Name: determination of the mating efficiency of haploids in saccharomyces cerevisiae
Uploaded: 2022-12-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of the Mating Efficiency of Haploids in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

تم تمويل هذا العمل من خلال منحة DBT / Wellcome Trust (تحالف الهند) (IA / S / 19/2/504632) إلى S.S. P.N. هو زميل باحث مدعوم بمنحة DBT / Wellcome Trust (تحالف الهند) (IA / S / 19/2/504632). يتم دعم A.M. من قبل مجلس البحوث العلمية والصناعية (CSIR) ، حكومة الهند ، كزميل باحث أول (09/087 (0873) / 2017-EMR-I). يشكر المؤلفون بايكي جاياديفا بهات على المناقشات.

ملاحظة: يتضمن البروتوكول بشكل عام الخطوات التالية: (1) ترقيع الأحاديات الصيغة الصبغية في شبكات كفاءة التزاوج على لوحة YPD ، (2) خلط الأحاديات الصيغة الصبغية بأعداد متساوية بعد حضانة 24 ساعة وإعطاء الأحاديات الفردية المختلطة بضع ساعات للتزاوج (7 ساعات في هذه الدراسة) ، (3) طلاء الخلايا المختلطة ع?...

<ol>
	<li>Neiman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sporulation+in+the+budding+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Sporulation in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Genetics. 189 (3), 737-765 (2011).</li><li>Duina, A. A., Miller, M. E., Keeney, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Budding+yeast+for+budding+geneticists:+A+primer+on+the+Saccharomyces+cerevisiae+model+system.">Budding yeast for budding geneticists: A primer on the Saccharomyces cerevisiae model system.</a> Genetics. 197 (1), 33-48 (2014).</li><li>Herskowitz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+the+budding+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Life cycle of the budding yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiological Reviews. 52 (4), 536-553 (1988).</li><li>Erdman, S., Lin, L., Malczynski, M., Snyder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone-regulated+genes+required+for+yeast+mating+differentiation.">Pheromone-regulated genes required for yeast mating differentiation.</a> Journal of Cell Biology. 140 (3), 461-483 (1998).</li><li>Merlini, L., Dudin, O., Martin, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+and+fuse:+How+yeast+cells+do+it.">Mate and fuse: How yeast cells do it.</a> Open Biology. 3 (3), 130008 (2013).</li><li>Gustin, M. C., Albertyn, J., Alexander, M., Davenport, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAP+kinase+pathways+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">MAP kinase pathways in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 62 (4), 1264-1300 (1998).</li><li>Bardwell, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+walk-through+of+the+yeast+mating+pheromone+response+pathway.">A walk-through of the yeast mating pheromone response pathway.</a> Peptides. 26 (2), 339-350 (2005).</li><li>Reid, B. J., Hartwell, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+mating+in+the+cell+cycle+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Regulation of mating in the cell cycle of Saccharomyces cerevisiae.</a> Journal of Cell Biology. 75, 355-365 (1977).</li><li>Williams, T. C., Peng, B., Vickers, C. E., Nielsen, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Saccharomyces+cerevisiae+pheromone-response+is+a+metabolically+active+stationary+phase+for+bio-production.">The Saccharomyces cerevisiae pheromone-response is a metabolically active stationary phase for bio-production.</a> Metabolic Engineering Communications. 3, 142-152 (2016).</li><li>Bagnat, M., Simons, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+polarization+during+yeast+mating.">Cell surface polarization during yeast mating.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (22), 14183-14188 (2002).</li><li>Trueheart, J., Boeke, J. D., Fink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+genes+required+for+cell+fusion+during+yeast+conjugation:+Evidence+for+a+pheromone-induced+surface+protein.">Two genes required for cell fusion during yeast conjugation: Evidence for a pheromone-induced surface protein.</a> Molecular and Cellular Biology. 7 (7), 2316-2328 (1987).</li><li>Sniegowski, P. D., Dombrowski, P. G., Fingerman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saccharomyces+cerevisiae+and+Saccharomyces+paradoxus+coexist+in+a+natural+woodland+site+in+North+America+and+display+different+levels+of+reproductive+isolation+from+European+conspecifics.">Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces paradoxus coexist in a natural woodland site in North America and display different levels of reproductive isolation from European conspecifics.</a> FEMS Yeast Research. 1 (4), 299-306 (2002).</li><li>Replansky, T., Koufopanou, V., Greig, D., Bell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saccharomyces+sensu+stricto+as+a+model+system+for+evolution+and+ecology.">Saccharomyces sensu stricto as a model system for evolution and ecology.</a> Trends in Ecology and Evolution. 23 (9), 494-501 (2008).</li><li>Greig, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+isolation+in+Saccharomyces.">Reproductive isolation in Saccharomyces.</a> Heredity. 102 (1), 39-44 (2009).</li><li>Mayr, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Systematics and the Origin of Species, from the Viewpoint of a Zoologist. , (1999).</li><li>Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assay+of+yeast+mating+reaction.">Assay of yeast mating reaction.</a> Methods in Enzymology. 194, 77-93 (1991).</li><li>McCaffrey, G., Clay, F. J., Kelsay, K., Sprague, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+regulation+of+a+gene+required+for+cell+fusion+during+mating+of+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Identification and regulation of a gene required for cell fusion during mating of the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Molecular and Cellular Biology. 7 (8), 2680-2690 (1987).</li><li>Valtz, N., Peter, M., Herskowitz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FAR1+is+required+for+oriented+polarization+of+yeast+cells+in+response+to+mating+pheromones.">FAR1 is required for oriented polarization of yeast cells in response to mating pheromones.</a> Journal of Cell Biology. 131 (4), 863-873 (1995).</li><li>Maclean, C. J., Greig, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prezygotic+reproductive+isolation+between+Saccharomyces+cerevisiae+and+Saccharomyces+paradoxus.">Prezygotic reproductive isolation between Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces paradoxus.</a> BMC Evolutionary Biology. 8, 1 (2008).</li><li>Murphy, H. A., Kuehne, H. A., Francis, C. A., Sniegowski, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+choice+assays+and+mating+propensity+differences+in+natural+yeast+populations.">Mate choice assays and mating propensity differences in natural yeast populations.