Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

이 작업은 절강성 자연 과학 기금(LQ22H020010)의 지원을 받았습니다.

모든 실험은 절강 대학의 실험 동물 관리 및 사용 지침에 따라 수행되었으며 절강 대학의 동물 자문위원회의 승인을 받았습니다.
1. 좌전하행 관상동맥결찰술(LAD 결찰술) 수술
참고: 8주령의 수컷 C57BL/6J 마우스를 모델로 사용했습니다. MI 2주 후에 심장을 적출하였다. 좌전하행 관상동맥 결찰술은 앞서 기술하고 입증한 바와 같이 수행하였다<sup ...

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	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews. Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Kain, V., Prabhu, S. D., Halade, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+revisited:+Inflammation+versus+resolution+of+inflammation+following+myocardial+infarction.">Inflammation revisited: Inflammation versus resolution of inflammation following myocardial infarction.</a> Basic Research in Cardiology. 109 (6), 444 (2014).</li><li>Tzahor, E., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coalition+to+heal-the+impact+of+the+cardiac+microenvironment.">A coalition to heal-the impact of the cardiac microenvironment.</a> Science. 377 (6610), 4443 (2022).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485 (7400), 599-604 (2012).</li><li>Jaitin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. Immunology. 18 (1), 35-45 (2018).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+the+temporal+diversity+and+dynamics+of+cardiac+immunity+after+myocardial+infarction.">Single-cell RNA sequencing reveals the temporal diversity and dynamics of cardiac immunity after myocardial infarction.</a> Small Methods. 6 (3), 2100752 (2022).</li><li>Tombor, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+sequencing+reveals+endothelial+plasticity+with+transient+mesenchymal+activation+after+myocardial+infarction.">Single cell sequencing reveals endothelial plasticity with transient mesenchymal activation after myocardial infarction.</a> Nature Communications. 12 (1), 681 (2021).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581 (2011).</li><li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry.">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 95 (2), 219-226 (2018).</li><li>Gladka, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

이 기사는 MI 후 마우스 심장에서 단일 비심근 세포를 분리하는 프로토콜을 설명하는 것을 목표로 했습니다. 이 프로토콜은 면역 세포, 내피 세포 및 섬유아세포를 포함하여 MI 후 미세 환경에서 다양한 유형의 세포를 고품질로 분리하는 데 적용할 수 있습니다. 세 가지 필수 요소는 단일 세포 시퀀싱을 위한 고품질 세포 현탁액을 얻는 데 중요합니다. 첫 번째는 효소 소화의 설정입니다. 세포 생존?...

심근경색증(Myocardial infarction, MI)은 가장 흔한 심혈관 질환 중 하나이며, 전 세계적으로 그 사망률이 증가하고 있다1. MI는 주변 심근으로의 혈액 공급이 불충분하여 발생하며, 이는 죽상동맥경화반 파열과 함께 발생하는 관상동맥 막힘의 결과일 수 있습니다. 경피적 관상동맥 중재술(PCI)이 급성 심근경색 환자의 사망률을 감소시켰지만, 심근경색 후 심부전의 높은 유병률은 여전히 문제로 남아 있다2. MI 후 심부전의 기초가 되는 주요 병태생리학은 죽은 심장 근육을 비수축성 섬유성 흉터로 대체하는 것을 포함하는 심장 손상에 대한 신체의 보상 반응입니다. 이러한 적응 반응은 여러 세포 유형과 심장 조직 세포 사이의 상호 작용에 의해 매개되는 국소 염증에 크게 의존하며, 이 염증은 이제 섬유성 흉터 형성을 감소시켜 MI 후 심부전을 예방하기 위한 잠재적인 치료 표적으로 간주됩니다 3,4. 흥미롭게도, 경색 부위의 미세환경은 MI 1,5의 상이한 단계에서 침윤 세포 유형 및 기능에서 시간 의존적 전이를 경험한다. 많은 연구에서 비심근세포(예: 면역 세포, 섬유아세포, 내피 세포)가 MI 후 염증 및 조직 복구에 중심적인 역할을 하는 것으로 나타났습니다 5,6. 최근 몇 년 동안, 단세포 시퀀싱은 MI 이후 미세 환경에서 비심근세포의 침범 및 기능을 설명하기 위한 강력한 도구로서 널리 사용되어 왔다 7,8. 이것은 MI 후 손상 및 복구의 병태생리학에 대한 통찰력과 MI 후 심부전에 대한 잠재적 치료법 개발에 대한 통찰력을 제공합니다.
고처리량 RNA 염기서열분석(RNA-Sequencing)은 차세대 염기서열분석(NGS)7,8,9을 사용하여 전체 전사체를 매우 자세히 연구하는 데 사용되는 기술입니다. 최근 scRNA-Seq의 개발은 생물의학 연구 분야에 혁명을 일으켰습니다. 기존의 대량 염기서열 분석과 비교하여 scRNA-Seq는 단일 세포 수준 7,8에서 유전자 발현 프로필과 전사 이질성을 분석합니다. 이 기술은 MI 후 미세 환경에서 다양한 순환 세포 유형을 식별하고 심근 세포와 비심근 세포 간의 상호 작용을 밝혀냄으로써 MI 9,10의 세포 병태생리학 연구를 크게 촉진합니다. 이러한 발견은 MI 후 심부전에 대한 새로운 치료 표적을 밝히는 데 더욱 기여합니다. 일반적으로, scRNA-seq-기반 MI 후 실험은 3개의 주요 섹션을 포함한다: (1) MI 후 동물 모델의 확립; (2) 세포 현탁액의 제조; (3) 샘플 시퀀싱 및 데이터 분석. 주목할 만한 것은, 세포 현탁액의 품질이 결과의 정확성을 결정하기 때문에 scRNA-Seq 실험의 준비에서 세포 현탁액을 준비하는 것이 가장 중요한 단계라는 것입니다.
이 프로토콜은 MI 후 심장 조직으로부터 비심근세포 세포 현탁액을 추출하도록 설계되었습니다. 중요한 것은 세포 생존율 및 분해능을 유지하기 위한 구체적인 세부 사항이 포함되어 있다는 것입니다. 한편, 생쥐용 수술 키트, 설치류 인공호흡기, 원심분리기 등 이 프로토콜에 사용되는 장비는 대부분의 동물 실험 센터 및 생물 의학 실험실에서 찾을 수 있으므로 이 프로토콜의 실험 비용은 상대적으로 저렴합니다. 또한, 경색의 시점과 부위를 변수로 고려하는 경우 이 프로토콜을 적용하여 광범위한 임상 시나리오, 특히 MI 후 합병증을 시뮬레이션할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

