Name: differentiation and imaging of brown adipocytes from the stromal vascular fraction of interscapular adipose tissue from newborn mice
Uploaded: 2023-02-03T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differentiation and Imaging of Brown Adipocytes from the Stromal Vascular Fraction of Interscapular Adipose Tissue from Newborn Mice at JoVE.com

המימון ניתן על ידי FONDECYT (1181214 ו-1221146) ואנילוס (ACT210039) למלגות הון סיכון ודוקטורט ANID 21171743 ל-AMF ו-ANID 21150665 ל-FS. אנו מודים לאלחנדרו מוניזאגה על העזרה בעיבוד הדגימות ועל הייעוץ הטכני למיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת. האיורים הופקו באמצעות BioRender.

נהלי בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים ב- Pontificia Universidad Católica de Chile. במחקר זה נעשה שימוש בעכברי P0.5 שזה עתה נולדו משני המינים, שמקורם ברקע מעורב של הזנים C57BL/6J ו-129J.
1. מיצוי רקמות
<ol><li>נקו וחיטאו את שולחן העבודה בתמיסת אתנול 70%, והשתמשו בחומר ...

<ol>
	<li>Luo, L., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+in+control+of+metabolism.">Adipose tissue in control of metabolism.</a> Journal of Endocrinology. 231 (3), 77-99 (2016).</li><li>Gaspar, R. C., Pauli, J. R., Shulman, G. I., Mu&#241;oz, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+on+brown+adipose+tissue+biology:+A+discussion+of+recent+findings.">An update on brown adipose tissue biology: A discussion of recent findings.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 320 (3), 488-495 (2021).</li><li>Richard, D., Picard, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+fat+biology+and+thermogenesis.">Brown fat biology and thermogenesis.</a> Frontiers in Bioscience. 16, 1233-1260 (2011).</li><li>Rosenwald, M., Wolfrum, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+definition+of+brite+versus+white+and+classical+brown+adipocytes.">The origin and definition of brite versus white and classical brown adipocytes.</a> Adipocyte. 3 (1), 4-9 (2014).</li><li>Smorlesi, A., Frontini, A., Giordano, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ:+White-brown+adipocyte+plasticity+and+metabolic+inflammation.">The adipose organ: White-brown adipocyte plasticity and metabolic inflammation.</a> Obesity Reviews. 13, 83-96 (2012).</li><li>Townsend, K., Tseng, Y. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue:+Recent+insights+into+development,+metabolic+function+and+therapeutic+potential.">Brown adipose tissue: Recent insights into development, metabolic function and therapeutic potential.</a> Adipocyte. 1 (1), 13-24 (2012).</li><li>Benador, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+bound+to+lipid+droplets+have+unique+bioenergetics,+composition,+and+dynamics+that+support+lipid+droplet+expansion.">Mitochondria bound to lipid droplets have unique bioenergetics, composition, and dynamics that support lipid droplet expansion.</a> Cell Metabolism. 27 (4), 869-885 (2018).</li><li>Benador, I. Y., Veliova, M., Liesa, M., Shirihai, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+bound+to+lipid+droplets:+Where+mitochondrial+dynamics+regulate+lipid+storage+and+utilization.">Mitochondria bound to lipid droplets: Where mitochondrial dynamics regulate lipid storage and utilization.</a> Cell Metabolism. 29 (4), 827-835 (2019).</li><li>Lee, P., Swarbrick, M. M., Ho, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue+in+adult+humans:+A+metabolic+renaissance.">Brown adipose tissue in adult humans: A metabolic renaissance.</a> Endocrine Reviews. 34 (3), 413-438 (2013).</li><li>Han, S., Sun, H. M., Hwang, K. C., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stromal+vascular+fraction+cells:+Update+on+clinical+utility+and+efficacy.">Adipose-derived stromal vascular fraction cells: Update on clinical utility and efficacy.</a> Critical Reviews in Eukaryotic Gene Expression. 25 (2), 145-152 (2015).</li><li>Klein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta(3)-adrenergic+stimulation+differentially+inhibits+insulin+signaling+and+decreases+insulin-induced+glucose+uptake+in+brown+adipocytes.">Beta(3)-adrenergic stimulation differentially inhibits insulin signaling and decreases insulin-induced glucose uptake in brown adipocytes.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (3), 34795-34802 (1999).</li><li>Gaom, W., Kong, X., Yang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+primary+culture,+and+differentiation+of+preadipocytes+from+mouse+brown+adipose+tissue.">Isolation, primary culture, and differentiation of preadipocytes from mouse brown adipose tissue.