Name: preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart
Uploaded: 2023-02-03T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Zhejiangprovinsens naturvetenskapliga fonder (LQ22H020010).

Alla experiment utfördes i enlighet med riktlinjerna för vård och användning av laboratoriedjur vid Zhejiang University och godkändes av Animal Advisory Committee vid Zhejiang University.
1. Vänster främre fallande kranskärlsligering (LAD-ligering) kirurgi
OBS: Åtta veckor gamla manliga C57BL / 6J möss användes som modeller. Hjärtan skördades 2 veckor efter MI. Vänster främre fallande kranskärlsligeringskirurgi utfördes som tidigare b...

<ol>
	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incident+heart+failure+in+patients+with+coronary+artery+disease+undergoing+percutaneous+coronary+intervention.">Incident heart failure in patients with coronary artery disease undergoing percutaneous coronary intervention.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 727727 (2021).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews. Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Kain, V., Prabhu, S. D., Halade, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+revisited:+Inflammation+versus+resolution+of+inflammation+following+myocardial+infarction.">Inflammation revisited: Inflammation versus resolution of inflammation following myocardial infarction.</a> Basic Research in Cardiology. 109 (6), 444 (2014).</li><li>Tzahor, E., Dimmeler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coalition+to+heal-the+impact+of+the+cardiac+microenvironment.">A coalition to heal-the impact of the cardiac microenvironment.</a> Science. 377 (6610), 4443 (2022).</li><li>Song, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+repair+by+reprogramming+non-myocytes+with+cardiac+transcription+factors.">Heart repair by reprogramming non-myocytes with cardiac transcription factors.</a> Nature. 485 (7400), 599-604 (2012).</li><li>Jaitin, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massively+parallel+single-cell+RNA-seq+for+marker-free+decomposition+of+tissues+into+cell+types.">Massively parallel single-cell RNA-seq for marker-free decomposition of tissues into cell types.</a> Science. 343 (6172), 776-779 (2014).</li><li>Massaia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+gene+expression+to+understand+the+dynamic+architecture+of+the+heart.">Single cell gene expression to understand the dynamic architecture of the heart.</a> Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 167 (2018).</li><li>Papalexi, E., Satija, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+explore+immune+cell+heterogeneity.">Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity.</a> Nature Reviews. Immunology. 18 (1), 35-45 (2018).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+reveals+the+temporal+diversity+and+dynamics+of+cardiac+immunity+after+myocardial+infarction.">Single-cell RNA sequencing reveals the temporal diversity and dynamics of cardiac immunity after myocardial infarction.</a> Small Methods. 6 (3), 2100752 (2022).</li><li>Tombor, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+sequencing+reveals+endothelial+plasticity+with+transient+mesenchymal+activation+after+myocardial+infarction.">Single cell sequencing reveals endothelial plasticity with transient mesenchymal activation after myocardial infarction.</a> Nature Communications. 12 (1), 681 (2021).</li><li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction.">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581 (2011).</li><li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry.">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry Part A. 95 (2), 219-226 (2018).</li><li>Gladka, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+of+the+healthy+and+diseased+heart+reveals+cytoskeleton-associated+protein+4+as+a+new+modulator+of+fibroblasts+activation.">Single-cell sequencing of the healthy and diseased heart reveals cytoskeleton-associated protein 4 as a new modulator of fibroblasts activation.</a> Circulation. 138 (2), 166-180 (2018).</li><li>Garcia-Flores, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+single-cell+suspensions+from+the+human+placenta.">Preparation of single-cell suspensions from the human placenta.</a> Nature Protocols. , (2022).</li><li>Guez-Barber, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+purification+of+immunolabeled+cell+types+from+adult+rat+brain.">FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 10-18 (2012).</li><li>Rheinl&#228;ndera, A., Schravenab, B., Bommhardt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD45+in+human+physiology+and+clinical+medicine.">CD45 in human physiology and clinical medicine.</a> Immunology Letters. 196, 22-32 (2018).</li><li>Hua, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+to+dissect+the+immunological+network+of+autoimmune+myocarditis.">Single-cell RNA sequencing to dissect the immunological network of autoimmune myocarditis.</a> Circulation. 142 (4), 384-400 (2020).</li><li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-sequencing+from+single+nuclei.">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li><li>Vanden Brink, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+sequencing+reveals+dissociation-induced+gene+expression+in+tissue+subpopulations.">Single-cell sequencing reveals dissociation-induced gene expression in tissue subpopulations.</a> Nature Methods. 14, 935-936 (2017).</li></ol>

Denna artikel syftade till att beskriva ett protokoll för att isolera enstaka icke-kardiomyocyter från mushjärtan efter MI. Protokollet kan tillämpas för att isolera olika typer av celler i post-MI-mikromiljön med hög kvalitet, inklusive immunceller, endotelceller och fibroblaster. Tre viktiga faktorer är avgörande för att erhålla en högkvalitativ cellsuspension för encellssekvensering. Den första är inställningen av enzymatisk matsmältning. Det är viktigt att kontrollera tiden för matsmältningen och ...

