Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
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Diese Arbeit wurde vom Natural Science Funds der Provinz Zhejiang unterstützt (LQ22H020010).

Alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren an der Zhejiang University durchgeführt und vom Animal Advisory Committee der Zhejiang University genehmigt.
1. Ligatur der Koronararterien links anterior absteigend (LAD-Ligatur)
HINWEIS: Acht Wochen alte männliche C57BL/6J-Mäuse wurden als Modelle verwendet. Die Herzentnahme erfolgte 2 Wochen nach dem Myokardinfarkt. Die linksanterior...

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	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

Ziel dieses Artikels war es, ein Protokoll zur Isolierung einzelner Nicht-Kardiomyozyten aus Mäuseherzen nach Myokardinfarkt zu beschreiben. Das Protokoll kann angewendet werden, um verschiedene Zelltypen in der Post-MI-Mikroumgebung mit hoher Qualität zu isolieren, darunter Immunzellen, Endothelzellen und Fibroblasten. Drei wesentliche Faktoren sind entscheidend, um eine qualitativ hochwertige Zellsuspension für die Einzelzellsequenzierung zu erhalten. Die erste ist die Einstellung der enzymatischen Verdauung. Es ist...

Der Myokardinfarkt (MI) ist eine der häufigsten Herz-Kreislauf-Erkrankungen, deren Sterblichkeit weltweit zunimmt1. Der Myokardinfarkt wird durch eine unzureichende Durchblutung des umgebenden Myokards verursacht, was auf einen Verschluss der Koronararterien zurückzuführen sein kann, der bei einer atherosklerotischen Plaqueruptur auftritt. Obwohl die perkutane Koronarintervention (PCI) die Sterblichkeitsraten von Patienten mit akutem Myokardinfarkt gesenkt hat, bleibt die hohe Prävalenz der Herzinsuffizienz nach Myokardinfarkt ein Problem2. Die wichtigste Pathophysiologie, die der Herzinsuffizienz nach einem Herzinfarkt zugrunde liegt, ist die kompensatorische Reaktion des Körpers auf Herzverletzungen, bei der der abgestorbene Herzmuskel durch nicht-kontraktile fibrotische Narben ersetzt wird. Diese adaptiven Reaktionen beruhen maßgeblich auf lokalen Entzündungen, die durch die Interaktionen zwischen mehreren Zelltypen und Herzgewebezellen vermittelt werden, und diese Entzündung wird nun als potenzielles therapeutisches Ziel angesehen, um die fibrotische Narbenbildung zu reduzieren und somit vor einer Herzinsuffizienz nach einem Myokardinfarkt zu schützen 3,4. Interessanterweise erfährt die Mikroumgebung an der Infarktstelle einen zeitabhängigen Übergang der infiltrierenden Zelltypen und -funktionen in verschiedenen Stadien von MI 1,5. Viele Studien haben gezeigt, dass Nicht-Kardiomyozyten (z. B. Immunzellen, Fibroblasten und Endothelzellen) eine zentrale Rolle bei der Entzündung nach einem Myokardinfarkt und der Gewebereparatur spielen 5,6. In den letzten Jahren wurde die Einzelzellsequenzierung in großem Umfang als leistungsfähiges Werkzeug zur Aufklärung der Beteiligung und Funktion von Nicht-Kardiomyozyten in der Mikroumgebung nach einem Myokardinfarkteingesetzt 7,8. Dies gibt Einblicke in die Pathophysiologie der Post-MI-Verletzung und -Reparatur sowie in die Entwicklung potenzieller Therapien gegen die Post-MI-Herzinsuffizienz.
Die Hochdurchsatz-RNA-Sequenzierung (RNA-Seq) ist eine Technik, mit der ganze Transkriptome mithilfe von Next-Generation-Sequencing (NGS) sehr detailliert untersucht werden können7,8,9. In jüngster Zeit hat die Entwicklung von scRNA-Seq das biomedizinische Forschungsfeld revolutioniert. Im Vergleich zur konventionellen Massensequenzierung analysiert scRNA-Seq Genexpressionsprofile und transkriptionelle Heterogenität auf Einzelzellebene 7,8. Diese Technik fördert maßgeblich die Erforschung der zellulären Pathophysiologie von MI 9,10, indem sie verschiedene zirkulierende Zelltypen in der Post-MI-Mikroumgebung identifiziert und die Interaktion zwischen Kardiomyozyten und Nicht-Kardiomyozyten aufdeckt. Diese Ergebnisse tragen außerdem dazu bei, neue therapeutische Angriffspunkte für die Herzinsuffizienz nach Myokardinfarkt zu finden. Im Allgemeinen umfasst das scRNA-seq-basierte Post-MI-Experiment drei Hauptabschnitte: (1) die Etablierung eines Post-MI-Tiermodells; (2) die Herstellung der Zellsuspension; und (3) Probensequenzierung und Datenanalyse. Auffällig ist, dass die Herstellung der Zellsuspension der kritischste Schritt bei der Vorbereitung des scRNA-Seq-Experiments ist, da die Qualität der Zellsuspension die Genauigkeit der Ergebnisse bestimmt.
Dieses Protokoll wurde entwickelt, um eine Nicht-Kardiomyozyten-Zellsuspension aus dem Herzgewebe nach einem Myokardinfarkt zu extrahieren. Bezeichnenderweise sind die spezifischen Details zur Aufrechterhaltung der Lebensfähigkeit und Auflösung der Zellen enthalten. Inzwischen sind die in diesem Protokoll verwendeten Geräte, wie z. B. chirurgische Kits für Mäuse, Beatmungsgeräte für Nagetiere und Zentrifugen, in den meisten Tierversuchszentren und biomedizinischen Labors zu finden, und daher sind die Versuchskosten für dieses Protokoll relativ gering. Darüber hinaus kann dieses Protokoll unter Berücksichtigung von Zeitpunkten und Infarktorten als Variablen angewendet werden, um eine Vielzahl von klinischen Szenarien zu simulieren, insbesondere für die Komplikationen nach dem Myokardinfarkt.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

