Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
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Nos gustaría agradecer a los NIH por el siguiente apoyo de subvención: RO1EY032079 (VTR), R21EY029097-01 (VTR), 1F30EY033647-01 (KS) y 5T32GM008541-24 (KS). También nos gustaría reconocer al Fondo de Investigación del Ojo de los Leones de Massachusetts y al Fondo de Trasplante de Córnea de Nueva Inglaterra.

Los procedimientos que involucran sujetos animales fueron aprobados por la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología para el Uso de Animales en Cuidados Oftalmológicos e Investigación de la Visión y el protocolo IACUC de la Universidad de Boston (201800302).
1. Diseño de los soportes impresos en 3D y la barra de cubierta
<ol><li>Diseñe los soportes impresos en 3D y la barra de cubierta que representan el diámetro promedio de los globos del ratón e ...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

Este protocolo describe una técnica de imagen de células vivas que utiliza un soporte impreso en 3D para estabilizar e inmovilizar los ojos intactos de los animales. Está diseñado para eludir varias desventajas significativas reconocidas con protocolos previos de imágenes de células vivas de tejido corneal ex vivo . Este protocolo ofrece muchas ventajas para la obtención de imágenes de células vivas de globos intactos. Reduce significativamente el daño tisular innecesario que podría interferir con la ...

Córnea La córnea es una estructura transparente y avascular que cubre la superficie anterior del ojo que refracta la luz para permitir la visión y protege el interior del ojo del daño. Como la córnea está expuesta al medio ambiente, es susceptible al daño tanto por causas mecánicas (rascado) como por infección. Una lesión corneal en un paciente sano generalmente se cura dentro de 1-3 días. Sin embargo, en pacientes con afecciones subyacentes, incluida la deficiencia de células madre limbares y la diabetes tipo II, el proceso de cicatrización de la herida corneal puede prolongarse en gran medida1. Como la córnea está altamente inervada, estas úlceras corneales que no cicatrizan y las erosiones corneales recurrentes son muy dolorosas y disminuyen en gran medida la calidad de vida de los pacientes que las experimentan1.
Señalización celular Cuando una córnea sana se lesiona, los eventos de señalización de calcio en las células adyacentes a la herida preceden y provocan la migración celular al lecho de la herida, donde cierran la lesión sin riesgo de cicatrización 2,3. Estos eventos de señalización han sido bien caracterizados en modelos de cultivo de células epiteliales corneales utilizando imágenes de células vivas2. Los experimentos preliminares demuestran significativamente más señalización de calcio después de una lesión en células no diabéticas en comparación con las células diabéticas. Sin embargo, la caracterización de los eventos de señalización celular en globos ex vivo ha demostrado ser un desafío técnico.
Imágenes de células vivas Estudios previos han registrado con éxito eventos de señalización de calcio a partir de modelos de cultivo celular in vitro de cicatrización de heridas corneales 4,5,6. El desarrollo de una metodología para producir imágenes de alta calidad de estos eventos de señalización en tejido ex vivo es de gran interés porque permitiría el estudio de estos eventos en un sistema más complejo y real. Los enfoques anteriores han implicado la disección de la córnea seguida de la inmovilización en un gel PEG inducido por UV 7,8,9. La inmovilización es un paso esencial pero desafiante cuando se trabaja con tejido vivo, ya que debe permanecer viable e hidratado durante todo el transcurso del experimento. Además, la inmovilización no debe dañar el tejido. Mientras que la solución de PEG inmovilizó el tejido, la resolución y la calidad de las imágenes producidas no fueron consistentes. Por lo tanto, los soportes impresos en 3D se desarrollaron para inmovilizar globos intactos para producir imágenes de mayor calidad con menos riesgo de daño tisular.
El enfoque Se desarrolló un soporte impreso en 3D único para inmovilizar globos intactos ex vivo para obtener imágenes de células vivas. Este soporte evita el daño de dos fuentes principales: permite obtener imágenes de un globo enucleado sin la necesidad de diseccionar la córnea y elimina la exposición a la luz UV. Sin estas fuentes de daño, las imágenes obtenidas representaron con mayor precisión la respuesta a las lesiones por rasguños realizadas experimentalmente. Además, el soporte impreso en 3D se calibró con las dimensiones precisas del ojo murino. Esto proporcionó un ajuste mucho mejor que la inmovilización en la solución PEG, lo que llevó a una imagen de mayor calidad en objetivos de menor potencia debido a la disminución del movimiento del tejido. Una barra de cubierta unida a la parte superior del soporte asegura que el globo permanezca inmóvil durante toda la duración del experimento y que no haya desplazamiento del globo cuando se aplica un medio de crecimiento para mantener la hidratación y la viabilidad. La capacidad de imprimir el soporte a dimensiones precisas también nos permite generar un ajuste óptimo para ojos murinos de diferentes tamaños debido a la edad o estado de la enfermedad. Esta tecnología se puede aplicar más ampliamente para desarrollar soportes para los ojos de diferentes especies en función de sus dimensiones.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

