Name: polysome purification from soybean symbiotic nodules
Uploaded: 2022-07-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Polysome Purification from Soybean Symbiotic Nodules at JoVE.com

Cette recherche a été financée par la subvention 282 de la SCCI I+D 2020, la subvention FVF 2017 n° 210 et PEDECIBA (María Martha Sainz).

1. Croissance des plantes et inoculation des rhizobiums
<ol><li>Pour générer les nodules requis, semez les graines de soja de votre choix dans le substrat sélectionné dans une chambre de croissance dans des conditions contrôlées. NOTE: Dans ce protocole, les graines ont été semées dans une bouteille en plastique de 0,5 L remplie d’un mélange de sable:vermiculite (1:1). La chambre de croissance a été réglée avec une température du cycle jour/nuit de 28 °C / 20 ° C, respectivement, ...

<ol>
	<li>Limpens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-+and+tissue-specific+transcriptome+analyses+of+Medicago+truncatula+root+nodules.">Cell- and tissue-specific transcriptome analyses of Medicago truncatula root nodules.</a> PLoS ONE. 8 (5), 64377 (2013).</li><li>Masson-Boivin, C., Giraud, E., Perret, X., Batut, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+nitrogen-fixing+symbiosis+with+legumes:+How+many+rhizobium+recipes.">Establishing nitrogen-fixing symbiosis with legumes: How many rhizobium recipes.</a> Trends in Microbiology. 17 (10), 458-466 (2009).</li><li>King, H. A., Gerber, A. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+RNA-Seq+and+microarray+gene+expression+data+in+two+zones+of+the+Arabidopsis+root+apex+relevant+to+spaceflight.">Comparing RNA-Seq and microarray gene expression data in two zones of the Arabidopsis root apex relevant to spaceflight.</a> Applications in Plant Sciences. 6 (11), 1197 (2018).</li><li>Shulse, C. 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S., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+in+vivo+of+translation+with+nucleotide+resolution+using+ribosome+profiling.">Genome-wide analysis in vivo of translation with nucleotide resolution using ribosome profiling.</a> Science. 324 (5924), 218-223 (2009).</li><li>Brar, G. A., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosome+profiling+reveals+the+what,+when,+where+and+how+of+protein+synthesis.">Ribosome profiling reveals the what, when, where and how of protein synthesis.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 16 (11), 651-664 (2015).</li><li>Eastman, G., Smircich, P., Sotelo-Silveira, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Following+ribosome+footprints+to+understand+translation+at+a+genome+wide+level.">Following ribosome footprints to understand translation at a genome wide level.</a> Computational and Structural Biotechnology Journal. 16, 167-176 (2018).</li><li>Westermann, A. J., Gorski, S. A., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+RNA-seq+of+pathogen+and+host.">Dual RNA-seq of pathogen and host.</a> Nature Reviews Microbiology. 10 (9), 618-630 (2012).</li></ol>

L’étude de la régulation de l’expression génique au niveau translationnel est essentielle pour mieux comprendre les différents processus biologiques puisque le critère d’évaluation de l’expression génique cellulaire est l’abondance des protéines13,14. Ceci peut être évalué en analysant le translatome du tissu ou de l’organisme d’intérêt pour lequel la fraction polysomale doit être purifiée et ses ARNm associés...

