Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Funds of Zhejiang-provinsen (LQ22H020010).

Alle forsøkene ble utført i samsvar med retningslinjene for omsorg og bruk av forsøksdyr ved Zhejiang University og ble godkjent av Animal Advisory Committee ved Zhejiang University.
1. Venstre fremre synkende koronar ligering (LAD ligering) kirurgi
MERK: Åtte uker gamle mannlige C57BL/6J-mus ble brukt som modeller. Hjertene ble høstet 2 uker etter MI. Venstre fremre nedadstigende koronarkirurgi ble utført som tidligere beskrevet og demonstrert<...

<ol>
	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews. Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Kain, V., Prabhu, S. D., Halade, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+revisited:+Inflammation+versus+resolution+of+inflammation+following+myocardial+infarction.">Inflammation revisited: Inflammation versus resolution of inflammation following myocardial infarction.</a> Basic Research in Cardiology. 109 (6), 444 (2014).</li><li>Tzahor, E., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coalition+to+heal-the+impact+of+the+cardiac+microenvironment.">A coalition to heal-the impact of the cardiac microenvironment.</a> Science. 377 (6610), 4443 (2022).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485 (7400), 599-604 (2012).</li><li>Jaitin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. Immunology. 18 (1), 35-45 (2018).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+the+temporal+diversity+and+dynamics+of+cardiac+immunity+after+myocardial+infarction.">Single-cell RNA sequencing reveals the temporal diversity and dynamics of cardiac immunity after myocardial infarction.</a> Small Methods. 6 (3), 2100752 (2022).</li><li>Tombor, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+sequencing+reveals+endothelial+plasticity+with+transient+mesenchymal+activation+after+myocardial+infarction.">Single cell sequencing reveals endothelial plasticity with transient mesenchymal activation after myocardial infarction.</a> Nature Communications. 12 (1), 681 (2021).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581 (2011).</li><li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry.">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 95 (2), 219-226 (2018).</li><li>Gladka, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

Denne artikkelen hadde som mål å beskrive en protokoll for å isolere enkeltstående ikke-kardiomyocytter fra musehjerter post MI. Protokollen kan brukes til å isolere forskjellige typer celler i post-MI mikromiljøet med høy kvalitet, inkludert immunceller, endotelceller og fibroblaster. Tre viktige faktorer er avgjørende for å oppnå en cellesuspensjon av høy kvalitet for enkeltcellesekvensering. Den første er innstillingen av enzymatisk fordøyelse. Det er viktig å kontrollere tidspunktet for fordøyelsen og ...

Hjerteinfarkt (MI) er en av de vanligste hjerte- og karsykdommene, og dødeligheten øker over hele verden1. MI er forårsaket av utilstrekkelig blodtilførsel til det omkringliggende myokardiet, noe som kan være et resultat av en blokkering av kranspulsårene som oppstår med aterosklerotisk plakkruptur. Selv om perkutan koronar intervensjon (PCI) har redusert dødeligheten hos akutte MI-pasienter, er den høye forekomsten av hjertesvikt etter MI fortsatt et problem2. Den viktigste patofysiologien som ligger til grunn for post-MI hjertesvikt er kroppens kompenserende respons på hjerteskader, som innebærer å erstatte den døde hjertemuskelen med ikke-kontraktile fibrotiske arr. Disse adaptive responsene er i betydelig grad avhengige av lokal betennelse mediert av interaksjonene mellom flere celletyper og hjertevevsceller, og denne betennelsen anses nå som et potensielt terapeutisk mål for å redusere fibrotisk arrdannelse og dermed beskytte mot post-MI hjertesvikt 3,4. Interessant nok opplever mikromiljøet på infarktstedet en tidsavhengig overgang i de infiltrerende celletypene og funksjonene i ulike stadier av MI 1,5. Mange studier har vist at ikke-kardiomyocytter (f.eks. immunceller, fibroblaster og endotelceller) spiller sentrale roller i post-MI-betennelse og vevsreparasjon 5,6. I de senere år har enkeltcellesekvensering blitt mye brukt som et kraftig verktøy for å belyse involveringene og funksjonene til ikke-kardiomyocytter i post-MI mikroenviroment 7,8. Dette gir innsikt i patofysiologien ved post-MI skade og reparasjon og utvikling av potensielle terapier mot post-MI hjertesvikt.
High-throughput RNA sequencing (RNA-Seq) er en teknikk som brukes til å studere hele transkriptomer i detalj ved hjelp av neste generasjons sekvensering (NGS) 7,8,9. Nylig har utviklingen av scRNA-Seq revolusjonert det biomedisinske forskningsfeltet. Sammenlignet med konvensjonell bulksekvensering analyserer scRNA-Seq genuttrykksprofiler og transkripsjonell heterogenitet på encellenivå 7,8. Denne teknikken fremmer signifikant forskningen av den cellulære patofysiologien til MI 9,10 ved å identifisere forskjellige sirkulerende celletyper i post-MI mikromiljøet og avdekke samspillet mellom kardiomyocytter og ikke-kardiomyocytter. Disse funnene bidrar videre til å avdekke nye terapeutiske mål for post-MI hjertesvikt. Generelt inkluderer det scRNA-seq-baserte post-MI-eksperimentet tre hoveddeler: (1) etablering av post-MI dyremodell; (2) fremstilling av cellesuspensjonen; og (3) prøvesekvensering og dataanalyse. Spesielt er forberedelse av cellesuspensjonen det mest kritiske trinnet i utarbeidelsen av scRNA-Seq-eksperimentet fordi kvaliteten på cellesuspensjonen bestemmer nøyaktigheten av resultatene.
Denne protokollen er utformet for å ekstrahere en ikke-kardiomyocyttcellesuspensjon fra hjertevevet etter MI; Det er viktig at de spesifikke detaljene for å opprettholde cellens levedyktighet og oppløsning er inkludert. I mellomtiden kan utstyret som brukes i denne protokollen, for eksempel kirurgiske sett for mus, gnagerventilatorer og sentrifuger, finnes i de fleste dyreforsøkssentre og biomedisinske laboratorier, og dermed er eksperimentkostnaden for denne protokollen relativt lav. Videre, hvis man vurderer tidspunkter og infarktsteder som variabler, kan denne protokollen brukes til å simulere et bredt spekter av kliniske scenarier, spesielt for komplikasjonene etter MI.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