</a> Methods in Molecular Biology. 1566, 3-8 (2017).</li><li>Rocha, A. L., Guerra, B. A., Boucher, J., Mori, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+to+induce+brown/beige+adipocyte+differentiation+from+murine+preadipocytes.">A Method to induce brown/beige adipocyte differentiation from murine preadipocytes.</a> Bio-protocol. 11 (24), 4265 (2021).</li><li>Galmozzi, A., Kok, B. P., Saez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+differentiation+of+primary+white+and+brown+preadipocytes+from+newborn+mice.">Isolation and differentiation of primary white and brown preadipocytes from newborn mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (167), e62005 (2021).</li><li>Tapia, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+AGPAT2+impairs+brown+adipogenesis,+increases+IFN+stimulated+gene+expression+and+alters+mitochondrial+morphology.">Absence of AGPAT2 impairs brown adipogenesis, increases IFN stimulated gene expression and alters mitochondrial morphology.</a> Metabolism. 111, 154341 (2020).</li><li>Gonz&#225;lez-H&#243;dar, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+caveolae+in+AGPAT2+lacking+adipocytes+is+independent+of+changes+in+cholesterol+or+sphingolipid+levels:+A+whole+cell+and+plasma+membrane+lipidomic+analysis+of+adipogenesis.">Decreased caveolae in AGPAT2 lacking adipocytes is independent of changes in cholesterol or sphingolipid levels: A whole cell and plasma membrane lipidomic analysis of adipogenesis.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1867 (9), 166167 (2021).</li><li>Fern&#225;ndez-Galilea, M., Tapia, P., Cautivo, K., Morselli, E., Cort&#233;s, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGPAT2+deficiency+impairs+adipogenic+differentiation+in+primary+cultured+preadipocytes+in+a+non-autophagy+or+apoptosis+dependent+mechanism.">AGPAT2 deficiency impairs adipogenic differentiation in primary cultured preadipocytes in a non-autophagy or apoptosis dependent mechanism.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 467 (1), 39-45 (2015).</li><li>Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bicinchoninic+acid+(BCA)+assay+for+protein+quantitation.">The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation.</a> The Protein Protocols Handbook. , 11-15 (2009).</li><li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid.">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Analytical Biochemistry. 150 (1), 76-85 (1985).</li><li>Kurien, B. T., Scofield, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Western+blotting.">Western blotting.</a> Methods. 38 (4), 283-293 (2006).</li><li>Reynolds, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+lead+citrate+at+high+pH+as+an+electron-opaque+stain+in+electron+microscopy.">The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 17 (1), 208-212 (1963).</li><li>Ghaben, A. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipogenesis+and+metabolic+health.">Adipogenesis and metabolic health.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (4), 242-258 (2019).</li><li>Ambele, M. A., Dhanraj, P., Giles, R., Pepper, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipogenesis:+A+complex+interplay+of+multiple+molecular+determinants+and+pathways.">Adipogenesis: A complex interplay of multiple molecular determinants and pathways.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (12), 4283 (2020).</li><li>Lefterova, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPAR&#947;+and+C/EBP+factors+orchestrate+adipocyte+biology+via+adjacent+binding+on+a+genome-wide+scale.">PPAR&#947; and C/EBP factors orchestrate adipocyte biology via adjacent binding on a genome-wide scale.</a> Genes &amp; Development. 22 (21), 2941-2952 (2008).</li><li>Ntambi, J. M., Young-Cheul, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+differentiation+and+gene+expression.">Adipocyte differentiation and gene expression.</a> The Journal of Nutrition. 130 (12), (2000).</li><li>Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perilipins:+A+diversity+of+intracellular+lipid+droplet+proteins.">Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins.</a> Lipids in Health and Disease. 16, 83 (2017).</li><li>Christiaens, V., Van Hul, M., Lijnen, H. R., Scroyen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD36+promotes+adipocyte+differentiation+and+adipogenesis.">CD36 promotes adipocyte differentiation and adipogenesis.</a> Biochimica et Biophysica Acta - General Subjects. 1820 (7), 949-956 (2012).