Name: cultivation methods of spirochetes from borrelia burgdorferi sensu lato complex and relapsing fever borrelia
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia at JoVE.com

这项工作得到了加拿大自然科学和工程研究理事会和加拿大莱姆病基金会（AB和VL），瑞典研究理事会（SB，M-LF 和IN），TAČR GAMA 2项目-“支持生物中心CAS的应用潜力验证2.0”（TP01010022）（MG和NR）的部分支持，以及捷克共和国卫生部NV19-05-00191（MG和NR）的赠款。我们感谢 S. Vranjes（2021 年，鲁登科实验室）提供图 4 中的图像，感谢 J. Thomas-Ebbett（2021 年，劳埃德实验室）提供图 5 中的图像。我们感谢所有为该领域做出贡献的研究人员，并向那些由于篇幅限制而无法引用其工作的人道歉。

所有涉及从人类受试者获得的样本的研究均已获得相关大学和/或医疗机构的机构审查委员会的批准，并在收集样本之前获得参与者的书面知情同意。所有涉及从动物身上获得的样本的研究均在机构动物伦理委员会的指导下获得批准和进行。在相关情况下，已获得环境取样的批准。
注意：培养的成功在很大程度上取决于成分的质量。商业BSK培养基可用，可有力地支持实验室适?...

细菌的实验室培养是研究的跳板。培养能力所赋予的深远优势体现在一个多世纪以来，直到最近才取得成功的梅毒螺旋体（梅毒螺旋体）的斗争中，44.螺旋疏螺旋体也对培养具有挑战性，但培养是可能的23，24，34，44，45，46，47，48<...