Les légumineuses, comme le soja (Glycine max), peuvent établir une symbiose avec des bactéries spécifiques du sol appelées rhizobiums. Cette relation mutualiste provoque la formation de nouveaux organes, les nodules symbiotiques, sur les racines des plantes. Les nodules sont les organes végétaux hébergeant la bactérie et sont constitués de cellules hôtes dont le cytoplasme est colonisé par une forme spécialisée de rhizobiums appelée bactéroïdes. Ces bactéroïdes catalysent la réduction de l’azote atmosphérique (N2) en ammoniac, qui est transféré à la plante en échange de glucides 1,2.
Bien que cette symbiose fixatrice d’azote soit l’une des symbioses plantes-microbes les mieux étudiées, de nombreux aspects restent à mieux comprendre, tels que la façon dont les plantes soumises à différentes conditions de stress abiotique modulent leur interaction avec leur partenaire symbiotique et comment cela affecte le métabolisme des nodules. Ces processus pourraient être mieux compris en analysant le translatome nodule (c’est-à-dire le sous-ensemble d’ARN messagers [ARNm] activement traduit). Les polyribosomes ou polysomes sont des complexes de ribosomes multiples associés à l’ARNm, couramment utilisés pour étudier la traduction3. La méthode de profilage des polysomes consiste en l’analyse des ARNm associés aux polysomes et a été utilisée avec succès pour étudier les mécanismes posttranscriptionnels contrôlant l’expression des gènes qui se produisent dans divers processus biologiques 4,5.
Historiquement, l’analyse de l’expression du génome s’est principalement concentrée sur la détermination de l’abondance de l’ARNm 6,7,8,9. Cependant, il y a un manque de corrélation entre les niveaux de transcrits et de protéines en raison des différentes étapes de la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique, en particulier la traduction10,11,12. De plus, aucune dépendance n’a été observée entre les changements au niveau du transcriptome et ceux qui se produisent au niveau du translatome13. L’analyse directe de l’ensemble des ARNm en cours de traduction permet une mesure plus précise et complète de l’expression génique cellulaire (dont le critère d’évaluation est l’abondance des protéines) que celle obtenue lorsque seuls les niveaux d’ARNm sont analysés14,15,16.
Ce protocole décrit comment les polysomes d’origine végétale sont purifiés à partir de nodules de soja intacts par centrifugation différentielle à travers un coussin de saccharose à deux couches (Figure 1). Cependant, comme les ribosomes dérivés de bactéroïdes sont également présents dans les nodules, un mélange d’espèces de ribosomes et d’ARN est purifié, même si les eucaryotes représentent la fraction principale (90%-95%). L’isolement, la quantification et le contrôle de la qualité de l’ARN qui s’ensuivent sont également décrits (figure 1). Ce protocole, en combinaison avec RNA-seq, devrait fournir des résultats expérimentaux sur la régulation translationnelle des ARNm eucaryotes dans un tissu complexe tel que le nodule symbiotique.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64269/64269fig01.jpg"> Figure 1 : Aperçu schématique de la méthodologie proposée pour la purification des polysomes eucaryotes à partir de nodules symbiotiques. Le schéma donne un aperçu des étapes suivies dans le protocole depuis (1) la croissance des plantes et (2) la récolte des nodules jusqu’à (3) la préparation des extraits cytosoliques, (3) l’obtention d’échantillons TOTAL et (4) d’échantillons PAR, et (5) l’extraction de l’ARN et le contrôle de la qualité. Abréviations : PEB = tampon d’extraction de polysomes; RB = tampon de remise en suspension; TOTAL = ARN total; PAR = ARNm associé aux polysomes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64269/64269fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plant growth and rhizobia inoculation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>Daihan Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Model SHO-1D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YEM-medium</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>J850 (yeast extract) 0122 (mannitol)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water deficit treatment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KNO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>221295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porometer</td>
			<td>Decagon Device</td>
			<td></td>
			<td>Model SC-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparation of cytosolic extracts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brij L23</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Model 2K15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloranphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal CA 360</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I8896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic tissue grinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12649595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTE</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15504-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dish&#160;</td>
			<td>Deltalab</td>
			<td>1911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparation of sucrose cushions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15503022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 40 Ti rotor</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td></td>
			<td>Optima L-100K</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tubes</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td>344059</td>
			<td>13.2 mL tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA extraction and quality control</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>R0492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Model 2100. Eukaryote total RNA nano assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>DI</td>
			<td>41191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Dorwil</td>
			<td>UN1170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Mallinckrodt</td>
			<td>3032-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10814-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol LS</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>102960028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miscellaneous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes 15 mL</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>10-0152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 10 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>321-4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 1000 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>361-1050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 20 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>341-4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 200 &#181;L</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>528104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5 mL</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>500010-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 2.0 mL</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>500020-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing company</td>
			<td>Macrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 250 mL flask</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>4110207</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polysome purification from soybean symbiotic nodules