</li><li>Carobbio, S., Rosen, B., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipogenesis:+New+insights+into+brown+adipose+tissue+differentiation.">Adipogenesis: New insights into brown adipose tissue differentiation.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 51 (3), 75-85 (2013).</li><li>Ricquier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncoupling+protein+1+of+brown+adipocytes,+the+only+uncoupler:+A+historical+perspective.">Uncoupling protein 1 of brown adipocytes, the only uncoupler: A historical perspective.</a> Frontiers in Endocrinology. 2, 85-91 (2011).</li><li>Cui, L., Mirza, A. H., Zhang, S., Liang, B., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+and+mitochondria+are+anchored+during+brown+adipocyte+differentiation.">Lipid droplets and mitochondria are anchored during brown adipocyte differentiation.</a> Protein &amp; Cell. 10 (12), 921-926 (2019).</li><li>Hao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indomethacin+enhances+brown+fat+activity.">Indomethacin enhances brown fat activity.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 365 (3), 467-475 (2018).</li><li>Lehmann, J. M., Lenhard, J. M., Oliver, B. B., Ringold, G. M., Kliewer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptors+alpha+and+gamma+are+activated+by+indomethacin+and+other+non-steroidal+anti-inflammatory+drugs.">Peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma are activated by indomethacin and other non-steroidal anti-inflammatory drugs.</a> Journal of Biological Chemistry. 272 (6), 3406-3410 (1997).</li><li>Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+methods+of+adipogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells.">Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).</li><li>Wilson-Fritch, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+remodeling+in+adipose+tissue+associated+with+obesity+and+treatment+with+rosiglitazone.">Mitochondrial remodeling in adipose tissue associated with obesity and treatment with rosiglitazone.</a> The Journal of Clinical Investigation. 114 (9), 1281-1289 (2004).</li><li>Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+adipose+tissue:+Function+and+physiological+significance.">Brown adipose tissue: Function and physiological significance.</a> Physiological Reviews. 84 (1), 277-359 (2004).</li><li>Ohno, H., Shinoda, K., Spiegelman, B. M., Kajimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PPARgamma+agonists+induce+a+white-to-brown+fat+conversion+through+stabilization+of+PRDM16+protein.">PPARgamma agonists induce a white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein.</a> Cell Metabolism. 15 (3), 395-404 (2012).</li><li>Merlin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rosiglitazone+and+a+&#946;3-adrenoceptor+agonist+are+both+required+for+functional+browning+of+white+adipocytes+in+culture.">Rosiglitazone and a &#946;3-adrenoceptor agonist are both required for functional browning of white adipocytes in culture.</a> Frontiers in Endocrinology. 9, 249 (2018).</li><li>Fayyad, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rosiglitazone+enhances+browning+adipocytes+in+association+with+MAPK+and+PI3-K+pathways+during+the+differentiation+of+telomerase-transformed+mesenchymal+stromal+cells+into+adipocytes.">Rosiglitazone enhances browning adipocytes in association with MAPK and PI3-K pathways during the differentiation of telomerase-transformed mesenchymal stromal cells into adipocytes.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (7), 1618-1633 (2019).</li><li>Zennaro, M. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hibernoma+development+in+transgenic+mice+identifies+brown+adipose+tissue+as+a+novel+target+of+aldosterone+action.">Hibernoma development in transgenic mice identifies brown adipose tissue as a novel target of aldosterone action.</a> The Journal of Clinical Investigation. 101 (6), 1254-1260 (1998).</li><li>Klaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+novel+brown+adipocyte+cell+line+HIB+1B.+Adrenergic+pathways+involved+in+regulation+of+uncoupling+protein+gene+expression.">Characterization of the novel brown adipocyte cell line HIB 1B. Adrenergic pathways involved in regulation of uncoupling protein gene expression.</a> Journal of Cell Science. 107 (1), 313-319 (1994).</li><li>Guennoun, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+characterization+of+human+adipocytes+reveals+a+transient+brown+phenotype.">Comprehensive molecular characterization of human adipocytes reveals a transient brown phenotype.</a> Journal of Translational Medicine. 13, 135 (2015).</li></ol>