疏螺旋体是螺旋体细菌的一个属，包括三个主要分支：莱姆疏螺旋体病（LB）组，回归热（RF）组，以及似乎仅限于爬行动物的特征不太好的组。随着允许基因组和蛋白质组比较的分子方法的出现，疏螺旋体分类法也在不断变化，就像大多数其他分类组1，2，3，4，5，6，7一样。LB组（也称为莱姆病组）传统上被称为伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi sensu lato），以其特征最好的成员伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi sensu stricto）命名。本文使用目前使用最广泛的术语：LB、RF 和爬行动物相关组，并描述了 LB 和 RF 组的培养协议。
正如螺旋体科成员所预期的那样，疏螺旋体可以采用独特的长而薄的螺旋形状，通常长20-30μm，宽0.2-0.3μm。然而，疏螺旋体细胞具有高度多形性，由于其复杂的细胞和遗传结构，可以在培养物和体内1，8中采用许多其他形状。在其螺旋体形式中，平面正弦波形态是由其轴向内鞭毛在内膜和外膜之间的周质空间中旋转引起的。这种结构使细胞具有高度运动性，外膜含有蛋白质，使细胞能够与宿主组织相互作用9，10。外膜蛋白的表达受到严格调控，不仅影响宿主组织侵袭，还影响与宿主免疫系统的相互作用11。这种复杂的基因表达使疏螺旋体细胞能够在脊椎动物宿主和无脊椎动物载体的不同环境之间穿梭。疏螺旋体的基因组在原核生物中是不寻常的，由线性而不是圆形染色体组成。除线性染色体外，疏螺旋体物种还含有7-21个质粒，有些是线性的，有些是圆形的。质粒含有宿主适应和毒力所需的大部分基因，来自噬菌体的环状质粒被认为是螺旋体细胞之间大部分水平基因流动的原因12，13。与宿主适应中的作用一致，莱姆疏螺旋体病组的一些（可能许多或全部）成员在培养物中丢失质粒14。研究得最好的“实验室适应”伯氏疏螺旋体B. burgdorferi菌株B31在该物种的野生分离株中发现的9个质粒中只有7个15。同样，加里尼双歧杆菌在培养物中丢失质粒16。一些研究表明，RF物种和宫本双歧杆菌在培养时保留质粒14，17，但最近的研究表明，长期体外培养18改变了质粒和感染性。
基于培养的方法仍然是实验室检测细菌感染的金标准，无论是研究和临床工作14，17。从体液或组织中培养病原体可直接检测复制病原体，并为研究提供源材料14，17。该协议展示了成功培养LB组螺旋体以及RF疏螺旋体和宫本芽孢杆菌所需的方法和配方。生长螺旋体疏螺旋体的基本培养基是Barbour-Stoenner-Kelly培养基（BSK-II或市售的BSK-H），有或没有抗生素以减少污染原核生物的生长。该介质改编自最初用于支持RF Borrelia19的介质，由Stoenner20和Barbour21进一步修改。此后开发了许多修饰，每种修饰都对细菌生理学产生影响，可影响生长，感染性和致病性22。该培养基可靠地支持已建立培养物中螺旋体的生长，并已用于从蜱、哺乳动物和临床样品中分离螺旋体23。最近开发的变体，改良的Kelly-Pettenkofer（MKP）培养基，当从环境样品中分离新的疏螺旋体分离物时，当可用于播种培养物的样品中存在的螺旋体数量低时，可以提供更好的分离成功率，形态和运动性23，24。在所有情况下，种植的成功都主要取决于新鲜制备的培养基和适当成分的使用;并非所有商业成分都能生产高质量的培养基。接种的培养物可以方便地在传统的32-34°C培养箱中在少量残留环境氧气存在的情况下孵育，而无需摇动。螺旋疏螺旋体是厌氧菌，但在自然界中暴露于氧气和二氧化碳浓度的波动中，并对基因表达的变化做出反应26，27，28，29。因此，基因表达、生长和其他代谢研究应使用氧控培养箱或厌氧室来控制氧气和二氧化碳水平。在培养中，每周或更频繁地使用暗场显微镜或相差显微镜检查培养物是否存在螺旋体。培养涂片可以用银染、免疫组化或通过使用荧光标记菌株29，30 染色。PCR和DNA测序是一种灵敏和特异性的方法，用于检测和遗传鉴定或确认疏螺旋体物种30，31，32，33。
BSK-II存在许多小的变体，有些是商业上可获得的。第1节中描述的协议改编自Barbour（1984）21。液体MKP培养基是最近开发的培养基，在第2节中描述。它是根据先前报道的方案33，34制备的，该方案与BSK培养基类似，由两个步骤组成：碱性培养基的制备和完整培养基的制备。疏螺旋体培养基可以制备有或没有抗生素，如第3节所述;抗生素的作用是减少接种临床或环境样本时引入的污染细菌，如第4节所述;如果接种纯疏螺旋体培养物，则可能不需要抗生素。制作长期疏螺旋体库存通常很重要，第 5 节描述了这样做的方案。第6节描述了使用这些培养基从临床或环境样品中分离纯感性疏螺旋体克隆。有许多可能的方法36;下面是一个发现有效的。本协议中使用的电镀介质是BSK-II电镀介质37和MKP培养基34的修改（兔血清增加到10%38）。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.7 mL tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>87003-294</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2&#160;&#181;m Sterile syringe filter&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28145-501</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L barrier pipette tip</td>
			<td>Neptune</td>
			<td>BT10XLS3</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Serological pipettes&#160;</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>229011B</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L barrier pipette tip</td>
			<td>Neptune</td>
			<td>BT1000.96</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tube</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>188261</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;L barrier pipette tip</td>
			<td>Neptune</td>
			<td>BT20</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Sterile syringe&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>309661</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L barrier pipette tip</td>
			<td>Neptune</td>
			<td>BT200</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL Screw Cap Culture Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-933C</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL Serological pipettes</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>229025B</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL Sterile syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35% BSA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-7409</td>
			<td>Source is important - see note</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Serological pipettes&#160;</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>229006B</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tube</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>229421</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.5 ml MKP glass tubes&#160;</td>
			<td>Schott</td>
			<td>Schott Nr. 26 135 115</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amikacine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PHR1654</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9528-100MG</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bactrim/rimethoprim/sulfamethoxazole</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PHR1126-1G</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BBL Brucella broth&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>211088</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>302419100</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tubes (yellow top - ACD)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BD&#160;Vacutainer Glass Blood Collection Tubes with Acid Citrate Dextrose (ACD)</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSK-H Medium [w 6% Rabbit serum]&#160;</td>
			<td>Darlynn biologicals</td>
			<td>BB83-500</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge&#160;</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>model 5430</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid TrisodiumSaltDihydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C-8532 100 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL</td>
			<td>Gibco BRL</td>
			<td>21540 500 mL</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21-510-018</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Tubes (Nalgene)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>5000-0020</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep Petri with stacking ring 100 mm &#215; 25 mm</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7741</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>model 1545</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>D12345</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filters for filter sterilization</td>
			<td>Millipore 0.22&#956;m GPExpressPLUS Membrane</td>
			<td>SCGPU05RE</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Difco BD</td>
			<td>214340 500 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Culture Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>99449-20</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G-7021 1 kg</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemafuge (Hematocrit &#38; Immuno hematology centrifuge )</td>
			<td>Labwissen</td>
			<td>Model 3220</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>H-3784 100 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetylglucoseamine</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>A-3286 25 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neopeptone</td>
			<td>Difco&#160; BD</td>
			<td>211681 500 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer Hematocytometer</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Z359629</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase contrast microscope&#160;</td>
			<td>Leitz</td>
			<td></td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5396-1G</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5396</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetboy</td>
			<td>Integra</td>
			<td></td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Standard Balance</td>
			<td>OHAUS</td>
			<td>model TS200S</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvic acid (Na salt)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-8574 25 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16-120-032</td>
			<td>Source is important&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Serum&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R-4505&#160; 100 mL</td>
			<td>Source is important&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rifampicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R3501-1G</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5761&#160;&#160;&#160;&#160; 500 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sufametaxazole&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PHR1126</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Yeastolate</td>
			<td>Difco&#160; BD</td>
			<td>255752 100 g</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470225-044</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>PHR1056</td>
			<td>Standard item - any supplier will do</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cultivation methods of spirochetes from borrelia burgdorferi sensu lato complex and relapsing fever borrelia