L’objectif de ce protocole est de fournir une stratégie pour étudier le translatome eucaryote du nodule symbiotique du soja (Glycine max). Cet article décrit des méthodes optimisées pour isoler les polyribosomes dérivés de plantes et leurs ARNm associés à analyser à l’aide du séquençage de l’ARN. Premièrement, les lysats cytoplasmiques sont obtenus par homogénéisation dans des conditions de préservation des polysomes et de l’ARN à partir de nodules de soja entiers congelés. Ensuite, les lysats sont éliminés par centrifugation à basse vitesse, et 15% du surnageant est utilisé pour l’isolement de l’ARN total (TOTAL). Le lysat éliminé restant est utilisé pour isoler les polysomes par ultracentrifugation à travers un coussin de saccharose à deux couches (12% et 33,5%). L’ARNm associé aux polysomes (PAR) est purifié à partir de pastilles polysomiques après remise en suspension. TOTAL et PAR sont évalués par électrophorèse capillaire très sensible pour répondre aux normes de qualité des bibliothèques de séquençage pour le séquençage de l’ARN-seq. À titre d’exemple d’application en aval, après séquençage, des pipelines standard pour l’analyse de l’expression génique peuvent être utilisés pour obtenir des gènes exprimés différentiellement aux niveaux du transcriptome et du translatome. En résumé, cette méthode, en combinaison avec le séquençage de l’ARN, permet l’étude de la régulation translationnelle des ARNm eucaryotes dans un tissu complexe tel que le nodule symbiotique.

L’évaluation de la quantité et de la qualité des fractions TOTAL et PAR purifiées avec la procédure susmentionnée est essentielle pour déterminer son succès, car pour la plupart des applications en aval, telles que le séquençage de l’ARN, des échantillons de haute qualité sont fondamentaux pour la préparation et le séquençage des bibliothèques. De plus, l’intégrité des molécules d’ARN permet la capture d’un instantané du profil d’expression génique au moment du prélèvement de l’échan...

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Polysome Purification from Soybean Symbiotic Nodules

Ce protocole décrit une méthode de purification eucaryote des polysomes à partir de nodules de soja intacts. Après le séquençage, des pipelines standard pour l’analyse de l’expression génique peuvent être utilisés pour identifier les gènes exprimés différentiellement aux niveaux du transcriptome et du translatome.

Purification des polysomes à partir de nodules symbiotiques de soja

The aim of this protocol is to provide a strategy for studying the eukaryotic translatome of the soybean (Glycine max) symbiotic nodule. This paper ...