심근경색증(MI)은 전 세계적으로 사망률이 증가하고 있는 가장 흔한 심혈관 질환 중 하나입니다. 비심근세포는 전체 심장 세포 집단의 절반 이상을 차지하며 염증 반응, 조직 복구 및 흉터 형성을 포함하여 심근 손상 시 적응 보상에 기여합니다. MI 후 심장 미세 환경을 연구하기 위해 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNA-seq)은 다양한 심장 세포 유형과 세포 간 통신을 식별하는 데 널리 사용됩니다. scRNA-seq 샘플 준비 절차 중 세포 현탁액을 준비하는 것은 세포 생존율이 scRNA-seq 결과의 품질에 영향을 미칠 수 있기 때문에 가장 중요한 단계 중 하나입니다. 따라서 우리는 약한 소화 효소를 선택하고, 소화 시간을 제어하고, 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 적용하여 세포 생존율을 향상시키는 데 추가로 중점을 두고 MI 후 마우스 심장에서 비심근세포 세포 현탁액을 준비하기 위한 실험 프로토콜을 설계했습니다. 마지막으로, 우리는 이 프로토콜을 통해 얻은 비심근세포 세포 현탁액에서 CD45+ 세포를 분리한 다음 scRNA-seq를 수행했습니다.

높은 활력을 갖는 단일 세포 현탁액은 이 프로토콜의 섹션 2를 구현하여 얻어졌습니다. 그러나 세포 단편은 여전히 관찰 될 수 있습니다 (그림 1A). 따라서, 품질16을 더욱 향상시키기 위해 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 수행하였다. FACS 후, 평균 세포 크기는 9.6 μm에서 9.1 μm로 감소하며 (표 1), 이는 FACS에 의해 세포 현탁액에서 세포 단편의 비율?...

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Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

여기에서 우리는 심근 경색 후(MI) 마우스 심장에서 높은 생존력을 가진 충분한 양의 단일 비심근 세포를 분리하는 프로토콜을 설명합니다. 이는 후속 단일 세포 시퀀싱, 유세포 분석 및 일차 세포 배양에 사용할 수 있습니다.