Der Myokardinfarkt (MI) ist eine der häufigsten Herz-Kreislauf-Erkrankungen mit weltweit steigender Sterblichkeit. Nicht-Kardiomyozyten machen mehr als die Hälfte der gesamten Herzzellpopulation aus und tragen zur adaptiven Kompensation von Myokardverletzungen bei, einschließlich Entzündungsreaktionen, Gewebereparatur und Narbenbildung. Um die kardiale Mikroumgebung nach einem MI zu untersuchen, wird die Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq) häufig verwendet, um verschiedene Herzzelltypen und interzelluläre Kommunikation zu identifizieren. Unter den Verfahren der scRNA-seq-Probenvorbereitung ist die Herstellung der Zellsuspension einer der kritischsten Schritte, da die Zellviabilität die Qualität der scRNA-seq-Ergebnisse beeinflussen kann. Daher haben wir ein experimentelles Protokoll zur Herstellung einer nicht-kardiomyozytenartigen Zellsuspension aus Mäuseherzen nach einem Myokardinfarkt entwickelt, wobei der Schwerpunkt auf der Verbesserung der Zelllebensfähigkeit durch die Auswahl milder Verdauungsenzyme, die Kontrolle der Verdauungszeit und die Anwendung der fluoreszenzaktivierten Zellsortierung (FACS) liegt. Schließlich isolierten wir CD45+ -Zellen aus der durch dieses Protokoll erhaltenen Nicht-Kardiomyozyten-Zellsuspension und führten dann scRNA-seq durch.

Eine einzellige Suspension mit hoher Vitalität wurde durch die Umsetzung von Abschnitt 2 dieses Protokolls erhalten. Es konnten jedoch noch Zellfragmente beobachtet werden (Abbildung 1A); Daher wurde eine fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS) durchgeführt, um die Qualität weiter zu verbessern16. Nach FACS verringert sich die durchschnittliche Zellgröße von 9,6 μm auf 9,1 μm (Tabelle 1), was darauf hindeutet, dass der Anteil der Zellfragme...

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Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

In dieser Arbeit beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung einer ausreichenden Anzahl einzelner nicht-kardiomyozyten mit hoher Viabilität aus einem Mausherzen nach einem Myokardinfarkt (MI). Dies kann für die anschließende Einzelzellsequenzierung, Durchflusszytometrie-Analyse und primäre Zellkultur verwendet werden.

Herstellung einer Nicht-Kardiomyozyten-Zellsuspension für die Einzelzell-RNA-Sequenzierung aus einem erwachsenen Mausherzen nach Myokardinfarkt