</a> Biology Letters. 2 (4), 553-556 (2006).</li><li>Leu, J. Y., Murray, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+evolution+of+mating+discrimination+in+budding+yeast.">Experimental evolution of mating discrimination in budding yeast.</a> Current Biology. 16 (3), 280-286 (2006).</li><li>Kim, J., Hirsch, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nucleolar+protein+that+affects+mating+efficiency+in+Saccharomyces+cerevisiae+by+altering+the+morphological+response+to+pheromone.">A nucleolar protein that affects mating efficiency in Saccharomyces cerevisiae by altering the morphological response to pheromone.</a> Genetics. 149 (2), 795-805 (1998).</li><li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+dynamically+modify+their+environment+to+achieve+better+mating+efficiency.">Yeast dynamically modify their environment to achieve better mating efficiency.</a> Science Signaling. 4 (186), (2011).</li><li>Rogers, D. W., Denton, J. A., McConnell, E., Greig, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+evolution+of+species+recognition.">Experimental evolution of species recognition.</a> Current Biology. 25 (13), 1753-1758 (2015).</li><li>McClure, A. W., Jacobs, K. C., Zyla, T. R., Lew, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating+in+wild+yeast:+Delayed+interest+in+sex+after+spore+germination.">Mating in wild yeast: Delayed interest in sex after spore germination.</a> Molecular Biology of the Cell. 29 (26), 3119-3127 (2018).</li><li>Sena, E. P., Radin, D. N., Fogel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronous+mating+in+yeast.">Synchronous mating in yeast.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 70 (5), 1373-1377 (1973).</li><li>Werner-Washburne, M., Braun, E., Johnston, G. C., Singer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stationary+phase+in+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Stationary phase in the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiology Reviews. 57 (2), 383-401 (1993).</li><li>Johnston, S. A., Hopper, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+the+yeast+regulatory+gene+GAL4+and+analysis+of+its+dosage+effects+on+the+galactose/melibiose+regulon.">Isolation of the yeast regulatory gene GAL4 and analysis of its dosage effects on the galactose/melibiose regulon.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 79 (22), 6971-6975 (1982).</li><li>Mahilkar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Study of metabolic specialization leading to speciation, using yeast as a model system. , (2021).</li><li>Blank, T. E., Woods, M. P., Lebo, C. M., Xin, P., Hopper, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Gal3+proteins+showing+altered+Gal80p+binding+cause+constitutive+transcription+of+Gal4p-activated+genes+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Novel Gal3 proteins showing altered Gal80p binding cause constitutive transcription of Gal4p-activated genes in Saccharomyces cerevisiae.</a> Molecular and Cellular Biology. 17 (5), 2566-2575 (1997).</li><li>Rice, W. R., Hostert, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+experiments+on+speciation:+What+have+we+learned+in+40+years.">Laboratory experiments on speciation: What have we learned in 40 years.</a> Evolution. 47 (6), 1637-1653 (1993).</li><li>White, N. J., Snook, R. R., Eyres, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+past+and+future+of+experimental+speciation.">The past and future of experimental speciation.</a> Trends in Ecology and Evolution. 35 (1), 10-21 (2020).</li><li>Milo, R., Jorgensen, P., Moran, U., Weber, G., Springer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BioNumbers--The+database+of+key+numbers+in+molecular+and+cell+biology.">BioNumbers--The database of key numbers in molecular and cell biology.</a> Nucleic Acids Research. 38, 750-753 (2010).</li><li>Domitrovic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+study+of+YER067W,+a+new+protein+involved+in+yeast+metabolism+control+and+drug+resistance.">Structural and functional study of YER067W, a new protein involved in yeast metabolism control and drug resistance.</a> PLoS One. 5 (6), 11163 (2010).</li><li>Lindegren, C. C., Spiegelman, S., Lindegren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mendelian+inheritance+of+adaptive+enzymes.">Mendelian inheritance of adaptive enzymes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 30 (11), 346-352 (1944).</li><li>Dettman, J. R., Sirjusingh, C., Kohn, L. M., Anderson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+divergent+adaptation+and+antagonistic+epistasis+in+yeast.">Incipient speciation by divergent adaptation and antagonistic epistasis in yeast.</a> Nature. 447 (7144), 585-588 (2007).</li><li>Jhuang, H. Y., Lee, H. Y., Leu, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial-nuclear+co-evolution+leads+to+hybrid+incompatibility+through+pentatricopeptide+repeat+proteins.">Mitochondrial-nuclear co-evolution leads to hybrid incompatibility through pentatricopeptide repeat proteins.</a> EMBO Reports. 18 (1), 87-101 (2017).</li><li>Lee, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incompatibility+of+nuclear+and+mitochondrial+genomes+causes+hybrid+sterility+between+two+yeast+species.">Incompatibility of nuclear and mitochondrial genomes causes hybrid sterility between two yeast species.</a> Cell. 135 (6), 1065-1073 (2008).</li><li>Pronk, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Auxotrophic+yeast+strains+in+fundamental+and+applied+research.">Auxotrophic yeast strains in fundamental and applied research.</a> Applied and Environmental Microbiology. 68 (5), 2095-2100 (2002).</li><li>Madhani, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> From a to &#945;: Yeast as a Model for Cellular Differentiation. , (2007).</li><li>Huxley, C., Green, E. D., Dunham, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+assessment+of+S.+cerevisiae+mating+type+by+PCR.">Rapid assessment of S. cerevisiae mating type by PCR.</a> Trends in Genetics. 6 (8), 236 (1990).</li><li>Rang, C., Galen, J. E., Kaper, J. B., Chao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fitness+cost+of+the+green+fluorescent+protein+in+gastrointestinal+bacteria.">Fitness cost of the green fluorescent protein in gastrointestinal bacteria.</a> Canadian Journal of Microbiology. 49 (9), 531-537 (2003).</li><li>Tusso, S., Nieuwenhuis, B. P. S., Weissensteiner, B., Immler, S., Wolf, J. B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+evolution+of+adaptive+divergence+under+varying+degrees+of+gene+flow.">Experimental evolution of adaptive divergence under varying degrees of gene flow.</a> Nature Ecology and Evolution. 5 (3), 338-349 (2021).</li></ol>