Ce protocole est important parce qu’il est, à notre connaissance, le premier à décrire un nouveau métal à base de centrifugeuse pour la purification cinétique des polysomes à partir de nodules symbiotiques de soja. Le gros avantage de cette technique est qu’en combinaison avec RNA-Seq, permet l’étude de la relation et organisée dans un tissu complexe tel que le nodule symbiotique. Pour commencer, pesez environ 0,2 gramme de nodules intacts dans un plat de pesée et transférez-les dans un tube de deux millilitres prérefroidi.Ajoutez ensuite 1,2 millilitre de tampon d’extraction de polysomes, laissez l’échantillon décongeler pendant deux minutes et homogénéisez avec un broyeur de tissus jusqu’à perturbation complète et homogénéisation des nodules. Ensuite, incuber les échantillons sur de la glace en agitant doucement pendant 10 minutes ou jusqu’à ce que tous les échantillons aient été traités et centrifuger à 16 000 fois G pendant 15 minutes à quatre degrés Celsius pour enduire les débris. Ensuite, récupérez le surnageant et répétez l’étape de la centrifugeuse.Après avoir soigneusement récupéré l’extrait cytosolique clarifié, transférer une partie aliquote de 200 microlitres dans un tube microcentrifuge propre de 1,5 millilitre pour une isolation totale. Ensuite, versez 4,5 millilitres de la couche de saccharose à 33,5% dans les tubes de centrifugation et ajoutez 4,5 millilitres de la couche de 12% avec précaution et lentement avec une micropipette P-1000. Ensuite, mettez les tubes sur de la glace jusqu’à l’ajout de l’extrait cytosolique clarifié.Chargez un millilitre de l’extrait cytosolique clarifié sur le coussin de saccharose en pipetant soigneusement sur la paroi latérale du tube. Ensuite, transférer les tubes ultracentrifugeurs dans des godets prérefroidis et centrifuger à 217,874 G pendant deux heures à quatre degrés Celsius. Après avoir jeté l’extrait cytosolique restant et le coussin de saccharose, remettre en suspension la pastille polysomale avec 200 microlitres de tampon de remise en suspension prérefroidi.Ensuite, incuber pendant 30 minutes sur de la glace, puis transférer la remise en suspension polysomale dans des tubes prérefroidis de 1,5 millilitre pour procéder à l’extraction de l’ARN. Après homogénéisation des échantillons avec 750 microlitres du réactif d’isolement d’ARN, incuber pendant cinq minutes à température ambiante. Ensuite, ajoutez 200 microlitres de chloroforme froid et agitez vigoureusement les tubes pendant 15 secondes.Ensuite, incuber à température ambiante pendant 10 minutes. Centrifuger à 12 000 fois G pendant 15 minutes à quatre degrés Celsius pour la séparation des phases, et transférer 500 microlitres de la phase aqueuse supérieure dans un tube propre sans perturber la phase organique rose. Ensuite, ajoutez 375 microlitres d’isopropanol froid et 0,5 microlitre de glycogène libre ARN.Ensuite, mélangez bien en pipetant de haut en bas. Incuber le mélange pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius et centrifuger à 12 000 fois G pendant 15 minutes. Ensuite, jetez le surnageant et lavez le précipité d’ARN avec un millilitre d’éthanol froid à 75%.Mélanger par vortex bref. Ensuite, centrifuger à 7 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Jeter le surnageant et sécher à l’air la pastille d’ARN.Ensuite, dissoudre la pastille dans 50 microlitres d’eau libre d’ARN et incuber à 65 degrés Celsius pendant cinq minutes. Évaluer la concentration et l’intégrité de l’ARN avec une électrophorèse capillaire très sensible et/ou une électrophorèse sur un gel d’agarose libre à 2 % d’ARN. Après avoir estimé le volume de l’échantillon, ajoutez 0,1 volume d’acétate de sodium à trois molaires, trois volumes d’éthanol froid et 0,5 microlitre d’ARN, glycogène libre.Ensuite, mélangez-les soigneusement. L’électrophorèse capillaire a été réalisée pour plusieurs fractions d’échantillons d’ARN associés totaux et polysomiques, qui ont démontré des bandes d’ARN ribosomique nettes, sans aucune apparence maculée. Cependant, cela n’est pas reflété dans les valeurs RIN, car elles se situent entre 5,9 et 7,5, ce qui correspond à des échantillons non intacts.Le bioanalyseur n’a pas réussi à identifier les pics 18S et 25S observés dans les électrophérogrammes, tant pour les échantillons d’ARN total que pour les échantillons d’ARN associés aux polysomes. Il n’y avait aucun signe visuel de dégradation de l’échantillon. Cependant, un échantillon a été analysé pour visualiser le résultat d’un échantillon presque entièrement dégradé, à des fins de comparaison.Le plus important est de travailler dans des conditions de préservation des polysomes et de l’ARN pendant tout le protocole. Après le séquençage des fractions d’ARN total et par, les modèles standard pour l’expression génique analysée peuvent être utilisés pour identifier les gènes d’expression différentielle au niveau de la transcription et de la traduction.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

Dérivation des cellules cardiaques progénitrices de cellules souches embryonnaires

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Recherche

Biologie du développement

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Quantification tridimensionnelle d&#39;épines dendritiques de Pyramidal neurones humains induits Dérivé de cellules souches pluripotentes

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

A Quick and Efficient Method for the Purification of Endoderm Cells Generated from Human Embryonic Stem Cells

Une méthode rapide et efficace pour la purification des cellules endoderme Généré à partir d&#39;embryons humains Cellules souches

The differentiation capabilities of pluripotent stem cells such as embryonic stem cells (ESCs) allow a potential therapeutic application for cell ...

Establishment of Proliferative Tetraploid Cells from Nontransformed Human Fibroblasts

Mise en place de cellules tétraploïdes proliférative de fibroblastes humains non transformés

Polyploid (mostly tetraploid) cells are often observed in preneoplastic lesions of human tissues and their chromosomal instability has been considered to ...

Effective Isolation of Functional Islets from Neonatal Mouse Pancreas

Isolation efficace des îlots fonctionnels de néonatales Pancréas souris

Perfusion-based islet-isolation protocols from large mammalian pancreata are well established. Such protocols are readily conducted in many laboratories ...

A Standardized Approach for Multispecies Purification of Mammalian Male Germ Cells by Mechanical Tissue Dissociation and Flow Cytometry

Une approche standardisée pour la purification multispécifique des cellules germinales masculines de mammifères par dissociation mécanique des tissus et cytométrie de flux

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In this article, we give hands-on instructions to obtain translatome data from different Arabidopsis thaliana root cell types via the translating ribosome ...

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Isolement des préadipocytes à partir d’embryons de poussins de poulet de chair

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