Name: an efficient clearing protocol for the study of seed development in tomato (solanum lycopersicum l.)
Uploaded: 2022-09-07T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato Solanum lycopersicum L. at JoVE.com

Die Autoren danken Dr. Jie Le und Dr. Xiufen Song für ihre hilfreichen Vorschläge zur differentiellen Interferenzkontrastmikroskopie bzw. zur konventionellen Clearing-Methode. Diese Forschung wurde von der National Natural Science Foundation of China (31870299) und der Youth Innovation Promotion Association der Chinesischen Akademie der Wissenschaften finanziert. Abbildung 2 wurde mit BioRender.com erstellt.

1. Vorbereitung von Lösungen
<ol><li>Bereiten Sie das FAA-Fixiermittel durch Zugabe von 2,5 ml 37% Formaldehyd, 2,5 ml Eisessig und 45 ml 70% Ethanol in einem 50-ml-Zentrifugenröhrchen vor. Vortex und lagern Sie es bei 4 °C. FAA Fixiermittel kurz vor Gebrauch frisch zubereiten. ACHTUNG: 37% Formaldehyd ist ätzend und potenziell krebserregend, wenn es exponiert oder eingeatmet wird. Das Fixiermittel muss in einem Abzug unter Tragen geeigneter persönlicher Schutzausrüstung durchgeführt werden....

<ol>
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Im Vergleich zum mechanischen Schneiden ist die Clearing-Technologie für die dreidimensionale Bildgebung vorteilhafter, da sie die Integrität von Pflanzengeweben oder Organen bewahrt16. Herkömmliche Clearing-Protokolle sind aufgrund des leichteren Eindringens chemischer Lösungen oft auf kleine Proben beschränkt. Tomatensamen sind eine problematische Probe für die Gewebereinigung, da sie etwa 70-mal größer sind als ein Arabidopsis-Samen und mehr Durchlässigkeitsbarrieren aufweisen...