הפרוטוקול הנוכחי הוא הליך התמיינות דו-פאזי פשוט וניתן לשכפול (איור 2) ליצירת תאים בעלי המאפיינים המולקולריים והמורפולוגיים של אדיפוציטים חומים בוגרים. הקציר הכירורגי של iBAT הוא הצעד הקריטי הראשון מכיוון שקריעות רקמות מגבילות מאוד את הכדאיות של חומר המוצא. עיבוד רקמות הוא ג...

רקמת השומן הלבנה והחומה נבדלות זו מזו במיקומה האנטומי, במוצא התאי, בתפקודן, במורפולוגיה ובמסה הכוללת שלהן. רקמת השומן הלבן (WAT) היא מאגר האנרגיה הפיזיולוגי העיקרי של הגוף והיא מאחסנת כמויות גדולות של טריאצילגליצרול (TAG) בתאים מתמחים מאוד שיש להם טיפת שומנים ענקית אחת שתופסת את רוב נפח התא שלהם1. ליפוליזה TAG משחררת חומצות שומן חופשיות, אשר נכנסות למחזור הדם המערכתי כדי לעמוד בדרישות האנרגיה במהלך צום או מצבים אחרים של מאזן אנרגיה שלילי. בנוסף, ה-WAT מפריש חלבונים ומוצרי שומנים, הנקראים אדיפוקינים וליפוקינים, בהתאמה, שיש להם פונקציות מטבוליות, חיסוניות ורבייה, מה שהופך את ה-WAT לרקמה האנדוקרינית הגדולה ביותר בגוף2.
רקמת שומן חום (BAT) היא איבר קטן בהרבה שתפקידו הפיזיולוגי העיקרי הוא תרמוגנזה שאינה רועדת למניעת היפותרמיה. בעכברים ובבני אדם שזה עתה נולדו, BAT הוא איבר מוגדר היטב הממוקם בחלל הבין-סקפולרי. לבני אדם בוגרים חסר עטלף בין-סקפולרי (iBAT); עם זאת, הם מפתחים אשכולות של תאים דמויי אדיפוציט חום המשולבים במחסנים שאחרת מרכיבים בעיקר WAT. אדיפוציטים "חומים-בלבן" (בריט) אלה חולקים תכונות מורפולוגיות ומולקולריות עם אדיפוציטים iBAT קלאסיים, אך יש להם מקור תאי שונה 3,4.
בניגוד לאדיפוציטים לבנים, לאדיפוציטים חומים יש מספר טיפות שומנים קטנות ומיטוכונדריה5 בשפע. פירוק צימוד חלבון 1 (UCP1, הידוע גם בשם תרמוגנין) מבוטא באופן ייחודי על ידי אדיפוציטים חומים ובריט ומתווך דליפת פרוטונים בקרום המיטוכונדריאלי הפנימי (IMM), ובכך משחרר את העברת האלקטרונים מסינתזה של ATP ויוצר חום. תרמוגנזה שאינה רועדת ב- BAT מופעלת על ידי נוראפינפרין (NE), אשר משתחרר מהטרמינלים הסימפתטיים ב- BAT בתגובה לגירוי קר6. NE נקשר לבטא-אדרנוצפטורים (בעיקר בטא 3) על פני השטח של אדיפוציטים חומים ומפעיל מפל איתות בתיווך cAMP תוך-תאי. התוצאה היא ליפוליזה של TAG, חמצון בטא של חומצות שומן מיטוכונדריאליות, ויצירת חום עם הפעלת UCP13. לקשר הפונקציונלי ההדוק בין טיפות שומנים למיטוכונדריה באדיפוציטים חומים יש מקבילות מבניות, כגון האינטראקציה בין אברונים אלה באזורים גדולים שיש להם מגע פיזי הדוק מאוד 7,8.
ל- iBAT יש כלי דם בשפע וטרמינלים סימפתטיים9. מבנים אלה, יחד עם הקדם-אדיפוציטים, תאי מערכת החיסון, הפיברובלסטים ומולקולות המטריקס החוץ-תאיות, מרכיבים את מקטע כלי הדם של סטרומה השומן (SVF)10. פרוטוקולים רבים דווחו כמייצרים אדיפוציטים בוגרים מפראדיפוציטים 11,12,13,14,15 (טבלה משלימה 1); עם זאת, הם מציגים וריאציות קיצוניות בעיבוד רקמות ובהרכב אמצעי תרבות הבידול. הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר התמיינות יעילה וניתנת לשחזור של אדיפוציטים חומים אשר (1) מבטאים את גורמי השעתוק האדיפוגניים העיקריים peroxisome proliferator-activated receptor-activated gamma (PPARγ) ו- CCAAT/enhancer-binding protein alpha (C/EBPα), (2) מבטאים את סמני האדיפוציט הבוגרים perilipin1 (PLIN1), ודטרמיננטה אשכול 36 (CD36), (3) צוברים טיפות שומנים בשפע, (4) בעלי מסה מיטוכונדריאלית גבוהה ושפע גבוה של קומפלקסים של OXPHOS, (5) יש להם פוטנציאל תרמוגני, כפי שנקבע על ידי רמות גבוהות של UCP1, ו-(6) יש להם שינויים מורפולוגיים מיטוכונדריאליים הקשורים לפנוטיפ של אדיפוציטים חומים בוגרים. מתודולוגיה זו משמשת לחקר המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ליפודיסטרופיה כללית 15,16,17.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x Tris/Glycine Buffer</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610734</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde Aqueous Solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm TC-treated Easy-Grip Style Cell Culture Dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>410957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate&#160;</td>
			<td>SPL Life Science&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well optical black w/lid cell culture sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>165305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuRuler RGB Plus Pre-stained Protein Ladder&#160;</td>
			<td>Maestrogen</td>
			<td>02102-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK lysing buffer&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Persulfate&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody&#160;&#160;</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>7074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blotting-grade blocker&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>170-6404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BODIPY 493/503&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A1470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C/EBP&#945; antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Calbiochem&#160;</td>
