Name: intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

يتم دعم هذا العمل من خلال منح من البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2018YFC1704300 و 2020YFE0201600) ، والمؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة (81973877 و 82174408) ، والمشاريع البحثية ضمن ميزانية جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (2021LK047) ، ومركز شنغهاي للابتكار التعاوني للتحول الصناعي لإعداد الطب الصيني التقليدي في المستشفى.

تم إيواء ذكور الفئران الأثيمية BALB / c البالغة من العمر ستة إلى ثمانية أسابيع (ن = 10) في أقفاص فئران جيدة التهوية (5 فئران / قفص) في غرفة خالية من مسببات الأمراض (SPF) في ظل ظروف دورة الضوء / الظلام لمدة 12 ساعة ، مع حرية الوصول إلى علف SPF والمياه المعقمة. تم تغذية الفئران بشكل تكيفي لمدة أسبوع قبل التج...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Cancerstatistics,+2021.">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+complications+of+malignancy.">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li><li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+metastases:+An+overview.">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321 (2017).</li><li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research:+From+xenograft+to+PDX.">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer.">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+bone+metastasis.">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice.">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li><li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models:+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells.">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li><li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats.">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li><li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model.">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li><li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis.">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176 (2018).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+prostate+cancer+cell+line+(Probasco)+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo.">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li><li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP/TAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis.">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response/endoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li><li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow.">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li><li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells.">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556 (2022).</li><li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA.">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2010).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cachexia:+mediators,+signaling,+and+metabolic+pathways.">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li><li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+TGF-&#946;+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice.">Excess TGF-&#946; mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li><li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint:+a+critical+appraisal.">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li><li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast.">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li><li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development.">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li><li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton.">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li><li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases.">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li></ol>

يعد الحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا البشرية لتوليد ورم خبيث في العظام نموذجا مثاليا للفأر لاستكشاف وظائف وآليات ورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا وتقييم الفعالية العلاجية. أظهرت الدراسات أن تلف العظام يحدث على الأرجح في الساق القريبة وعظم الفخذالبعيد 17 ، والذي ?...

سرطان البروستاتا هو السرطان الأكثر شيوعا بين الرجال في 112 دولة ويحتل المرتبة الثانية من حيث الوفيات في البلدان ذات مؤشر التنمية البشريةالأعلى 1,2. تحدث معظم الوفيات في مرضى سرطان البروستاتا بسبب ورم خبيث ، وحوالي 65٪ -75٪ من الحالات ستتطور إلى ورم خبيث في العظام 3,4. لذلك ، هناك حاجة ماسة للوقاية والعلاج من النقائل العظمية لسرطان البروستاتا لتحسين النتائج السريرية لمرضى سرطان البروستاتا. يعد النموذج الحيواني لورم خبيث في العظام أداة لا غنى عنها لاستكشاف العملية متعددة المراحل والآليات الجزيئية التي تنطوي عليها كل مرحلة من مراحل ورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا ، وبالتالي تحديد الأهداف العلاجية وتطوير علاجات جديدة5.
تشمل الطرق الأكثر شيوعا لإنشاء نماذج حيوانية تجريبية لورم خبيث عظمي لسرطان البروستاتا تقويم العظام ، وداخل الحجاب الحاجز (مثل داخل الظنبوب) ، والحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا. يتم إنشاء نموذج ورم خبيث عظمي مع حقن تقويم العظام عن طريق حقن خلايا سرطان البروستاتا مباشرة في البروستاتا من الفأر 6,7. هذا النموذج الحيواني التجريبي له خصائص سريرية مشابهة جدا لورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا. ومع ذلك ، يحدث ورم خبيث بشكل رئيسي في العقدة الليمفاوية الإبطية والرئة بدلا من العظام 8,9. يقوم نموذج الحقن داخل الظنبوب لسرطان البروستاتا بحقن خلايا سرطان البروستاتا مباشرة في الساق بمعدل تكوين ورم مرتفع في العظام (الظنبوب)10,11; ومع ذلك ، فإن قشرة العظام وتجويف نخاع العظام تتلف بسهولة. بالإضافة إلى ذلك ، لا يمكن لطريقة حقن الظنبوب تحفيز العملية المرضية لورم خبيث عظمي لسرطان البروستاتا حيث تستعمر الخلايا السرطانية العظام من خلال الدورة الدموية. للتحقيق في الدورة الدموية ، وتسرب الأوعية الدموية ، وورم خبيث بعيد مع ارتفاع معدل ورم خبيث في العظام للخلايا السرطانية ، تم تطوير تقنية الحقن داخل القلب عن طريق الحقن المباشر لخلايا سرطان البروستاتا في البطين الأيسر للفأر8،12،13. هذا يجعله نموذجا حيوانيا قيما لأبحاث ورم خبيثفي العظام 8. تظهر طريقة الحقن داخل القلب معدل ورم خبيث في العظام يبلغ حوالي 75٪ 9,14 ، وهو أعلى بكثير من طريقة الحقن التقويمي. لذلك ، فإن الحقن داخل القلب هو وسيلة مثالية لتوليد نموذج حيواني مع ورم خبيث في العظام سرطان البروستاتا.
يهدف هذا العمل إلى وصف عملية إنشاء نموذج فأر لنقائل عظام سرطان البروستاتا ، مما يسمح للقراء بتصور إنشاء النموذج. يوفر العمل الحالي عمليات مفصلة واحتياطات وصورا توضيحية لتوليد نموذج xenograft للنقائل العظمية عن طريق الحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا البشرية في الفئران الأثيمية. توفر هذه الطريقة أداة فعالة لمزيد من استكشاف الآليات الجزيئية والآثار العلاجية في الجسم الحي لورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes and needles</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td>
			<td>20200411</td>
			<td>The cells were injected into the ventricles of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>Equipment for anesthetizing mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>&#160;For counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>6-8 week old, male mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescence imaging system</td>
			<td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td>
			<td>Vieworks</td>
			<td>For tracking the tumor growth and pulmonary metastasis if the injected cells are labeled by luciferase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL, 50 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>&#160;430790, Corning</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1105</td>
			<td>&#160;For decalcification of bone tissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 medium</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>21700075, GIBCO</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>BL539A</td>
			<td>For fixing the specimen of each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>11668027, Thermo fisher</td>
			<td>Plasmid transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-3 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 158</td>
			<td>Prostate cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>Wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>For detaching the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector (pLV-luciferase)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>VL3613</td>
			<td>Plasmid for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray imaging system</td>
			<td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td>
			<td>FX PRO</td>
			<td>For obtaining x-ray images to detect tumor growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT80</td>
			<td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td>
			<td>Scanco Medical AG,Switzerland</td>
			<td>For detection of bone destruction. The mico-CT is equipped with 3DCalc, cone reconstruction,&#160; and &#956;CT Ray V3.4A model visualization software.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model

