Name: live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder
Uploaded: 2022-10-06T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

Vi vill tacka NIH för följande bidragsstöd: RO1EY032079 (VTR), R21EY029097-01 (VTR), 1F30EY033647-01 (KS) och 5T32GM008541-24 (KS). Vi vill också uppmärksamma Massachusetts Lions Eye Research Fund och New England Corneal Transplant Fund.

Försöken med djurförsökspersoner godkändes av Association for Research in Vision and Ophthalmology for the Use of Animals in Ophthalmic Care and Vision Research och Boston University IACUC protocol (201800302).
1. Designa 3D-tryckta hållare och omslagsfält
<ol><li>Designa de 3D-tryckta hållarna och täcklisten som står för musglobernas medeldiameter och 3D-skriv ut designen (figur 1A, B).</li>
	<li>Håll diametern på ...

<ol>
	<li>Kneer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+induces+pre-type+2+diabetes+with+regional+changes+in+corneal+sensory+nerves+and+altered+P2X7+expression+and+localization.">High fat diet induces pre-type 2 diabetes with regional changes in corneal sensory nerves and altered P2X7 expression and localization.</a> Experimental Eye Research. 175, 44-55 (2018).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+Ca2++mobilizations:+A+quantitative+approach+to+predict+their+importance+in+cell-cell+communication+and+wound+healing.">Sustained Ca2+ mobilizations: A quantitative approach to predict their importance in cell-cell communication and wound healing.</a> PLoS One. 14 (4), 0213422 (2019).</li><li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals.">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).</li><li>Klepeis, V. S., Cornell-Bell, A., Trinkaus-Randal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+but+not+gap+junctions+play+a+role+in+injury-induced+Ca2++waves+in+epithelial+cells.">Growth factors but not gap junctions play a role in injury-induced Ca2+ waves in epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 114 (23), 4185-4195 (2001).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+changes+in+Ca(2+)+mobilization+and+protein+phosphorylation+implicated+in+impaired+wound+healing.">Hypoxia-induced changes in Ca(2+) mobilization and protein phosphorylation implicated in impaired wound healing.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 306 (10), 972-985 (2014).</li><li>Boucher, I., Rich, C., Lee, A., Marcincin, A., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y2+receptor+mediates+the+epithelial+injury+response+and+cell+migration.">The P2Y2 receptor mediates the epithelial injury response and cell migration.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (2), 411-421 (2010).</li><li>Awal, M. R., Wirak, G. S., Gabel, C. V., Connor, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collapse+of+global+neuronal+states+in+Caenorhabditis+elegans+under+isoflurane+anesthesia.">Collapse of global neuronal states in Caenorhabditis elegans under isoflurane anesthesia.</a> Anesthesiology. 133 (1), 133-144 (2020).</li><li>Burnett, K., Edsinger, E., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+gentle+hydrogel+encapsulation+of+living+organisms+enables+long-term+microscopy+over+multiple+hours.">Rapid and gentle hydrogel encapsulation of living organisms enables long-term microscopy over multiple hours.</a> Communications Biology. 1, 73 (2018).</li><li>Rhodes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pannexin1:+Role+as+a+sensor+to+injury+is+attenuated+in+pretype+2+corneal+diabetic+epithelium.">Pannexin1: Role as a sensor to injury is attenuated in pretype 2 corneal diabetic epithelium.</a> Analytical Cellular Pathology. 2021, 4793338 (2021).</li><li>Segars, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+dependent+changes+in+corneal+epithelial+cell+signaling.">Age dependent changes in corneal epithelial cell signaling.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 886721 (2022).</li><li>Xu, P., Londregan, A., Rich, C., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+epithelial+and+stromal+corneal+stiffness+occur+with+age+and+obesity.">Changes in epithelial and stromal corneal stiffness occur with age and obesity.</a> Bioengineering. 7 (1), 14 (2020).</li><li>Minns, M. S., Teicher, G., Rich, C. B., Trinkaus-Randall, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purinoreceptor+P2X7+regulation+of+Ca(2+)+mobilization+and+cytoskeletal+rearrangement+is+required+for+corneal+reepithelialization+after+injury.">Purinoreceptor P2X7 regulation of Ca(2+) mobilization and cytoskeletal rearrangement is required for corneal reepithelialization after injury.</a> The American Journal of Pathology. 186 (2), 285-296 (2016).</li><li>Tadvalkar, G., Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+euthanasia+and+enucleation+on+mouse+corneal+epithelial+axon+density+and+nerve+terminal+morphology.">The impact of euthanasia and enucleation on mouse corneal epithelial axon density and nerve terminal morphology.</a> The Ocular Surface. 18 (4), 821-828 (2020).</li></ol>