يعد القياس الكمي لكفاءة التزاوج في S. cerevisiae ضروريا لإجراء الدراسات المتعلقة بالجينات المشاركة في مسارات التزاوج أو دراسة تأثير البيئة الخارجية على سلوك التزاوج. في العقدين الماضيين ، أصبحت S. cerevisiae أيضا نموذجا شائعا لمعالجة الأسئلة المتعلقة بالانتواع14،36</s...

Saccharomyces cerevisiae ، المعروف باسم الخميرة الناشئة ، هو حقيقيات النواة وحيدة الخلية. يحتوي على نوعين من التزاوج ، A و α ، ويظهر دورات التكاثر اللاجنسي والجنسي. النوعان A و α من التزاوج أحادي الصيغة الصبغية ويمكن أن ينقسما ميتوتيا في حالة عدم وجود نوع التزاوج الآخر في البيئة المحيطة ، والذي يمثل الدورة اللاجنسية للخميرة. عندما يكون نوعا التزاوج على مقربة ، يتوقفان عن الانقسام الميتوتي ويندمجان لتكوين خلية ثنائية الصيغة الصبغية. يمكن أن تنقسم الخميرة ثنائية الصيغة الصبغية إما انقساما عند وجود العناصر الغذائية أو تخضع للانقسام الاختزالي في ظل ظروف تجويع النيتروجين في وجود مصدر كربون فقير غير قابل للتخمير ، مثل الأسيتات1. ينتج عن هذا تكوين جراثيم تظل نائمة حتى تكون هناك ظروف نمو مواتية. تكتمل دورة الحياة عندما تنبت هذه الجراثيم ويتم إطلاق النوعين الأحاديين الصيغة الصبغية مرة أخرى إلى البركة أحادية الصيغة الصبغية 2,3 (الشكل 1).

