Name: intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2018YFC1704300 ve 2020YFE0201600), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973877 ve 82174408), Şangay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (2021LK047) bütçesi dahilindeki araştırma projeleri ve Şangay İşbirliği İnovasyon Merkezi Hastane TCM Hazırlığı Endüstriyel Dönüşüm Merkezi tarafından desteklenmektedir.

Altı ila sekiz haftalık erkek BALB / c atimik fareler (n = 10), SPF yemine ve steril suya serbest erişime sahip, 12 saatlik aydınlık / karanlık döngü koşulları altında spesifik patojen içermeyen (SPF) bir hayvan odasında ayrı ayrı havalandırılan farelerin kafeslerine (5 fare / kafes) yerleştirildi. Fareler, deneylerden önce bir hafta boyunca uyarlanabilir bir şekilde beslendi. Tüm hayvan deneyleri, Şangay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi hayvan refahı komitesi tarafından onaylandı.
<p cl...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Cancerstatistics,+2021.">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+complications+of+malignancy.">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li><li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+metastases:+An+overview.">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321 (2017).</li><li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research:+From+xenograft+to+PDX.">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer.">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+bone+metastasis.">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice.">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li><li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models:+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells.">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li><li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats.">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li><li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model.">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li><li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis.">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176 (2018).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+prostate+cancer+cell+line+(Probasco)+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo.">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li><li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP/TAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis.">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response/endoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li><li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow.">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li><li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells.">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556 (2022).</li><li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA.">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2010).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cachexia:+mediators,+signaling,+and+metabolic+pathways.">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li><li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+TGF-&#946;+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice.">Excess TGF-&#946; mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li><li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint:+a+critical+appraisal.">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li><li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast.">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li><li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development.">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li><li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton.">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li><li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases.">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li></ol>

Kemik metastazı oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu, prostat kanseri kemik metastazının fonksiyonlarını ve mekanizmalarını araştırmak ve terapötik etkinliği değerlendirmek için ideal bir fare modelidir. Çalışmalar, kemik hasarının büyük olasılıkla proksimal tibia ve distal femur17'de meydana geldiğini ve bunun da yüksek vaskülarizasyon ve metabolik aktivitelerinden kaynaklanabileceğini göstermiştir.
<p class="jove_content"...

Prostat kanseri, 112 ülkede erkeklerde en sık görülen kanserdir ve yüksek insani gelişme endeksi ülkelerinde ölüm oranı açısından ikinci sırada yer almaktadır 1,2. Prostat kanseri hastalarında ölümlerin çoğu metastazdan kaynaklanır ve vakaların yaklaşık% 65-75'inde kemik metastazı gelişir 3,4. Bu nedenle, prostat kanseri hastalarının klinik sonuçlarını iyileştirmek için prostat kanseri kemik metastazlarının önlenmesi ve tedavisine acilen ihtiyaç vardır. Kemik metastazının hayvan modeli, prostat kanseri kemik metastazının her aşamasında yer alan çok aşamalı süreci ve moleküler mekanizmaları keşfetmek, böylece terapötik hedefleri belirlemek ve yeni terapötikler geliştirmek için vazgeçilmez bir araçtır5.
Prostat kanseri kemik metastazının deneysel hayvan modellerini oluşturmak için en yaygın yöntemler, ortotopik, intra-diyafiz (intra-tibial gibi) ve prostat kanseri hücrelerinin intra-kardiyak enjeksiyonunu içerir. Ortotopik enjeksiyonlu kemik metastazı modeli, prostat kanseri hücrelerinin bir farenin prostatına doğrudan enjekte edilmesiyle oluşturulur 6,7. Bu deneysel hayvan modeli, prostat kanseri kemik metastazı ile çok benzer klinik özelliklere sahiptir. Bununla birlikte, metastaz esas olarak kemikte değil, aksiller lenf nodu ve akciğerde gerçekleşir 8,9. Prostat kanseri için intra-tibial enjeksiyon modeli, prostat kanseri hücrelerini kemikte yüksek tümör oluşum hızına sahip tibiaya doğrudan enjekte eder (tibia)10,11; Bununla birlikte, kemik korteksi ve kemik iliği boşluğu kolayca zarar görebilir. Ek olarak, tibial enjeksiyon yöntemi, kanser hücrelerinin dolaşım yoluyla kemiği kolonize ettiği prostat kanseri kemik metastazının patolojik sürecini uyaramaz. Kanser hücrelerinin dolaşımını, vasküler ekstravazasyonunu ve daha yüksek kemik metastazı oranı ile uzak metastazlarını araştırmak için, prostat kanseri hücrelerinin farenin sol ventrikülüne doğrudan enjekte edilmesiyle intrakardiyak enjeksiyon tekniği geliştirilmiştir 8,12,13. Bu, onu kemik metastazı araştırması için değerli bir hayvan modeli yapar8. İntrakardiyak enjeksiyon yöntemi, ortotopik enjeksiyon yönteminden çok daha yüksek olan yaklaşık %759,14'lük bir kemik metastazı oranı göstermektedir. Bu nedenle, intra-kardiyak enjeksiyon, prostat kanseri kemik metastazı olan bir hayvan modeli oluşturmak için ideal bir yöntemdir.
Bu çalışma, prostat kanseri kemik metastazlarının fare modelini oluşturma sürecini tanımlamayı ve okuyucuların model kuruluşunu görselleştirmelerini sağlamayı amaçlamaktadır. Mevcut çalışma, atimik farelerde insan prostat kanseri hücrelerinin intra-kardiyak enjeksiyonu yoluyla bir kemik metastazı ksenograft modeli oluşturmak için ayrıntılı süreçler, önlemler ve açıklayıcı resimler sunmaktadır. Bu yöntem, prostat kanseri kemik metastazının moleküler mekanizmalarını ve in vivo terapötik etkilerini daha fazla araştırmak için etkili bir araç sağlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes and needles</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td>
			<td>20200411</td>
			<td>The cells were injected into the ventricles of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>Equipment for anesthetizing mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>&#160;For counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>6-8 week old, male mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescence imaging system</td>
			<td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td>
			<td>Vieworks</td>
			<td>For tracking the tumor growth and pulmonary metastasis if the injected cells are labeled by luciferase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL, 50 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>&#160;430790, Corning</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1105</td>
			<td>&#160;For decalcification of bone tissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 medium</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>21700075, GIBCO</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>BL539A</td>
			<td>For fixing the specimen of each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>11668027, Thermo fisher</td>
			<td>Plasmid transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-3 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 158</td>
			<td>Prostate cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>Wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>For detaching the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector (pLV-luciferase)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>VL3613</td>
			<td>Plasmid for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray imaging system</td>
			<td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td>
			<td>FX PRO</td>
			<td>For obtaining x-ray images to detect tumor growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT80</td>
			<td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td>
			<td>Scanco Medical AG,Switzerland</td>
			<td>For detection of bone destruction. The mico-CT is equipped with 3DCalc, cone reconstruction,&#160; and &#956;CT Ray V3.4A model visualization software.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model

