Name: an efficient clearing protocol for the study of seed development in tomato (solanum lycopersicum l.)
Uploaded: 2022-09-07T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato Solanum lycopersicum L. at JoVE.com

Los autores agradecen al Dr. Jie Le y al Dr. Xiufen Song por sus útiles sugerencias sobre la microscopía de contraste de interferencia diferencial y el método de limpieza convencional, respectivamente. Esta investigación fue financiada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31870299) y la Asociación de Promoción de la Innovación Juvenil de la Academia China de Ciencias. La figura 2 se creó con BioRender.com.

1. Preparación de soluciones
<ol><li>Prepare el fijador FAA agregando 2.5 ml de formaldehído al 37%, 2.5 ml de ácido acético glacial y 45 ml de etanol al 70% en un tubo de centrífuga de 50 ml. Vortex y almacénelo a 4 °C. Prepare el fijador FAA justo antes de usar. PRECAUCIÓN: El formaldehído al 37% es corrosivo y potencialmente cancerígeno si se expone o inhala. El fijador debe realizarse en una campana extractora mientras se usa el equipo de protección personal adecuado.</li>
	<li>Prepa...

<ol>
	<li>. FAOSTAT Available from: <a target="_blank" href="https://www.fao.org/faostat/en/#data/QCL">https://www.fao.org/faostat/en/#data/QCL</a> (2022)</li><li>Olmstead, R. G., Bohs, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+summary+of+molecular+systematic+research+in+Solanaceae:+1982-2006.">A summary of molecular systematic research in Solanaceae: 1982-2006.</a> Acta Horticulturae. 745, 255-268 (2007).</li><li>Consortium, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tomato+genome+sequence+provides+insights+into+fleshy+fruit+evolution.">The tomato genome sequence provides insights into fleshy fruit evolution.</a> Nature. 485 (7400), 635-641 (2012).</li><li>Ebert, A. W., Chou, Y. 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En comparación con la sección mecánica, la tecnología de limpieza es más ventajosa para la obtención de imágenes tridimensionales, ya que conserva la integridad de los tejidos u órganos vegetales16. Los protocolos de limpieza convencionales a menudo se limitan a muestras pequeñas debido a la penetración más fácil de las soluciones químicas. La semilla de tomate es una muestra problemática para la limpieza de tejidos porque es aproximadamente 70 veces más grande que una semilla de <e...

