beginnen Sie mit der Präparation der Tumorzellen, indem Sie das duktale Adenokarzinom der Bauchspeicheldrüse oder die PDAC-Zellen, die in einem T75-Kulturkolben gezüchtet wurden, mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS waschen. Dann 0,5 Milliliter Trypsin für fünf bis 10 Minuten hinzufügen, um sich aus dem Kolben zu lösen. Die abgelösten Zellen werden in 10 Millilitern DMEM mit 10 % fötalem Kälberserum (FBS) und 0,1 % Penicillin-Streptomycin resuspendiert, bevor die Zellsuspension in ein 15-Milliliter-Röhrchen übertragen wird.Zentrifugieren Sie die Zellsuspension fünf Minuten lang bei 200 G und saugen Sie den Überstand ab. Resuspendieren Sie das Zellpellet in DMEM ohne Zusatzstoffe, basierend auf der erforderlichen Endkonzentration der Zellen für die Injektion. Zählen Sie die Zellen in 10 Mikrolitern Zellsuspension mit der Neubauer-Kammer und berechnen Sie die Anzahl der verfügbaren Zellen.Übertragen Sie einen Milliliter der verdünnten Suspension entsprechend der erforderlichen Endkonzentration in ein 1,5-Milliliter-Röhrchen. Legen Sie den Schlauch bis zur Implantation auf einen Rotator, um eine Zellaggregation zu verhindern. Für die orthotope Implantation von PDAC-Zellen tragen Sie Augencreme auf die analgosedierte Maus auf, während die Maus schläft.Überprüfen Sie die ausreichende Analgosedierung, bevor Sie die linke seitliche Bauchflanke der analgosedierten Maus rasieren. Legen Sie die Maus auf der rechten Seite liegend auf eine sterile Heizmatte und kleben Sie die Beine mit Klebeband auf die Oberfläche. Tragen Sie neue Handschuhe und desinfizieren Sie sie.Schneiden Sie mit einer chirurgischen Schere etwa einen Zentimeter der Haut und des Unterhautfettgewebes in Längsrichtung an der linken Flanke ab, wo die Milz projiziert wird. Trennen Sie die Haut mit Schere und Pinzette vom Bauchfell, um einen leichteren Zugang zum Bauchfell zu erhalten. Wechseln Sie die Schere, bevor Sie das Bauchfell an der Stelle der Milz mit einem Längsschnitt von einem Zentimeter öffnen.Achten Sie bei der Mobilisierung der Milz und der angesetzten Bauchspeicheldrüse mit einer stumpfen Pinzette mit feiner Spitze darauf, dass die Organe nicht mit anderem Gewebe verbunden sind. Achten Sie auch auf die zuführenden Blutgefäße, um eine Verletzung der Gefäße oder des umliegenden Gewebes beim Umgang mit der Bauchspeicheldrüse zu vermeiden. Ziehen Sie die Bauchspeicheldrüse vorsichtig aus dem Schnitt, um einen leichteren Zugang zum Schwanz des Organs zu ermöglichen, und beobachten Sie die Milz, die der Bauchspeicheldrüse folgt.Stellen Sie sicher, dass das Organ während der Injektion nicht gefaltet wird und die Organkapsel an der Nadeleindringstelle unter Spannung gehalten wird, um ein Verschütten zu vermeiden. Zielen Sie auf ein Stück Bauchspeicheldrüsengewebe zwischen den sichtbaren Blutgefäßen, um das Risiko einer Punktion oder Injektion des Gefäßes zu minimieren. Mit der dominanten Hand wird die Kapsel des Organs mit einer Kanüle von 27 Gauge und einer 50-Mikroliter-Spritze vorsichtig entlang der Längsachse des Organs durchdrungen.Nach der Injektion der 20 Mikroliter Suspension mit 2.500 Zellen in den Schwanzbereich der Bauchspeicheldrüse halten Sie die Bauchspeicheldrüse und die eingeführte Spritze etwa eine Minute lang still, um ein Verschütten der Tumorzellen zu vermeiden. Entfernen Sie dann die Nadel von der Injektionsstelle. Ordnen Sie als Nächstes die Organe im Bauchraum vorsichtig neu an, ohne das Gewebe zu verletzen, um ein Verschütten der Zellen zu vermeiden.Vermeiden Sie Organverklebungen, indem