Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
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RO1EY032079 (VTR), R21EY029097-01 (VTR), 1F30EY033647-01 (KS) 및 5T32GM008541-24 (KS)의 보조금 지원에 대해 NIH에 감사드립니다. 또한 매사추세츠 라이온스 안구 연구 기금과 뉴잉글랜드 각막 이식 기금에 감사드립니다.

동물 피험자와 관련된 절차는 안과 치료 및 시력 연구에서 동물 사용을위한 시력 및 안과 연구 협회 및 보스턴 대학 IACUC 프로토콜 (201800302)의 승인을 받았습니다.
1. 3D 프린팅 홀더 및 커버 바 디자인
<ol><li>마우스 글로브의 평균 직경을 고려하여 3D 프린팅된 홀더와 커버 바를 설계하고 디자인을 3D 프린팅합니다(그림 1A, B).</li>
...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

이 프로토콜은 3D 프린팅 홀더를 사용하여 손상되지 않은 동물의 눈을 안정화하고 고정시키는 라이브 셀 이미징 기술을 설명합니다. 이는 생체 외 각막 조직의 이전 라이브 셀 이미징 프로토콜에서 인식된 몇 가지 중요한 단점을 우회하도록 설계되었습니다. 이 프로토콜은 온전한 구체의 라이브 셀 이미징에 많은 이점을 제공합니다. 실험적으로 유도 된 스크래치 상처에 대한 상처 치유 반?...

각막 각막은 눈의 앞쪽 표면을 덮고 있는 투명한 무혈관 구조로, 빛을 굴절시켜 시력을 가능하게 하고 눈 내부를 손상으로부터 보호합니다. 각막은 환경에 노출되기 때문에 기계적 원인(긁힘)과 감염으로 인한 손상을 받기 쉽습니다. 건강한 환자의 각막 손상은 일반적으로 1-3 일 이내에 치유됩니다. 그러나 윤부 줄기 세포 결핍 및 제 2 형 당뇨병을 포함한 기저 질환이있는 환자의 경우 각막 상처 치유 과정이 크게 연장 될 수 있습니다1. 각막이 고도로 신경이 분포되어 있기 때문에 이러한 치유되지 않는 각막 궤양과 재발성 각막 침식은 매우 고통스럽고 이를 경험하는 환자의 삶의 질을 크게 저하시킵니다1.
세포 신호 전달 건강한 각막이 손상되면 상처에 인접한 세포에서 칼슘 신호 이벤트가 선행되어 상처 침대로 세포 이동을 촉진하여 흉터 2,3의 위험없이 손상을 닫습니다. 이러한 신호전달 이벤트는 라이브세포 이미징을 사용하는 각막 상피 세포 배양 모델에서 잘 특성화되었습니다2. 예비 실험은 당뇨병 세포에 비해 비 당뇨병 세포에서 손상 후 훨씬 더 많은 칼슘 신호 전달을 보여줍니다. 그러나 생체 외 글로브에서 세포 신호 전달 이벤트의 특성 분석은 기술적 과제임이 입증되었습니다.
라이브 셀 이미징 이전 연구에서는 각막 상처 치유의 시험관 내 세포 배양 모델에서 칼슘 신호 전달 이벤트를 성공적으로 기록했습니다 4,5,6. 생체 외 조직에서 이러한 신호 이벤트의 고품질 이미지를 생성하는 방법론을 개발하는 것은 보다 복잡하고 실제와 같은 시스템에서 이러한 이벤트를 연구할 수 있기 때문에 큰 관심을 끌고 있습니다. 이전의 접근법은 각막의 해부에 이어 UV 유도 PEG 겔 7,8,9에서의 고정화를 포함하였다. 고정화는 살아있는 조직으로 작업할 때 필수적이지만 어려운 단계로, 실험 과정 내내 실행 가능하고 수분을 유지해야 합니다. 또한, 고정은 조직을 손상시키지 않아야합니다. PEG 용액이 조직을 고정화하는 동안, 생성된 이미지의 해상도와 품질은 일관되지 않았다. 따라서 3D 프린팅 홀더는 손상되지 않은 지구본을 고정하여 조직 손상 위험이 적은 고품질 이미지를 생성하기 위해 개발되었습니다.
접근 방식 고유한 3D 프린팅 홀더는 라이브 셀 이미징을 위해 손상되지 않은 생체 외 글로브를 고정하기 위해 개발되었습니다. 이 홀더는 두 가지 주요 원인으로 인한 손상을 방지합니다: 각막을 해부할 필요 없이 핵이 있는 지구를 이미징할 수 있고 자외선에 대한 노출을 제거합니다. 이러한 손상 원이 없으면 얻은 이미지는 실험적으로 만들어진 스크래치 부상에 대한 반응을보다 정확하게 나타냅니다. 또한 3D 인쇄 홀더는 쥐 눈의 정확한 치수로 보정되었습니다. 이는 PEG 용액에 고정화하는 것보다 훨씬 더 잘 맞았으며, 조직 움직임 감소로 인해 저전력 대물렌즈에서 더 높은 품질의 이미지를 얻을 수 있었습니다. 홀더 상단에 부착된 커버 바는 실험 기간 동안 지구가 움직이지 않고 수화와 생존력을 유지하기 위해 성장 배지를 적용할 때 지구본이 변위되지 않도록 합니다. 홀더를 정확한 치수로 인쇄 할 수있는 기능을 통해 연령이나 질병 상태로 인해 다양한 크기의 쥐 눈에 최적의 맞춤을 생성 할 수 있습니다. 이 기술은 크기에 따라 다른 종의 눈을 위한 홀더를 개발하는 데 보다 광범위하게 적용될 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

