Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af naturvidenskabelige fonde i Zhejiang-provinsen (LQ22H020010).

Alle forsøgene blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for pleje og brug af forsøgsdyr ved Zhejiang University og blev godkendt af Animal Advisory Committee ved Zhejiang University.
1. Venstre forreste nedadgående koronararterieligering (LAD ligation) kirurgi
BEMÆRK: Otte uger gamle C57BL/6J-hanmus blev brugt som modeller. Hjerterne blev høstet 2 uger efter MI. Venstre anterior faldende koronararterieligeringsoperation blev udført s...

<ol>
	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews. Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Kain, V., Prabhu, S. D., Halade, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+revisited:+Inflammation+versus+resolution+of+inflammation+following+myocardial+infarction.">Inflammation revisited: Inflammation versus resolution of inflammation following myocardial infarction.</a> Basic Research in Cardiology. 109 (6), 444 (2014).</li><li>Tzahor, E., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coalition+to+heal-the+impact+of+the+cardiac+microenvironment.">A coalition to heal-the impact of the cardiac microenvironment.</a> Science. 377 (6610), 4443 (2022).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485 (7400), 599-604 (2012).</li><li>Jaitin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. Immunology. 18 (1), 35-45 (2018).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+the+temporal+diversity+and+dynamics+of+cardiac+immunity+after+myocardial+infarction.">Single-cell RNA sequencing reveals the temporal diversity and dynamics of cardiac immunity after myocardial infarction.</a> Small Methods. 6 (3), 2100752 (2022).</li><li>Tombor, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+sequencing+reveals+endothelial+plasticity+with+transient+mesenchymal+activation+after+myocardial+infarction.">Single cell sequencing reveals endothelial plasticity with transient mesenchymal activation after myocardial infarction.</a> Nature Communications. 12 (1), 681 (2021).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581 (2011).</li><li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry.">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 95 (2), 219-226 (2018).</li><li>Gladka, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

Denne artikel havde til formål at beskrive en protokol til isolering af enkelte ikke-kardiomyocytter fra musehjerter efter MI. Protokollen kan anvendes til at isolere forskellige typer celler i post-MI-mikromiljøet med høj kvalitet, herunder immunceller, endotelceller og fibroblaster. Tre væsentlige faktorer er afgørende for at opnå en cellesuspension af høj kvalitet til enkeltcellesekventering. Den første er indstillingen af den enzymatiske fordøjelse. Det er vigtigt at kontrollere fordøjelsestiden og volumen ...

Myokardieinfarkt (MI) er en af de mest almindelige hjerte-kar-sygdomme, og dens dødelighed stiger over hele verden1. MI er forårsaget af utilstrækkelig blodtilførsel til det omgivende myokardium, hvilket kan være et resultat af en koronararterieblokering, der opstår med aterosklerotisk plaquebrud. Selvom perkutan koronar intervention (PCI) har reduceret dødeligheden hos akutte MI-patienter, er den høje forekomst af hjertesvigt efter MI fortsat et problem2. Den vigtigste patofysiologi, der ligger til grund for hjertesvigt efter MI, er kroppens kompenserende reaktion på hjerteskader, hvilket indebærer at erstatte den døde hjertemuskel med ikke-kontraktile fibrotiske ar. Disse adaptive reaktioner er signifikant afhængige af lokal inflammation medieret af interaktionerne mellem flere celletyper og hjertevævsceller, og denne betændelse betragtes nu som et potentielt terapeutisk mål for at reducere fibrotisk ardannelse og dermed beskytte mod hjertesvigt efter MI 3,4. Interessant nok oplever mikromiljøet på infarktstedet en tidsafhængig overgang i de infiltrerende celletyper og funktioner på forskellige stadier af MI 1,5. Mange undersøgelser har vist, at ikke-kardiomyocytter (f.eks. Immunceller, fibroblaster og endotelceller) spiller centrale roller i post-MI-betændelse og vævsreparation 5,6. I de senere år er enkeltcellesekventering blevet brugt i vid udstrækning som et kraftfuldt værktøj til belysning af involvering og funktioner af ikke-kardiomyocytter i post-MI mikromiljøet 7,8. Dette giver indsigt i patofysiologien af post-MI skade og reparation og udviklingen af potentielle terapier mod post-MI hjertesvigt.
High-throughput RNA-sekventering (RNA-Seq) er en teknik, der bruges til at studere hele transkriptomer i detaljer ved hjælp af næste generations sekventering (NGS)7,8,9. For nylig har udviklingen af scRNA-Seq revolutioneret det biomedicinske forskningsfelt. Sammenlignet med konventionel bulksekventering analyserer scRNA-Seq genekspressionsprofiler og transkriptionel heterogenitet på enkeltcelleniveau 7,8. Denne teknik fremmer signifikant forskningen i den cellulære patofysiologi af MI 9,10 ved at identificere forskellige cirkulerende celletyper i mikromiljøet efter MI og afdække interaktionen mellem kardiomyocytter og ikke-kardiomyocytter. Disse resultater bidrager yderligere til at afdække nye terapeutiske mål for hjertesvigt efter MI. Generelt omfatter det scRNA-seq-baserede post-MI-eksperiment tre hovedafsnit: (1) etablering af post-MI dyremodel; 2) fremstilling af cellesuspensionen og (3) prøvesekventering og dataanalyse. Det er bemærkelsesværdigt, at forberedelse af cellesuspensionen er det mest kritiske trin i forberedelsen af scRNA-Seq-eksperimentet, fordi kvaliteten af cellesuspensionen bestemmer nøjagtigheden af resultaterne.
Denne protokol er designet til at ekstrahere en ikke-kardiomyocytcellesuspension fra post-MI hjertevævet; Det er vigtigt, at de specifikke detaljer for opretholdelse af cellelevedygtighed og opløsning er inkluderet. I mellemtiden kan det udstyr, der anvendes i denne protokol, såsom kirurgiske sæt til mus, gnaverventilatorer og centrifuger, findes i de fleste dyreforsøgscentre og biomedicinske laboratorier, og eksperimentomkostningerne ved denne protokol er således relativt lave. Hvis man betragter tidspunkter og infarktsteder som variabler, kan denne protokol desuden anvendes til at simulere en lang række kliniske scenarier, især for komplikationer efter MI.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