Detta protokoll beskriver en levande cellavbildningsteknik som använder en 3D-tryckt hållare för att stabilisera och immobilisera intakta djurögon. Den är utformad för att kringgå flera signifikanta nackdelar som erkänns med tidigare levande cellavbildningsprotokoll för ex vivo hornhinnevävnad. Detta protokoll erbjuder många fördelar för levande cellavbildning av intakta jordklot. Det minskar avsevärt onödiga vävnadsskador som kan störa sårläkningssvaret på experimentellt inducerade repsår. ...

Hornhinna Hornhinnan är en klar, avaskulär struktur som täcker ögats främre yta som bryter ljus för att möjliggöra syn och skyddar ögats inre från skador. Eftersom hornhinnan utsätts för miljön är den mottaglig för skador från både mekaniska orsaker (repor) och från infektion. En hornhinneskada hos en annars frisk patient läker vanligtvis inom 1-3 dagar. Men hos patienter med underliggande tillstånd inklusive limbal stamcellsbrist och typ II-diabetes kan hornhinnans sårläkningsprocess förlängas kraftigt1. Eftersom hornhinnan är mycket innerverad är dessa icke-helande hornhinnesår och återkommande hornhinneerosioner mycket smärtsamma och minskar kraftigt livskvaliteten hos patienter som upplever dem1.
Cell signalering När en i övrigt frisk hornhinna skadas föregår kalciumsignaleringshändelser i cellerna intill såret och föranleder cellulär migration in i sårbädden, där de stänger skadan utan risk för ärrbildning 2,3. Dessa signalhändelser har karakteriserats väl i hornhinneepitelcellodlingsmodeller med hjälp av levande cellavbildning2. Preliminära experiment visar signifikant mer kalciumsignalering efter skada i icke-diabetiska celler jämfört med diabetesceller. Karakterisering av cellsignaleringshändelserna i ex vivo-glober har dock visat sig vara en teknisk utmaning.
Avbildning av levande celler Tidigare studier har framgångsrikt registrerat kalciumsignaleringshändelser från in vitro-cellodlingsmodeller av hornhinnesårläkning 4,5,6. Att utveckla en metod för att producera högkvalitativa bilder av dessa signalhändelser i ex vivo-vävnad är av stort intresse eftersom det skulle göra det möjligt att studera dessa händelser i ett mer komplext och verklighetstroget system. Tidigare tillvägagångssätt har involverat dissektion av hornhinnan följt av immobilisering i en UV-inducerad PEG-gel 7,8,9. Immobilisering är ett viktigt men utmanande steg när man arbetar med levande vävnad, eftersom det måste förbli livskraftigt och hydratiserat under hela experimentets gång. Dessutom får immobilisering inte skada vävnaden. Medan PEG-lösningen immobiliserade vävnaden var upplösningen och kvaliteten på de producerade bilderna inte konsekventa. Därför utvecklades 3D-tryckta hållare för att immobilisera intakta jordklot för att producera bilder av högre kvalitet med mindre risk för vävnadsskador.
Tillvägagångssättet En unik 3D-tryckt hållare utvecklades för att immobilisera intakta ex vivo-glober för levande cellavbildning. Denna hållare förhindrar skador från två huvudkällor: det möjliggör avbildning av en enucleated globe utan att behöva dissekera hornhinnan, och det eliminerar exponering för UV-ljus. Utan dessa skadekällor representerade de erhållna bilderna mer exakt svaret på repskadorna som gjordes experimentellt. Dessutom kalibrerades den 3D-tryckta hållaren till de exakta måtten på det murina ögat. Detta gav en mycket bättre passform än immobilisering i PEG-lösningen, vilket ledde till en bild av högre kvalitet vid lägre effektmål på grund av minskad vävnadsrörelse. En täckstång fäst på toppen av hållaren säkerställer att jordklotet förblir orörligt under hela experimentets varaktighet och att det inte finns någon förskjutning av jordklotet när tillväxtmedier appliceras för att upprätthålla hydrering och livskraft. Möjligheten att skriva ut hållaren till exakta dimensioner gör det också möjligt för oss att skapa en optimal passform för murina ögon i olika storlekar på grund av ålder eller sjukdomsstatus. Denna teknik kan tillämpas bredare för att utveckla hållare för olika arters ögon baserat på deras dimensioner.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.75 blue polylactic acid (PLA) plastic</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Material for holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm Dish, No. 1.5 Coverslip, 14 mm glass diameter, Poly-D-Lysine Coated</td>
			<td>MatTek Corporation (Ashland, MA)</td>
			<td>P35GC-1.5-14-C</td>
			<td>Well for imaging.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autodesk Fusion 360 software</td>
			<td>Autodesk (San Rafael, CA).</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Software used for printing the holders.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25 G 7/8 sterile needles single use 100 needles/box</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)</td>
			<td>305124</td>
			<td>For experimentally-induced wounds to the globes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask DeepRed</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>C10046</td>
			<td>Cell membrane counterstain. Calcium indicator. 1:10,000 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Home Super Glue</td>
			<td>Walgreens (Deerfield, IL)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For attaching the holder to the imaging well</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ender 3 Pro 3D printer&#160;</td>
			<td>Creality (Shenzen, China)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For printing the holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI/ImageJ</td>
			<td>ImageJ (Bethesda, MD)</td>
			<td>License Number: GPL2</td>
			<td>Softwareused for confirming consistency of wound depth and diameter between independent globes using Region of Interest analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4</td>
			<td>Invitrogen (Carlsbad, CA)</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Calcium indicator. 1:100 concentration with a final concentration of 1%(v/v) DMSO and 0.1% (w/v) pluronic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte Serum-Free Medium</td>
			<td>Gibco (Waltham, MA)</td>
			<td>17005042</td>
			<td>25 mg/mL bovine pituitary extract, 0.02 nM EGF, 0.3 mM CaCl2, and penicillin-streptomycin (100 units/mL, 100 &#181;g/mL, respectively) added to medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning, Medlabtech (Manassas, VA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Used to wash excess stain off of corneas before imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Confocal 880 Microscope with AiryScan</td>
			<td>Zeiss (Thornwood, NY)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20x magnification objective was used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of intact ex vivo globes using a novel 3d printed holder

