mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
5:13
Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
6:23
Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
7:47
Data Analysis
8:39
Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
10:11
Conclusion
Transcript
כאן, השתמשנו ב-FRET של מולקולה בודדת, ובתיוג חלבונים ספציפיים לאתר באמצעות שילוב טבעי של חומצות אמינו כדי לחקור את הדינמיקה הקונפורמציונית של mGluR2. זה מאפשר לחקור את הדינמיקה של החלבון מבלי להפריע למבנה החלבון. מבנה אטומי מספק תמונה סטטית של חלב
Sign in or start your free trial to access this content
מחקר זה מציג הליך מפורט לביצוע ניסויים של העברת אנרגיה בתהודה פלואורסצנטית של מולקולה בודדת (smFRET) על קולטנים מצומדים לחלבון G (GPCRs) באמצעות תיוג ספציפי לאתר באמצעות שילוב חומצות אמינו לא טבעיות (UAA). הפרוטוקול מספק מדריך שלב אחר שלב להכנת דגימות smFRET, ניסויים וניתוח נתונים.