Myokardieinfarkt (MI) er en af de mest almindelige hjerte-kar-sygdomme med stigende dødelighed over hele verden. Ikke-kardiomyocytter tegner sig for mere end halvdelen af den samlede hjertecellepopulation, og de bidrager til adaptive kompensationer ved myokardieskade, herunder inflammatoriske reaktioner, vævsreparation og ardannelse. For at studere post-MI hjertemikromiljøet anvendes enkeltcelle RNA-sekventering (scRNA-seq) i vid udstrækning til at identificere forskellige hjertecelletyper og intercellulær kommunikation. Blandt procedurerne for forberedelse af scRNA-seq-prøver er forberedelse af cellesuspensionen et af de mest kritiske trin, fordi cellelevedygtigheden kan påvirke kvaliteten af scRNA-seq-resultaterne. Derfor designede vi en eksperimentel protokol til fremstilling af en ikke-kardiomyocytcellesuspension fra post-MI musehjerter med ekstra fokus på at forbedre cellelevedygtigheden ved at vælge milde fordøjelsesenzymer, kontrollere fordøjelsestiden og anvende fluorescensaktiveret cellesortering (FACS). Endelig isolerede vi CD45+ celler fra den ikke-kardiomyocytcellesuspension opnået gennem denne protokol, og derefter udførte vi scRNA-seq.

En enkeltcellesuspension med høj vitalitet blev opnået ved at implementere afsnit 2 i denne protokol. Imidlertid kunne cellefragmenter stadig observeres (figur 1A); derfor blev fluorescensaktiveret cellesortering (FACS) udført for yderligere at forbedre kvaliteten16. Efter FACS reduceres den gennemsnitlige cellestørrelse fra 9,6 μm til 9,1 μm ( tabel 1), hvilket tyder på, at andelen af cellefragmenter effektivt kan reduceres i cellesuspensionen...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

Her beskriver vi en protokol til isolering af en tilstrækkelig mængde enkelte ikke-kardiomyocytter med høj levedygtighed fra et musehjerte efter myokardieinfarkt (MI). Dette kan bruges til efterfølgende enkeltcellesekventering, flowcytometrianalyse og primær cellekultur.

Fremstilling af en ikke-kardiomyocytcellesuspension til enkeltcelle RNA-sekventering fra et post-myokardieinfarkt voksen musehjerte