Corneal epitelial sårläkning är en migrerande process som initieras genom aktivering av purinerga receptorer uttryckta på epitelceller. Denna aktivering resulterar i kalciummobiliseringshändelser som sprider sig från cell till cell, vilket är viktigt för att initiera cellulär rörlighet i sårbädden, vilket främjar effektiv sårläkning. Trinkaus-Randall-labbet har utvecklat en metod för att avbilda hornhinnans sårläkningssvar i ex vivo murina jordklot i realtid. Detta tillvägagångssätt innebär att man enucleing en intakt jordklot från en mus som har avlivats enligt etablerade protokoll och omedelbart inkuberar jordklotet med ett kalciumindikatorfärgämne. En motfärg som fläckar andra funktioner i cellen kan appliceras i detta skede för att hjälpa till med avbildning och visa cellulära landmärken. Protokollet fungerade bra med flera olika levande cellfärger som används för motfärgning, inklusive SiR-aktin för att färga aktin och djupröd plasmamembranfläck för att färga cellmembranet. För att undersöka svaret på ett sår skadas hornhinneepitelet med en 25 G-nål och kloten placeras i en 3D-tryckt hållare. Dimensionerna på den 3D-tryckta hållaren är kalibrerade för att säkerställa immobilisering av jordklotet under hela experimentets varaktighet och kan modifieras för att rymma ögon i olika storlekar. Levande cellavbildning av sårsvaret utförs kontinuerligt på olika djup i vävnaden över tid med hjälp av konfokalmikroskopi. Detta protokoll gör det möjligt för oss att generera högupplösta bilder av publikationskvalitet med ett 20x luftmål på ett konfokalmikroskop. Andra mål kan också användas för detta protokoll. Det representerar en signifikant förbättring av kvaliteten på levande cellavbildning i ex vivo murina jordklot och möjliggör identifiering av nerver och epitel.

