Name: polysome purification from soybean symbiotic nodules
Uploaded: 2022-07-01T15:00:00
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इस शोध को सीएसआईसी आई + डी 2020 अनुदान संख्या 282, एफवीएफ 2017 अनुदान संख्या 210 और पीईडीईसीआईबीए (मारिया मार्था सैंज) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

1. पौधे की वृद्धि और राइजोबिया टीकाकरण
<ol><li>आवश्यक नोड्यूल उत्पन्न करने के लिए, नियंत्रित परिस्थितियों में विकास कक्ष में चयनित सब्सट्रेट में पसंद के सोयाबीन बीज बोएं। नोट: इस प्रोटोकॉल में, बीज ...

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	<li>Limpens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-+and+tissue-specific+transcriptome+analyses+of+Medicago+truncatula+root+nodules.">Cell- and tissue-specific transcriptome analyses of Medicago truncatula root nodules.</a> PLoS ONE. 8 (5), 64377 (2013).</li><li>Masson-Boivin, C., Giraud, E., Perret, X., Batut, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+nitrogen-fixing+symbiosis+with+legumes:+How+many+rhizobium+recipes.">Establishing nitrogen-fixing symbiosis with legumes: How many rhizobium recipes.</a> Trends in Microbiology. 17 (10), 458-466 (2009).</li><li>King, H. A., Gerber, A. 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ट्रांसलेशनल स्तर पर जीन अभिव्यक्ति विनियमन का अध्ययन विभिन्न जैविक प्रक्रियाओं को बेहतर ढंग से समझने के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि सेल जीन अभिव्यक्ति का समापन बिंदु प्रोटीन बहुतायत13,14<sup ...