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

Vores protokol sikrer både cellelevedygtighed og isolationseffektivitet ved enkeltcellesuspension til relativt lave omkostninger. De relativt lave omkostninger og krav til laboratorieudstyr er de vigtigste fordele ved denne teknik. Enkeltcellesekventering afslører heterogeniteten af ikke-kardiomyocytter i hjertepatofysiologi og giver også ideer til grundlæggende og kliniske undersøgelser for hjertesygdomme.Denne protokol kan anvendes i disse undersøgelser af det kardiovaskulære miljø efter MI, såsom involvering af immunceller. Til førstegangsforberedelser foreslår jeg, at der lægges ekstra vægt på prøvepepsin og fordøjelsestid. Når bufferne og opløsningerne er forberedt som beskrevet i manuskriptet, placeres en aflivet mus, der havde et myokardieinfarkt to uger tidligere, i liggende stilling på operationsbordet.Fastgør bagbenene ved hjælp af tape. For at skære hjertet skal du sprøjte kroppen med 70% ethanol. Lav et lodret snit gennem mavehuden og musklerne, mens du undgår leveren.Uden at punktere hjertet skal du forsigtigt åbne thoraxen og overdøve venstre ventrikel med forkølet PBS-opløsning, indtil perfusionsvæsken løber farveløs. Brug tang til forsigtigt at løfte hjertet og skære det overskydende væv, der er fastgjort til dets ydre med oftalmisk saks. Placer hjertet i en milliliter forkølet PBS i et 1,5 ml mikrocentrifugerør.Overfør hjertet til en brønd i en 24 brøndplade placeret på is. Pipet 150 mikroliter af hjertedissociationsbufferen i brønden og skær hjertet i en millimeter store stykker ved hjælp af en saks. Overfør det hakkede hjertevæv til et 15 ml centrifugerør indeholdende fem ml af vævsdissociationsbufferen.Anbring røret i en termostatisk frem- og tilbagegående ryster. Pipet affjedringen op og ned 10 gange hvert 20. minut. For at fjerne klumper og ufordøjet væv filtreres cellesuspensionen gennem en 70 mikrometer cellesil ved hjælp af 25 ml cellevaskebuffer.Skyl centrifugeslangen og cellesilen. Derefter filtreres cellesuspensionen gennem en 40 mikrometer cellesil for at fjerne yderligere celleklumper. Den filtrerede cellesuspension centrifugeres ved 300 x g i fem minutter ved fire grader Celsius.Celleprøven resuspenderes i fem volumener RBC-lysebuffer og inkuberes i fem minutter ved stuetemperatur. Tilføj nu fire volumener af cellevaskebufferen i cellesuspension og centrifuge som tidligere vist. Efter at supernatanten er kasseret, resuspenderes cellerne i 10 ml af cellevaskebufferen og centrifugeres igen.Efter centrifugeringen kasseres supernatanten, og pelletsen resuspenderes i en ml cellevaskebuffer. Tag 18 mikroliter af suspensionen i et andet centrifugerør og tilsæt to mikroliter acridinorange propidiumiodidfarvningsopløsning. Tilsæt 10 mikroliter af denne farvede opløsning til et tællekammerglas.Evaluer cellenumrene og levedygtigheden ved hjælp af en automatisk celletæller. Cellefragmenter blev observeret i enkeltcellet hjertesuspension. Fluorescensaktiveret cellesortering reducerede effektivt andelen af cellefragmenter og celleklumpning, hvilket resulterede i nedsat gennemsnitlig cellestørrelse.RNA-sekventering viste en åbenlys adskillelse af syv typer immunceller, som demonstreret ved den uovervågede klyngedannelse og reduceret T-distribueret stokastisk naboindlejring. Hver immuncelle viste et højt udtryk for klassiske markører. Hjertevæv skal skæres lille nok til at undgå ufuldstændig fordøjelse, hvilket fører til masser af celleklumper i cellesuspensionen.Den enkeltcellesuspension opnået ved denne protokol kan yderligere anvendes i flowanalyse af primær cellekultur. Denne protokol gavner undersøgelserne af mikromiljøet af myokardieinfektion, hvilket kan hjælpe forskere med at se ud over hjertevævet og overveje myokardieinfektion som et systematisk problem.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Myokardieinfarkt og Functional resultatvurdering i Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

En modificeret Metode til Heterotop Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

En Isoleret Working Heart System for Produktionsdyr og Modeller

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent ligering af venstre forreste nedadgående kranspulsåre i mus: En Model af Post-myokardieinfarkt Ombygning og hjertesvigt

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

Uvildige Deep Sekventering af RNA vira fra kliniske prøver

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

En effektiv Sieving metode til at isolere intakt Glomeruli fra voksen rotte nyre

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolering af atrial Myocytes fra voksne mus

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Kryoskade model til undersøgelse af myokardieinfarkt i mus

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

Etablering af en svin model af post-myokardieinfark hjertesvigt for stamcellebehandling

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Post-Myocardial Infarction Heart Failure in Closed-chest Coronary Occlusion/Reperfusion Model in G&#246;ttingen Minipigs and Landrace Pigs

Post-Myocardial Infarkt Hjertesvigt i Lukket bryst Koronar Okklusion / Reperfusion Model i Göttingen Minipigs og Landrace Svin

The development of heart failure is the most powerful predictor of long-term mortality in patients surviving acute myocardial infarction (MI). There is an ...