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•
10:59 min
August 17th, 2022
DOI :
10.3791/64254-v
Chapters
0:04
Introduction
1:04
Slide and Coverslip Cleaning
3:04
mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
5:13
Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
6:23
Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
7:47
Data Analysis
8:39
Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
10:11
Conclusion
Transcript
在这里,我们使用单分子FRET和通过天然氨基酸掺入的位点特异性蛋白质标记来研究mGluR2的构象动力学。这允许在不干扰蛋白质结构的情况下研究蛋白质动力学。原子结构提供了蛋白质的静态图像。
然而,单分子FRET使我们能够实时可视化蛋白质运动和解决方案的全范围。这种方法可用于研究任何蛋白质的动力学。此外,天然氨基酸掺入可用于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用以及合成受体的工程。
样品装载和成像优化需要耐心和实践。首先,用记号笔标记要在载玻片上钻的孔。使用Dremel在滑轨上
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Summary
本研究提出了一种详细的程序,通过非天然氨基酸(UAA)掺入 使用 位点特异性标记对G蛋白偶联受体(GPCR)进行单分子荧光共振能量转移(smFRET)实验。该协议为 smFRET 样品制备、实验和数据分析提供了分步指南。
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