Name: intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

이 작업은 중국 국가 핵심 R&D 프로그램(2018YFC1704300 및 2020YFE0201600), 국립 자연 과학 재단(81973877 및 82174408), 상하이 중의과 대학(2021LK047) 예산 내 연구 프로젝트, 상하이 병원 TCM 준비 산업 혁신 협력 혁신 센터.

6주령에서 8주령의 수컷 BALB/c 무흉선 마우스(n = 10)는 12시간 명암기 조건에서 특정 병원체가 없는(SPF) 동물실에서 개별적으로 환기되는 마우스 케이지(5마리/케이지)에 수용되었으며, SPF 사료 및 멸균수에 자유롭게 접근할 수 있습니다. 마우스는 실험 전에 일주일 동안 적응적으로 먹이를 주었다. 모든 동물 실험은 상하이 중의과 대학 동물 복지위원회의 승인을 받았습니다.
<stro...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Cancerstatistics,+2021.">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+complications+of+malignancy.">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li><li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+metastases:+An+overview.">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321 (2017).</li><li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research:+From+xenograft+to+PDX.">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer.">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+bone+metastasis.">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice.">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li><li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models:+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells.">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li><li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats.">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li><li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model.">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li><li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis.">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176 (2018).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+prostate+cancer+cell+line+(Probasco)+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo.">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li><li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP/TAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis.">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response/endoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li><li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow.">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li><li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells.">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556 (2022).</li><li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA.">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2010).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cachexia:+mediators,+signaling,+and+metabolic+pathways.">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li><li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+TGF-&#946;+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice.">Excess TGF-&#946; mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li><li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint:+a+critical+appraisal.">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li><li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast.">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li><li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development.">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li><li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton.">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li><li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases.">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li></ol>

골 전이를 발생시키는 인간 전립선암 세포의 심장내 주사는 전립선암 골 전이의 기능 및 메커니즘을 탐색하고 치료 효능을 평가하기 위한 이상적인 마우스 모델이다. 연구에 따르면 뼈 손상은 근위 경골과 원위 대퇴골17에서 발생할 가능성이 가장 높으며, 이는 높은 혈관 형성 및 대사 활동 때문일 수 있습니다.
뼈 전이는 유방암 환자에서 빈번하게 관찰되는...

전립선 암은 112 국가에서 남성에게 가장 흔한 암이며 인간 발달 지수가 높은 국가 1,2에서 사망률 2 위를 차지했습니다. 전립선암 환자의 대부분의 사망은 전이에 의해 발생하며, 사례의 약 65%-75%는 뼈 전이가 발생합니다 3,4. 따라서 전립선암 환자의 임상 결과를 개선하기 위해서는 전립선암 골 전이의 예방 및 치료가 시급하다. 뼈 전이의 동물 모델은 전립선암 뼈 전이의 각 단계에 관여하는 다단계 과정과 분자 메커니즘을 탐색하여 치료 표적을 식별하고 새로운 치료법을 개발하는 데 없어서는 안될 도구입니다5.
전립선암 골 전이의 실험 동물 모델을 생성하는 가장 일반적인 방법은 전립선암 세포의 동소, 골내 (예: 경골내) 및 심장내 주사를 포함한다. 동소 주사를 이용한 골 전이 모델은 전립선암 세포를 마우스의 전립선에 직접 주입함으로써 생성된다 6,7. 이 실험 동물 모델은 전립선암 뼈 전이와 매우 유사한 임상적 특징을 가지고 있습니다. 그러나 전이는 주로 뼈보다는 겨드랑이 림프절과 폐에서 발생합니다 8,9. 전립선암에 대한 경골내 주사 모델은 뼈(경골)의 종양 형성률이 높은 전립선암 세포를 경골에 직접 주입합니다10,11; 그러나 뼈 피질과 골수강은 쉽게 손상됩니다. 또한, 경골 주사 방법은 암세포가 순환을 통해 뼈를 식민지화하는 전립선암 뼈 전이의 병리학적 과정을 자극할 수 없습니다. 암세포의 골전이율이 높은 순환순환, 혈관혈관외유출, 원격전이를 조사하기 위해 전립선암세포를 마우스의 좌심실에 직접 주입하는 심장내 주사기법이 개발되었다 8,12,13. 이것은 뼈 전이 연구를 위한 귀중한 동물 모델이 된다8. 심장 내 주사 방법은 약 75%의 골 전이율을 보이며9,14 동소 주사 방법보다 훨씬 높습니다. 따라서, 심장내 주사는 전립선암 동물모델을 생성하는데 이상적인 방법이다.
이 작업은 전립선암 뼈 전이의 마우스 모델을 구축하는 과정을 설명하여 독자가 모델 설정을 시각화할 수 있도록 하는 것을 목표로 합니다. 현재 작업은 무흉선 마우스에서 인간 전립선암 세포의 심장 내 주입을 통해 뼈 전이 이종 이식 모델을 생성하기 위한 자세한 프로세스, 예방 조치 및 예시 사진을 제공합니다. 이 방법은 전립선암 골 전이의 분자 메커니즘 및 생체 내 치료 효과를 추가로 탐색하기 위한 효과적인 도구를 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes and needles</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td>
			<td>20200411</td>
			<td>The cells were injected into the ventricles of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>Equipment for anesthetizing mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>&#160;For counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>6-8 week old, male mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescence imaging system</td>
			<td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td>
			<td>Vieworks</td>
			<td>For tracking the tumor growth and pulmonary metastasis if the injected cells are labeled by luciferase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL, 50 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>&#160;430790, Corning</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1105</td>
			<td>&#160;For decalcification of bone tissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 medium</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>21700075, GIBCO</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>BL539A</td>
			<td>For fixing the specimen of each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>11668027, Thermo fisher</td>
			<td>Plasmid transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-3 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 158</td>
			<td>Prostate cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>Wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>For detaching the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector (pLV-luciferase)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>VL3613</td>
			<td>Plasmid for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray imaging system</td>
			<td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td>
			<td>FX PRO</td>
			<td>For obtaining x-ray images to detect tumor growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT80</td>
			<td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td>
			<td>Scanco Medical AG,Switzerland</td>
			<td>For detection of bone destruction. The mico-CT is equipped with 3DCalc, cone reconstruction,&#160; and &#956;CT Ray V3.4A model visualization software.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model