Tomate (S. lycopersicum L.) ist eine der wichtigsten Gemüsekulturen der Welt, mit einer Produktion von 186,8 Millionen Tonnen fleischigen Früchten von 5,1 Millionen Hektar im Jahr 20201. Es gehört zur großen Familie der Solanaceae mit etwa 2.716 Arten2, darunter viele kommerziell wichtige Kulturen wie Auberginen, Paprika, Kartoffeln und Tabak. Die Kulturtomate ist eine diploide Art (2n = 2x = 24) mit einer Genomgröße von ca. 900Mb3. Seit langem werden große Anstrengungen unternommen, um Tomatendomestizierung und -züchtung zu züchten, indem wünschenswerte Merkmale aus wilden Solanum spp. Es gibt über 5.000 Tomatenakzessionen, die im Tomato Genetics Resource Center aufgeführt sind, und mehr als 80.000 Keimplasma von Tomaten werden weltweit gelagert4. Die Tomatenpflanze ist mehrjährig im Gewächshaus und vermehrt sich durch Samen. Ein reifer Tomatensamen besteht aus drei Hauptkompartimenten: einem ausgewachsenen Embryo, einem zellulären Endosperm und einer harten Samenschale 5,6 (Abbildung 1A). Nach doppelter Befruchtung geht die Entwicklung von zellulärem Endosperm der Entwicklung von Zygoten voraus. Bei ~5-6 Tagen nach der Blüte (DAF) wird erstmals ein zweizelliger Proembryo beobachtet, wenn das Endosperm aus sechs bis acht Kernen besteht7. Bei Solanum pimpinellifolium nähert sich der Embryo nach 20 DAF seiner endgültigen Größe, und die Samen sind nach 32 DAF8 für die Keimung geeignet. Wenn sich der Embryo entwickelt, wird das Endosperm allmählich absorbiert und nur eine kleine Menge Endosperm verbleibt im Samen. Das restliche Endosperm besteht aus mikropylarem Endosperm, das die Radikelspitze umgibt, und seitlichem Endosperm im Rest des Samens 9,10. Die äußere Samenhülle wird aus verdickter und verholzter äußerer Epidermis des Integuments entwickelt, und mit den abgestorbenen Schichten von Integumentresten bilden sie eine harte Schale, um den Embryo und das Endosperm zu schützen5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64445/64445fig01.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung eines reifen Samens in Solanum lycopersicum und Arabidopsis thaliana. (A) Längsanatomie eines reifen Tomatensamens. (B) Längsanatomie eines reifen Arabidopsis-Samens. Ein reifer Tomatensamen ist etwa 70-mal größer als ein Arabidopsis-Samen. Maßstabsbalken = (A) 400 μm, (B) 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64445/64445fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
Die Produktion hochwertiger Tomatensamen hängt von der Koordination zwischen dem Embryo, dem Endosperm und den mütterlichen Samenbestandteilen ab11. Die Analyse von Schlüsselgenen und Netzwerken in der Samenentwicklung erfordert eine tiefe und vollständige phänotypische Aufzeichnung von mutierten Samen. Konventionelle Einbettungsschnitttechniken, wie der Halbdünnschliff und der Paraffinschnitt, werden häufig auf Tomatensamen angewendet, um die lokalen und feineren Strukturen des Embryoszu beobachten 12,13,14,15. Die Analyse der Seed-Entwicklung aus dünnen Schnitten ist jedoch in der Regel mühsam und es fehlt die räumliche Auflösung der z-Achse. Im Vergleich dazu ist die Gewebereinigung eine schnelle und effiziente Methode, um das Entwicklungsstadium von embryonalen Defekten zu bestimmen, die am wahrscheinlichsten auftreten16. Das Clearing-Verfahren verringert die Undurchsichtigkeit des inneren Gewebes durch Homogenisierung des Brechungsindex mit einem oder mehreren biochemischen Mitteln16. Die gesamte Gewebereinigung ermöglicht die Beobachtung einer pflanzlichen Gewebestruktur, ohne ihre Integrität zu zerstören, und die Kombination von Clearing-Technologie und dreidimensionaler Bildgebung ist zu einer idealen Lösung geworden, um Informationen über die Morphologie und den Entwicklungszustand eines Pflanzenorgans zu erhalten17,18. Im Laufe der Jahre wurden Samenreinigungstechniken bei verschiedenen Pflanzenarten eingesetzt, darunter Arabidopsis thaliana, Hordeum vulgare und Beta vulgaris 19,20,21,22,23. Unter diesen war die Whole-mount-Eizellenreinigungstechnologie ein effizienter Ansatz zur Untersuchung der Samenentwicklung von Arabidopsis, aufgrund ihrer geringen Größe, 4-5 Schichten der Samenhüllenzelle und des nuklearen Endosperms24,25. Mit der kontinuierlichen Aktualisierung verschiedener Clearing-Mischungen, wie dem Auftauchen der Hoyer-Lösung26, wurden die inneren Strukturen der Gerstenzelle mit einem hohen Grad an Klarheit abgebildet, obwohl ihr Endosperm den Großteil der Samen ausmacht. Die Embryogenese von Zuckerrüben kann durch Reinigung in Kombination mit Vakuumbehandlung und Erweichung mit Salzsäurebeobachtet werden 19. Im Gegensatz zu den oben genannten Arten wurden jedoch keine embryologischen Beobachtungen durch Clearing-Protokolle in Tomatensamen berichtet. Dies verhindert eine detaillierte Untersuchung der Embryonal- und Samenentwicklung von Tomaten.
Chloralhydrat wird üblicherweise als Reinigungslösung verwendet, die es ermöglicht, die eingetauchten Gewebe und Zellen auf verschiedenen optischen Ebenen darzustellen und die Zellen oder Gewebekomponenten im Wesentlichen zu erhalten 27,28,29. Das auf Chloralhydrat basierende Clearing-Protokoll wurde erfolgreich für die gesamte Reinigung von Samen verwendet, um den Embryo und das Endosperm von Arabidopsis21,28 zu beobachten. Diese Clearing-Lösung ist jedoch nicht effizient bei der Reinigung von Tomatensamen, die undurchlässiger sind als Arabidopsis-Samen. Zu den physischen Barrieren gehören: (1) das Tomatenintegument hat fast 20 Zellschichten bei 3 bis 15 DAF 30,31, (2) das Tomatenendosperm ist zellulär, nicht vom Kerntyp 32, und (3) Tomatensamen sind etwa70-mal größer in der Größe33,34 und (4) produzieren große Mengen an Samenmantelschleimstoffen, die das Eindringen von Reinigungsreagenzien blockieren und die Visualisierung von Embryozellen beeinträchtigen.
Daher stellt dieser Bericht eine optimierte Chloralhydrat-basierte Clearing-Methode für die vollständige Reinigung von Tomatensamen in verschiedenen Stadien vor, die eine tiefe Bildgebung des Embryo-Entwicklungsprozesses ermöglicht (Abbildung 2).