각막 상피 상처 치유는 상피 세포에서 발현되는 퓨린 성 수용체의 활성화에 의해 시작되는 이동 과정입니다. 이 활성화는 세포에서 세포로 전파되는 칼슘 동원 이벤트를 초래하며, 이는 상처 침대로의 세포 운동성을 시작하여 효율적인 상처 치유를 촉진하는 데 필수적입니다. 트링카우스-랜달 연구실은 생체 외 쥐 구체에서 각막 상처 치유 반응을 실시간으로 이미징하는 방법론을 개발했습니다. 이 접근법은 확립 된 프로토콜에 따라 안락사 된 마우스에서 손상되지 않은 지구를 핵 제거하고 칼슘 지시제 염료로 지구를 즉시 배양하는 것을 포함합니다. 이 단계에서 세포의 다른 특징을 염색하는 카운터 염색을 적용하여 이미징을 돕고 세포 랜드 마크를 보여줄 수 있습니다. 이 프로토콜은 액틴을 염색하는 SiR 액틴과 세포막을 염색하는 진한 적색 원형질막 염색을 포함하여 카운터 염색에 사용되는 여러 가지 살아있는 세포 염료와 잘 작동했습니다. 상처에 대한 반응을 검사하기 위해 25G 바늘을 사용하여 각막 상피를 손상시키고 지구본을 3D 인쇄 홀더에 넣습니다. 3D 프린팅 홀더의 치수는 실험 기간 동안 지구본의 고정을 보장하도록 보정되며 다양한 크기의 눈을 수용하도록 수정할 수 있습니다. 상처 반응의 라이브 셀 이미징은 컨포칼 현미경을 사용하여 시간이 지남에 따라 조직 전체에 걸쳐 다양한 깊이에서 연속적으로 수행됩니다. 이 프로토콜을 사용하면 컨포칼 현미경에서 20x 공기 대물렌즈를 사용하여 고해상도 출판 품질의 이미지를 생성할 수 있습니다. 이 프로토콜에는 다른 목표도 사용할 수 있습니다. 이는 생체 외 뮤린 글로브에서 생세포 영상의 품질을 크게 개선했으며 신경과 상피의 식별을 허용합니다.