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

Unser Protokoll gewährleistet sowohl die Zellviabilität als auch die Isolationseffizienz von Einzelzellsuspensionen zu relativ geringen Kosten. Die relativ geringen Kosten und Anforderungen an die Laborausstattung sind die Hauptvorteile dieser Technik. Die Einzelzellsequenzierung zeigt die Heterogenität von Nicht-Kardiomyozyten in der kardialen Pathophysiologie auf und liefert auch Ideen für grundlegende und klinische Studien zu Herzerkrankungen.Dieses Protokoll kann in diesen Studien über das kardiovaskuläre Milieu nach einem Myokardinfarkt, wie z. B. die Beteiligung von Immunzellen, verwendet werden. Bei der erstmaligen Zubereitung schlage ich vor, besonders auf das Pepsin der Probe und die Verdauungszeit zu achten. Sobald die Puffer und Lösungen wie im Manuskript beschrieben vorbereitet sind, legen Sie eine euthanasierte Maus, die zwei Wochen zuvor einen Myokardinfarkt erlitten hatte, in Rückenlage auf den Operationstisch.Fixieren Sie die Hinterbeine mit Klebeband. Um das Herz zu entfernen, besprühen Sie den Körper mit 70%igem Ethanol. Machen Sie einen vertikalen Schnitt durch die Bauchhaut und die Muskeln, während Sie die Leber aussparen.Ohne das Herz zu punktieren, öffnen Sie vorsichtig den Brustkorb und füllen Sie die linke Herzkammer mit vorgekühlter PBS-Lösung, bis die Perfusionsflüssigkeit farblos läuft. Heben Sie das Herz mit einer Pinzette sanft an und schneiden Sie das überschüssige Gewebe, das an seiner Außenseite befestigt ist, mit einer Augenschere ab. Legen Sie das Herz in einen Milliliter vorgekühltes PBS in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen.Übertragen Sie das Herz in eine Vertiefung einer 24-Well-Platte, die auf Eis gestellt wird. Pipettieren Sie 150 Mikroliter des kardialen Dissoziationspuffers in die Vertiefung und schneiden Sie das Herz mit einer Schere in einen Millimeter große Stücke. Das gehackte Herzgewebe wird in ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen überführt, das fünf Milliliter des Gewebedissoziationspuffers enthält.Legen Sie das Röhrchen in einen thermostatischen Schüttler. Pipettieren Sie die Aufhängung alle 20 Minuten 10 Mal auf und ab. Um Klumpen und unverdautes Gewebe zu entfernen, filtern Sie die Zellsuspension durch ein 70-Mikrometer-Zellsieb mit 25 Millilitern Zellwaschpuffer.Spülen Sie das Zentrifugenröhrchen und das Zellensieb aus. Als nächstes filtrieren Sie die Zellsuspension durch ein 40-Mikrometer-Zellsieb, um weitere Zellklumpen zu entfernen. Die filtrierte Zellsuspension wird bei 300 x g für fünf Minuten bei vier Grad Celsius zentrifugiert.Resuspendieren Sie die Zellprobe in fünf Volumina Erythrozytenlysepuffer und inkubieren Sie sie fünf Minuten lang bei Raumtemperatur. Fügen Sie nun vier Volumina des Zellwaschpuffers in Zellsuspension hinzu und zentrifugieren Sie, wie zuvor gezeigt. Nach dem Entsorgen des Überstandes werden die Zellen in 10 Milliliter des Zellwaschpuffers resuspendiert und erneut zentrifugiert.Am Ende der Zentrifugation wird der Überstand verworfen und das Pellet in einem Milliliter Zellwaschpuffer resuspendiert. Nehmen Sie 18 Mikroliter der Suspension in ein anderes Zentrifugenröhrchen und fügen Sie zwei Mikroliter Acridin-Orangen-Propidiumiodid-Färbelösung hinzu. Geben Sie 10 Mikroliter dieser gefärbten Lösung in einen Objektträger der Zählkammer.Bewerten Sie die Zellzahlen und die Viabilität mit einem automatischen Zellzähler. Zellfragmente wurden in der einzelligen kardialen Suspension beobachtet. Die fluoreszenzaktivierte Zellsortierung reduzierte effektiv den Anteil der Zellfragmente und die Zellverklumpung, was zu einer verringerten durchschnittlichen Zellgröße führte.Die RNA-Sequenzierung bewies eine offensichtliche Trennung von sieben Arten von Immunzellen, was durch das unüberwachte Clustering und die reduzierte T-verteilte stochastische Einbettung von Nachbarn gezeigt wurde. Jede Immunzelle zeigte eine hohe Expression klassischer Marker. Das Herzgewebe muss klein genug geschnitten werden, um eine unvollständige Verdauung zu vermeiden, die zu vielen Zellklumpen in der Zellsuspension führt.Die durch dieses Protokoll erhaltene Einzelzellsuspension kann in der Flussanalyse von primären Zellkulturen weiter angewendet werden. Dieses Protokoll kommt den Studien über die Mikroumgebung der Myokardinfektion zugute, die den Forschern helfen können, über das Herzgewebe hinauszublicken und die Myokardinfektion als systematisches Problem zu betrachten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Myokardinfarkt und Functional Outcome Assessment in Schweine

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

Forschung

Medizin

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Eine modifizierte Methode zur Heterotope Maus Herz-Transplantation

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Eine isolierte Arbeits Herz-System für Großtiermodelle

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent Ligation des linken vorderen absteigenden Koronararterie bei Mäusen: Ein Modell der Post-Myokardinfarkt Umbau und Herzinsuffizienz

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

Unvoreingenommene Tiefe Sequenzierung von RNA-Viren aus klinischen Proben

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Eine effiziente Methode der Absiebung, intakten Glomeruli von Erwachsenen Ratte Niere zu isolieren

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolierung von Atrial Myozyten von erwachsenen Mäusen

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A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

Ein Cryoinjury-Modell zur Untersuchung des Myokardinfarkts in der Maus

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Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

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