가장 흔한 남성 악성 종양인 전립선암(PC)은 주로 65%-75%의 뼈 전이율로 인해 사망률 2위를 차지합니다. 따라서 새로운 치료제 개발을 위해서는 전립선암 골전이의 과정 및 관련 기전을 이해하는 것이 필수적이다. 이를 위해서는 뼈 전이의 동물 모델이 필수적인 도구입니다. 여기에서는 전립선암 세포의 심장 내 주사를 통해 뼈 전이 마우스 모델을 생성하는 자세한 절차를 보고합니다. 생물발광 이미징 시스템은 전립선암 세포가 심장에 정확하게 주입되었는지 여부를 확인하고 전이성 병변 발달을 모니터링하는 데 큰 이점이 있기 때문에 암세포 전이를 모니터링할 수 있습니다. 이 모델은 파종된 암세포의 자연적 발달을 복제하여 뼈에 미세 전이를 형성하고 전립선암 뼈 전이의 병리학적 과정을 모방합니다. 그것은 이 질병의 분자 메커니즘과 생체 내 치료 효과에 대한 추가 탐색을 위한 효과적인 도구를 제공합니다.

생물발광 이미징은 심장 내 주사 모델의 전이성 병변 발달을 모니터링하는 데 엄청난 이점을 제공합니다. 암세포 주입 직후(24시간 이내), 생체발광 이미징을 사용하여 일반 순환계로 들어가는 암세포를 시각화했습니다(그림 3A). 암세포가 동맥 순환에 적절하게 주입될 때 몸 전체에 명백한 생물발광 신호가 나타납니다. 주사 부위(심장)에서만 생물발광 신호를 나타내는 마우...

Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

여기서, 본 발명자들은 골전이 병변이 있는 마우스 모델을 생성하기 위해 인간 전립선암 세포의 심장내 주사를 위한 프로토콜을 제시한다.