El tomate (S. lycopersicum L.) es uno de los cultivos hortícolas más importantes del mundo, con una producción de 186,8 millones de toneladas de frutos carnosos de 5,1 millones de hectáreas en 20201. Pertenece a la gran familia Solanaceae con alrededor de 2.716 especies2, incluyendo muchos cultivos comercialmente importantes como berenjenas, pimientos, patatas y tabaco. El tomate cultivado es una especie diploide (2n = 2x = 24) con un tamaño de genoma de aproximadamente 900 Mb3. Durante mucho tiempo, se ha hecho un gran esfuerzo hacia la domesticación y reproducción del tomate mediante la selección de rasgos deseables de Solanum spp. silvestres. Hay más de 5.000 accesiones de tomate listadas en el Centro de Recursos Genéticos del Tomate y más de 80.000 germoplasma de tomates se almacenan en todo el mundo4. La planta de tomate es perenne en el invernadero y se propaga por semillas. Una semilla de tomate madura consta de tres compartimentos principales: un embrión adulto, endospermo residual de tipo celular y una capa dura de semilla 5,6 (Figura 1A). Después de la doble fertilización, el desarrollo del endospermo de tipo celular precede al desarrollo de cigotos. A ~ 5-6 días después de la floración (DAF), el proembrión bicelular se observa por primera vez cuando el endospermo consta de seis a ocho núcleos7. En Solanum pimpinellifolium, el embrión se acerca a su tamaño final después de 20 DAF, y las semillas son viables para la germinación después de 32 DAF8. A medida que el embrión se desarrolla, el endospermo se absorbe gradualmente y solo queda una pequeña cantidad de endospermo en la semilla. El endospermo residual consiste en endospermo micropilar que rodea la punta de la radícula, y endospermo lateral en el resto de la semilla 9,10. La capa externa de la semilla se desarrolla a partir de la epidermis externa engrosada y lignificada del tegumento, y con las capas muertas de restos de tegumento, forman una cáscara dura para proteger el embrión y el endospermo5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64445/64445fig01.jpg"> Figura 1: Representación esquemática de una semilla madura en Solanum lycopersicum y Arabidopsis thaliana. (A) Anatomía longitudinal de una semilla de tomate maduro. (B) Anatomía longitudinal de una semilla madura de Arabidopsis. Una semilla de tomate maduro es aproximadamente 70 veces más grande en tamaño que una semilla de Arabidopsis. Barras de escala = (A) 400 μm, (B) 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64445/64445fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
La producción de semillas de tomate de alta calidad depende de la coordinación entre el embrión, el endospermo y los componentes de la semilla materna11. La disección de genes y redes clave en el desarrollo de semillas requiere un registro fenotípico profundo y completo de semillas mutantes. Las técnicas convencionales de embutido-seccionamiento, como la sección semifina y la sección de parafina, se aplican ampliamente a las semillas de tomate para observar las estructuras locales y más finas del embrión12,13,14,15. Sin embargo, analizar el desarrollo de la semilla a partir de secciones delgadas suele ser laborioso y carece de resolución espacial del eje z. En comparación, la limpieza del tejido es un método rápido y eficiente para identificar la etapa de desarrollo de los defectos embrionarios que tienen más probabilidades de ocurrir16. El método de depuración reduce la opacidad del tejido interno homogeneizando el índice de refracción con uno o más agentes bioquímicos16. El aclaramiento de tejido completo permite observar la estructura de un tejido vegetal sin destruir su integridad, y la combinación de la tecnología de limpieza y la imagen tridimensional se ha convertido en una solución ideal para obtener información sobre la morfología y el estado de desarrollo de un órgano vegetal17,18. A lo largo de los años, las técnicas de limpieza de semillas se han utilizado en varias especies de plantas, incluyendo Arabidopsis thaliana, Hordeum vulgare y Beta vulgaris 19,20,21,22,23. Entre estos, la tecnología de limpieza de óvulos de montaje completo ha sido un enfoque eficiente para estudiar el desarrollo de semillas de Arabidopsis, debido a su pequeño tamaño, 4-5 capas de la célula de recubrimiento de la semilla y el endospermo de tipo nuclear24,25. Con la actualización continua de diferentes mezclas de aclaramiento, como la aparición de la solución de Hoyer26, las estructuras internas del óvulo de cebada fueron fotografiadas con un alto grado de claridad, aunque su endospermo constituye la mayor parte de las semillas. La embriogénesis de la remolacha azucarera se puede observar mediante la limpieza combinada con el tratamiento al vacío y el ablandamiento con ácido clorhídrico19. Sin embargo, a diferencia de las especies mencionadas anteriormente, no se han reportado observaciones embriológicas mediante protocolos de limpieza en semillas de tomate. Esto impide una investigación detallada sobre el desarrollo embrionario y de semillas de los tomates.
El hidrato de cloral se utiliza comúnmente como una solución de limpieza que permite que los tejidos y células sumergidos se muestren en diferentes planos ópticos, y preserva sustancialmente las células o componentes tisulares27,28,29. El protocolo de limpieza basado en hidrato de cloral se ha utilizado con éxito para el aclaramiento de semillas de montaje completo para observar el embrión y el endospermo de Arabidopsis21,28. Sin embargo, esta solución de limpieza no es eficiente para limpiar las semillas de tomate, que son más impermeables que las semillas de Arabidopsis. Las barreras físicas incluyen: (1) el tegumento del tomate tiene casi 20 capas celulares de 3 a 15 DAF 30,31, (2) el endospermo del tomate es de tipo celular, no de tipo nuclear 32, y (3) las semillas de tomate son aproximadamente 70 veces más grandes en tamaño33,34 y (4) producen grandes cantidades de mucílago de recubrimiento de semillas, lo que bloquea la penetración de los reactivos de limpieza y afecta la visualización de las células embrionarias.
Por lo tanto, este informe presenta un método optimizado de limpieza basado en hidrato de cloral para la limpieza de semillas de tomate de montaje completo en diferentes etapas, lo que permite obtener imágenes profundas del proceso de desarrollo embrionario (Figura 2).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,000 &#181;L pipette</td>
			<td>GILSON</td>
			<td>FA10006M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>T-1000-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml centrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>37% formaldehyde</td>
			<td>DAMAO</td>
			<td>685-2013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,000 &#181;L pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5,000 &#181;L pipette tips</td>
			<td>biosharp</td>
			<td>BS-5000-TL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol</td>
			<td>BOYUAN</td>
			<td>678-2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle glass</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB800-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral Hydrate</td>
			<td>Meryer</td>
			<td>M13315-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Leica</td>
			<td>384200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIC microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Imager A1</td>
			<td>10x, 20x and 40x magnification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant</td>
			<td>QIKELONGAN</td>
			<td>17-9185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting needle</td>
			<td>Bioroyee</td>
			<td>17-9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flower nutrient soil</td>
			<td>FANGJIE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>HAIOU</td>
			<td>4-94</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial Acetic Acid</td>
			<td>BOYUAN</td>
			<td>676-2007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G8190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>RET basic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Tom</td>
			<td>Tomato Genetics Resource Center</td>
			<td>LA3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>QILINBEIER</td>
			<td>QB-206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seeding substrate</td>
			<td>PINDSTRUP</td>
			<td>LV713/018-LV252</td>
			<td>Screening:0-10 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single concave slide</td>
			<td>HUABODEYI</td>
			<td>HBDY1895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>S8 APO</td>
			<td>1x to 4x magnification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tin foil</td>
			<td>ZAOWUFANG</td>
			<td>613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>SHIDING</td>
			<td>SHB-III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex meter</td>
			<td>Silogex</td>
			<td>MX-S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an efficient clearing protocol for the study of seed development in tomato (solanum lycopersicum l.)

