Name: intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00
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Este trabajo está respaldado por subvenciones del Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (2018YFC1704300 y 2020YFE0201600), la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza (81973877 y 82174408), los proyectos de investigación dentro del presupuesto de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai (2021LK047) y el Centro de Innovación Colaborativa de Shanghai de Transformación Industrial de Preparación de MTC Hospitalaria.

Los ratones atímicos machos BALB/c machos de seis a ocho semanas de edad (n = 10) fueron alojados en jaulas de ratones ventilados individualmente (5 ratones/jaula) en una sala de animales libre de patógenos específicos (SPF) bajo las condiciones de ciclo de luz/oscuridad de 12 h, con libre acceso a alimento SPF y agua estéril. Los ratones fueron alimentados adaptativamente durante una semana antes de los experimentos. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el comité de bienestar animal de la Univer...

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	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Cancerstatistics,+2021.">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+complications+of+malignancy.">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li><li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+metastases:+An+overview.">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321 (2017).</li><li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research:+From+xenograft+to+PDX.">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer.">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+bone+metastasis.">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice.">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li><li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models:+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells.">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li><li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats.">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li><li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model.">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li><li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis.">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176 (2018).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+prostate+cancer+cell+line+(Probasco)+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo.">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li><li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP/TAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis.">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response/endoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li><li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow.">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li><li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells.">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556 (2022).</li><li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA.">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2010).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cachexia:+mediators,+signaling,+and+metabolic+pathways.">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li><li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+TGF-&#946;+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice.">Excess TGF-&#946; mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li><li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint:+a+critical+appraisal.">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li><li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast.">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li><li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development.">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li><li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton.">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li><li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases.">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li></ol>

La inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar metástasis óseas es un modelo de ratón ideal para explorar las funciones y mecanismos de la metástasis ósea del cáncer de próstata y evaluar la eficacia terapéutica. Los estudios han demostrado que el daño óseo probablemente ocurre en la tibia proximal y el fémur distal17, lo que puede deberse a su alta vascularización y actividad metabólica.
Dado que la metástasis ósea e...

El cáncer de próstata es el cáncer más frecuente en hombres en 112 países y ocupa el segundo lugar en mortalidad en los países con mayor índice de desarrollo humano 1,2. La mayoría de las muertes en pacientes con cáncer de próstata son causadas por metástasis, y alrededor del 65%-75% de los casos desarrollarán metástasis óseas 3,4. Por lo tanto, se necesitan urgentemente la prevención y el tratamiento de las metástasis óseas del cáncer de próstata para mejorar el resultado clínico de los pacientes con cáncer de próstata. El modelo animal de metástasis ósea es una herramienta indispensable para explorar el proceso multietapa y los mecanismos moleculares implicados en cada estadio de la metástasis ósea del cáncer de próstata, identificando así dianas terapéuticas y desarrollando nuevas terapias5.
Los métodos más comunes para generar modelos animales experimentales de metástasis óseas de cáncer de próstata incluyen la inyección ortotópica, intradiáfisis (como intratibial) e intracardíaca de células de cáncer de próstata. El modelo de metástasis ósea con inyección ortotópica se genera inyectando directamente células de cáncer de próstata en la próstata de un ratón 6,7. Este modelo animal experimental tiene características clínicas muy similares a la metástasis ósea del cáncer de próstata. Sin embargo, la metástasis ocurre principalmente en el ganglio linfático axilar y el pulmón más que en el hueso 8,9. El modelo de inyección intratibial para el cáncer de próstata inyecta directamente células de cáncer de próstata en la tibia con una alta tasa de formación de tumores en el hueso (tibia)10,11; Sin embargo, la corteza ósea y la cavidad de la médula ósea se dañan fácilmente. Además, el método de inyección tibial no puede estimular el proceso patológico de la metástasis ósea del cáncer de próstata en el que las células cancerosas colonizan el hueso a través de la circulación. Para investigar la circulación, la extravasación vascular y la metástasis a distancia con una mayor tasa de metástasis ósea de las células cancerosas, se ha desarrollado una técnica de inyección intracardíaca mediante la inyección directa de células de cáncer de próstata en el ventrículo izquierdo del ratón 8,12,13. Esto lo convierte en un modelo animal valioso para la investigación de metástasis óseas8. El método de inyección intracardíaca muestra una tasa de metástasis ósea de alrededor del 75%9,14, mucho más alta que el método de inyección ortotópica. Por lo tanto, la inyección intracardíaca es un método ideal para generar un modelo animal con metástasis óseas de cáncer de próstata.
Este trabajo tiene como objetivo describir el proceso de establecimiento de un modelo de ratón de metástasis óseas de cáncer de próstata, permitiendo a los lectores visualizar el establecimiento del modelo. El trabajo actual proporciona procesos detallados, precauciones e imágenes ilustrativas para generar un modelo de xenoinjerto de metástasis ósea a través de la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano en ratones atímicos. Este método proporciona una herramienta eficaz para explorar más a fondo los mecanismos moleculares y los efectos terapéuticos in vivo de la metástasis ósea del cáncer de próstata.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes and needles</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td>
			<td>20200411</td>
			<td>The cells were injected into the ventricles of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>Equipment for anesthetizing mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>&#160;For counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>6-8 week old, male mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescence imaging system</td>
			<td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td>
			<td>Vieworks</td>
			<td>For tracking the tumor growth and pulmonary metastasis if the injected cells are labeled by luciferase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL, 50 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>&#160;430790, Corning</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1105</td>
			<td>&#160;For decalcification of bone tissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 medium</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>21700075, GIBCO</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>BL539A</td>
			<td>For fixing the specimen of each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>11668027, Thermo fisher</td>
			<td>Plasmid transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-3 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 158</td>
			<td>Prostate cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>Wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>For detaching the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector (pLV-luciferase)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>VL3613</td>
			<td>Plasmid for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray imaging system</td>
			<td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td>
			<td>FX PRO</td>
			<td>For obtaining x-ray images to detect tumor growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT80</td>
			<td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td>
			<td>Scanco Medical AG,Switzerland</td>
			<td>For detection of bone destruction. The mico-CT is equipped with 3DCalc, cone reconstruction,&#160; and &#956;CT Ray V3.4A model visualization software.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model