인간 전립선암 세포의 심장내 주사를 통해 뼈 전이 이종이식 마우스 모델 생성

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

이 방법은 생체 내에서 전립선암 세포의 자연적인 골 전이 진행을 밀접하게 모방하는 이상적인 모델을 생성하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술은 생체 내에서 전립선암 세포의 자연적인 골 전이 과정을 나타내는 골 전이의 장점이 있다. 이 기술은 분자 메커니즘의 탐색과 전립선암 뼈 전이에 대한 생체 내 치료 효과의 조사에 도움이 됩니다.주사 당일, 10cm 세포 배양 접시에서 배양된 80 내지 90%confluent luciferase-labeled PC3 세포를 취하여 차가운 멸균 PBS로 2회 세척하여 주사 준비를 시작한다. 세척된 세포를 1.5밀리리터의 0.25% 트립신으로 3분 동안 트립신화한 다음, 10% 혈청을 함유하는 F12 배지 6밀리리터를 첨가하여 트립신을 소멸시키고 세포를 15밀리리터 원심분리기 튜브에 수집합니다. 수집 된 세포 현탁액 20 마이크로 리터를 세포 계수 플레이트에 옮기고 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 농도를 계산합니다.다음으로, 실온에서 800G에서 5분 동안 세포를 원심분리하고, 피펫을 사용하여 상층액을 버리고 F12 배지에 세포 펠릿을 재현탁하여 원하는 최종 세포 밀도를 얻습니다. 이제 세포를 수술실로 옮기고 2 시간 이내에 세포 주사를 수행하십시오. 주사 할 때까지 세포를 얼음 위에 보관하십시오.수술을 시작하려면 마취된 마우스를 앙와위 자세로 놓고 양쪽 상지를 정중선에서 수직으로 늘려 고정시킵니다. 수술 용 접착 테이프를 사용하여 마우스를 복부에서 아래로 고정시키고 내부 장기를 세게 누르지 않고 고정시킵니다. 70 % 에탄올 면봉을 사용하여 흉부의 피부를 소독하십시오.다음으로, 전방 흉벽의 중앙을 촉진하여 흉골 중간의 가장 낮은 끝의 함몰부에서 마우스 검상돌기를 찾습니다. xiphoid 과정의 가장 열등한 지점에 표시하십시오. 그런 다음 전방 흉벽의 중앙에서 위로 촉진하여 manubrium의 위쪽 경계에 있는 중앙 함몰부에 마우스 경정맥 노치를 찾아 경정맥 노치의 가장 아래쪽 지점을 표시합니다.이제 세 번째 늑간 공간에서 약간 오른쪽과 심장 바로 위에 있는 이전 두 표시 사이의 중간 지점을 찾아 표시합니다. 이것이 주입 지점입니다. 200 마이크로 리터의 현탁액을 26 게이지 바늘이 장착 된 1 밀리리터 주사기에 넣기 전에 세포 현탁액을 완전히 혼합하십시오.주입 중에 맥동하는 혈액이 들어갈 수 있도록 플런저와 서스펜션 사이의 주사기에 약간의 공기를 남겨 두십시오. 주사를 수행하려면 주사 부위를 통해 바늘을 수직으로 삽입하십시오. 바늘 끝이 좌심실에 올바르게 삽입되면 바늘 허브에 밝은 빨간색의 맥동 혈액이 보입니다.혈액 맥동이 보이지 않거나 혈액이 응고되는 경우 주사를 다시 시도하십시오. 바늘이 제대로 삽입되면 100 마이크로 리터의 세포 현탁액을 40-60 초에 걸쳐 매우 천천히 안정된 손으로 주입합니다. 주사 완료 후 마른 면봉으로 주사 부위에 압력을 가하면서 바늘을 15초 동안 집어넣어 지혈을 합니다.마우스를 깨끗한 케이지로 돌려 보내고 마취에서 완전히 회복 될 때까지 동물을 모니터링하십시오. 루시페라아제 표지된 PC3 세포를 마우스에 주사한 후 24시간 후에 수행된 생체발광 이미징은 전신 순환계에 암세포의 존재를 나타내는 동물의 전신으로부터의 신호를 보여주었다. 전이성 병변은 주사 2 주 후 마우스의 뒷다리에 나타났다.전이성 병변은 시간이 지남에 따라 더 커졌고 다른 부위에 나타나기 시작했습니다. 전립선암 세포에 의해 유발된 뼈의 전이성 병변은 동물의 근위 경골에서 뼈 파괴를 보여주는 X선 영상을 사용하여 추가로 검출되었습니다. 마이크로 CT 스캐닝으로도 동일하게 확인되었습니다.전이성 병변은 헤마틴 및 에오신 염색에 의해 파라핀 포매 조직에서 추가로 확인되었습니다. 정확한 주사 부위는 이 모델의 성공률을 보장하는 데 매우 중요합니다. 이것은 연습을 통해 달성 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

현미경 뼈 전이의 효율적이고 선택적 모델링을위한 내부 장골 동맥 주입

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

연구

암 연구학

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid 암 세포 주입 뇌 전이의 마우스 모델을 제작하기

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

인간의 맨 틀 세포 림프 종의이 종이 식 마우스 모델에서 종양 Engraftment

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

인간 비뇨기과 세포 암 및 대장암 종양 성장 및 자발적 전이를 위한 환자 유래 직교 이종이식 모델

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Analysis of Three-Dimensional (3D) Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Establishment and Analysis of Three-Dimensional 3D Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

환자 전립선암 뼈 전이 표본 및 이종이식에서 파생된 3차원(3D) 오르가노이드의 설립 및 분석

Three-dimensional (3D) culture of organoids from tumor specimens of human patients and patient-derived xenograft (PDX) models of prostate cancer, referred ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

종양 세포의 측면 꼬리 정맥 주입 다음 폐 전이의 병리학 적 분석

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

렙토메뇌질환의 직접 표적 치료를 연구하는 뮤린 옴마야 제노이식 모델

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

전이율을 제어하는 절단을 가진 신제닉 직소 성 골육종 스프라그 Dawley 쥐 모델

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...