심근경색 후 성인 마우스 심장에서 단일 세포 RNA 시퀀싱을 위한 비심근세포 세포 현탁액의 제조

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

당사의 프로토콜은 상대적으로 저렴한 비용으로 단일 세포 현탁액의 세포 생존력과 분리 효율성을 모두 보장합니다. 실험실 장비에 대한 상대적으로 저렴한 비용과 요구 사항이이 기술의 주요 장점입니다. 단일 세포 시퀀싱은 심장 병태생리학에서 비심근 세포의 이질성을 밝히고 심장 질환에 대한 기본 및 임상 연구에 대한 아이디어를 제공합니다.이 프로토콜은 면역 세포의 관여와 같은 MI 후 심혈관 환경에 대한 이 연구에서 사용될 수 있습니다. 처음 준비할 때는 샘플 펩신과 소화 시간에 각별한 주의를 기울여야 한다고 제안합니다. 원고에 설명된 대로 완충액과 용액이 준비되면 2주 전에 심근경색이 있었던 안락사된 마우스를 수술대 위에 앙와위 자세로 놓습니다.접착 테이프를 사용하여 뒷다리를 고정하십시오. 심장을 절제하려면 몸에 70 % 에탄올을 뿌리십시오. 간을 피하면서 복부 피부와 근육을 통해 수직 절개를하십시오.심장에 구멍을 뚫지 않고 흉부를 조심스럽게 열고 관류액이 무색이 될 때까지 미리 냉각 된 PBS 용액으로 좌심실을 풍부하게하십시오. 집게를 사용하여 심장을 부드럽게 들어 올리고 안과 용 가위로 외부에 부착 된 과도한 조직을 잘라냅니다. 1.5 밀리리터 마이크로 원심 분리기 튜브에 1 밀리리터의 사전 냉각 된 PBS에 심장을 놓습니다.얼음 위에 놓인 24 웰 플레이트의 우물에 심장을 옮깁니다. 150 마이크로리터의 심장 해리 완충액을 웰에 피펫하고, 가위를 사용하여 심장을 1 밀리미터 크기의 조각으로 절단하였다. 다진 심장 조직을 5 밀리리터의 조직 해리 완충액이 들어있는 15 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮깁니다.자동 온도 조절 왕복 셰이커에 튜브를 놓습니다. 서스펜션을 20분마다 10회 위아래로 피펫합니다. 덩어리와 소화되지 않은 조직을 제거하려면 25 밀리리터의 세포 세척 완충액을 사용하여 70 마이크로 미터 세포 여과기를 통해 세포 현탁액을 여과합니다.원심분리기 튜브와 셀 스트레이너를 헹굽니다. 다음으로, 40 마이크로미터 세포 스트레이너를 통해 세포 현탁액을 여과하여 추가 세포 덩어리를 제거합니다. 여과된 세포 현탁액을 섭씨 4도에서 5분 동안 300 x g에서 원심분리합니다.세포 샘플을 5 부피의 RBC 용해 완충액에 재현탁하고 실온에서 5 분 동안 배양합니다. 이제 이전에 시연된 대로 세포 현탁액과 원심분리기에 4가지 부피의 세포 세척 완충액을 추가합니다. 상청액을 버린 후, 세포를 10 밀리리터의 세포 세척 완충액에 재현탁시키고 다시 한번 원심분리한다.원심분리가 끝나면 상층액을 버리고 펠릿을 1밀리리터의 세포 세척 완충액에 재현탁합니다. 다른 원심분리기 튜브에 현탁액 18마이크로리터를 넣고 아크리딘 오렌지 프로피듐 요오드화물 염색 용액 2마이크로리터를 추가합니다. 이 염색된 용액 10마이크로리터를 계수 챔버 슬라이드에 추가합니다.자동 세포 계수기를 사용하여 세포 수와 생존력을 평가합니다. 세포 단편은 단세포 심장 현탁액에서 관찰되었다. 형광 활성화 세포 분류는 세포 단편 및 세포 응집의 비율을 효과적으로 감소시켜 평균 세포 크기를 감소시켰습니다.RNA 시퀀싱은 감독되지 않은 클러스터링 및 감소된 T-분포 확률적 이웃 임베딩에 의해 입증된 바와 같이 7가지 유형의 면역 세포의 명백한 분리를 입증했습니다. 각 면역세포는 고전적 마커의 높은 발현을 보였다. 심장 조직은 불완전한 소화를 피하기 위해 충분히 작게 절단해야 하며, 이로 인해 세포 현탁액에 많은 세포 덩어리가 생깁니다.이 프로토콜에 의해 얻어진 단일 세포 현탁액은 일차 세포 배양의 유동 분석에 추가로 적용될 수 있습니다. 이 프로토콜은 심근 감염의 미세 환경에 대한 연구에 도움이 되며, 이는 연구자들이 심장 조직 너머를 바라보고 심근 감염을 체계적인 문제로 간주하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

돼지의 심근 경색 및 기능적 결과의 평가

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

연구

의학

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

큰 동물 모델에 대한 격리 된 작업 심장 시스템

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

마우스의 왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰 : 심근 경색 리모델링과 심장 마비의 모델

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

임상 샘플에서 RNA 바이러스의 편견 깊은 시퀀싱

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

그대로 Glomeruli 성인 쥐 신장에서 분리 하는 효율적인 체질 하 방법

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

성인 마우스에서 심방 근세포의 격리

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

마우스에서 심근 경색을 연구하는 극저온 손상 모델

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

줄기 세포 치료를위한 심근 경색 심부전의 돼지 모델 설립

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Post-Myocardial Infarction Heart Failure in Closed-chest Coronary Occlusion/Reperfusion Model in G&#246;ttingen Minipigs and Landrace Pigs

괴팅겐 미니피그와 랜드레이스 돼지의 폐쇄 가슴 관상 동맥 폐색/재관류 모델의 심근 경색 심부전

The development of heart failure is the most powerful predictor of long-term mortality in patients surviving acute myocardial infarction (MI). There is an ...