Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de Natural Science Funds van de provincie Zhejiang (LQ22H020010).

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren aan de Zhejiang University en werden goedgekeurd door de Animal Advisory Committee aan de Zhejiang University.
1. Linker anterieure dalende coronaire ligatie (LAD ligatie) operatie
OPMERKING: Acht weken oude mannelijke C57BL / 6J-muizen werden als modellen gebruikt. De harten werden geoogst 2 weken na MI. Linker anterieure dalend...

<ol>
	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews. Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Kain, V., Prabhu, S. D., Halade, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+revisited:+Inflammation+versus+resolution+of+inflammation+following+myocardial+infarction.">Inflammation revisited: Inflammation versus resolution of inflammation following myocardial infarction.</a> Basic Research in Cardiology. 109 (6), 444 (2014).</li><li>Tzahor, E., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coalition+to+heal-the+impact+of+the+cardiac+microenvironment.">A coalition to heal-the impact of the cardiac microenvironment.</a> Science. 377 (6610), 4443 (2022).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485 (7400), 599-604 (2012).</li><li>Jaitin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. Immunology. 18 (1), 35-45 (2018).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+the+temporal+diversity+and+dynamics+of+cardiac+immunity+after+myocardial+infarction.">Single-cell RNA sequencing reveals the temporal diversity and dynamics of cardiac immunity after myocardial infarction.</a> Small Methods. 6 (3), 2100752 (2022).</li><li>Tombor, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+sequencing+reveals+endothelial+plasticity+with+transient+mesenchymal+activation+after+myocardial+infarction.">Single cell sequencing reveals endothelial plasticity with transient mesenchymal activation after myocardial infarction.</a> Nature Communications. 12 (1), 681 (2021).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581 (2011).</li><li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry.">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 95 (2), 219-226 (2018).</li><li>Gladka, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

Dit artikel was bedoeld om een protocol te beschrijven om enkele niet-cardiomyocyten te isoleren van muizenharten post MI. Het protocol kan worden toegepast om verschillende soorten cellen in de post-MI-micro-omgeving met hoge kwaliteit te isoleren, waaronder immuuncellen, endotheelcellen en fibroblasten. Drie essentiële factoren zijn cruciaal voor het verkrijgen van een hoogwaardige celsuspensie voor single-cell sequencing. De eerste is de instelling van de enzymatische spijsvertering. Het is belangrijk om de tijd van ...

Myocardinfarct (MI) is een van de meest voorkomende hart- en vaatziekten en de mortaliteit ervan neemt over de hele wereld toe1. MI wordt veroorzaakt door een onvoldoende bloedtoevoer naar het omliggende myocardium, wat een gevolg kan zijn van een kransslagaderblokkade die optreedt bij atherosclerotische plaqueruptuur. Hoewel percutane coronaire interventie (PCI) de sterftecijfers van acute MI-patiënten heeft verminderd, blijft de hoge prevalentie van hartfalen na MI een probleem2. De belangrijkste pathofysiologie die ten grondslag ligt aan post-MI hartfalen is de compenserende reactie van het lichaam op hartletsels, waarbij de dode hartspier wordt vervangen door niet-contractiele fibrotische littekens. Deze adaptieve reacties zijn aanzienlijk afhankelijk van lokale ontsteking gemedieerd door de interacties tussen meerdere celtypen en hartweefselcellen, en deze ontsteking wordt nu beschouwd als een potentieel therapeutisch doelwit om fibrotische littekenvorming te verminderen en dus te beschermen tegen post-MI hartfalen 3,4. Interessant is dat de micro-omgeving op de infarctplaats een tijdsafhankelijke overgang ervaart in de infiltrerende celtypen en functies in verschillende stadia van MI 1,5. Veel studies hebben aangetoond dat niet-cardiomyocyten (bijv. Immuuncellen, fibroblasten en endotheelcellen) een centrale rol spelen bij post-MI-ontsteking en weefselherstel 5,6. In de afgelopen jaren is single-cell sequencing op grote schaal gebruikt als een krachtig hulpmiddel voor het ophelderen van de betrokkenheid en functies van niet-cardiomyocyten in de post-MI micro-omgeving 7,8. Dit geeft inzicht in de pathofysiologie van post-MI letsel en herstel en de ontwikkeling van mogelijke therapieën tegen post-MI hartfalen.
High-throughput RNA sequencing (RNA-Seq) is een techniek die wordt gebruikt om volledige transcriptomen in detail te bestuderen met behulp van next-generation sequencing (NGS)7,8,9. Onlangs heeft de ontwikkeling van scRNA-Seq een revolutie teweeggebracht in het biomedische onderzoeksveld. Vergeleken met conventionele bulksequencing analyseert scRNA-Seq genexpressieprofielen en transcriptionele heterogeniteit op het niveau van één cel 7,8. Deze techniek bevordert het onderzoek van de cellulaire pathofysiologie van MI 9,10 aanzienlijk door verschillende circulerende celtypen in de post-MI micro-omgeving te identificeren en de interactie tussen cardiomyocyten en niet-cardiomyocyten bloot te leggen. Deze bevindingen dragen verder bij aan het ontdekken van nieuwe therapeutische doelen voor post-MI hartfalen. Over het algemeen omvat het op scRNA-seq gebaseerde post-MI-experiment drie hoofdsecties: (1) de vaststelling van een post-MI-diermodel; 2) de bereiding van de celsuspensie; en (3) monstersequencing en gegevensanalyse. Opmerkelijk is dat het voorbereiden van de celsuspensie de meest kritieke stap is in de voorbereiding van het scRNA-Seq-experiment, omdat de kwaliteit van de celsuspensie de nauwkeurigheid van de resultaten bepaalt.
Dit protocol is ontworpen om een niet-cardiomyocytencelsuspensie uit het post-MI hartweefsel te extraheren; Veelbetekenend is dat de specifieke details voor het behoud van de levensvatbaarheid en resolutie van cellen zijn opgenomen. Ondertussen is de apparatuur die in dit protocol wordt gebruikt, zoals chirurgische kits voor muizen, knaagdierventilatoren en centrifuges, te vinden in de meeste dierexperimentele centra en biomedische laboratoria, en dus zijn de experimentkosten van dit protocol relatief laag. Bovendien, als tijdspunten en plaatsen van infarct als variabelen worden beschouwd, kan dit protocol worden toegepast om een breed scala aan klinische scenario's te simuleren, vooral voor de post-MI-complicaties.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