El tomate (Solanum lycopersicum L.) es uno de los principales cultivos comerciales en todo el mundo. La semilla de tomate es un modelo importante para estudiar la genética y la biología del desarrollo durante la reproducción de las plantas. La visualización de la estructura embrionaria más fina dentro de una semilla de tomate a menudo se ve obstaculizada por el mucílago de la capa de semillas, el tegumento de capas múltiples y un endospermo de paredes gruesas, que debe resolverse mediante una laboriosa sección de incrustación. Una alternativa más simple es emplear técnicas de limpieza de tejidos que hacen que la semilla sea casi transparente utilizando agentes químicos. Aunque los procedimientos convencionales de limpieza permiten una visión profunda de las semillas más pequeñas con una capa de semilla más delgada, la limpieza de las semillas de tomate sigue siendo un desafío técnico, especialmente en las últimas etapas de desarrollo.
Aquí se presenta un protocolo de limpieza rápido y que ahorra mano de obra para observar el desarrollo de las semillas de tomate de 3 a 23 días después de la floración, cuando la morfología embrionaria está casi completa. Este método combina la solución de limpieza a base de hidrato de cloral ampliamente utilizada en Arabidopsis con otras modificaciones, incluida la omisión de la fijación de formalina-aceto-alcohol (FAA), la adición del tratamiento con hipoclorito de sodio de las semillas, la eliminación del mucílago de la cubierta de semilla ablandada y el lavado y el tratamiento al vacío. Este método se puede aplicar para la limpieza eficiente de semillas de tomate en diferentes etapas de desarrollo y es útil en el monitoreo completo del proceso de desarrollo de semillas mutantes con buena resolución espacial. Este protocolo de limpieza también se puede aplicar a imágenes profundas de otras especies comercialmente importantes en las solanáceas.