फलीदार पौधे, जैसे सोयाबीन (ग्लाइसिन अधिकतम), राइज़ोबिया नामक विशिष्ट मिट्टी के बैक्टीरिया के साथ सहजीवन स्थापित कर सकते हैं। यह पारस्परिक संबंध पौधे की जड़ों पर उपन्यास अंगों, सहजीवी नोड्यूल के गठन को प्राप्त करता है। नोड्यूल बैक्टीरिया की मेजबानी करने वाले पौधे के अंग होते हैं और इसमें मेजबान कोशिकाएं होती हैं जिनके साइटोप्लाज्म को राइज़ोबिया के एक विशेष रूप के साथ उपनिवेशित किया जाता है जिसे बैक्टीरॉइड कहा जाता है। ये बैक्टीरॉइड वायुमंडलीय नाइट्रोजन (एन2) को अमोनिया में कम करने के लिए उत्प्रेरित करते हैं, जिसे कार्बोहाइड्रेट 1,2 के बदले में पौधे में स्थानांतरित किया जाता है।
यद्यपि यह नाइट्रोजन-फिक्सिंग सहजीवन सबसे अच्छी तरह से अध्ययन किए गए पौधे-सूक्ष्मजीव सहजीवी में से एक है, कई पहलुओं को बेहतर ढंग से समझा जाना बाकी है, जैसे कि विभिन्न अजैविक तनाव स्थितियों के अधीन पौधे अपने सहजीवी साथी के साथ अपनी बातचीत को कैसे संशोधित करते हैं और यह नोड्यूल चयापचय को कैसे प्रभावित करता है। नोड्यूल ट्रांसलेटोम (यानी, मैसेंजर आरएनए [एमआरएनए] के सबसेट का सक्रिय रूप से अनुवाद किया गया) का विश्लेषण करके इन प्रक्रियाओं को बेहतर ढंग से समझा जा सकता है। पॉलीराइबोसोम या पॉलीसोम एमआरएनए से जुड़े कई राइबोसोम के परिसर हैं, जिनका उपयोग आमतौर पर अनुवाद का अध्ययन करने के लिए किया जाताहै 3. पॉलीसोम प्रोफाइलिंग विधि में पॉलीसोम से जुड़े एमआरएनए का विश्लेषण होता है और इसका उपयोग जीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करने वाले पोस्टट्रांसक्रिप्शनल तंत्रका अध्ययन करने के लिए सफलतापूर्वक किया जाता है जो विभिन्न जैविक प्रक्रियाओं 4,5 में होता है।
ऐतिहासिक रूप से, जीनोम अभिव्यक्ति विश्लेषण ने मुख्य रूप से एमआरएनए बहुतायत 6,7,8,9 का निर्धारण करने पर ध्यान केंद्रित किया है। हालांकि, जीन अभिव्यक्ति के पोस्टट्रांसक्रिप्शनल विनियमन के विभिन्न चरणों के कारण प्रतिलेख और प्रोटीन के स्तर के बीच सहसंबंध की कमी है, विशेष रूप से अनुवाद 10,11,12। इसके अलावा, ट्रांसक्रिप्टोम के स्तर पर परिवर्तनों और अनुवाद13 के स्तर पर होने वाले परिवर्तनों के बीच कोई निर्भरता नहीं देखी गई है। एमआरएनए के सेट का प्रत्यक्ष विश्लेषण जिसका अनुवाद किया जा रहा है, सेल जीन अभिव्यक्ति (जिसका समापन बिंदु प्रोटीन बहुतायत है) के अधिक सटीक और पूर्ण माप की अनुमति देता है, जब केवल एमआरएनए स्तरों का विश्लेषण 14,15,16 किया जाता है।
यह प्रोटोकॉल बताता है कि पौधे-व्युत्पन्न पॉलीसोम को दो-परत सुक्रोज कुशन (चित्रा 1) के माध्यम से अंतर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा बरकरार सोयाबीन नोड्यूल से कैसे शुद्ध किया जाता है। हालांकि, चूंकि बैक्टीरॉइड-व्युत्पन्न राइबोसोम नोड्यूल में भी मौजूद होते हैं, इसलिए राइबोसोम और आरएनए प्रजातियों का मिश्रण शुद्ध होता है, भले ही यूकेरियोटिक वाले मुख्य अंश (90% -95%) का प्रतिनिधित्व करते हैं। बाद के आरएनए अलगाव, मात्रा का ठहराव, और गुणवत्ता नियंत्रण भी वर्णित हैं (चित्रा 1)। यह प्रोटोकॉल, आरएनए-सेक के साथ संयोजन में, सहजीवी नोड्यूल जैसे जटिल ऊतक में यूकेरियोटिक एमआरएनए के ट्रांसलेशनल विनियमन पर प्रयोगात्मक परिणाम प्रदान करना चाहिए।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64269/64269fig01.jpg"> चित्रा 1: सहजीवी नोड्यूल से यूकेरियोटिक पॉलीसोम शुद्धिकरण के लिए प्रस्तावित पद्धति का योजनाबद्ध अवलोकन। योजना (1) पौधे की वृद्धि और (2) नोड्यूल फसल से (3) साइटोसोलिक अर्क की तैयारी, (3) कुल नमूने और (4) पीएआर नमूने प्राप्त करने, और (5) आरएनए निष्कर्षण और गुणवत्ता नियंत्रण से प्रोटोकॉल में पीछा किए गए चरणों का अवलोकन देती है। संक्षिप्त नाम: पीईबी = पॉलीसोम निष्कर्षण बफर; आरबी = पुन: निलंबन बफर; कुल = कुल आरएनए; पीएआर = पॉलीसोम से जुड़े एमआरएनए। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64269/64269fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plant growth and rhizobia inoculation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>Daihan Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Model SHO-1D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YEM-medium</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>J850 (yeast extract) 0122 (mannitol)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water deficit treatment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KNO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>221295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porometer</td>
			<td>Decagon Device</td>
			<td></td>
			<td>Model SC-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparation of cytosolic extracts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brij L23</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td>Model 2K15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloranphenicol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal CA 360</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I8896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic tissue grinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12649595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMSF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTE</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15504-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dish&#160;</td>
			<td>Deltalab</td>
			<td>1911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preparation of sucrose cushions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15503022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 40 Ti rotor</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td></td>
			<td>Optima L-100K</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tubes</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td>344059</td>
			<td>13.2 mL tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA extraction and quality control</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>R0492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Model 2100. Eukaryote total RNA nano assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>DI</td>
			<td>41191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Dorwil</td>
			<td>UN1170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Mallinckrodt</td>
			<td>3032-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10814-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol LS</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>102960028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miscellaneous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes 15 mL</td>
			<td>Biologix</td>
			<td>10-0152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 10 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>321-4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 1000 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>361-1050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 20 &#181;L</td>
			<td>BioPointe Scientific</td>
			<td>341-4050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips 200 &#181;L</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>528104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5 mL</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>500010-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 2.0 mL</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>500020-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing company</td>
			<td>Macrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 250 mL flask</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>4110207</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polysome purification from soybean symbiotic nodules

इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य सोयाबीन (ग्लाइसिन अधिकतम) सहजीवी नोड्यूल के यूकेरियोटिक अनुवाद का अध्ययन करने के लिए एक रणनीति प्रदान करना है। यह पत्र पौधे-व्युत्पन्न पॉलीराइबोसोम और उनके संबंधित एमआरएनए को आरएनए-अनुक्रमण का उपयोग करके विश्लेषण करने के लिए अनुकूलित तरीकों का वर्णन करता है। सबसे पहले, साइटोप्लाज्मिक लाइसेट्स पूरे, जमे हुए सोयाबीन नोड्यूल से पॉलीसोम- और आरएनए-संरक्षण स्थितियों में होमोजेनाइजेशन के माध्यम से प्राप्त किए जाते हैं। फिर, लाइसेट्स को कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा साफ किया जाता है, और सतह पर तैरनेवाला का 15% कुल आरएनए (कुल) अलगाव के लिए उपयोग किया जाता है। शेष साफ़ लाइसेट का उपयोग दो-परत सुक्रोज कुशन (12% और 33.5%) के माध्यम से अल्ट्रासेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा पॉलीसोम को अलग करने के लिए किया जाता है। पॉलीसोम से जुड़े एमआरएनए (पीएआर) को पुन: निलंबन के बाद पॉलीसोमल छर्रों से शुद्ध किया जाता है। आरएनए-सेक के लिए अनुक्रमण पुस्तकालयों के गुणवत्ता मानकों को पूरा करने के लिए अत्यधिक संवेदनशील केशिका वैद्युतकणसंचलन द्वारा कुल और पीएआर दोनों का मूल्यांकन किया जाता है। डाउनस्ट्रीम एप्लिकेशन के उदाहरण के रूप में, अनुक्रमण के बाद, जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए मानक पाइपलाइनों का उपयोग ट्रांसक्रिप्टोम और ट्रांसलेटोम स्तरों पर अलग-अलग व्यक्त जीन प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है। संक्षेप में, यह विधि, आरएनए-सेक के साथ संयोजन में, सहजीवी नोड्यूल जैसे जटिल ऊतक में यूकेरियोटिक एमआरएनए के ट्रांसलेशनल विनियमन के अध्ययन की अनुमति देती है।

उपर्युक्त प्रक्रिया के साथ शुद्ध कुल और पीएआर अंशों की मात्रा और गुणवत्ता मूल्यांकन इसकी सफलता का निर्धारण करने के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि आरएनए अनुक्रमण जैसे अधिकांश डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के...

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Polysome Purification from Soybean Symbiotic Nodules

यह प्रोटोकॉल बरकरार सोयाबीन नोड्यूल से यूकेरियोटिक पॉलीसोम शुद्धिकरण के लिए एक विधि का वर्णन करता है। अनुक्रमण के बाद, जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए मानक पाइपलाइनों का उपयोग ट्रांसक्रिप्टोम और ट्रांसलेटोम स्तरों पर अलग-अलग व्यक्त जीन की पहचान करने के लिए किया जा सकता है।