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1,000 &#181;L pipette</td>
			<td>GILSON</td>
			<td>FA10006M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>T-1000-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% formaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>685-2013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,000 &#181;L pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>biosharp</td>
			<td>BS-5000-TL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol</td>
			<td>BOYUAN</td>
			<td>678-2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle glass</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB800-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral Hydrate</td>
			<td>Meryer</td>
			<td>M13315-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Leica</td>
			<td>384200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIC microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Imager A1</td>
			<td>10x, 20x and 40x magnification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant</td>
			<td>QIKELONGAN</td>
			<td>17-9185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting needle</td>
			<td>Bioroyee</td>
			<td>17-9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flower nutrient soil</td>
			<td>FANGJIE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>HAIOU</td>
			<td>4-94</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid</td>
			<td>BOYUAN</td>
			<td>676-2007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G8190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>RET basic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Tom</td>
			<td>Tomato Genetics Resource Center</td>
			<td>LA3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>QILINBEIER</td>
			<td>QB-206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seeding substrate</td>
			<td>PINDSTRUP</td>
			<td>LV713/018-LV252</td>
			<td>Screening:0-10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single concave slide</td>
			<td>HUABODEYI</td>
			<td>HBDY1895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S8 APO</td>
			<td>1x to 4x magnification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tin foil</td>
			<td>ZAOWUFANG</td>
			<td>613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>SHIDING</td>
			<td>SHB-III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex meter</td>
			<td>Silogex</td>
			<td>MX-S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an efficient clearing protocol for the study of seed development in tomato (solanum lycopersicum l.)

Tomate (Solanum lycopersicum L.) ist eine der wichtigsten Cash Crops weltweit. Der Tomatensamen ist ein wichtiges Modell für das Studium der Genetik und Entwicklungsbiologie während der Pflanzenvermehrung. Die Visualisierung einer feineren embryonalen Struktur innerhalb eines Tomatensamens wird oft durch Samenhüllenschleim, mehrzellige Schichtintegument und ein dickwandiges Endosperm behindert, das durch mühsames Einbetten aufgelöst werden muss. Eine einfachere Alternative ist der Einsatz von Gewebereinigungstechniken, die das Saatgut mit chemischen Mitteln nahezu transparent machen. Obwohl herkömmliche Clearingverfahren einen tiefen Einblick in kleinere Samen mit dünnerer Samenhülle ermöglichen, ist die Klärung von Tomatensamen vor allem in den späten Entwicklungsstadien eine technische Herausforderung.
Hier wird ein schnelles und arbeitssparendes Clearing-Protokoll vorgestellt, um die Entwicklung von Tomatensamen 3 bis 23 Tage nach der Blüte zu beobachten, wenn die embryonale Morphologie fast abgeschlossen ist. Diese Methode kombiniert eine in Arabidopsis weit verbreitete Chloralhydrat-basierte Reinigungslösung mit anderen Modifikationen, einschließlich des Wegfalls der Formalin-Aceto-Alkohol (FAA) -Fixierung, der Zugabe von Natriumhypochlorit-Behandlung von Samen, der Entfernung der erweichten Samenschichtschleimhaut sowie des Waschens und der Vakuumbehandlung. Diese Methode kann zur effizienten Reinigung von Tomatensamen in verschiedenen Entwicklungsstadien angewendet werden und ist nützlich bei der vollständigen Überwachung des Entwicklungsprozesses von mutierten Samen mit guter räumlicher Auflösung. Dieses Clearing-Protokoll kann auch auf die Tiefenbildgebung anderer kommerziell wichtiger Arten in den Solanaceae angewendet werden.

Wenn Tomatensamen mit einer herkömmlichen Methode wie bei Arabidopsis entfernt wurden, blockierten dichte Endospermzellen die Visualisierung früher Tomatenembryonen bei 3 DAF und 6 DAF (Abbildung 3A,B). Als das Gesamtvolumen des Embryos zunahm, war ein kugelförmiger Embryo bei 9 DAF kaum zu unterscheiden (Abbildung 3C). Als die Samengröße jedoch weiter zunahm, nahm ihre Permeabilität ab, was zu einem unscharfen Herzembryo bei 12 D...