يتضمن تزاوج خلايا الخميرة عدة خطوات ، مثل التراص ، وتشكيل إسقاط التزاوج أو "shmoo" ، تليها الخلية والاندماج النووي 4,5. ينتج نوعان من التزاوج a و α عامل a وعامل α ، على التوالي ، لبدء التزاوج. هذه العوامل هي الفيرومونات عديد الببتيد التي ترتبط بالمستقبلات (Ste2 و Ste3) الموجودة على سطح الخلية من نوع التزاوج المعاكس5. يؤدي ارتباط الفيرومونات بالمستقبلات إلى بدء مسار استجابة الفرمون ، مسار نقل إشارة بروتين كيناز المنشط للميتوجين (MAPK)6،7،8. ينتج عن هذا توقف دورة الخلية في المرحلة G1 ، مما يؤدي إلى مرحلة ثابتة نشطة أيضيا9. ثم تتوقف الخلايا عن الانقسام الميتوتي ، ويتم تصنيع البروتينات اللازمة للتزاوج. وبما أن الخلايا الأحادية الصيغة الصبغية لا يمكنها التحرك بعضها نحو بعض، فإن إسقاط التزاوج أو «shmoo» موجه نحو شريك التزاوج. عندما تتلامس الخلايا ، يتحلل جدار الخلية ، وتندمج محتويات السيتوبلازم ، مما يؤدي إلى التزاوج لتشكيل خلية ثنائية الصيغة الصبغية10,11. تم استخدام كفاءة التزاوج بين الصبغيات الفردية كمقياس للانتواع في السلالات المتطورة مختبريا ، وكذلك بين الأنواع الموجودة12.

كونها كائنا حقيقيا النواة بسيطا ، فإن الخميرة هي النموذج المفضل لعدد كبير من الأسئلة البحثية المرتبطة بالكائنات الحقيقية النواة المعقدة. يرتبط أحد هذه الأسئلة بالانتواع وتطور الحواجز الإنجابية13,14. بالنسبة للكائنات الحية التي تتكاثر جنسيا ، يتم تعريف النوع من خلال مفهوم الأنواع البيولوجية (BSC) الذي اقترحه إرنست ماير15. وفقا لهذا المفهوم ، يقال إن فردين من السكان ينتميان إلى نوعين مختلفين إذا لم يتمكنوا من التزاوج ومعزولين تناسليا. يؤدي انهيار الدورة التناسلية الجنسية (التي تتضمن اندماج الأمشاج لتكوين زيجوت ، وتطور الزيجوت إلى ذرية ، وتحقيق النضج الجنسي في النسل) إلى العزلة التناسلية. كما هو موضح في الشكل 1 ، فإن دورة حياة S. cerevisiae مماثلة لدورة التكاثر الجنسي: أ) اندماج نوعي التزاوج a و α مشابه لاندماج الأمشاج في الكائنات الحية التي تتكاثر جنسيا. ب) قدرة ثنائي الصيغة الصبغية على الخضوع للانقسام الانقسامي تعادل تطور الزيجوت إلى ذرية ؛ ج) ثنائي الصيغة الصبغية الذي يخضع للتبويض يمكن مقارنته بعملية تكوين الأمشاج14.

يحدث عزل ما قبل الزيجوت عند ملاحظة التزاوج المتنوع. بالنظر إلى فرصة متساوية للتزاوج مع نوعين مختلفين وراثيا ، فإن النوع α يتزاوج بشكل تفضيلي مع أحدهما على الآخر أو العكس14. في حالة تجارب التطور التي تطورت فيها الصبغيات الفردية في بيئات مختلفة ، يمكن تحديد وجود حاجز ما قبل التزاوج عن طريق إجراء فحص التزاوج. يشير انخفاض كفاءة التزاوج عند مقارنته بالسلف إلى تطور حاجز ما قبل التزاوج. يمكن أن تنشأ عزلة ما بعد الزيجوت بسبب عدم قدرة ثنائي الصيغة الصبغية على الخضوع للانقسام الانقسامي الفعال و / أو الأبواغ لتشكيل جراثيم أحادية الصيغة الصبغية14. يمكن قياسها كميا عن طريق قياس معدل نمو ثنائيات الصيغة الصبغية وحساب كفاءة التبويض ، على التوالي. ومن ثم ، لدراسة تطور الحواجز التناسلية ، يلزم وجود طرق قوية لتحديد (أ) كفاءة التزاوج ، (ب) النمو الانقسامي للثنائي الصيغة الصبغية ، و (ج) كفاءة التبويض لثنائي الصيغة الصبغية. في هذا العمل ، تم الإبلاغ عن طريقة قوية لتحديد كفاءة التزاوج لسلالات الخميرة.