이 프로토콜은 출판물 품질의 데이터 및 이미지를 일관되게 생성하는데 사용되어 왔다(10). 얻은 이미지는 이전 접근 방식과 비교할 때 상당한 개선을 나타냅니다(그림 2). 3D 프린팅 홀더를 사용하여 각막 층 전체에서 이미지를 캡처하고 다양한 Z 평면에서 칼슘 동원을 관찰할 수 있습니다(그림 3). 이 접근법은 젊은 마우스와 늙은 마우...

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Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

본 연구는 핵이 있는 구체의 고해상도 라이브 셀 이미징을 가능하게 하기 위해 3D 프린팅 홀더를 활용하는 새로운 실험 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜을 통해 생체 외 글로브 에서 상처 입은 각막 상피의 세포 칼슘 신호 전달 활성을 실시간으로 관찰 할 수 있습니다.

새로운 3D 프린팅 홀더를 사용한 온전한 생체 외 구체의 라이브 셀 이미징

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

이 프로토콜에 사용되는 3D 프린팅 홀더를 사용하면 상처 입은 각막의 단기 세포 신호 전달 및 장기 세포 이동 이벤트를 실시간으로 모니터링 할 수 있습니다. 지구를 온전하고 실행 가능하며 움직이지 않게 유지함으로써 이 프로토콜은 상피와 신경을 포함한 각막 세포의 고품질 라이브 이미지를 생성합니다. 3D 프린팅 홀더는 다양한 크기와 종의 지구본에 맞게 쉽게 수정할 수 있습니다.또한 다른 영역을 이미지화하거나 나노 압흔 실험을 수행하기 위해 눈의 방향을 다르게 지정할 수도 있습니다. 시작하려면 안락사 된 마우스의 머리를 제거한 후 즉시 얼음 위에 놓아 조직의 생존력을 보존하십시오. 그런 다음 핀셋을 사용하여 지구본을 졸려서 핵을 공급하십시오.그리고 핀셋으로 잡히는 곳 바로 아래에 해부 가위를 사용하여 시신경을 자릅니다. 칼슘 지시약 및/또는 세포막 염색을 포함한 P-35 세포 배양 접시에 2밀리리터의 배지에 글로브를 배양하여 섭씨 37도 및 저조도 조건의 5%이산화탄소의 인큐베이터에서 1시간 동안 배양하여 글로브가 얼룩 배지에 잠기도록 하여 균일한 염색을 위해 글로브가 얼룩 배지에 잠기도록 합니다. 홀더를 깨끗한 유리 바닥 커버 슬립에 부착하려면 홀더를 70 % 에탄올로 씻고 홀더에 접착제를 바르십시오.그런 다음 홀더를 유리 바닥 덮개 슬립에 부착하여 접착제가 형광을 발하여 이미징을 복잡하게 만들 수 있으므로 홀더의 내부 영역 내에 접착제가 없는지 확인합니다. 접착제가 굳은 후 홀더가 덮개 슬립에 고정되어 있는지 확인하십시오. 멸균 스포이드를 사용하여 염색 용액에서 글로브를 제거하고 관심 부위의 조직 손상을 방지하도록 주의하십시오.멸균 인산염 완충 식염수를 사용하여 실온에서 5분 동안 글로브를 세척하여 과도한 얼룩을 제거하고 글로브를 배지에 넣어 현미경으로 운반합니다. 관심 부위에 멸균 25게이지 바늘을 사용하여 지구본을 감으려면 멸균 스포이드를 사용하여 눈 뒤쪽에서 지구본을 집어 들고 잡고 지구본을 안정적으로 유지하고 구르는 것을 방지합니다. 긁힌 상처의 경우 멸균 된 25 게이지 바늘을 노출 된 각막을 가로 질러 부드럽게 움직이거나 바늘을 중앙 각막으로 직접 부드럽게 눌러 상처가 각막 기저막을 관통하지 않도록합니다.각막 또는 윤부 부위를 홀더 내부 영역의 커버 슬립에 놓고 지구본이 올바르게 배치되고 관심 부위가 유리 커버 슬립과 접촉하는지 확인합니다. 접착제를 사용하여 홀더에 부착 된 3D 인쇄 커버를 사용하여 안정화하십시오. 조직 손상을 일으킬 수 있으므로 지구본을 제거하려고하지 마십시오.현미경을 켜고 환경 챔버를 섭씨 35도 및 5% 이산화탄소로 설정하고 가습 챔버를 확인합니다. 커버 슬립 홀더와 안정화된 지구본을 라이브 셀 이미징 기술을 사용하여 환경 챔버 및 이미지 내의 현미경 스테이지에 놓습니다. 탈수를 방지하고 조직 생존력을 유지하기 위해 커버 슬립에 추가 성장 배지를 조사하여 홀더의 지구본을 덮을 수 있는 충분한 배지가 우물에 있는지 확인합니다.라이브 셀 이미징 기술을 사용하여 실험을 시작하면서 저전력 레이저 설정을 사용하여 조직을 보존하고 조직 손상을 방지하며 장기간 실험을 위한 적절한 목표를 달성합니다. 데이터 기록을 위해 CZI 파일의 기본 파일 형식으로 데이터를 기록하고 저장합니다. X 생체 각막에 대해 다층 구조의 고품질 이미징 데이터를 얻었으며 3D 인쇄 홀더로 안정화하여 각막의 정점, 기저 및 기질층에서 칼슘 신호 전달 이벤트를 입증했습니다.스크래치 상처에서 3D 인쇄 홀더에 고정 된 각막의 Z 스택 이미지를 얻어 각막 층 전체의 세포막과 칼슘 신호 전달 및 다른 Z 평면에서의 칼슘 동원을 시각화했습니다. 치유 반응 동안 상처 침대로의 세포 이동을 연구하기 위해 각막의 시계열 실험을 수행하여 X, Y 또는 Z 방향으로 지구의 움직임이 거의 없음을 보여주었습니다. 지구본을 홀더에 놓으면 각막의 다른 영역이 중앙 및 각막 윤부 영역 모두에서 시각화 될 수 있음이 관찰되었습니다.이 프로토콜을 통해 상처 치유의 차이를 나타내는 질병 모델의 눈을 이미지화할 수 있습니다. 우리는 세포 신호 전달의 이상과 살아있는 조직의 운동성을 특성화 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