Cuando las semillas de tomate se eliminaron utilizando un método convencional como en Arabidopsis, las células densas del endospermo bloquearon la visualización de embriones de tomate tempranos a 3 DAF y 6 DAF (Figura 3A, B). A medida que aumentaba el volumen total del embrión, un embrión globular apenas se distinguía a 9 DAF (Figura 3C). Sin embargo, a medida que el tamaño de la semilla continuó aumentando, su permeabilidad dis...

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An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato Solanum lycopersicum L.

La semilla de tomate es un modelo importante para estudiar la genética y la biología del desarrollo durante la reproducción de las plantas. Este protocolo es útil para limpiar las semillas de tomate en diferentes etapas de desarrollo para observar la estructura embrionaria más fina.

Un protocolo de limpieza eficiente para el estudio del desarrollo de semillas en tomate (Solanum lycopersicum L.)

Tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the major cash crops worldwide. The tomato seed is an important model for studying genetics and developmental ...

Este método puede ayudar a las investigaciones a encontrar rápidamente y sin esfuerzo períodos anormales de desarrollo del embrión de tomate. La principal ventaja de este protocolo es un tratamiento de semillas de tomate con hipoclorito de sodio que proporciona una base para la observación de embriones de tomate. Comience con la preparación química y la cosecha de los frutos de Solanum lycopersicum de tres a 23 días después de la floración o DAF.Inmediatamente ponga las frutas en hielo y divídalas en frutas tempranas, medias y tardías, según los días posteriores a la floración. Rompa la fruta temprana, colóquela en un portaobjetos y recoja cuidadosamente las semillas frescas con pinzas de precisión con un aumento de 1x a 4x del microscopio estéreo. Para frutas medias y tardías, rompa la fruta y recoja directamente las semillas frescas con pinzas de precisión.En el método convencional, transfiera las semillas recién recolectadas inmediatamente a un tubo centrífugo de dos mililitros que contenga 1,5 mililitros de fijador FAA y coloque el tubo en el agitador orbital a 5 rpm durante cuatro horas a temperatura ambiente. Luego deshidratar las semillas en 70% 95% y 100% etanol durante una hora cada una en un agitador orbital a 5 rpm. Una vez hecho esto, coloque la semilla en las tres a cinco gotas de solución de limpieza presente en el portaobjetos y cúbrala suavemente con un cubreobjetos.Use un solo portaobjetos cóncavo para semillas medias y tardías. Dependiendo de las etapas de desarrollo de las semillas, incubarlas a temperatura ambiente para su limpieza. Después de la incubación, observe las muestras con un contraste de interferencia diferencial, o microscopio DIC equipado con una cámara digital con aumentos de 10x, 20x y 40x.Ajuste y optimice el brillo de la luz transmitida, el control deslizante DIC y la apertura del condensador en tiempo real para cada muestra y capture imágenes. Transfiera las semillas frescas recolectadas de las frutas rotas a un tubo de centrífuga de dos mililitros que contenga 1,5 mililitros de solución desinfectante. Incubar las muestras en un agitador orbital a 30 rpm durante tres a 50 minutos a temperatura ambiente.Una vez que el contorno de la capa de semilla más interna sea claramente visible, deseche la solución desinfectante. Para semillas medias y tardías, transfiera las semillas a un portaobjetos. Use fórceps y una aguja de disección para extraer el mucílago de semilla con un aumento de 1x a 4x del microscopio estéreo.Transfiera las semillas de nuevo al tubo de centrífuga original usando pinzas. Lávelos cinco veces en 1,5 mililitros de agua desionizada durante 10 segundos cada uno, y deseche el agua desionizada. A continuación, agregue el doble volumen de la solución de limpieza a las semillas.Dependiendo de la etapa de semilla, administre el tratamiento de vacío intermitente de cero a 50 minutos, con intervalos de 10 minutos después de cada tratamiento al vacío de 10 minutos. Después del tratamiento con vacío, reemplace la solución de aclaración. Para facilitar el aclarado de las semillas, coloque el tubo de centrífuga protegido de la luz durante 30 minutos a siete días a temperatura ambiente.En el caso de embriones tardíos, reemplace la solución diariamente con una solución de aclaramiento fresca, seguido de someter las semillas a un tratamiento de vacío durante 10 minutos. Coloque las semillas limpias en el portaobjetos o en un solo portaobjetos cóncavo. Utilizando el microscopio DIC equipado con una cámara digital, ajuste y optimice el brillo de la luz transmitida, el control deslizante DIC y la apertura del condensador en tiempo real para cada muestra y capture la imagen.En el método convencional de limpieza de semillas de S.lycopersicum, las células densas del endospermo bloquearon la visualización de embriones tempranos a 3 y 6 DAF. La disminución de la permeabilidad durante el crecimiento de la semilla dio lugar a imágenes borrosas después de 9 DAF. El mucílago de la semilla y la cubierta de la semilla se volvieron gradualmente más densos, evitando la penetración de agentes de limpieza desde 13 DAF en adelante.El contorno del embrión dentro de 14 a 19 semillas DAF estaba extremadamente borroso, a pesar del tiempo de tratamiento extendido de siete días. La estructura interna de 22 semillas DAF era completamente invisible. El mucílago de la cubierta de semilla despojado producido por las células epidérmicas de la cubierta de la semilla fue prominente desde 13 DAF en adelante.El tratamiento con hipoclorito de sodio permitió una identificación clara de la capa interna de la semilla y el desprendimiento de la mayor parte del mucílago adherente sin dañar la semilla. En el protocolo de limpieza optimizado, las semillas mostraron una transparencia satisfactoria en todas las etapas de desarrollo probadas. Se observaron las distintas capas celulares de la cubierta de semilla a 3 DAF, células de endospermo distinguibles a 5 DAF, el embrión en forma de palo a siete DAF, la etapa globular a 9 DAF y la etapa cardíaca a 11 DAF.En el protocolo optimizado, el grado del rizo de los cotiledones y el meristemo apical del brote se capturó muy fácilmente en varias etapas del desarrollo embrionario. La esterilización elimina el mucílago de la semilla y el pigmento de la cubierta de la semilla, lo que mejora la penetración y la visualización de la semilla. El tratamiento con vacío puede acelerar la penetración de la solución de limpieza.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Efficient Clearing Protocol for the Study of Seed Development in Tomato (Solanum lycopersicum L.)