सोयाबीन सहजीवी नोड्यूल से पॉलीसोम शुद्धिकरण

The aim of this protocol is to provide a strategy for studying the eukaryotic translatome of the soybean (Glycine max) symbiotic nodule. This paper ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह हमारे ज्ञान के लिए, सोयाबीन सहजीवी नोड्यूल से गतिज पॉलीसोम शुद्धि के लिए एक नई अपकेंद्रित्र आधारित धातु का वर्णन करने वाला पहला व्यक्ति है। इस तकनीक का बड़ा लाभ यह है कि आरएनए-सेक के साथ संयोजन में, संबंध के अध्ययन की अनुमति देता है और सहजीवी नोड्यूल जैसे जटिल ऊतक में व्यवस्थित होता है। शुरू करने के लिए, वजन पकवान में लगभग 0.2 ग्राम बरकरार नोड्यूल का वजन करें, और उन्हें पूर्व-ठंडा दो मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें।फिर पॉलीसोम निष्कर्षण बफर के 1.2 मिलीलीटर जोड़ें, नमूना को दो मिनट के लिए पिघलने दें, और नोड्यूल के पूर्ण व्यवधान और समरूपता तक ऊतक की चक्की के साथ होमोजेनाइज करें। अगला, 10 मिनट के लिए कोमल आंदोलन के साथ बर्फ पर नमूनों सेते हैं या जब तक सभी नमूनों को संसाधित नहीं किया जाता है और मलबे को गोली देने के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 16, 000 गुना जी पर अपकेंद्रित्र होता है। फिर, सतह पर तैरनेवाला पुनर्प्राप्त करें, और अपकेंद्रित्र चरण दोहराएं।स्पष्ट साइटोसोलिक निकालने को सावधानीपूर्वक पुनर्प्राप्त करने के बाद, कुल अलगाव के लिए एक साफ 1.5 मिलीलीटर माइक्रो अपकेंद्रित्र ट्यूब में 200 माइक्रोलीटर विभाज्य स्थानांतरित करें। फिर, अपकेंद्रित्र ट्यूबों में 33.5% सुक्रोज परत के 4.5 मिलीलीटर डालें, और पी -1000 माइक्रोपिपेट के साथ सावधानीपूर्वक और धीरे-धीरे 12% परत के 4.5 मिलीलीटर जोड़ें। अगला, स्पष्ट साइटोसोलिक अर्क के अलावा तक ट्यूबों को बर्फ पर रखें।ट्यूब की साइड की दीवार पर सावधानीपूर्वक पाइपिंग करके सुक्रोज कुशन के शीर्ष पर स्पष्ट साइटोसोलिक अर्क का एक मिलीलीटर लोड करें। फिर, अल्ट्रा अपकेंद्रित्र ट्यूबों को पूर्व-ठंडा बाल्टी में स्थानांतरित करें, और चार डिग्री सेल्सियस पर दो घंटे के लिए 217, 874 जी पर अपकेंद्रित्र करें। शेष साइटोसोलिक अर्क और सुक्रोज कुशन को त्यागने के बाद, प्री-कूल्ड री-सस्पेंशन बफर के 200 माइक्रोलीटर के साथ पॉलीसोमल गोली को फिर से निलंबित करें।अगला, बर्फ पर 30 मिनट के लिए सेते हैं, और फिर आरएनए निष्कर्षण के साथ आगे बढ़ने के लिए पॉलीसोमल पुन: निलंबन को 1.5 मिलीलीटर प्री-कूल्ड ट्यूबों में स्थानांतरित करें। कमरे के तापमान पर पांच मिनट के लिए आरएनए अलगाव अभिकर्मक के 750 माइक्रोलीटर के साथ नमूनों को समरूप बनाने के बाद। फिर, ठंडे क्लोरोफॉर्म के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें, और ट्यूबों को 15 सेकंड के लिए सख्ती से हिलाएं।अगला, 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं। चरण पृथक्करण के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 12, 000 गुना जी पर अपकेंद्रित्र, और गुलाबी कार्बनिक चरण को परेशान किए बिना ऊपरी जलीय चरण के 500 माइक्रोलीटर को एक साफ ट्यूब में स्थानांतरित करें। फिर, ठंडे आइसोप्रोपेनॉल के 375 माइक्रोलीटर और आरएनए मुक्त ग्लाइकोजन के 0.5 माइक्रोलीटर जोड़ें।इसके बाद ऊपर-नीचे पाइप करके अच्छी तरह मिक्स कर लें। चार डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए मिश्रण सेते हैं, और 15 मिनट के लिए 12, 000 बार जी पर अपकेंद्रित्र। फिर, सतह पर तैरनेवाला त्यागें, और आरएनए अवक्षेप को एक मिलीलीटर ठंड, 75% इथेनॉल के साथ धो लें।संक्षिप्त भंवर द्वारा मिलाएं। अगला, चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए 7, 500 जी पर अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला त्यागें, और हवा आरएनए गोली सूखी।फिर, आरएनए मुक्त पानी के 50 माइक्रोलीटर में गोली को भंग करें, और पांच मिनट के लिए 65 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। अत्यधिक संवेदनशील केशिका वैद्युतकणसंचलन और, या 2% आरएनए मुक्त अगारोज जेल पर वैद्युतकणसंचलन के साथ आरएनए एकाग्रता और अखंडता का आकलन करें। नमूना मात्रा का अनुमान लगाने के बाद, तीन दाढ़ सोडियम एसीटेट, ठंड इथेनॉल के तीन संस्करणों, और आरएनए के 0.5 माइक्रोलीटर, मुक्त ग्लाइकोजन के 0.1 वॉल्यूम जोड़ें।इसके बाद इन्हें अच्छे से मिक्स कर लें। केशिका वैद्युतकणसंचलन कई कुल और पॉलीसोमल जुड़े आरएनए नमूना अंशों के लिए किया गया था, जिसने बिना किसी धब्बेदार उपस्थिति के तेज राइबोसोमल आरएनए बैंड का प्रदर्शन किया था। हालांकि, यह आरआईएन मानों में परिलक्षित नहीं होता है, क्योंकि वे 5.9 और 7.5 के बीच होते हैं, जो गैर-बरकरार नमूनों से मेल खाती है।बायोएनालाइज़र 18 एस और 25 एस चोटियों की पहचान करने में विफल रहा, जैसा कि इलेक्ट्रोफेरोग्राम में देखा गया था, दोनों कुल और पॉलीसोम जुड़े आरएनए नमूनों के लिए। नमूना क्षरण का कोई दृश्य संकेत नहीं था। हालांकि, तुलना के लिए लगभग पूरी तरह से अपमानित नमूने के परिणाम की कल्पना करने के लिए एक नमूने का विश्लेषण किया गया था।सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि पूरे प्रोटोकॉल के दौरान पॉलीसोम और आरएनए संरक्षण स्थितियों में काम करना है। विश्लेषण किए गए जीन अभिव्यक्ति के लिए कुल और बराबर आरएनए अंशों मानक पैटर्न को अनुक्रमित करने के बाद प्रतिलेखन और अनुवाद स्तर पर अंतर एक्सप्रेस जीन की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से कार्डिएक पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की व्युत्पत्ति