Hjerteinfarkt (MI) er en av de vanligste hjerte- og karsykdommene, med økende dødelighet på verdensbasis. Ikke-kardiomyocytter står for mer enn halvparten av den totale hjertecellepopulasjonen, og de bidrar til adaptive kompensasjoner ved myokardskade, inkludert inflammatoriske responser, vevsreparasjon og arrdannelse. For å studere post-MI hjertets mikromiljø, er enkeltcelle RNA-sekvensering (scRNA-seq) mye brukt til å identifisere forskjellige hjertecelletyper og intercellulær kommunikasjon. Blant prosedyrene for scRNA-seq-prøvepreparering er fremstilling av cellesuspensjonen et av de mest kritiske trinnene, fordi cellens levedyktighet kan påvirke kvaliteten på scRNA-seq-resultatene. Derfor designet vi en eksperimentell protokoll for å forberede en ikke-kardiomyocyttcellesuspensjon fra post-MI musehjerter med ekstra fokus på å forbedre cellens levedyktighet ved å velge milde fordøyelsesenzymer, kontrollere fordøyelsestiden og bruke fluorescensaktivert cellesortering (FACS). Til slutt isolerte vi CD45+ celler fra ikke-kardiomyocyttcellesuspensjonen oppnådd gjennom denne protokollen, og deretter utførte vi scRNA-seq.

En encellesuspensjon med høy vitalitet ble oppnådd ved å implementere avsnitt 2 i denne protokollen. Imidlertid kunne cellefragmenter fortsatt observeres (figur 1A); Derfor ble fluorescensaktivert cellesortering (FACS) utført for å forbedre kvalitetenytterligere 16. Etter FACS reduseres gjennomsnittlig cellestørrelse fra 9,6 μm til 9,1 μm ( tabell 1), noe som antyder at andelen cellefragmenter effektivt kan reduseres i cellesuspensjonen ved FA...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

Her beskriver vi en protokoll for å isolere en tilstrekkelig mengde enkeltstående ikke-kardiomyocytter med høy levedyktighet fra et musehjerte etter hjerteinfarkt (MI). Dette kan brukes til påfølgende enkeltcellesekvensering, flowcytometrianalyse og primær cellekultur.

Fremstilling av en ikke-kardiomyocyttcellesuspensjon for enkeltcelle RNA-sekvensering fra et voksent musehjerte etter hjerteinfarkt