Detta protokoll har använts för att konsekvent producera data och bilder av publikationskvalitet10. De bilder som erhållits representerar en signifikant förbättring jämfört med tidigare metoder (figur 2). Med hjälp av den 3D-tryckta hållaren kan bilder fångas genom hornhinnans lager och kalciummobilisering i olika z-plan kan observeras (figur 3). Detta tillvägagångssätt har använts för att jämföra cell-cellsignalering mel...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder at JoVE.com

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

Det aktuella arbetet beskriver ett nytt experimentellt protokoll som använder en 3D-tryckt hållare för att möjliggöra högupplöst levande cellavbildning av enucleated glober. Genom detta protokoll kan den cellulära kalciumsignalaktiviteten i sårat hornhinneepitel från ex vivo-glober observeras i realtid.

Live-cellavbildning av intakta ex vivo-glober med en ny 3D-tryckt hållare

Corneal epithelial wound healing is a migratory process initiated by the activation of purinergic receptors expressed on epithelial cells. This activation ...

Den 3D-tryckta hållaren som används i detta protokoll gör att vi kan övervaka kortvarig cellsignalering och långsiktiga cellulära migrationshändelser i sårade hornhinnor i realtid. Genom att hålla jordklotet intakt, livskraftigt och orörligt producerar detta protokoll högkvalitativa levande bilder av hornhinneceller, inklusive epitel och nerver. Den 3D-tryckta hållaren kan enkelt modifieras för glober av olika storlekar och arter.Vi kan också orientera ögonen annorlunda än att avbilda andra regioner eller utföra nanoindragningsexperiment. För att börja, efter att ha tagit bort huvudet på en avlivad mus, placera den omedelbart på is för att bevara vävnadens livskraft. Enucleate sedan globerna genom att rekvisit slumra det med pincett.Och klipp synnerven med dissektionsax strax nedanför där den hålls av pincetten. Inkubera jordgloberna i två milliliter av mediet i en P-35-cellodlingsskål, inklusive en kalciumindikator och / eller cellmembranfläck i en timme i en inkubator vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid med svagt ljusförhållanden, vilket säkerställer att jordkloten är nedsänkta i fläckmediet för enhetlig färgning. För att fästa hållarna på en ren glasbottenlockglidning, tvätta hållaren i 70% etanol och placera lim på hållaren.Fäst sedan hållaren på glasbottenlocket och se till att inget lim finns inom hållarens inre område, eftersom lim kan fluorescera, vilket komplicerar avbildning. När limet har stelnat, kontrollera att hållaren är fast mot locket. Ta bort jordkloten från färgningslösningen med de sterila pipetterna, var noga med att förhindra vävnadsskador på det intressanta området.Tvätta jordkloten i fem minuter vid rumstemperatur med steril fosfatbuffrad saltlösning för att avlägsna överflödig fläck och placera jordkloten i mediet för transport till mikroskopet. För att linda jordkloten med en steril 25 gauge nål i det intressanta området, plocka upp och håll jordklotet från baksidan av ögat, med hjälp av en steril pipett för att hålla jordklotet stabilt och förhindra att det rullar. För ett repsår, flytta försiktigt en steril 25 gauge nål över den exponerade hornhinnan eller tryck försiktigt nålen direkt in i den centrala hornhinnan för ett punkteringssår, så att såret inte genomborrar hornhinnans källarmembran.Placera hornhinnan eller limbalregionen på lockglidningen i hållarens inre område, samtidigt som du bekräftar att jordklotet är korrekt placerat och att platsen av intresse är i kontakt med glaslocket. Stabilisera med det 3D-tryckta locket som fästs på hållaren med lim. Och försök inte ta bort världen, eftersom det kan orsaka vävnadsskador.Slå på mikroskopet och ställ in miljökammaren på 35 grader Celsius och 5% koldioxid och verifiera den fuktade kammaren. Placera täckglidhållaren och den stabiliserade jordgloben på mikroskopsteget i miljökammaren och bilden med hjälp av levande cellavbildningstekniker. Genom att veterinär ytterligare tillväxtmedia på locket glider för att förhindra uttorkning och upprätthålla vävnadens livskraft, vilket säkerställer att det finns tillräckligt med medium i brunnen för att täcka jordklotet i hållaren.Börja experiment med levande cellavbildningstekniker, samtidigt som du använder laserinställningar med låg effekt för att bevara vävnaden och förhindra vävnadsskador och lämpliga mål för långvariga experiment. Spela in och spara data i önskat filformat för CZI-filer för datainspelning. Högkvalitativa bilddata med flerskiktsstruktur erhölls för X vivo hornhinna, stabiliserad med en 3D-tryckt hållare, vilket visar kalciumsignaleringshändelser i hornhinnans apikala, basala och stromala lager.Z-stackbilder av en hornhinna, immobiliserad i den 3D-tryckta hållaren, vid ett repsår erhölls för att visualisera cellmembranen och kalciumsignalering genom skikten i hornhinnan och kalciummobilisering i olika Z-plan. Ett tidsserieexperiment av en hornhinna utfördes för att studera den cellulära migrationen till sårbädden under läkningssvaret, vilket avslöjade liten rörelse av världen i X-, Y- eller Z-riktningarna. Det observerades att genom att placera jordklotet i hållaren kan olika regioner i hornhinnan, både vid den centrala och i hornhinnans limbala region, visualiseras.Detta protokoll tillåter oss att avbilda ögon från sjukdomsmodeller som uppvisar skillnader i sårläkning. Vi kan karakterisera avvikelser i cellsignalering och rörlighet i levande vävnad.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Live-Cell Imaging of Intact Ex Vivo Globes Using a Novel 3D Printed Holder