Myocardinfarct (MI) is een van de meest voorkomende hart- en vaatziekten, met een toenemende mortaliteit wereldwijd. Niet-cardiomyocyten zijn goed voor meer dan de helft van de totale hartcelpopulatie en ze dragen bij aan adaptieve compensaties bij myocardletsel, waaronder ontstekingsreacties, weefselherstel en littekenvorming. Om de post-MI cardiale micro-omgeving te bestuderen, wordt single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) veel gebruikt om verschillende hartceltypen en intercellulaire communicatie te identificeren. Onder de procedures van scRNA-seq monstervoorbereiding is het voorbereiden van de celsuspensie een van de meest kritieke stappen, omdat de levensvatbaarheid van de cel de kwaliteit van de scRNA-seq-resultaten kan beïnvloeden. Daarom hebben we een experimenteel protocol ontworpen voor het bereiden van een niet-cardiomyocytencelsuspensie van post-MI-muizenharten met een extra focus op het verbeteren van de levensvatbaarheid van de cel door milde spijsverteringsenzymen te kiezen, de verteringstijd te regelen en fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) toe te passen. Ten slotte isoleerden we CD45+ cellen uit de niet-cardiomyocytencelsuspensie verkregen via dit protocol, en vervolgens voerden we scRNA-seq uit.

Een eencellige suspensie met hoge vitaliteit werd verkregen door toepassing van sectie 2 van dit protocol. Er konden echter nog steeds celfragmenten worden waargenomen (figuur 1A); daarom werd fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) uitgevoerd om de kwaliteit verder te verbeteren16. Na FACS neemt de gemiddelde celgrootte af van 9,6 μm tot 9,1 μm ( tabel 1), wat suggereert dat het aandeel celfragmenten in de celsuspensie effectief kan worden v...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

Hier beschrijven we een protocol om een voldoende hoeveelheid enkele niet-cardiomyocyten met hoge levensvatbaarheid te isoleren uit een post-myocardinfarct (MI) muizenhart. Dit kan worden gebruikt voor daaropvolgende single-cell sequencing, flowcytometrie-analyse en primaire celcultuur.

Voorbereiding van een niet-cardiomyocytencelsuspensie voor single-cell RNA-sequencing van een post-myocardinfarct volwassen muizenhart