باعتباره أكثر الأورام الخبيثة شيوعا بين الذكور ، يحتل سرطان البروستاتا (PC) المرتبة الثانية في معدل الوفيات ، ويرجع ذلك أساسا إلى معدل ورم خبيث في العظام بنسبة 65٪ -75٪. لذلك ، من الضروري فهم العملية والآليات ذات الصلة لورم خبيث في العظام لسرطان البروستاتا لتطوير علاجات جديدة. لهذا ، فإن النموذج الحيواني لورم خبيث في العظام هو أداة أساسية. هنا ، نبلغ عن إجراءات مفصلة لإنشاء نموذج فأر ورم خبيث عظمي عن طريق الحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا. يمكن لنظام تصوير التلألؤ الحيوي تحديد ما إذا كانت خلايا سرطان البروستاتا قد تم حقنها بدقة في القلب ومراقبة ورم خبيث للخلايا السرطانية نظرا لأنه يتمتع بمزايا كبيرة في مراقبة تطور الآفة النقيلية. يكرر هذا النموذج التطور الطبيعي للخلايا السرطانية المنتشرة لتشكيل النقائل الدقيقة في العظام ويحاكي العملية المرضية لورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا. يوفر أداة فعالة لمزيد من الاستكشاف للآليات الجزيئية والآثار العلاجية في الجسم الحي لهذا المرض.

يوفر تصوير التلألؤ البيولوجي مزايا هائلة في مراقبة تطور الآفة النقيلية لنموذج الحقن داخل القلب. بعد فترة وجيزة من حقن الخلايا السرطانية (في غضون 24 ساعة) ، تم استخدام تصوير التلألؤ الحيوي لتصور الخلايا السرطانية التي تدخل الدورة الدموية العامة (الشكل 3 أ). سيظهر التلألؤ الحي...

Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

هنا ، نقدم بروتوكولا للحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا البشرية لإنشاء نموذج فأر مع آفات ورم خبيث في العظام.

الحقن داخل القلب لخلايا سرطان البروستاتا البشرية لإنشاء نموذج فأر Xenograft نقيلي عظمي