La cicatrización de heridas epiteliales corneales es un proceso migratorio iniciado por la activación de receptores purinérgicos expresados en las células epiteliales. Esta activación da como resultado eventos de movilización de calcio que se propagan de célula a célula, que son esenciales para iniciar la motilidad celular en el lecho de la herida, promoviendo la cicatrización eficiente de la herida. El laboratorio de Trinkaus-Randall ha desarrollado una metodología para obtener imágenes de la respuesta de cicatrización de heridas corneales en globos murinos ex vivo en tiempo real. Este enfoque implica la enucleación de un globo intacto de un ratón que ha sido sacrificado según los protocolos establecidos e inmediatamente la incubación del globo con un tinte indicador de calcio. Una contratinción que tiñe otras características de la célula se puede aplicar en esta etapa para ayudar con las imágenes y mostrar puntos de referencia celulares. El protocolo funcionó bien con varios colorantes de células vivas diferentes utilizados para la contratinción, incluida la actina SiR para teñir la actina y la tinción de la membrana plasmática de color rojo intenso para teñir la membrana celular. Para examinar la respuesta a una herida, el epitelio corneal se lesiona con una aguja de 25 G, y los globos se colocan en un soporte impreso en 3D. Las dimensiones del soporte impreso en 3D están calibradas para garantizar la inmovilización del globo durante toda la duración del experimento y se pueden modificar para adaptarse a ojos de diferentes tamaños. Las imágenes de células vivas de la respuesta de la herida se realizan continuamente a varias profundidades en todo el tejido a lo largo del tiempo utilizando microscopía confocal. Este protocolo nos permite generar imágenes de alta resolución y calidad de publicación utilizando un objetivo de aire 20x en un microscopio confocal. Otros objetivos también se pueden utilizar para este protocolo. Representa una mejora significativa en la calidad de las imágenes de células vivas en globos murinos ex vivo y permite la identificación de nervios y epitelio.

Este protocolo se ha utilizado para producir consistentemente datos e imágenes con calidad de publicación10. Las imágenes obtenidas representan una mejora significativa en comparación con los enfoques anteriores (Figura 2). Usando el soporte impreso en 3D, las imágenes se pueden capturar a través de las capas de la córnea, y se puede observar la movilización de calcio en diferentes planos z (Figura 3). Este enfoque se ha utilizado...

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Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

El presente trabajo describe un novedoso protocolo experimental que utiliza un soporte impreso en 3D para permitir imágenes de células vivas de alta resolución de globos enucleados. A través de este protocolo, la actividad de señalización de calcio celular en el epitelio corneal herido de globos ex vivo se puede observar en tiempo real.

Imágenes de células vivas de globos intactos ex vivo utilizando un novedoso soporte impreso en 3D