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

Vår protokoll sikrer både cellens levedyktighet og isolasjonseffektivitet av enkeltcellesuspensjon til relativt lave kostnader. De relativt lave kostnadene og kravene til laboratorieutstyr er de viktigste fordelene ved denne teknikken. Enkeltcellesekvensering avslører heterogeniteten til ikke-kardiomyocytter i hjertepatofysiologi, og gir også ideer til grunnleggende og kliniske studier for hjertesykdom.Denne protokollen kan brukes i disse studiene på det kardiovaskulære miljøet etter MI, for eksempel involvering av immunceller. For første gangs forberedelser foreslår jeg at det bør tas ekstra hensyn til prøvepepsin og fordøyelsestid. Når bufferne og løsningene er klargjort som beskrevet i manuskriptet, legger du en avlivet mus som to uker tidligere hadde hjerteinfarkt i liggende stilling på operasjonsbordet.Fest bakre lemmer ved hjelp av tape. For å punktere hjertet, spray kroppen med 70% etanol. Lag et vertikalt snitt gjennom magehuden og musklene mens du unngår leveren.Uten å punktere hjertet, åpne forsiktig thoraxen og rikelig venstre ventrikkel med forkjølt PBS-løsning til perfusjonsvæsken blir fargeløs. Bruk tang, løft hjertet forsiktig og kutt bort overflødig vev festet til utsiden med oftalmisk saks. Plasser hjertet i en milliliter forkjølt PBS i et 1,5 milliliter mikrosentrifugerør.Overfør hjertet til en brønn på en 24 brønnplate plassert på is. Pipet 150 mikroliter av hjertedissosiasjonsbufferen inn i brønnen, og kutt hjertet i en millimeter store biter ved hjelp av saks. Overfør det hakkede hjertevevet til et 15 milliliter sentrifugerør som inneholder fem milliliter av vevsdissosiasjonsbufferen.Plasser røret i en termostatisk frem- og tilbakegående shaker. Pipet suspensjonen opp og ned 10 ganger hvert 20. minutt. For å fjerne klumper og ufordøyd vev, filtrer cellesuspensjonen gjennom en 70 mikrometer cellesil ved hjelp av 25 ml cellevaskbuffer.Skyll sentrifugerøret og cellesilen. Deretter filtrerer du cellesuspensjonen gjennom en 40 mikrometer cellesil for å fjerne ytterligere celleklumper. Sentrifuger den filtrerte cellesuspensjonen ved 300 x g i fem minutter ved fire grader Celsius.Resuspender celleprøven i fem volumer RBC-lysisbuffer og inkuber i fem minutter ved romtemperatur. Legg nå til fire volumer av cellevaskbufferen i celleoppheng og sentrifuge som vist tidligere. Etter å ha kastet supernatanten, resuspenderer cellene i 10 milliliter av cellevaskbufferen og sentrifugen igjen.På slutten av sentrifugeringen, kast supernatanten og resuspender pelleten i en milliliter cellevaskbuffer. Ta 18 mikroliter av suspensjonen i et annet sentrifugerør og tilsett to mikroliter akridin oransje propidiumjodidfargeløsning. Tilsett 10 mikroliter av denne fargede løsningen til et lysbilde i tellekammeret.Evaluer cellenumrene og levedyktigheten ved hjelp av en automatisk celleteller. Cellefragmenter ble observert i enkeltcellet hjertesuspensjon. Fluorescensaktivert cellesortering reduserte effektivt andelen av cellefragmentene og celleklumping, noe som resulterte i redusert gjennomsnittlig cellestørrelse.RNA-sekvensering viste seg å være en åpenbar separasjon av syv typer immunceller som demonstrert av den ikke-overvåkede klyngen og redusert T-distribuert stokastisk naboinnebygging. Hver immuncelle viste et høyt uttrykk av klassiske markører. Hjertevev må kuttes lite nok til å unngå ufullstendig fordøyelse, noe som fører til mange celleklumper i cellesuspensjonen.Enkeltcellesuspensjonen oppnådd ved denne protokollen kan videre anvendes i strømningsanalyse av primær cellekultur. Denne protokollen fordeler studiene på mikromiljøet av myokardinfeksjon, noe som kan hjelpe forskere til å se utover hjertevevet og vurdere myokardinfeksjon som et systematisk problem.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Hjerteinfarkt og funksjonelle resultatet Vurdering i Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

En modifisert metode for Heterotop Mouse Hjerte Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

Et isolert Working Hjerte System for stort dyr modeller

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent Ligation av Venstre Anterior Synkende Coronary Artery i Mus: En modell av Post-hjerteinfarkt Remodelling og hjertesvikt

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

Objektivt Deep Sekvensering av RNA virus fra kliniske prøver

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Effektiv Sieving metode å isolere intakt Glomeruli fra voksen rotte nyre

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolering av atrieflimmer myocytter fra voksen mus

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Cryoinjury modell for å studere hjerteinfarkt i Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

Etablere en svinemodell av post-hjerteinfarkt hjertesvikt for stamcellebehandling

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Post-Myocardial Infarction Heart Failure in Closed-chest Coronary Occlusion/Reperfusion Model in G&#246;ttingen Minipigs and Landrace Pigs

Post-myokardinfarkt hjertesvikt i lukket bryst koronar okklusjon / reperfusjonsmodell i Göttingen minipigs og landrace griser

The development of heart failure is the most powerful predictor of long-term mortality in patients surviving acute myocardial infarction (MI). There is an ...