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Transferencia génica eficaz en polluelo retinas para estudios de cultivo celular primario: Un<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Enfoque electroporación

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Análisis de pez cebra larvas esquelético Integridad del músculo con el colorante azul de Evans

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Desarrollo de una<em&gt; In Vitro</em&gt; Ensayo para evaluar la función contráctil de las células mesenquimales que la transición epitelio-mesenquimal Sufrió

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Desarrollo de un Modelo de hígado fibrótico inducida por etanol en el pez cebra para el Estudio de células progenitoras mediada por la regeneración de hepatocitos

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Co-localization of Cell Lineage Markers and the Tomato Signal

Co-localización de los marcadores de linaje de la célula y la señal de tomate

The cell lineage tracing system has been used predominantly in developmental biology studies. The use of Cre recombinase allows for the activation of the ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Cultura Organotypic método para estudiar el desarrollo de tejidos de embrión de pollo

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

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Análisis computacional de lo elegans de Caenorhabditis del Germline para estudiar la distribución de núcleos, proteínas y citoesqueleto

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

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Un método In Vivo para el estudio de integridad de barrera Hematotesticular ratón

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

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Un protocolo para la inmunohistoquímica y la distribución in situ de ARN dentro del embrión temprano de Drosophila

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...

Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

Inmunofluorescencia de ovario completo, limpieza y microscopía multifotónica para el análisis cuantitativo en 3D de la reserva ovárica en desarrollo en ratones