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित स्टेम कोशिकाओं से व्युत्पन्न पिरामिड न्यूरॉन्स से वृक्ष के समान spines के तीन आयामी मात्रा

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

A Quick and Efficient Method for the Purification of Endoderm Cells Generated from Human Embryonic Stem Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से उत्पन्न एण्डोडर्म कोशिकाओं की शुद्धि के लिए एक त्वरित और कारगर तरीका

The differentiation capabilities of pluripotent stem cells such as embryonic stem cells (ESCs) allow a potential therapeutic application for cell ...

Establishment of Proliferative Tetraploid Cells from Nontransformed Human Fibroblasts

Nontransformed मानव fibroblasts से Proliferative टेट्राप्लोइड प्रकोष्ठों की स्थापना

Polyploid (mostly tetraploid) cells are often observed in preneoplastic lesions of human tissues and their chromosomal instability has been considered to ...

Effective Isolation of Functional Islets from Neonatal Mouse Pancreas

नवजात माउस अग्न्याशय से कार्यात्मक आइलेट्स की प्रभावी अलगाव

Perfusion-based islet-isolation protocols from large mammalian pancreata are well established. Such protocols are readily conducted in many laboratories ...

A Standardized Approach for Multispecies Purification of Mammalian Male Germ Cells by Mechanical Tissue Dissociation and Flow Cytometry

मैकेनिकल टिशू डिसोसिएशन और फ्लो साइटोमेट्री द्वारा स्तनधारी नर मृदा कोशिकाओं की बहुपक्षीय शोधन के लिए एक मानकीकृत दृष्टिकोण

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) has been one of the methods of choice to isolate enriched populations of mammalian testicular germ cells. ...

Imaging Dpp Release from a Drosophila Wing Disc

Imaging Dpp Release from a Drosophila Wing Disc

एक Drosophila विंग डिस्क से इमेजिंग Dpp रिलीज

The transforming Growth Factor-beta (TGF-&#946;) superfamily is essential for early embryonic patterning and development of adult structures in ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) to Investigate Arabidopsis thaliana Root Development at a Cell Type-Specific Scale

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP to Investigate Arabidopsis thaliana Root Development at a Cell Type-Specific Scale

एक सेल प्रकार विशिष्ट पैमाने पर अरबीdopsis थैलियाना रूट विकास की जांच करने के लिए रिबोसोम एफ़िनिटी शुद्धि (ट्रैप) का अनुवाद

In this article, we give hands-on instructions to obtain translatome data from different Arabidopsis thaliana root cell types via the translating ribosome ...

Generation of Na&#239;ve Blastoderm Explants from Zebrafish Embryos

जेब्राफिश भ्रूण से भोले ब्लास्टोडर्म एक्सप्लांट की पीढ़ी

Due to their optical clarity and rapid development, zebrafish embryos are an excellent system for examining cell behaviors and developmental processes. ...

Isolation of Preadipocytes from Broiler Chick Embryos

ब्रॉयलर चिक भ्रूण से प्रीडिपोसाइट्स का अलगाव

Primary preadipocytes are a valuable experimental system for understanding the molecular pathways that control adipocyte differentiation and metabolism. ...