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

High-throughput screening av kolhydratnedbrytande enzymer Använda Novel Olöslig kromogena substratmetod Kits

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Single-molecule Super-resolution Imaging of Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in the Plasma Membrane with Novel Fluorescent Probes

Enda molekyl Super-upplösning avbildning av Fosfatidylinositol 4,5-bisfosfat i plasmamembranet med nya fluorescerande Probes

Phosphoinositides in the cell membrane are signaling lipids with multiple cellular functions. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) is a ...

Identification of Small Molecule-binding Proteins in a Native Cellular Environment by Live-cell Photoaffinity Labeling

Identifiering av liten molekyl-bindande proteiner i en Native Cellular miljö med Live-cell fotoaffinitetsmärkning

Identifying the molecular target(s) of small molecules is a challenging but necessary step towards understanding their mechanism of action. While several ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjärnmembranfraktioner: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tillvägagångssätt för att utvärdera lokalisering av subsynaptisk protein

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Glycoproteomics of the Extracellular Matrix: A Method for Intact Glycopeptide Analysis Using Mass Spectrometry

Glycoproteomics av ​​den extracellulära matrisen: En metod för intakt glykopeptiden analys med masspektrometri

Fibrosis is a hallmark of many cardiovascular diseases and is associated with the exacerbated secretion and deposition of the extracellular matrix (ECM). ...

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescence Live-cell Imaging of the Complete Vegetative Cell Cycle of the Slow-growing Social Bacterium Myxococcus xanthus

Fluorescens Live-cell Imaging av komplett vegetativ cellcykeln av den långsamt växande sociala bakterien Myxococcus xanthus

Fluorescence live-cell imaging of bacterial cells is a key method in the analysis of the spatial and temporal dynamics of proteins and chromosomes ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrering-gratis In Vitro kvantifiering av Protein Homo-oligomerisering använder kommersiella instrumentering och fri, öppen källkod ljusstyrka analys programvara

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifiering av romanen CK2 Kinase substrat med en mångsidig biokemisk metod

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In vivo kalcium avbildning i C. elegans kropps vägg muskler

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

En allt-i-ett-provhållare för makro molekyl ära röntgenkristallografi med minimal bakgrunds spridning

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...