Hjärtinfarkt (MI) är en av de vanligaste hjärt-kärlsjukdomarna, och dess dödlighet ökar över hela världen1. MI orsakas av otillräcklig blodtillförsel till det omgivande myokardiet, vilket kan vara ett resultat av en kranskärlsblockering som uppstår vid aterosklerotisk plackbrott. Även om perkutan koronar intervention (PCI) har minskat dödligheten hos akuta MI-patienter, är den höga förekomsten av hjärtsvikt efter MI fortfarande ett problem2. Den viktigaste patofysiologin bakom hjärtsvikt efter hjärtinfarkt är kroppens kompensatoriska svar på hjärtskador, vilket innebär att den döda hjärtmuskeln ersätts med icke-kontraktila fibrotiska ärr. Dessa adaptiva svar är signifikant beroende av lokal inflammation medierad av interaktionerna mellan flera celltyper och hjärtvävnadsceller, och denna inflammation betraktas nu som ett potentiellt terapeutiskt mål för att minska fibrotisk ärrbildning och därmed skydda mot hjärtsvikt efter MI 3,4. Intressant nog upplever mikromiljön vid infarktstället en tidsberoende övergång i de infiltrerande celltyperna och funktionerna i olika stadier av MI 1,5. Många studier har visat att icke-kardiomyocyter (t.ex. immunceller, fibroblaster och endotelceller) spelar centrala roller vid inflammation efter MI och vävnadsreparation 5,6. Under de senaste åren har encellssekvensering använts i stor utsträckning som ett kraftfullt verktyg för att belysa involveringar och funktioner hos icke-kardiomyocyter i mikromiljönefter MI 7,8. Detta ger insikter i patofysiologin för post-MI skada och reparation och utvecklingen av potentiella terapier mot post-MI hjärtsvikt.
RNA-sekvensering med hög genomströmning (RNA-Seq) är en teknik som används för att studera hela transkriptom i detalj med hjälp av nästa generations sekvensering (NGS) 7,8,9. På senare tid har utvecklingen av scRNA-Seq revolutionerat det biomedicinska forskningsfältet. Jämfört med konventionell bulksekvensering analyserar scRNA-Seq genuttrycksprofiler och transkriptionell heterogenitet på encellsnivå 7,8. Denna teknik främjar signifikant forskningen av den cellulära patofysiologin för MI 9,10 genom att identifiera olika cirkulerande celltyper i mikromiljön efter MI och avslöja interaktionen mellan kardiomyocyter och icke-kardiomyocyter. Dessa fynd bidrar ytterligare till att avslöja nya terapeutiska mål för hjärtsvikt efter MI. I allmänhet innehåller det scRNA-seq-baserade post-MI-experimentet tre huvudavsnitt: (1) upprättandet av post-MI-djurmodell; 2) framställning av cellsuspensionen, och (3) provsekvensering och dataanalys. Märkbart är beredningen av cellsuspensionen det mest kritiska steget i beredningen av scRNA-Seq-experimentet eftersom kvaliteten på cellsuspensionen bestämmer resultatens noggrannhet.
Detta protokoll är utformat för att extrahera en icke-kardiomyocytcellsuspension från hjärtvävnaden efter MI; Signifikant ingår de specifika detaljerna för att upprätthålla cellviabilitet och upplösning. Under tiden kan utrustningen som används i detta protokoll, såsom kirurgiska kit för möss, gnagareventilatorer och centrifuger, hittas i de flesta djurförsökscentra och biomedicinska laboratorier, och därmed är experimentkostnaden för detta protokoll relativt låg. Dessutom, om man betraktar tidpunkter och platser för infarkt som variabler, kan detta protokoll tillämpas för att simulera ett brett spektrum av kliniska scenarier, särskilt för post-MI-komplikationer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acridine Orange / Propidium Iodide Stain</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>F23001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated&#160;Cell&#160;Counter</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G5001</td>
			<td>Cytoprotective effect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Slides</td>
			<td>Logos biosystems</td>
			<td>L12001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104019</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4693</td>
			<td>Digestive enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Prevent cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;40&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td>Remove cell clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;70&#956;m Cell Strainer</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td>Remove undigested tissue and clumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cell Sorter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B25982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophor</td>
			<td>OU QING SI</td>
			<td>10054963976859</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>12061-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>RWD</td>
			<td>F14012-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Scissors</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S11036-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Servicebio</td>
			<td>G4202-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702-120ml</td>
			<td>Remove red blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rib Retractor</td>
			<td>FST</td>
			<td>17005-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Harvard</td>
			<td>730043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875093</td>
			<td>Solvent&#160;solution of enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Scissor</td>
			<td>RWD</td>
			<td>S14014-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a non-cardiomyocyte cell suspension for single-cell rna sequencing from a post-myocardial infarction adult mouse heart