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في إنتاج نموذج مثالي يحاكي عن كثب التقدم الطبيعي لورم خبيث في العظام لخلايا سرطان البروستاتا في الجسم الحي. تتمتع هذه التقنية بميزة ورم خبيث في العظام وتمثل عملية ورم خبيث عظمي طبيعي لخلايا سرطان البروستاتا في الجسم الحي. تفيد هذه التقنية في استكشاف الآليات الجزيئية والتحقيق في الآثار العلاجية في الجسم الحي لورم خبيث في العظام بسرطان البروستاتا.في يوم الحقن ، خذ 80 إلى 90٪ من خلايا PC3 المتقاربة التي تحمل علامة لوسيفيراز المزروعة في طبق زراعة الخلايا 10 سم وابدأ في تحضير الخلايا للحقن عن طريق غسلها مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني معقم بارد. التربسين الخلايا المغسولة مع 1.5 ملليلتر من 0.25 ٪ التربسين لمدة ثلاث دقائق ، وبعد ذلك إخماد التربسين عن طريق إضافة ستة ملليلتر من F12 المتوسطة التي تحتوي على 10 ٪ مصل وجمع الخلايا في أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر. انقل 20 ميكرولترا من تعليق الخلية المجمعة إلى لوحة عد الخلايا واحسب تركيز الخلية باستخدام عداد خلية أوتوماتيكي.بعد ذلك ، قم بطرد الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق عند 800 G.تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة وأعد تعليق حبيبات الخلية في وسط F12 لتحقيق كثافة الخلية النهائية المطلوبة. الآن احمل الخلايا إلى غرفة الجراحة وقم بإجراء حقن الخلايا في غضون ساعتين. الحفاظ على الخلايا على الجليد حتى الحقن.لبدء الجراحة ، ضع الفأر المخدر في وضع ضعيف وشل حركة كلا الطرفين العلويين عن طريق تمديدهما بشكل عمودي بعيدا عن خط الوسط. باستخدام شريط لاصق جراحي ، شل حركة الماوس من البطن إلى أسفل دون الضغط بشدة وتشريد الأعضاء الداخلية. تطهير جلد الصدر باستخدام مسحة الإيثانول 70 ٪.بعد ذلك ، قم بجس منتصف جدار الصدر الأمامي لتحديد موقع عملية خنجري الفأر في الاكتئاب عند الطرف الأدنى من منتصف القص. تسمية النقطة الأكثر أدنى من عملية الخنجري. ثم عن طريق الجس من منتصف جدار الصدر الأمامي ، حدد موقع الشق الوداجي للفأر في المنخفض المركزي عند الحد العلوي للمانوبريوم وحدد النقطة الأكثر انخفاضا في الشق الوداجي.الآن حدد موقع نقطة المنتصف بين العلامتين السابقتين وقم بتمييزها ، باتجاه اليمين قليلا وفوق القلب مباشرة في الفضاء الوربي الثالث. هذه هي نقطة الحقن. امزج تعليق الخلية جيدا قبل تحميل 200 ميكرولتر من التعليق في حقنة سعة ملليلتر واحدة مثبتة بإبرة قياس 26.اترك بعض الهواء في المحقنة بين المكبس والمعلق للسماح بدخول الدم النابض أثناء الحقن. لإجراء الحقن ، أدخل الإبرة عموديا من خلال موقع الحقن. إذا تم إدخال طرف الإبرة بشكل صحيح في البطين الأيسر ، فسيكون الدم النابض الأحمر الفاتح مرئيا في محور الإبرة.أعد محاولة الحقن إذا كان نبض الدم غير مرئي أو كان الدم يتجلط. بمجرد إدخال الإبرة بشكل صحيح ، قم بحقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية ببطء شديد على مدار 40 إلى 60 ثانية بيد ثابتة. بعد الانتهاء من الحقن ، اسحب الإبرة أثناء الضغط على موقع الحقن بقطعة قطن جافة لمدة 15 ثانية لضمان الإرقاء.أعد الماوس إلى القفص النظيف وراقب الحيوان حتى يتعافى تماما من التخدير. أظهر تصوير التلألؤ البيولوجي الذي تم إجراؤه بعد 24 ساعة من حقن خلايا PC3 التي تحمل علامة لوسيفيراز في الفأر إشارات من جسم الحيوان بأكمله تشير إلى وجود خلايا سرطانية في الدورة الدموية الجهازية. ظهرت الآفات النقيلية في الأطراف الخلفية للفأر بعد أسبوعين من الحقن.أصبحت الآفات النقيلية أكبر مع تقدم الوقت وبدأت في الظهور في مواقع أخرى. تم الكشف عن الآفات النقيلية التي تسببها خلايا سرطان البروستاتا في العظام باستخدام التصوير بالأشعة السينية الذي أظهر تدمير العظام في الساق القريبة للحيوان. تم تأكيد الشيء نفسه أيضا من خلال التصوير المقطعي المحوسب الدقيق.تم تأكيد الآفات النقيلية بشكل أكبر في الأنسجة المدمجة في البارافين عن طريق تلطيخ الهيماتين والإيوزين. موقع الحقن الدقيق مهم جدا لضمان معدل نجاح هذا النموذج. يمكن تحقيق ذلك بالممارسة.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

داخل الحرقفي حقن الشريان للنمذجة فعالة وانتقائية مجهرية العظام الانبثاث

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid حقن الخلية السرطانية لإنتاج نماذج الماوس من الدماغ الانبثاث

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

ورم انجرافتمينت في نموذج الفأر إكسينوجرافت من عباءة البشرية الخلية اللمفاوية

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

نماذج Xenograft المتوارثية المستمدة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم وورم الانبثاث العفوي

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Analysis of Three-Dimensional (3D) Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Establishment and Analysis of Three-Dimensional 3D Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

إنشاء وتحليل الأرغن ثلاثيالأبعاد (3D) المستمدة من عينات الانبثاث العظام سرطان البروستاتا المريض وXenografts بهم

Three-dimensional (3D) culture of organoids from tumor specimens of human patients and patient-derived xenograft (PDX) models of prostate cancer, referred ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

نموذج مورين أومايا زينوغرافت لدراسة العلاج المباشر المستهدف لمرض اللبتومينينجال

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

A Syngeneic العظام العظام سبراغ داولي نموذج الفئران مع بتر للسيطرة على معدل الانبثاث

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...