في التجارب المعملية ، تتمثل إحدى الطرق التي يمكن من خلالها اكتشاف حدوث التزاوج في استخدام علامات التغذية الخارجية التي تكمل المتطلبات الغذائية. عندما يكون نوعا التزاوج ذاتي التغذية لحمضين أمينيين مختلفين، فإن الخلية الثنائية الصيغة الصبغية التي تتكون من اندماج نوعي التزاوج هي وحدها التي يمكن أن تنمو على وسط ناقص في كلا الأحماض الأمينية. وبالتالي ، فإن العلامات الذاتية مفيدة للكشف عن التزاوج نوعيا وكميا. يكفي الاختبار النوعي لتحديد نوع التزاوج للسلالة بعد الانقسام الاختزالي16. الاختبارات الكمية ضرورية عندما يهتم المرء بتحديد انخفاض في التزاوج أثناء دراسة الجينات المشاركة في مسار التزاوج17,18. بالإضافة إلى ذلك ، مع استخدام الخميرة بشكل متزايد في دراسات الانتواع ، من الضروري إجراء فحص تزاوج مناسب وقابل للتكرار ، حيث أن القياس الكمي لكفاءة التزاوج هو مقياس للحاجز قبل الزيجوت.

تم تحديد كفاءة التزاوج بين نوعي تزاوج الخميرة سابقا16،19،20. معظم الطرق المستخدمة سابقا متشابهة في تصميمها مع بعض الاختلافات16،21،22،23،24،25. يستخدم بعضها ثقافات مرحلة اللوغاريتم المبكرة ، بينما يستخدم البعض الآخر ثقافات مرحلة منتصف اللوغاريتم للسلالات أحادية الصيغة الصبغية. هناك اختلافات في النسب التي يتم فيها خلط نوعي التزاوج. تستخدم جميع البروتوكولات تقريبا غشاء النيتروسليلوز. يتم خلط معلقات كلا النوعين من التزاوج المأخوذة من الثقافات المزروعة سابقا وتصفيتها على غشاء نيتروسليلوز يوضع على صفيحة YPD. في أحد أشكال البروتوكول ، يتم تصحيح التعليق أحادي الصيغة الصبغية مباشرة على لوحة YPD21. في التجارب التي تتناول الجينات المشاركة في إنتاج الفرمون لنوعي التزاوج ، تتم إضافة الفيرومونات خارجيا مع جعل معلقات نوعي التزاوج24.

بعد الحضانة لبضع ساعات (عادة حوالي 5 ساعات) بعد خلط الأحاديات الصبغية ، يتم غسل الخلايا من الغشاء وتخفيفها وطلائها على وسائط انتقائية. في إحدى الطرق السابقة التي تم الإبلاغ عنها في عام 1973 ، تم حساب كفاءة تكوين الزيجوت أو التزاوج عن طريق حساب عدد الخلايا الناشئة والخلايا غير المهدة وأزواج التزاوج تحت المجهر باستخدام مقياس الدم26. ومع ذلك ، فإن معظم الطرق التي تم الإبلاغ عنها لاحقا تستخدم علامات التغذية الذاتية للتمييز بين أحاديات الصيغة الصبغية وثنائيات الصبغيات. يتم حساب كفاءة التزاوج على أنها النسبة المئوية للخلايا ثنائية الصيغة الصبغية بالنسبة إلى عدد الخلايا ثنائية الصيغة الصبغية والأحادية الصيغة الصبغية في التجمع الخلوي16،21،23.

ومع ذلك ، على الرغم من عدد من التقارير التي تستخدم الخميرة ككائن نموذجي لدراسة الانتواع ، لا يوجد بروتوكول موحد تم الإبلاغ عنه في الأدبيات حتى الآن لحساب كفاءة التزاوج. قد لا تكون الخلايا في مرحلة السجل مثالية لقياس كفاءة التزاوج. أثناء التزاوج ، يتم القبض على دورة الخلية من اثنين من الصبغيات ، وبالتالي ، فإن الخلايا أثناء التزاوج لا تنقسم9. وبما أنه من المعروف أيضا أن دورة الخلية يتم إيقافها بالمثل في الخلايا في المرحلةالثابتة 27 ، فإن استخدام مثل هذه الخلايا يمكن أن يجعل البروتوكول أكثر قابلية للتكرار. يمكن خلط خلايا الطور الثابت ووضعها على ألواح YPD (أي بيئة غنية بالتغذية) للتزاوج. تتطلب الإجراءات التقليدية أيضا غشاء نيتروسليلوز وغسل الخلايا ، مما يجعل العملية مرهقة وعرضة للتعامل مع الأخطاء. بالإضافة إلى ذلك ، تحدد البروتوكولات المستخدمة حتى الآن كفاءة التزاوج من حيث واحد أحادي الصيغة الصبغية. ومع ذلك ، عند قياس العزلة التناسلية ، يتم تحديد كفاءة التزاوج لمجموعة معينة من أحاديات الصيغة الصبغية بدلا من أحادية الصيغة الصبغية واحدة.