Hjärtinfarkt (MI) är en av de vanligaste hjärt-kärlsjukdomarna, med ökande dödlighet över hela världen. Icke-kardiomyocyter står för mer än hälften av den totala hjärtcellspopulationen, och de bidrar till adaptiva kompensationer vid myokardskada, inklusive inflammatoriska svar, vävnadsreparation och ärrbildning. För att studera hjärtmikromiljön efter MI används encells-RNA-sekvensering (scRNA-seq) i stor utsträckning för att identifiera olika hjärtcellstyper och intercellulär kommunikation. Bland procedurerna för scRNA-seq-provberedning är beredning av cellsuspensionen ett av de mest kritiska stegen, eftersom cellviabiliteten kan påverka kvaliteten på scRNA-seq-resultaten. Därför utformade vi ett experimentellt protokoll för att förbereda en icke-kardiomyocytcellsuspension från post-MI-mushjärtan med extra fokus på att förbättra cellviabiliteten genom att välja milda matsmältningsenzymer, kontrollera matsmältningstiden och applicera fluorescensaktiverad cellsortering (FACS). Slutligen isolerade vi CD45 + -celler från den icke-kardiomyocytcellsuspensionen erhållen genom detta protokoll, och sedan utförde vi scRNA-seq.

En encellssuspension med hög vitalitet erhölls genom implementering av avsnitt 2 i detta protokoll. Cellfragment kunde dock fortfarande observeras (figur 1A); därför utfördes fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) för att ytterligare förbättra kvaliteten16. Efter FACS minskar den genomsnittliga cellstorleken från 9,6 μm till 9,1 μm ( tabell 1), vilket tyder på att andelen cellfragment effektivt kan reduceras i cellsuspensionen med FACS ...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart at JoVE.com

Preparation of a Non-Cardiomyocyte Cell Suspension for Single-Cell RNA Sequencing from a Post-Myocardial Infarction Adult Mouse Heart

Här beskriver vi ett protokoll för att isolera en tillräcklig mängd enstaka icke-kardiomyocyter med hög livskraft från ett mushjärta efter hjärtinfarkt (MI). Detta kan användas för efterföljande encellssekvensering, flödescytometrianalys och primär cellodling.

Beredning av en icke-kardiomyocytcellsuspension för encells-RNA-sekvensering från ett vuxenmushjärta efter hjärtinfarkt

Myocardial infarction (MI) is one of the most common cardiovascular diseases, with increasing mortality worldwide. Non-cardiomyocytes account for more ...