疏螺旋体由三组物种组成，莱姆疏螺旋体病（LB）组，也称为B. burgdorferi sensu lato（s.l.），最近重新分类为疏螺旋体，回归热（RF）组Borrelia和第三组爬行动物相关的螺旋体。基于培养的方法仍然是实验室检测研究和临床工作中细菌感染的金标准，因为从体液或组织中培养病原体可直接检测复制的病原体并为研究提供源材料。螺旋疏螺旋体和螺旋疏螺旋体挑剔且生长缓慢，因此通常不用于临床目的培养;然而，文化对于研究是必要的。该协议展示了成功培养LB和RF螺旋体所需的方法和配方，包括来自伯氏螺旋体的所有公认物种，包括B. afzelii，B. americana，B. andersonii，B. bavariensis，B. bissettii/bissettiae，B. burgdorferi sensu stricto （s.s.），加利福尼亚双歧杆菌，卡罗利宁双歧杆菌，智利双歧杆菌，芬兰芽孢杆菌，加里尼双歧杆菌，日本双歧杆菌，库尔滕巴奇双歧杆菌，双歧杆菌， 卢西塔尼双歧杆菌、马里蒂玛双歧杆菌、蛋黄双歧杆菌、斯皮尔曼双歧杆菌、狸猫双歧杆菌、图尔迪双歧杆菌、中华双歧杆菌、瓦莱西亚双歧杆菌、长江双歧杆菌和射频螺旋体、安氏双歧杆菌、苜蓿芽孢杆菌、苜蓿科、鳄鱼双歧杆菌、杜托尼双歧杆菌、西班牙双歧杆菌、波斯双歧杆菌、复发双歧杆菌和宫本双歧杆菌。生长LB和RF螺旋体的基本培养基是Barbour-Stoenner-Kelly（BSK-II或BSK-H）培养基，它可靠地支持螺旋体在已建立的培养物中的生长。为了能够从蜱或宿主来源的样品中培养出新分离的疏螺旋体分离株，其中接种物中的初始螺旋体数量较低，首选改良的Kelly-Pettenkofer（MKP）培养基。这种培养基也支持宫本双歧杆菌的生长。射频螺旋体的培养成功也主要取决于成分的质量。

疏螺旋体 培养基BSK和MKP及其变体是丰富的培养基，其成分需要按顺序制备和灭菌。正确制备后，BSK培养基应为红橙色和透明（图1）。变暖后持续存在的浊度和沉淀表明成分有问题、培养基生产或污染;这种介质最好丢弃。如果将明胶添加到BSK和MKP中，则冷藏时培养基会呈凝胶状;加热后，它将是液体，尽管略带粘性。
纯 疏螺旋体 培养物的?...