لمعالجة هذه المشكلات ، هنا ، نبلغ عن طريقة قوية لقياس كفاءة التزاوج في الخميرة قابلة للتكرار بدرجة كبيرة وسهلة الاستخدام. علاوة على ذلك ، يمكن أيضا استخدام هذه الطريقة وسلالات الخميرة المستخدمة هنا في الدراسات التي تدرس تأثير تدفق الجينات على تطور حواجز التزاوج.

تم استخدام سلالتين مختلفتين من S. cerevisiae في هذه الدراسة. إحدى السلالات مشتقة من خلفية SK1. تم تعديل هذا في مختبرنا عن طريق إضافة علامات التغذية الخارجية بالقرب من موضع MAT. يتم توفير الأنماط الجينية الناتجة من أحاديات الصيغة الصبغية في الجدول 128،29،30. في سلالة SK1 ، تم إدخال جين TRP1 أحادي الصيغة الصبغية بالقرب من موضع MAT ، وتم إدخال جين LEU2 أحادي الصيغة الصبغية α بالقرب من موضع MAT. في سلالة ScAM ، تم إدخال جينات TRP1 و URA3 في الصبغيات A و α ، على التوالي. كان موقع الإدخال في منطقة ARS للكروموسوم الثالث (Chr III: 197378..197609). بالنسبة للبروتوكول المذكور هنا ، تكفي علامات التغذية الخارجية في أي مكان على الجينوم. ومع ذلك ، فإن وجود علامات التغذية الذاتية بالقرب من موضع MAT يعني أنه يمكن أيضا استخدام هذه السلالات للدراسات التي تدرس تأثير تدفق الجينات على الانتواع31,32. تمت إضافة العلامات بالقرب من موضع MAT لمنع إعادة خلط العلامات بسبب إعادة التركيب. ومن ثم ، يمكن استخدام هذا البروتوكول لتحديد كفاءة التزاوج في الدراسات التي تنطوي على الانتواع وأيضا لتحديد تغيير كفاءة التزاوج عند دراسة البروتينات المشاركة في مسار التزاوج.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A8626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar Powder regular grade for bacteriology</td>
			<td>SRL</td>
			<td>19661 (0140186)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Sulphate, Hi-AR</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>GRM1273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-glucose</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Petri plates</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>PW008</td>
			<td>&#160;90 mm x 15 mm dimension</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A8094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A7219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine monochloride monohydrate</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H5659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>L8912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>62840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>M5308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>P5482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tyrosine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>T8566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>V0513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mating efficiency grid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 cm x 1.5 cm rectangular grid drawn on the Petri plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>500010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>U0750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract Powder</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Nitrogen Base w/o Amino acids and Ammonium Sulphate</td>
			<td>BD Difco</td>
			<td>233520</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of the mating efficiency of haploids in saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae هو كائن نموذجي يستخدم على نطاق واسع في علم الوراثة والتطور والبيولوجيا الجزيئية. في السنوات الأخيرة ، أصبح أيضا كائنا نموذجيا شائعا لدراسة المشكلات المتعلقة بالانتواع. تتضمن دورة حياة فطر الخميرة مرحلتي التكاثر اللاجنسي والجنسي. تسمح سهولة إجراء تجارب التطور ووقت التوليد القصير للكائن الحي بدراسة تطور الحواجز التناسلية. يشار إلى الكفاءة التي يتزاوج بها نوعان من التزاوج (a و α) لتشكيل ثنائي الصيغة الصبغية a / α باسم كفاءة التزاوج. أي انخفاض في كفاءة التزاوج بين أحاديات الصيغة الصبغية يشير إلى حاجز ما قبل الزيجوت. وبالتالي ، لتحديد مدى العزلة التناسلية بين اثنين من أحادي الصيغة الصبغية ، يلزم وجود طريقة قوية لتحديد كفاءة التزاوج. تحقيقا لهذه الغاية ، يتم تقديم بروتوكول بسيط وقابل للتكرار للغاية هنا. يتضمن البروتوكول أربع خطوات رئيسية ، والتي تشمل ترقيع الصبغيات على لوحة YPD ، وخلط الأحادي الصيغة الصبغية بأعداد متساوية ، والتمييع والطلاء للمستعمرات الفردية ، وأخيرا ، حساب الكفاءة بناء على عدد المستعمرات على لوحة التسرب. يتم استخدام علامات Auxotrophic للتمييز بوضوح بين أحاديات الصيغة الصبغية وثنائيات الصبغيات.