Vårt protokoll säkerställer både cellviabilitet och isoleringseffektivitet för encellssuspension till relativt låga kostnader. De relativt låga kostnaderna och kraven på laboratorieutrustning är de främsta fördelarna med denna teknik. Single cell sekvensering avslöjar heterogeniteten hos icke-kardiomyocyter i hjärtpatofysiologi, och ger också idéer för grundläggande och kliniska studier för hjärtsjukdomar.Detta protokoll kan användas i dessa studier på post-MI kardiovaskulär miljö, såsom involvering av immunceller. För första gången förberedelser föreslår jag att extra uppmärksamhet bör ägnas åt provet pepsin och matsmältningstid. När buffertarna och lösningarna är beredda enligt beskrivningen i manuskriptet, placera en avlivad mus som hade hjärtinfarkt två veckor tidigare i ryggläge på operationsbordet.Fäst bakbenen med tejp. För att skära hjärtat, spraya kroppen med 70% etanol. Gör ett vertikalt snitt genom buken hud och muskler samtidigt undvika levern.Utan att punktera hjärtat, öppna försiktigt bröstkorgen och fyll vänster kammare med förkyld PBS-lösning tills perfusionsvätskan går färglös. Använd pincett, lyft försiktigt hjärtat och skär bort överflödiga vävnader som är fästa på utsidan med oftalmisk sax. Placera hjärtat i en milliliter förkyld PBS i ett 1,5 milliliter mikrocentrifugrör.Överför hjärtat till en brunn av en 24 brunnsplatta placerad på is. Pipettera 150 mikroliter av hjärtdissociationsbufferten i brunnen och skär hjärtat i en millimeter stora bitar med sax. Överför den malet hjärtvävnaden till ett 15 ml centrifugrör innehållande fem milliliter av vävnadsdissociationsbufferten.Placera röret i en termostatisk fram- och återgående skakapparat. Pipettera suspensionen upp och ner 10 gånger var 20:e minut. För att avlägsna klumpar och osmält vävnad, filtrera cellsuspensionen genom en 70 mikrometer cellsil med 25 ml celltvättbuffert.Skölj centrifugröret och cellsilen. Därefter filtreras cellsuspensionen genom en 40 mikrometer cellsil för att avlägsna ytterligare cellklumpar. Centrifugera den filtrerade cellsuspensionen vid 300 x g i fem minuter vid fyra grader Celsius.Resuspendera cellprovet i fem volymer RBC-lysbuffert och inkubera i fem minuter vid rumstemperatur. Lägg nu till fyra volymer av celltvättbufferten i cellsuspension och centrifug som visats tidigare. Efter kassering av supernatanten, suspendera cellerna i 10 ml av celltvättbufferten och centrifugera igen.Vid slutet av centrifugeringen, kassera supernatanten och återsuspendera pelleten i en milliliter celltvättbuffert. Ta 18 mikroliter av suspensionen i ett annat centrifugrör och tillsätt två mikroliter akridinorange propidiumjodidfärgningslösning. Tillsätt 10 mikroliter av denna färgade lösning till en räknekammare.Utvärdera cellnummer och livskraft med hjälp av en automatisk cellräknare. Cellfragment observerades i hjärtsuspensionen med en cell. Fluorescensaktiverad cellsortering minskade effektivt andelen cellfragment och cellklumpar vilket resulterade i minskad genomsnittlig cellstorlek.RNA-sekvensering visade sig vara en uppenbar separation av sju typer av immunceller, vilket demonstrerades av den oövervakade klustringen och reducerad T-distribuerad stokastisk granninbäddning. Varje immuncell visade ett högt uttryck av klassiska markörer. Hjärtvävnad måste skäras tillräckligt liten för att undvika ofullständig matsmältning, vilket leder till massor av cellklumpar i cellsuspensionen.Den encellssuspension erhållen med detta protokoll kan appliceras vidare vid flödesanalys av primär cellodling. Detta protokoll gynnar studierna om mikromiljön för myokardinfektion, vilket kan hjälpa forskare att se bortom hjärtvävnaderna och överväga myokardinfektion som ett systematiskt problem.

Research

JoVE Journal

Medicine

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Hjärtinfarkt och bedömning Funktionell Utfall i Grisar

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

En modifierad metod för Heterotopisk mushjärta transplantationer

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

An Isolated Working Heart System for Large Animal Models

En isolerad Working Heart System för stora djurmodeller

Since its introduction in the late 19th century, the Langendorff isolated heart perfusion apparatus, and the subsequent development of the working heart ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Permanent Ligering av vänster främre Fallande Kranskärls hos möss: En modell av efter hjärtinfarkt Remodelling och hjärtsvikt

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Unbiased Deep Sequencing of RNA Viruses from Clinical Samples

Opartisk djup sekvensering av RNA virus från kliniska prover

Here we outline a next-generation RNA sequencing protocol that enables de novo assemblies and intra-host variant calls of viral genomes collected from ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

En effektiv siktning metod att isolera intakt Glomeruli från vuxen råtta njure

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolering av Förmaksmyocyter från vuxna möss

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

En Kryoskademodell för att studera hjärtinfarkt i mus

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Establishing a Swine Model of Post-myocardial Infarction Heart Failure for Stem Cell Treatment

Upprättande av en Swine modell av Post-hjärtinfarkt hjärtsvikt för stamcellsbehandling

Although advances have been achieved in the treatment of heart failure (HF) following myocardial infarction (MI), HF following MI remains one of the major ...

Post-Myocardial Infarction Heart Failure in Closed-chest Coronary Occlusion/Reperfusion Model in G&#246;ttingen Minipigs and Landrace Pigs

Post-Myokardisk hjärtinfarkt hjärtsvikt i sluten bröstkorg koronar ocklusion / reperfusion modell i Göttingen Minipigs och Landrace Grisar

The development of heart failure is the most powerful predictor of long-term mortality in patients surviving acute myocardial infarction (MI). There is an ...