Watch this Scientific Journal Video about Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia at JoVE.com

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

体外培养是检测活细菌存在的直接方法。该协议描述了各种螺旋疏螺旋体的培养方法，包括伯氏疏螺旋体复合体，回归热疏螺旋体属和宫本疏螺旋体的培养方法。 这些物种挑剔且生长缓慢，但可以养殖。

伯氏疏螺旋体复合体和回归热疏螺旋体的栽培方法

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

疏螺旋体是螺旋体细菌的一个属，包括三种主要种类。莱姆疏螺旋体病组、回归热组以及在爬行动物中发现的特征较差的组。许多疏螺旋体属具有致病性。细菌培养是检测感染的金标准。研究和临床工作都是如此。体液和组织中的细菌培养证实细菌既有活力又具有复制性。该协议展示了成功培养和保存莱姆疏螺旋体，回归热疏螺旋体和宫本疏螺旋体组所需的方法和配方。为培养以前分离的物种和菌株以及来自环境或哺乳动物来源的新分离株和单克隆分离株提供了方法。博士后研究员Marie-Line Faucillion和Bergstrom实验室的技术员Ingela Nilsson，劳埃德实验室的研究助理Anne Berthold和Rudenko实验室的研究助理Maryna Golovchenko将展示该程序。首先，获取制备一升芭芭拉-斯托纳-凯利或BSK-II培养基所需的试剂。首先通过搅拌水将BSA溶解在烧杯中。然后加入所有干化学品，让它们溶解，然后再加入CMRL。将培养基的pH值调节至7.6。如有必要，使用一摩尔氢氧化钠。接下来，将兔血清添加到培养基中，浓度为6至10%如果细菌生长不强烈，则向培养基中加入另外一种至2%的血清。然后使用0.22微米孔过滤器对培养基进行灭菌。将培养基的库存冷冻成 100 或 400 毫升等分试样。对于回归热菌株，将 100 毫升 7% 无菌明胶加入 400 毫升 BSK-II 培养基中。用7%乙醇对表面和所有材料进行消毒，并立即将其转移到生物安全柜中。在工作开始前对所有非生物材料进行紫外线消毒五分钟。要开始培养，请在培养箱中预热培养基。然后将1毫升甘油原液中的解冻疏螺旋体培养物加入5至15毫升预热的BSK培养基中。在关闭试管之前，几乎完全填充试管以形成微或厌氧气氛。在 37 摄氏度下生长回归热物种，在 33 至 34 摄氏度下生长伯氏疏螺旋体。使用相衬或暗场显微镜以200至400倍放大倍率监测疏螺旋体培养物的生长。为确保细胞均匀分布，将培养物与血清移液器混合或使用三毫升移液管，同时上下移液。然后在血细胞计数器的每一侧加载到10微升培养等分试样进行计数。接下来，用1.7毫升管中的培养基以1比2或1比4的比例稀释指数期疏螺旋体培养物。确定细胞计数时，请适当考虑稀释因子。使用后，用10%稀释的漂白剂和/或70%乙醇喷洒表面和血细胞计数器。为了提取DNA或分离疏螺旋体细胞，将指数相培养物以4， 000 G离心10分钟，并将上清液丢弃在合适的生物危害废物中。使用商业DNA提取试剂盒处理沉淀的细菌，或将其重悬于适当的培养基中进行预期的实验。在每个实验结束时，用乙醇和紫外线辐射对所有设备进行消毒。将液体废物（包括多余的培养物）收集在废瓶中，并加入10%的漂白剂。将瓶子放在 80 摄氏度下，然后再丢弃。对于伯氏疏螺旋体培养物的长期储存，取所需体积的指数相培养物，每毫升1000万至1亿个细胞，加入10%无菌甘油，并通过上下移液混合。将1.5毫升等分试样的混合物转移到两毫升螺旋盖低温小瓶中。将库存小瓶存放在 80 摄氏度。在冰箱中保持每种菌株至少 10 管的库存，要从硬蜱中培养疏螺旋体，请收集成年雌性、雄性和若虫蜱。通过将蜱虫浸入 70% 乙醇中两分钟并在生物安全柜中风干来对蜱虫进行表面消毒。接下来，使用无菌手术刀将蜱虫单独解剖成几块。然后将碎片放入含有1.5毫升补充抗生素的培养基的两毫升管中。在 34 摄氏度下孵育培养物，并通过暗场或相差显微镜检查螺旋体，前两周每周两次，之后每周检查一次，持续六周。要从血液样本中培养疏螺旋体，请轻轻地从管中取出血浆，并将一毫升血浆接种到五毫升预热的改良凯利-佩滕科弗或MKP完全培养基中。对于从皮肤活检培养疏螺旋体，用70%乙醇和过氧化氢对皮肤活检进行表面灭菌。然后将活检样本置于生理盐水中。在玻璃培养皿中浸入生理盐水中，使用无菌剃须刀片将样品切成两到六个较小的块。将切成丁的样品和储存皮肤活检的一毫升盐水转移到五毫升补充有抗生素的预热培养基中，并在33摄氏度下孵育。制作盘子时，加热 300 毫升不含明胶的 1.5x BSK 或 MKP 完全培养基。同时将 200 毫升 1.7% 琼脂糖加热至 55 摄氏度。将液体混合，将每个 15 毫升移液到 16 个深培养皿中，以制作底部琼脂层。将培养基的其余部分保持在水浴中。定量疏螺旋体培养密度并在液体培养基中稀释至所需密度。底板凝固后，将10毫升剩余的琼脂混合物作为顶部琼脂加入含有适当数量的螺旋体的15毫升管中。将悬浮液倒入底部琼脂平板上，放入标记的培养皿中。板凝固后，关闭它们并将它们倒置在 34 至 35 摄氏度的 2.5% 二氧化碳中。正确制备后，BSK培养基呈红橙色和透明。为了进行比较，此处还显示了MKP未接种培养基。竞争细菌的过度生长会在培养基中产生浑浊和结块的物质。通过相差或暗场显微镜目视检查监测细菌生长。在指数阶段，疏螺旋体细胞通常细长、扭结和在某种程度上是模态的。随着培养物在固定相处进入，圆体越来越明显。疏螺旋体细胞是挑剔的，每个物种和菌株甚至分离物在遗传上和通过适应它们被分离的宿主而有所不同。在制作培养基时，适当的成分对疏螺旋体培养的活力甚至培养的生存能力产生巨大影响。螺旋疏螺旋体对培养具有挑战性，但培养是可能的。实验室中的培养是研究这些细菌生物学的跳板。培养为了解疏螺旋体物种的基因组、蛋白质组、进化和宿主病原体相互作用提供了材料。疏螺旋体培养可能需要数周时间才能使螺旋体足够丰度以进行检测。这限制了诊断应用程序。但培养可以显示疏螺旋体物种是否存在、存活和复制，并且可以帮助获得治疗。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