			<td>208291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD36 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PA1-16813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m, nylon</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 40 &#181;m, nylon</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type II</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17101-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytation 5 Cell Imaging Multimode Reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethasone&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, powder</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12500062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMBed-812 EMBEDDING KIT (Epon)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Merck&#160;</td>
			<td>100983&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from cold water fish skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Gibco&#160;</td>
			<td>15023-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25% Aqueous Solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Phosphatase Inhibitor Cocktail 100X&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>78427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halt Protease Inhibitor Cocktail 100X&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>78429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H1398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immun-Blot PVDF Membrane&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1620177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Indomethacin&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>I7378&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Calbiochem&#160;</td>
			<td>529552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>529568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>60339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lane Marker Reducing Sample Buffer&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>39000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water sterile&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitoprofile Total OXPHOS Rodent WB antibody Cocktail</td>
			<td>Abcam&#160;</td>
			<td>MS604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Merck&#160;</td>
			<td>1064041000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OmniPur&#160;10x PBS Liquid Concentrate</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>6505-OP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium Tetroxide&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perilipin 1 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPAR&#947; (81B8) antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA buffer lysis&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>89901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosiglitazone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>557366</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacpdylate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talos F200C G2</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEMED&#160;</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TOM20 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>42406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Buffered Saline (TBS-10X)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>12498</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>93443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0,25%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20, Molecular Biology Grade</td>
			<td>Promega&#160;</td>
			<td>H5152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UCP1 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>14670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracut R</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl Acetate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>22400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westar Sun&#160;</td>
			<td>Cyanagen</td>
			<td>XLS063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westar Supernova&#160;</td>
			<td>Cyanagen</td>
			<td>XLS3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