En sık görülen erkek malignitesi olan prostat kanseri (PK), esas olarak %65-75 kemik metastazı oranı nedeniyle mortalitede ikinci sırada yer almaktadır. Bu nedenle, prostat kanseri kemik metastazının sürecini ve ilgili mekanizmalarını anlamak, yeni terapötiklerin geliştirilmesi için esastır. Bunun için, kemik metastazının bir hayvan modeli önemli bir araçtır. Burada, prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu yoluyla bir kemik metastazı fare modeli oluşturmak için ayrıntılı prosedürler sunuyoruz. Bir biyolüminesans görüntüleme sistemi, prostat kanseri hücrelerinin kalbe doğru bir şekilde enjekte edilip edilmediğini belirleyebilir ve metastatik lezyon gelişimini izlemede büyük avantajlara sahip olduğu için kanser hücresi metastazını izleyebilir. Bu model, kemikte mikro-metastaz oluşturmak için yayılmış kanser hücrelerinin doğal gelişimini çoğaltır ve prostat kanseri kemik metastazının patolojik sürecini taklit eder. Moleküler mekanizmaların ve bu hastalığın in vivo terapötik etkilerinin daha fazla araştırılması için etkili bir araç sağlar.

Biyolüminesans görüntüleme, intrakardiyak enjeksiyon modeli için metastatik lezyon gelişiminin izlenmesinde muazzam avantajlar sunmaktadır. Kanser hücresi enjeksiyonundan kısa bir süre sonra (24 saat içinde), genel dolaşıma giren kanser hücrelerini görselleştirmek için biyolüminesans görüntüleme kullanıldı (Şekil 3A). Vücudun her yerinde belirgin biyolüminesans sinyali, kanser hücreleri arteriyel dolaşıma düzgün bir şekilde enjekte edildiğinde görülecektir....

Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

Burada, kemik metastazı lezyonları olan bir fare modeli oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Bu yöntem, prostat kanseri hücrelerinin kemik metastazının doğal ilerlemesini in vivo olarak yakından taklit eden ideal bir model üretmeye yardımcı olabilir. Bu teknik, kemik metastazı avantajına sahiptir ve in vivo prostat kanseri hücrelerinin doğal kemik metastazı sürecini temsil eder. Bu teknik, moleküler mekanizmaların araştırılmasına ve prostat kanseri kemik metastazı için in vivo terapötik etkilerin araştırılmasına fayda sağlar.Enjeksiyon gününde, 10 santimetrelik bir hücre kültürü kabında kültürlenmiş% 80 ila% 90 oranında birleşen lusiferaz etiketli PC3 hücrelerini alın ve hücreleri soğuk steril PBS ile iki kez yıkayarak enjeksiyon için hazırlamaya başlayın. Yıkanmış hücreleri üç dakika boyunca 1.5 mililitre% 0.25 tripsin ile tripsin yapın, ardından% 10 serum içeren altı mililitre F12 ortamı ekleyerek tripsini söndürün ve hücreleri 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne toplayın. Toplanan hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini bir hücre sayma plakasına aktarın ve otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre konsantrasyonunu hesaplayın.Daha sonra, hücreleri oda sıcaklığında 800 G'de beş dakika boyunca santrifüj edin.Bir pipet kullanarak süpernatantı atın ve istenen nihai hücre yoğunluğunu elde etmek için hücre peletini F12 ortamında yeniden askıya alın. Şimdi hücreleri ameliyathaneye taşıyın ve hücre enjeksiyonunu iki saat içinde gerçekleştirin. Enjeksiyona kadar hücreleri buz üzerinde tutun.Ameliyata başlamak için, anestezi uygulanan fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve her iki üst ekstremiteyi de orta hattan dik olarak uzatarak hareketsiz hale getirin. Cerrahi yapışkan bant kullanarak, sert bastırmadan ve iç organları yerinden oynatmadan fareyi karnından aşağı doğru hareketsiz hale getirin. Toraksın cildini% 70 etanol çubukla dezenfekte edin.Daha sonra, orta sternumun en alt ucundaki depresyondaki fare ksifoid sürecini bulmak için ön göğüs duvarının ortasından palpe edin. Ksifoid işlemin en aşağı noktasını etiketleyin. Daha sonra ön göğüs duvarının ortasından palpe ederek, fare juguler çentiğini manubriumun üst sınırındaki merkezi depresyonda bulun ve juguler çentiğin en alt noktasını işaretleyin.Şimdi önceki iki işaret arasındaki orta noktayı, hafifçe sağa doğru ve üçüncü interkostal alanda kalbin hemen üzerinde bulun ve işaretleyin. Bu enjeksiyon noktasıdır. Süspansiyonun 200 mikrolitresini 26 gauge iğne ile monte edilmiş bir mililitrelik bir şırıngaya yüklemeden önce hücre süspansiyonunu iyice karıştırın.Enjeksiyon sırasında titreşen kanın girmesine izin vermek için piston ile süspansiyon arasındaki şırıngada biraz hava bırakın. Enjeksiyonu gerçekleştirmek için, iğneyi enjeksiyon bölgesinden dikey olarak yerleştirin. İğne ucu sol ventriküle doğru şekilde yerleştirilirse, iğne göbeğinde parlak kırmızı titreşen kan görünecektir.Kan pulsasyonu görünmüyorsa veya kan pıhtılaşıyorsa enjekte etmeyi tekrar deneyin. İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini sabit bir el ile 40 ila 60 saniye boyunca çok yavaş bir şekilde enjekte edin. Enjeksiyonun tamamlanmasından sonra, hemostazı sağlamak için enjeksiyon bölgesine kuru bir pamuklu çubukla 15 saniye boyunca basınç uygularken iğneyi geri çekin.Fareyi temiz kafese geri döndürün ve anesteziden tamamen iyileşene kadar hayvanı izleyin. Lusiferaz etiketli PC3 hücrelerinin fareye enjekte edilmesinden 24 saat sonra yapılan biyolüminesans görüntüleme, hayvanın tüm vücudundan sistemik dolaşımda kanser hücrelerinin varlığını gösteren sinyaller gösterdi. Metastatik lezyonlar, enjeksiyondan iki hafta sonra farenin arka bacaklarında ortaya çıktı.Metastatik lezyonlar zaman ilerledikçe büyüdü ve diğer bölgelerde görünmeye başladı. Kemiklerdeki prostat kanseri hücresi kaynaklı metastatik lezyonlar, hayvanın proksimal tibiasında kemik yıkımını gösteren x-ışını görüntüleme kullanılarak daha da tespit edildi. Aynı şey mikro BT taraması ile de doğrulandı.Metastatik lezyonlar parafin gömülü dokularda hematin ve eozin boyaması ile daha da doğrulandı. Doğru enjeksiyon bölgesi, bu modelin başarı oranını sağlamak için çok önemlidir. Bu pratik ile başarılabilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Analysis of Three-Dimensional (3D) Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Establishment and Analysis of Three-Dimensional 3D Organoids Derived from Patient Prostate Cancer Bone Metastasis Specimens and their Xenografts

Hasta Prostat Kanseri Kemik Metastazı Örneklerinden ve Ksenogreftlerinden Elde Edilen Üç Boyutlu (3D) Organoidlerin Oluşturulması ve Analizi

Three-dimensional (3D) culture of organoids from tumor specimens of human patients and patient-derived xenograft (PDX) models of prostate cancer, referred ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Leptomeningeal Hastalığın Doğrudan Hedefli Tedavisini Incelemek için Bir Murine Ommaya Xenograft Modeli

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Metastaz Oranını Kontrol Etmek için Amputasyonlu Syngeneic Ortotopik Osteosarkom Sprague Dawley Sıçan Modeli

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...