从黄热病的蚊子的血细胞的收集和染色的议定书埃及伊蚊</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

科研

免疫与感染

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial转型和在体外栽培曼氏血吸虫 Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Using Reverse Genetics to Manipulate the NSs Gene of the Rift Valley Fever Virus MP-12 Strain to Improve Vaccine Safety and Efficacy

利用反向遗传学操作的裂谷热病毒MP - 12菌株，以提高疫苗的安全性和有效性的NSS基因

Rift Valley fever virus (RVFV), which causes hemorrhagic fever, neurological disorders or blindness in humans, and a high rate abortion and fetal ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

T细胞实时成像实时信号复合物的形成

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

Establishment and Optimization of a High Throughput Setup to Study Staphylococcus epidermidis and Mycobacterium marinum Infection as a Model for Drug Discovery

建立和高通量安装程序研究优化<em&gt;表皮葡萄球菌</em&gt;和<em&gt;分枝杆菌</em&gt;感染作为模型药物发现

Zebrafish are becoming a valuable tool in the preclinical phase of drug discovery screenings as a whole animal model with high throughput screening ...

Methods to Evaluate Cytotoxicity and Immunosuppression of Combustible Tobacco Product Preparations

方法评估细胞毒性的可燃烟草产品的准备和免疫抑制

Among other pathophysiological changes, chronic exposure to cigarette smoke causes inflammation and immune suppression, which have been linked to ...

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

种植<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus：</em&gt;免疫调节线虫寄生虫及其分泌产物

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

评估细菌病原体免疫反应的声吞噬杀灭试验

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

体外ELISA测试评估狂犬病疫苗效力

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

Essential Components of Borreliella (Borrelia) burgdorferi In Vitro Transcription Assays

Essential Components of Borreliella Borrelia burgdorferi In Vitro Transcription Assays

伯氏疏螺旋体（Borrelia）伯氏疏螺旋体外转录测定的基本成分

Borreliella burgdorferi is a bacterial pathogen with limited metabolic and genomic repertoires. B. burgdorferi transits extracellularly between ...