differentiation and imaging of brown adipocytes from the stromal vascular fraction of interscapular adipose tissue from newborn mice

רקמת שומן חומה (BAT) קיימת רק ביונקים ויש לה תפקיד תרמוגני. אדיפוציטים חומים מאופיינים בציטופלסמה רב-לוקולרית עם טיפות שומנים מרובות, גרעין מרכזי, תכולת מיטוכונדריה גבוהה, וביטוי של חלבון uncoupling 1 (UCP1). BAT הוצע כיעד טיפולי פוטנציאלי להשמנת יתר ולהפרעות מטבוליות הקשורות אליה בשל יכולתו לפזר אנרגיה מטבולית כחום. כדי לחקור את הפונקציה והרגולציה של BAT, גידול אדיפוציט חום הוא הכרחי. הפרוטוקול הנוכחי מייעל את עיבוד הרקמות ואת התמיינות התאים לגידול אדיפוציטים חומים מעכברים שזה עתה נולדו. בנוסף, מוצגים נהלים להדמיית אדיפוציטים מובחנים עם אימונופלואורסנציה קונפוקלית ומיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת. באדיפוציטים החומים המובחנים בטכניקות המתוארות כאן, נשמרים המאפיינים המגדירים העיקריים של BAT קלאסי, כולל רמות UCP1 גבוהות, מסה מיטוכונדריאלית מוגברת ומגע פיזי קרוב מאוד בין טיפות השומנים למיטוכונדריה, מה שהופך שיטה זו לכלי רב ערך למחקרי BAT.

אדיפוגנזה מווסתת על ידי רשת של גורמי שעתוק האחראים הן לביטוי חלבוני מפתח הגורמים להיווצרות אדיפוציט חום ותפקודו22, כולל רגולטורים אדיפוגניים קלאסיים כגון PPARγ ו- C/EBPα 23,24,25, כמו גם סמנים של אדיפוציטים בוגרים 26,27<...

Watch this Scientific Journal Video about Differentiation and Imaging of Brown Adipocytes from the Stromal Vascular Fraction of Interscapular Adipose Tissue from Newborn Mice at JoVE.com

Differentiation and Imaging of Brown Adipocytes from the Stromal Vascular Fraction of Interscapular Adipose Tissue from Newborn Mice

פרדיפוציטים מבודדים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן החום הבין-סקפולרי מעכברים שזה עתה נולדו ומתמיינים לתאים שצוברים טיפות שומנים, מבטאים סמנים מולקולריים ומראים את המורפולוגיה המיטוכונדריאלית של אדיפוציטים חומים בוגרים. תאים אלה מנותחים עוד יותר על ידי immunofluorescence ומיקרוסקופ אלקטרונים הולכה.

התמיינות והדמיה של אדיפוציטים חומים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן הבין-סקפולרית מעכברים שזה עתה נולדו

Brown adipose tissue (BAT) is only present in mammals and has a thermogenic function. Brown adipocytes are characterized by a multilocular cytoplasm with ...