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An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato Solanum lycopersicum L.

Der Tomatensamen ist ein wichtiges Modell für das Studium der Genetik und Entwicklungsbiologie während der Pflanzenvermehrung. Dieses Protokoll ist nützlich, um Tomatensamen in verschiedenen Entwicklungsstadien zu entfernen, um die feinere embryonale Struktur zu beobachten.

Ein effizientes Clearing-Protokoll zur Untersuchung der Saatgutentwicklung bei Tomaten (Solanum lycopersicum L.)

Tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the major cash crops worldwide. The tomato seed is an important model for studying genetics and developmental ...

Diese Methode kann Forschern helfen, schnell und mühelos abnormale Perioden der Tomatenembryonalentwicklung zu finden. Der Hauptvorteil dieses Protokolls ist eine Behandlung von Tomatensamen mit Natriumhypochlorit, die eine Grundlage für die Beobachtung von Tomatenembryonen bietet. Beginnen Sie mit der chemischen Zubereitung und Ernte der Solanum lycopersicum Früchte drei bis 23 Tage nach der Blüte oder DAF.Legen Sie die Früchte sofort auf Eis und teilen Sie sie in frühe, mittlere und späte Früchte, basierend auf den Tagen nach der Blüte. Brechen Sie die frühen Früchte, legen Sie sie auf einen Objektträger und sammeln Sie frische Samen vorsichtig mit einer Präzisionszange unter 1x bis 4x Vergrößerung des Stereomikroskops. Für mittlere und späte Früchte brechen Sie die Früchte und sammeln Sie frische Samen direkt mit einer Präzisionszange.Bei der herkömmlichen Methode werden die frisch gesammelten Samen sofort in ein Zwei-Milliliter-Zentrifugenröhrchen mit 1,5 Milliliter FAA-Fixiermittel überführt und das Röhrchen bei 5 U/min für vier Stunden bei Raumtemperatur auf den Orbitalschüttler gelegt. Dann dehydrieren Sie die Samen in 70% 95% und 100% Ethanol für jeweils eine Stunde auf einem Orbitalschüttler bei 5 U/min. Wenn Sie fertig sind, legen Sie den Samen in die drei bis fünf Tropfen der auf dem Objektträger vorhandenen Reinigungslösung und bedecken Sie ihn vorsichtig mit einem Deckglas.Verwenden Sie eine einzelne konkave Folie für mittlere und späte Samen. Abhängig von den Entwicklungsstadien der Samen inkubieren Sie sie bei Raumtemperatur zur Reinigung. Nach der Inkubation beobachten Sie die Proben mit einem differentiellen Interferenzkontrast oder einem DIC-Mikroskop, das mit einer Digitalkamera bei 10-facher, 20-facher und 40-facher Vergrößerung ausgestattet ist.Passen und optimieren Sie die Durchlichthelligkeit, den DIC-Schieberegler und die Kondensatorblende in Echtzeit für jede Probe und erfassen Sie Bilder. Die frischen Samen der gebrochenen Früchte werden in ein Zwei-Milliliter-Zentrifugenröhrchen mit 1,5 Milliliter Desinfektionslösung überführt. Inkubieren Sie die Proben auf einem Orbitalschüttler bei 30 U/min für drei bis 50 Minuten bei Raumtemperatur.Sobald der innerste Saatmantelumriss deutlich sichtbar ist, entsorgen Sie die Desinfektionslösung. Bei mittleren und späten Samen die Samen auf einen Objektträger übertragen. Verwenden Sie eine Pinzette und eine Seziernadel, um den Samenschleim unter 1x bis 4-facher Vergrößerung des Stereomikroskops zu entfernen.Die Samen werden mit einer Pinzette wieder in das ursprüngliche Zentrifugenröhrchen überführt. Waschen Sie sie fünfmal in 1,5 Milliliter entionisiertem Wasser für jeweils 10 Sekunden und entsorgen Sie das entionisierte Wasser. Als nächstes fügen Sie das doppelte Volumen der Clearing-Lösung zu den Samen hinzu.Abhängig von der Saatstufe geben Sie die intermittierende Vakuumbehandlung für null bis 50 Minuten, mit 10-Minuten-Intervallen nach jeder Vakuumbehandlung von 10 Minuten. Ersetzen Sie nach der Vakuumbehandlung die Clearing-Lösung. Um die Reinigung der Samen zu erleichtern, stellen Sie das Zentrifugenröhrchen 30 Minuten bis sieben Tage lang bei Raumtemperatur vor Licht geschützt.Bei späten Embryonen ersetzen Sie die Lösung täglich durch eine frische Reinigungslösung, gefolgt von einer Vakuumbehandlung der Samen für 10 Minuten. Legen Sie die gelöschten Samen auf den Objektträger oder den einzelnen konkaven Objektträger. Mit dem DIC-Mikroskop, das mit einer Digitalkamera ausgestattet ist, können Sie die Helligkeit des Durchlichts, den DIC-Schieberegler und die Kondensatorapertur in Echtzeit für jede Probe einstellen und optimieren und das Bild aufnehmen.Bei der herkömmlichen Methode zur Reinigung von S.lycopersicum-Samen blockierten die dichten Endospermzellen die Visualisierung früher Embryonen bei 3 und 6 DAF. Die verminderte Permeabilität während des Samenwachstums führte nach 9 DAF zu unscharfen Bildern. Der Samenschleim und die Samenhülle wurden allmählich dichter, wodurch das Eindringen von Klärmitteln ab 13 DAF verhindert wurde.Die Umrisse des Embryos in 14 bis 19 DAF-Samen waren trotz der verlängerten Behandlungszeit von sieben Tagen extrem verschwommen. Die innere Struktur in 22 DAF-Samen war völlig unsichtbar. Der abgestreifte Samenmantelschleim, der von den epidermalen Zellen der Samenhülle produziert wurde, war ab 13 DAF prominent.Die Natriumhypochlorit-Behandlung ermöglichte eine eindeutige Identifizierung der inneren Samenhülle und die Ablösung des größten Teils der anhaftenden Schleimstoffe ohne Samenschäden. Im optimierten Clearing-Protokoll zeigten die Samen in allen getesteten Entwicklungsstadien eine zufriedenstellende Transparenz. Die verschiedenen Zellschichten der Samenhülle bei 3 DAF, unterscheidbare Endospermzellen bei 5 DAF, der stabförmige Embryo bei sieben DAF, das kugelförmige Stadium bei 9 DAF und das Herzstadium bei 11 DAF wurden beobachtet.Im optimierten Protokoll wurde der Grad der Kräuselung von Keimblättern und des apikalen Meristems in verschiedenen Stadien der Embryonalentwicklung sehr leicht erfasst. Die Sterilisation entfernt Samenschleim und Samenhüllenpigment, was die Penetration und Visualisierung des Saatguts verbessert. Die Vakuumbehandlung kann das Eindringen von Reinigungslösungen beschleunigen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato (Solanum lycopersicum L.)