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

Ons protocol garandeert zowel de levensvatbaarheid van de cel als de isolatie-efficiëntie van eencellige suspensie tegen relatief lage kosten. De relatief lage kosten en eisen aan laboratoriumapparatuur zijn de belangrijkste voordelen van deze techniek. Single cell sequencing onthult de heterogeniteit van niet-cardiomyocyten in cardiale pathofysiologie en biedt ook ideeën voor basis- en klinische studies voor hartaandoeningen.Dit protocol kan worden gebruikt in deze studies naar de post-MI cardiovasculaire omgeving, zoals de betrokkenheid van immuuncellen. Voor de eerste keer voorbereidingen, stel ik voor dat extra aandacht wordt besteed aan het monster pepsine en de verteringstijd. Zodra de buffers en oplossingen zijn voorbereid zoals beschreven in het manuscript, plaatst u een geëuthanaseerde muis die twee weken eerder een hartinfarct had gehad in rugligging op de operatietafel.Bevestig de achterpoten met plakband. Om het hart te verwijderen, spuit je het lichaam met 70% ethanol. Maak een verticale incisie door de buikhuid en spieren terwijl je de lever vermijdt.Zonder het hart te doorboren, opent u voorzichtig de thorax en overgiet u de linkerkamer met een voorkoele PBS-oplossing totdat de perfusievloeistof kleurloos is. Til met een tang het hart voorzichtig op en knip de overtollige weefsels weg die aan de buitenkant zijn bevestigd met een oogheelkundige schaar. Plaats het hart in een milliliter voorgekoelde PBS in een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter.Breng het hart over in een put van een 24-putplaat die op ijs is geplaatst. Pipetteer 150 microliter van de cardiale dissociatiebuffer in de put en snijd het hart in stukjes van een millimeter met een schaar. Breng het gehakte hartweefsel over in een centrifugebuis van 15 milliliter met vijf milliliter van de weefseldissociatiebuffer.Plaats de buis in een thermostatische heen en weer bewegende schudder. Pipetteer de suspensie 10 keer per 20 minuten op en neer. Om klonten en onverteerd weefsel te verwijderen, filtert u de celsuspensie door een 70 micrometer celzeef met behulp van 25 milliliter celwasbuffer.Spoel de centrifugebuis en de celzeef af. Filter vervolgens de celsuspensie door een celzeef van 40 micrometer om verdere celklonten te verwijderen. Centrifugeer de gefilterde celsuspensie op 300 x g gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius.Resuspendeer het celmonster in vijf volumes RBC-lysisbuffer en incubeer gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Voeg nu vier volumes van de celwasbuffer toe in celsuspensie en centrifuge zoals eerder gedemonstreerd. Nadat u het supernatant hebt weggegooid, resuspendeert u de cellen in 10 milliliter van de celwasbuffer en centrifugeert u opnieuw.Aan het einde van de centrifugatie gooit u het supernatant weg en suspensieert u de pellet in één milliliter celwasbuffer. Neem 18 microliter van de suspensie in een andere centrifugebuis en voeg twee microliter acridine oranje propidiumjodidekleuringsoplossing toe. Voeg 10 microliter van deze gekleurde oplossing toe aan een telkamerschuif.Evalueer de celaantallen en levensvatbaarheid met behulp van een automatische celteller. Celfragmenten werden waargenomen in de eencellige hartsuspensie. Fluorescentie geactiveerde celsortering verminderde effectief het aandeel van de celfragmenten en celklontering, wat resulteerde in een verminderde gemiddelde celgrootte.RNA-sequencing bleek een voor de hand liggende scheiding van zeven soorten immuuncellen, zoals aangetoond door de onbewaakte clustering en verminderde T-gedistribueerde stochastische bureninbedding. Elke immuuncel vertoonde een hoge expressie van klassieke markers. Hartweefsel moet klein genoeg worden gesneden om onvolledige spijsvertering te voorkomen, wat leidt tot veel celklontjes in de celsuspensie.De eencellige suspensie die door dit protocol wordt verkregen, kan verder worden toegepast in de stroomanalyse van de primaire celcultuur. Dit protocol komt ten goede aan de studies over de micro-omgeving van myocardiale infectie, wat onderzoekers kan helpen verder te kijken dan de hartweefsels en myocardiale infectie als een systematisch probleem te beschouwen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Myocardinfarct en Functional Outcome Assessment in Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Een gewijzigde methode voor Heterotope Mouse Hart transplantatie

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Een GeÃ ¯ soleerde Werken Hart voor grote Animal Models

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanente Ligatie van de linker anterior Aflopend Kransslagader in Muizen: Een model van Post-myocardinfarct Remodelling en hartfalen

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

Onpartijdige Deep Sequencing van RNA-virussen uit klinische monsters

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Een efficiënte zeven methode te isoleren Intact Glomeruli van de nier van volwassen ratten

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolatie van atriale Myocyten van volwassen muizen

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Een Cryoblessure model om myocardinfarct in de muis te bestuderen

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

Vaststelling van een varkensmodel van post-myocard hartinfarct voor stamcelbehandeling

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Post-Myocardial Infarction Heart Failure in Closed-chest Coronary Occlusion/Reperfusion Model in G&#246;ttingen Minipigs and Landrace Pigs

Post-Myocardinfarct Hartfalen in gesloten borst Coronaire Occlusie/Reperfusie Model in Göttingen Minipigs en Landrace Varkens

The development of heart failure is the most powerful predictor of long-term mortality in patients surviving acute myocardial infarction (MI). There is an ...