Como la neoplasia maligna masculina más común, el cáncer de próstata (CP) ocupa el segundo lugar en mortalidad, principalmente debido a una tasa de metástasis ósea del 65% al 75%. Por lo tanto, es esencial comprender el proceso y los mecanismos relacionados con la metástasis ósea del cáncer de próstata para desarrollar nuevas terapias. Para ello, un modelo animal de metástasis ósea es una herramienta esencial. Aquí, informamos procedimientos detallados para generar un modelo de ratón con metástasis ósea a través de la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata. Un sistema de imágenes de bioluminiscencia puede determinar si las células de cáncer de próstata se han inyectado con precisión en el corazón y controlar la metástasis de las células cancerosas, ya que tiene grandes ventajas en el seguimiento del desarrollo de lesiones metastásicas. Este modelo replica el desarrollo natural de las células cancerosas diseminadas para formar micrometástasis en el hueso e imita el proceso patológico de la metástasis ósea del cáncer de próstata. Proporciona una herramienta eficaz para una mayor exploración de los mecanismos moleculares y los efectos terapéuticos in vivo de esta enfermedad.

Las imágenes de bioluminiscencia ofrecen enormes ventajas en el monitoreo del desarrollo de lesiones metastásicas para un modelo de inyección intracardíaca. Poco después de la inyección de células cancerosas (dentro de las 24 h), se utilizaron imágenes de bioluminiscencia para visualizar las células cancerosas que ingresan a la circulación general (Figura 3A). La señalización obvia de bioluminiscencia en todo el cuerpo se verá cuando las células cancerosas se inyecten correctam...

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Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

Aquí, presentamos un protocolo para la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar un modelo de ratón con lesiones de metástasis óseas.

Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Este método puede ayudar a producir un modelo ideal que imita de cerca el progreso natural de la metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica tiene la ventaja de una metástasis ósea y representa el proceso natural de metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica beneficia la exploración de los mecanismos moleculares y la investigación de los efectos terapéuticos in vivo para la metástasis ósea del cáncer de próstata.El día de la inyección, tome células PC3 marcadas con luciferasa confluente del 80 al 90% cultivadas en una placa de cultivo celular de 10 centímetros y comience a preparar las células para la inyección lavándolas dos veces con PBS estéril en frío. Tripsinizar las células lavadas con 1,5 mililitros de tripsina al 0,25% durante tres minutos, después de lo cual apagar la tripsina añadiendo seis mililitros de medio F12 que contiene 10% de suero y recoger las células en un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Transfiera 20 microlitros de la suspensión celular recolectada a una placa de conteo celular y calcule la concentración celular utilizando un contador automático de células.A continuación, centrifugar las células a temperatura ambiente durante cinco minutos a 800 G.Deseche el sobrenadante con una pipeta y vuelva a suspender el pellet de la celda en medio F12 para lograr la densidad celular final deseada. Ahora lleve las células a la sala de cirugía y realice la inyección de células dentro de dos horas. Mantenga las células en hielo hasta la inyección.Para comenzar la cirugía, coloque al ratón anestesiado en posición supina e inmovilice ambas extremidades superiores estirándolas perpendicularmente lejos de la línea media. Usando cinta adhesiva quirúrgica, inmovilice al ratón desde el abdomen hacia abajo sin presionar con fuerza y desplazando los órganos internos. Desinfecte la piel del tórax con un hisopo de etanol al 70%.A continuación, palpe por el centro de la pared torácica anterior para localizar el proceso xifoide del ratón en la depresión en el extremo más bajo del esternón medio. Etiquete el punto más inferior del proceso xifoide. Luego, palpando hacia arriba desde el centro de la pared torácica anterior, ubique la muesca yugular del ratón en la depresión central en el borde superior del manubrio y marque el punto más inferior de la muesca yugular.Ahora localice y marque el punto medio entre las dos marcas anteriores, ligeramente hacia la derecha y justo sobre el corazón en el tercer espacio intercostal. Este es el punto de inyección. Mezcle bien la suspensión celular antes de cargar 200 microlitros de la suspensión en una jeringa de un mililitro montada con una aguja de calibre 26.Deje un poco de aire en la jeringa entre el émbolo y la suspensión para permitir la entrada de sangre pulsante durante la inyección. Para realizar la inyección, inserte verticalmente la aguja a través del sitio de inyección. Si la punta de la aguja se inserta correctamente en el ventrículo izquierdo, la sangre pulsante de color rojo brillante será visible en el cubo de la aguja.Vuelva a intentar inyectarse si la pulsación sanguínea no es visible o si la sangre se coagula. Una vez que la aguja se inserta correctamente, inyecte 100 microlitros de la suspensión celular muy lentamente durante 40 a 60 segundos con una mano estable. Después de completar la inyección, retraiga la aguja mientras aplica presión en el lugar de la inyección con un hisopo de algodón seco durante 15 segundos para asegurar la hemostasia.Devuelva el ratón a la jaula limpia y controle al animal hasta que se recupere completamente de la anestesia. Las imágenes de bioluminiscencia realizadas 24 horas después de inyectar células PC3 marcadas con luciferasa en el ratón mostraron señales de todo el cuerpo del animal que indican la presencia de células cancerosas en la circulación sistémica. Las lesiones metastásicas aparecieron en las extremidades posteriores del ratón dos semanas después de la inyección.Las lesiones metastásicas se hicieron más grandes a medida que avanzaba el tiempo y comenzaron a aparecer en otros sitios. Las lesiones metastásicas inducidas por células de cáncer de próstata en los huesos se detectaron aún más utilizando imágenes de rayos X que mostraron destrucción ósea en la tibia proximal del animal. Lo mismo también fue confirmado por micro tomografía computarizada.Las lesiones metastásicas se confirmaron aún más en los tejidos embebidos en parafina mediante tinción con hematina y eosina. El sitio de inyección preciso es muy importante para garantizar la tasa de éxito de este modelo. Esto se puede lograr mediante la práctica.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-ilíaca Arteria inyección de Modelamiento eficiente y selectiva de microscópico metástasis en los huesos

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Una inyección Modelo vena porta del hígado para estudiar la metástasis del cáncer de mama

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotídea inyección de las células del cáncer para Producción de ratón Modelos de metástasis cerebral

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Engraftment de tumor en un modelo de ratón de xenoinjerto de linfoma de manto humano

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modelos de xenoinjerto ortotópico derivados del paciente para el carcinoma de células uroteliales humanas y el crecimiento tumoral del cáncer colorrectal y la metástasis espontánea

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Analysis of Three-Dimensional (3D) Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Establishment and Analysis of Three-Dimensional 3D Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Establecimiento y Análisis de Organoides Tridimensionales (3D) Derivados de los Especímenes de Metastasis ósea del Cáncer de Próstata del Paciente y sus Xenoinjertos

Three-dimensional (3D) culture of organoids from tumor specimens of human patients and patient-derived xenograft (PDX) models of prostate cancer, referred ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análisis patológico de metástasis pulmonares después de la inyección lateral de células tumorales en la vena de la cola

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Un modelo de xenoinjerto murino de Ommaya para estudiar la terapia dirigida directamente de la enfermedad leptomeningeal

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Un modelo de rata Sprague Dawley de osteosarcoma ortotópico singénico con amputación para controlar la tasa de metástasis

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modelado de metástasis cerebral mediante inyección en la vena de cola de células inflamatorias de cáncer de mama

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...