القياس الكمي لكفاءة التزاوج لنوعي التزاوج تم استخدام البروتوكول الموصوف هنا لتحديد كفاءة التزاوج بين سلالتين من الخميرة - بين SK1AMa و SK1AM α وبين ScAMa و ScAMα (الشكل 3A). في هذه التجارب ، تكرر التزاوج بين اثنين من أحادي الصيغة الصبغية...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of the Mating Efficiency of Haploids in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Determination of the Mating Efficiency of Haploids in Saccharomyces cerevisiae

في هذا العمل ، تم وصف طريقة قوية لقياس كفاءة التزاوج في الخميرة Saccharomyces cerevisiae . هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص للقياس الكمي للحواجز ما قبل الزيجوت في دراسات الانتواع.

تحديد كفاءة التزاوج من أحادي الصيغة الصبغية في Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae is a widely used model organism in genetics, evolution, and molecular biology. In recent years, it has also become a popular ...

هذا البروتوكول هو طريقة بسيطة لتحديد الكفاءة التي تتزاوج بها سلالات وأنواع مختلفة من الخميرة مع بعضها البعض. الطريقة المقترحة بسيطة وقوية وفعالة. يمكن تمديد الطريقة لتشمل أي سلالة من الخميرة.يمكن استخدام الطريقة الموضحة في هذه الدراسة لفهم كيفية حدوث الانتواع في الخميرة. علاوة على ذلك، يمكن أن تكون السلالات التي نصفها مفيدة بشكل خاص لتصميم تجارب على تدفق الجينات. تكمن قوة الطريقة في أنها بسيطة حقا.قد تكون هناك حاجة إلى بعض التعديلات الطفيفة مثل وقت الحضانة اعتمادا على سلالة معينة مستخدمة. ابدأ في إحياء الصبغيات الفردية A و Alpha من المخزونات المجمدة عن طريق وضع لقاح الخميرة على مستخلص الخميرة بيبتون دكستروز ، أو صفيحة أجار YPD. اسمح لهم بالنمو لمدة 48 ساعة عند 30 درجة مئوية للحصول على مستعمرات واحدة.بعد الحضانة ، قم بتلقيح مستعمرات مفردة من صفيحة YPD وخمسة ملليلتر من وسط YPD ، واحتضانها عند 30 درجة مئوية لمدة 48 ساعة مع اهتزاز 250 دورة في الدقيقة. الخلايا في مرحلة ثابتة من النمو بعد فترة الحضانة هذه. على لوحة YPD جديدة ، ارسم شبكة كفاءة التزاوج كمستطيل 1 × 1.5 سم مقسم إلى ثلاثة صناديق ، كل منها بأبعاد 1 × 0.5 سم.تلقيح خمسة ميكرولترات من ثقافة YPD لنوعي التزاوج على المستطيلات الموجودة في أقصى اليسار وأقصى اليمين. يناظر هذا الحجم ٥ في ١٠ أس خامس خلايا أحادية الصيغة الصبغية في كل قسم. احتضان لوحات لمدة 24 ساعة في 30 درجة مئوية.لخلط عدد متساو من خلايا الخميرة ، قم بإزالة حوالي 1/3 من نمو الخميرة الذي تم تطويره في الصناديق الخارجية باستخدام عود أسنان معقم وأعد تعليق الخلايا التي تمت إزالتها في 20 ميكرولتر من الماء في قارورة معقمة سعة 1.5 ملليلتر. اتبع هذا لكل أحادي الصيغة الصبغية. بعد ذلك ، قم بتخفيف خمسة ميكرولترات من هذا التعليق في ملليلتر من الماء وقياس الكثافة الضوئية باستخدام مقياس الطيف الضوئي عند 600 نانومتر.استنادا إلى قيمة الكثافة الضوئية وعدد الخلايا لكل مليلتر بكثافة بصرية واحدة ، أضف الأحجام المطلوبة من كل من أحادي الصيغة الصبغية في قارورة جديدة ومعقمة سعة 1.5 ملليلتر. امزجه جيدا باستخدام ماصة. الحجم النهائي لهذا التعليق بشكل عام حوالي ستة إلى ثمانية ميكرولترات.بعد ذلك ، قم بتلقيح هذا التعليق في الشبكة المركزية. احتضان اللوحة عند 30 درجة مئوية لمدة سبع ساعات ، مما يسمح للأحاديات الصيغة الصبغية بالتزاوج. بعد سبع ساعات من الحضانة ، كشط الخلايا من المستطيل المركزي باستخدام مسواك أو طرف ماصة وتخفيفها في ملليلتر من الماء المعقم.قم بإجراء المزيد من التخفيفات ، ثم انشر تعليق الخلية على أجار YPD للحصول على مستعمرات واحدة. بعد الطلاء ، احتضان ألواح YPD عند 30 درجة مئوية لمدة 36 إلى 48 ساعة لتطوير مستعمرات واحدة. تأكد من الحصول على بضع مئات من المستعمرات الفردية من كل تجربة تزاوج للفحص لضمان الأهمية الإحصائية للبيانات.لتحديد المستعمرات ثنائية الصيغة الصبغية على اللوحة ، انقل المستعمرات المفردة عن طريق وضعها بشكل فردي على صفيحة مزدوجة التسرب ، تفتقر إلى الأحماض الأمينية التي تكون السلالات ذاتية التغذية من أجلها. احتضان لوحات في 30 درجة مئوية لمدة 48 ساعة وحساب كفاءة التزاوج ، نو. مكنت متانة البروتوكول من التمييز السهل بين كفاءة التزاوج بين السلالتين ، SK1AM و ScAM.بينما تتزاوج سلالات SK1 بكفاءة عالية جدا ، تتزاوج سلالات ScAM بكفاءة أقل نسبيا. انخفضت كفاءة التزاوج لسلالات ScAM بشكل كبير عندما لم تحتوي البيئة على الجلوكوز كمصدر أساسي للكربون ، مما يشير إلى أن التزاوج عملية مكلفة للغاية وأن النمو على مصادر الكربون البديلة يقلل نوعيا من كفاءة التزاوج. عندما سمح للتزاوج لفترات زمنية مختلفة ، لم يلاحظ أي تزاوج خلال الساعات الأربع إلى الخمس الأولى.ظهرت ثنائيات الصبغيات الأولى فقط بعد أربع إلى خمس ساعات ، مما يشير إلى أن هذا هو الوقت اللازم لإكمال عملية التزاوج في بيئة معينة. بعد ذلك ، زادت كفاءة التزاوج بسرعة. بعد سبع ساعات ، تأثرت حسابات كفاءة التزاوج بحقيقة أن النمو الانقسامي بدأ على اللوحة.تأكد من خلط عدد متساو من كل من أحاديات الصيغة الصبغية. ومن شأن الانحرافات عن ذلك أن تؤدي إلى اختلافات في التكرارات المستقلة للبروتوكول. كيف يؤثر تدفق الجينات على التكيف والانتواع هو سؤال مفتوح.وبما أن الواسمات الذاتية التغذية تدخل بجوار موضع التغذية المتعددة الأطراف في السلالات، فإن هذا يساعد في الإجابة عن هذا السؤال المهم.