Sie einen Milliliter 0,9%iges Natriumchlorid auf die Organe gießen. Nach dem Nähen des Bauchfells mit der einfachen unterbrochenen Nahttechnik verschließen Sie die Haut mit zwei bis drei neun Millimeter dicken Wundklammern aus Edelstahl. Antagonisieren Sie dann die Analgosedierung mit Midazolam, Medetomadin und Fentanyl oder MMF mit einer subkutanen Injektion von AFN entsprechend dem Körpergewicht der Maus.Wenn Sie fertig sind, legen Sie die Maus in eine bei 37 Grad Celsius beheizte Kammer, bis sie wach und vollständig aktiv ist. Setzen Sie die aktive Maus wieder in ihren ursprünglichen Käfig und überwachen Sie den Gesundheitszustand der Maus, indem Sie das Fell, die Hautfarbe und die Aktivität überprüfen, und wiederholen Sie dies drei bis vier Stunden nach der Operation. In der MRT der implantierten Maus wurde das Transplantat von PDAC-Zellen frühestens etwa sieben Tage nach der Operation abdominal palpiert, abhängig von der injizierten Zellzahl und den Aggressivitäts- und Wachstumseigenschaften der inokulierten Zelllinie.Das Überleben der implantierten Mäuse variierte in Abhängigkeit von den Tumorzell-intrinsischen Merkmalen der Zelllinien. Erfolgreiche intrapankreatische Injektionen führten zu ausgewachsenen Tumoren in der Bauchspeicheldrüse der Maus. Im Gegensatz dazu führten erfolglose Implantationen zum Fehlen von Bauchspeicheldrüsentumoren aufgrund der Injektion nicht lebensfähiger Zellen, der Abstoßung der implantierten Zellen oder der Injektion einer unzureichenden Anzahl von Zellen.Denken Sie daran, darauf zu achten, dass während der Injektionen keine Zellen verschüttet werden und kein umliegendes Gewebe verletzt wird, um zu verhindern, dass sich Zellen im Bauchraum ausbreiten. Im Anschluss an dieses Verfahren können In-vivo-Studien, wie präklinische Studien zum Ansprechen auf Medikamente, an immunkompetenten Mäusen durchgeführt werden, gefolgt von z. B. Fakten, Sequenzierung oder histologischer Analyse, um Tumor-Wirt-Interaktionen zu untersuchen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluoreszierende orthotopen Mausmodell des Bauchspeicheldrüsenkrebs

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Forschung

Krebsforschung

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ein Syngenetische Maus-Modell von metastasierendem Nierenzellkarzinom für Quantitative und Longitudinal Beurteilung der vorklinischen Therapien

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolierung von zirkulierenden Tumorzellen in einem orthotopischen Mausmodell des Darmkrebses

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Ein Phänomen Bauchspeicheldrüsenkrebs-Maus-Modell zur Untersuchung der Auswirkungen der Irreversible Electroporation

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Eine Fluoreszenz und Biolumineszenz orthotopen Phänomen Mausmodell der Androgen-abhängige und Kastration-resistenten Prostatakrebs

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Die Immunphänotypisierung der Orthotopen Homograft (Phänomen) der murinen primäre KPC duktales Pankreaskarzinom durch Durchflusszytometrie

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopen Transplantation von Phänomen Lungenzellen Adenokarzinom, PD-L1 Ausdruck zu studieren

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Ein Phänomen B-Zell-Lymphom Mausmodell für präklinische Bewertung von CD19-Auto-T-Zellen

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultraschallgeführte orthotopische Implantation von murine Pankreas-Ductalsocarcinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...