소설 불용성 발색 기질 분석 키트를 사용하여 탄수화물 분해 효소의 높은 처리량 검열

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

연구

생화학

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

소설 형광 프로브와 플라즈마 막에서 포스파티딜 이노시톨 -4,5- 비스 포스페이트의 단일 분자 슈퍼 해상도 이미징

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

라이브 셀 Photoaffinity 라벨에 의해 기본 셀룰러 환경에서 작은 분자 결합 단백질의 식별

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

뇌막 분획 화 :<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Subsynaptic Protein Localization 평가 방법

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

세포 외 기질의 Glycoproteomics : 질량 분석을 사용하여 본래 글리코 펩타이드 분석을위한 방법

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

형광 라이브 셀 이미징의 완전 한 식물 세포의 주기 느린 성장 사회 박테리아 Myxococcus xanthus

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

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생체 외에서 교정 무료 단백질 호모-oligomerization 상업 계측 및 무료, 오픈 소스 밝기 분석 소프트웨어를 사용 하 여의 정량화

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

다양 한 생 화 확 적인 접근을 사용 하 여 소설 CK2 키 기판의 식별

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

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C. 예쁜꼬마선충의 생체내 칼슘 이미징

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An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

최소한의 배경 산란을 갖춘 거대 분자 X선 결정학을 위한 올인원 샘플 홀더

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...