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Effizienten Gentransfer in Küken Netzhäute für primäre Zellkulturstudien: Eine<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Elektroporation Ansatz

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse von Zebrafisch-Larven Skelettmuskel Integrität mit Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Entwicklung eines<em&gt; In Vitro</em&gt; Assay Kontraktionsfunktion von mesenchymalen Zellen, die Unterzog Epithelial-mesenchymale Transition zur Bewertung

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Entwicklung einer fibrotischen Leber Modell in Zebrabärbling Ethanol-induzierte zur Untersuchung Progenitor-vermittelte Zell Hepatozyten-Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Co-localization of Cell Lineage Markers and the Tomato Signal

Co-Lokalisierung von Zell Lineage Marker und die Tomate Signal

The cell lineage tracing system has been used predominantly in developmental biology studies. The use of Cre recombinase allows for the activation of the ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Organotypischen Kultur-Methode, die Entwicklung der embryonalen Gewebe zu studieren

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

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Computergestützte Analyse der Keimbahn Caenorhabditis Elegans , die Verteilung der Kerne, Proteine und das Zytoskelett zu studieren

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

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Eine In-Vivo -Methode, um die Maus Blut-Hoden-Schranke Integrität zu studieren

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

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Ein Protokoll für Immunhistochemie und RNA-in-situ-Verteilung im frühen Drosophila-Embryo

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...

Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

Immunfluoreszenz, Clearing und Multiphotonenmikroskopie des gesamten Eierstocks zur quantitativen 3D-Analyse der sich entwickelnden Ovarialreserve in der Maus