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

El soporte impreso en 3D utilizado en este protocolo nos permite monitorear la señalización celular a corto plazo y los eventos de migración celular a largo plazo en córneas heridas en tiempo real. Al mantener el globo intacto, viable e inmóvil, este protocolo produce imágenes en vivo de alta calidad de las células corneales, incluidos el epitelio y los nervios. El soporte impreso en 3D podría modificarse fácilmente para globos terráqueos de varios tamaños y especies.También podemos orientar los ojos de manera diferente para obtener imágenes de otras regiones o realizar experimentos de nano indentación. Para empezar, después de retirar la cabeza de un ratón sacrificado, colóquelo inmediatamente sobre hielo para preservar la viabilidad del tejido. Luego enuclea los globos apoyándolos, usando pinzas.Y recorte el nervio óptico usando tijeras de disección justo debajo de donde lo sostienen las pinzas. Incubar los globos en dos mililitros del medio en una placa de cultivo celular P-35, incluyendo un indicador de calcio y/o tinción de membrana celular durante una hora en una incubadora a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono con condiciones de poca luz, asegurando que los globos estén sumergidos en el medio de tinción para una tinción uniforme. Para adherir los soportes a un deslizamiento de cubierta inferior de vidrio limpio, lave el soporte en etanol al 70% y coloque pegamento en el soporte.Luego, adhiera el soporte al deslizamiento de la cubierta inferior de vidrio, asegurándose de que no haya pegamento dentro del área interna del soporte, ya que el pegamento puede fluorescer, lo que complica las imágenes. Después de que el pegamento se solidifique, confirme que el soporte esté seguro contra el cubreobjetos. Retire los globos de la solución de tinción utilizando los goteros estériles, teniendo cuidado de evitar daños tisulares en la región de interés.Lave los globos durante cinco minutos a temperatura ambiente, utilizando solución salina tamponada con fosfato estéril para eliminar el exceso de manchas y coloque los globos en el medio para transportarlos al microscopio. Para enrollar los globos con una aguja estéril de calibre 25 en la región de interés, levante y sostenga el globo de la parte posterior del ojo, usando un gotero estéril para mantener el globo estable y evitar que ruede. Para una herida por rasguño, mueva suavemente una aguja estéril de calibre 25 a través de la córnea expuesta o presione suavemente la aguja directamente en la córnea central para una herida punzante, asegurándose de que la herida no perfore la membrana basal corneal.Coloque la córnea o la región limbal sobre el cubreobjetos en el área interna del soporte, mientras confirma que el globo está colocado correctamente y que el sitio de interés está en contacto con el cubreobjetos de vidrio. Estabilizar utilizando la cubierta impresa en 3D adherida al soporte, utilizando pegamento. Y no intente extraer el globo, ya que esto puede causar daño tisular.Encienda el microscopio y ajuste la cámara ambiental a 35 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono y verifique la cámara humidificada. Coloque el soporte de la cubierta y el globo estabilizado en la etapa del microscopio dentro de la cámara ambiental y la imagen, utilizando técnicas de imágenes de células vivas. Mediante el veterinario, aplique medios de crecimiento adicionales en el cubreobjetos para evitar la deshidratación y mantener la viabilidad del tejido, asegurando que haya suficiente medio en el pozo para cubrir el globo en el soporte.Comience los experimentos utilizando técnicas de imágenes de células vivas, mientras usa configuraciones de láser de baja potencia para preservar el tejido y prevenir el daño tisular y los objetivos apropiados para experimentos de larga duración. Grabe y guarde datos en el formato de archivo preferido de archivos CZI para la grabación de datos. Se obtuvieron datos de imágenes de alta calidad de la estructura multicapa para la córnea X vivo, estabilizados con un soporte impreso en 3D, que demuestra eventos de señalización de calcio en las capas apical, basal y estromal de la córnea.Se obtuvieron imágenes Z-stack de una córnea, inmovilizada en el soporte impreso en 3D, en una herida por rasguño para visualizar las membranas celulares y la señalización de calcio a lo largo de las capas de la córnea y la movilización de calcio en diferentes planos Z. Se realizó un experimento de serie temporal de una córnea para estudiar la migración celular hacia el lecho de la herida durante la respuesta de curación, revelando poco movimiento del globo en las direcciones X, Y o Z. Se observó que al colocar el globo en el soporte, se pueden visualizar diferentes regiones de la córnea, tanto en la región limbal central como en la corneal.Este protocolo nos permite obtener imágenes de ojos de modelos de enfermedades que exhiben diferencias en la cicatrización de heridas. Podemos caracterizar aberraciones en la señalización celular y la motilidad en tejido vivo.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

La selección de alto rendimiento de los hidratos de carbono-El uso de enzimas que degradan la novela insoluble cromogénico sustrato de ensayo Kits

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Investigación

Bioquímica

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

Single-molécula de super-resolución de imagen de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato en la membrana plasmática con la novela fluorescentes Sondas

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identificación de las pequeñas proteínas de unión a la molécula-celular en un entorno nativo de Células vivas marcado por fotoafinidad

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Fraccionamiento de Membranas Cerebrales: Un<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Enfoque para evaluar la localización de proteínas subsinápticas

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics de la matriz extracelular: Un método para el análisis glucopéptidos Intacto El uso de la espectrometría de masas

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Imágenes en vivo de la célula de fluorescencia de ciclo completo de células vegetativas de la lento-crecimiento Social bacteria Myxococcus xanthus

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibración-libre In Vitro cuantificación de proteína Homo-Oligomerización utilizando instrumentación comercial y Software de análisis de brillo libre de código abierto

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identificación de los sustratos de quinasa CK2 novela utilizando un enfoque bioquímico versátil

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging en C. elegans Body Wall Muscles

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Un soporte de muestra todo en uno para cristalografía de rayos X macromolecular con dispersión mínima de fondo

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...