Research

JoVE Journal

Biology

Determination of the Mating Efficiency of Haploids in Saccharomyces cerevisiae

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

تشريح السكيراء الجعوية زقاق

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

حفز Phosphoproteomics الكمية في الأحماض الدهنية السكيراء الجعوية</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

تحليل لميكروأري السكيراء الجعوية</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

والفحص المجهري لالإسفار Mitophagy الرصد في الخميرة السكيراء الجعوية

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

التعبير وتنقية عبر الغشاء التليف الكيسي بروتين منظم المواصلة في خميرة الخباز

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

التصور والتحليل من جزيئات الرنا المرسال عن طريق الإسفار<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين في<em&gt; خميرة الخباز</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

فحوصات بالإضافة لرصد طوي ثانية بروتين في<em&gt; خميرة الخباز</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

تنقية التليف الكيسي عبر الغشاء المواصلة منظم البروتين المعبر عنه في<em&gt; خميرة الخباز</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

EPR Monitored Redox Titration of the Cofactors of Saccharomyces cerevisiae Nar1

EPR Monitored Redox Titration of the Cofactors of Saccharomyces cerevisiae Nar1

EPR رصدت الأكسدة والاختزال المعايرة من العوامل المساعدة لل<em&gt; خميرة الخباز</em&gt; Nar1

Electron Paramagnetic Resonance (EPR) monitored redox titrations are a powerful method to determine the midpoint potential of cofactors in proteins and to ...

Measurement of mRNA Decay Rates in Saccharomyces cerevisiae Using rpb1-1 Strains

Measurement of mRNA Decay Rates in Saccharomyces cerevisiae Using rpb1-1 Strains

قياس مرنا تسوس الأسعار<em&gt; خميرة الخباز</em&gt; استخدام<em&gt; rpb1-1</em&gt; سلالات

mRNA steady state levels vary depending on environmental conditions. Regulation of the steady state accumulation levels of an mRNA ensures that the ...