פרוטוקול זה מאפשר התמיינות יעילה וניתנת לשחזור של אדיפוציטים חומים המבטאים גורמי שעתוק אדיפוגניים מרכזיים, סמני אדיפוציט בוגרים, ובעלי פוטנציאל תרמוגני ופנוטיפ מורפולוגי של אדיפוציטים חומים בוגרים. זהו הליך התמיינות דו-פאזי פשוט וניתן לשכפול להשגת תאים בעלי מאפיינים של אדיפוציטים חומים בוגרים מרקמת שומן חומה בין-סקפולרית של עכברים שזה עתה נולדו. פרוטוקול זה מאפשר לחקור את מנגנוני ההפעלה של רקמת השומן החומה כיעד לטיפול בהשמנת יתר.זה כבר מודל לקביעת המנגנונים המעורבים הפתופיזיולוגיה של lipodystrophy. ביצוע טכניקה זו בפעם הראשונה צפוי להיות מאתגר. חיוני שיהיה פרוטוקול מפורט ולהדגיש נקודות קריטיות כדי לקבל תוצאות מוצלחות.כדי להתחיל, הניחו את העכבר המרדים במצב נוטה ובצעו חתך עור באורך סנטימטר אחד באמצע הגב של החיה באמצעות מספריים חדים. הסר את העור בזהירות, לנתק בניתוח את iBAT מן הפגר באמצעות מספריים קטנים. קצרו את שתי אונות ה-iBAT באמצעות צבת קצה עקומה כדי להסיר את האונות באופן עצמאי.מניחים את שתי האונות בצינור פלסטיק עם 1.5 מיליליטר של PBS סטרילי בטמפרטורת החדר. יש לדגור על רקמות iBAT במאגר העיכול מסוג collagenase two למשך 45 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם רעידות עדינות מתמשכות ב-800 סל"ד. משבש מכנית את מתלה הרקמה בחיץ העיכול מסוג 2 של collagenase על ידי פיפטציה למעלה ולמטה באמצעות מיקרופיפטה P1000 וקצות מסנן.השתמש בעצה חדשה עבור כל דוגמה. העבירו את הרקמות המופרדות דרך מסננות בודדות של 100 מיקרומטר לתוך צינורות חדשים של 1.5 מיליליטר. הוסף 500 מיקרוליטר של חיץ ACK לדגימות הרקמה המסוננות.הפכו את הצינורות ארבע עד חמש פעמים ודגרו בטמפרטורת החדר במשך ארבע דקות. לאחר מכן העבירו את המתלים דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר לתוך צינורות חדשים של 1.5 מיליליטר באמצעות מיקרופיפטה P1000 וקצוות מסוננים. צנטריפויה משהה מחדש את הגלולה כמתואר בכתב היד של הטקסט.לאחר מכן זרעו כל דגימה בשש בארות של צלחת תרבית של 24 בארות על ידי הוספת מיליליטר אחד של התרחיף לכל באר. הפרדיפויטים הבלתי ממוינים הציגו רמות נמוכות מאוד או בלתי ניתנות לגילוי של ppar-gamma, C/ebp-alpha, perilipin 1 ו- CD36. לעומת זאת, סמנים אלה היו גבוהים משמעותית ביום השביעי של הבידול.הצטברות טיפות שומנים מרובות בפראדיפוציטים החומים הייתה עקבית עם התוצאות שפורסמו בעבר. עלייה משמעותית נצפתה בסמן המסה המיטוכונדריאלית TOM 20 וברמות החלבון של קומפלקס הזרחן החמצוני ביום השביעי להתמיינות. UCP1, סמן בונאפיד מסוג תא זה לא זוהה בפראדיפוציטים לא ממוינים בעוד שהוא בא לידי ביטוי משמעותי באדיפוציטים חומים בוגרים ביום השביעי להתמיינות.המיטוכונדריה התפתחו מצורה צינורית מוארכת ביום האפס לצורה מעוגלת או דמוית שעועית ביום השביעי. המבנה הפנימי של המיטוכונדריה השתנה גם הוא על ידי אדיפוגנזה, וכתוצאה מכך צפיפות גבוהה יותר של הקריסטה הדחוסה המקבילה. חשוב לציין שהמיטוכונדריה היו קשורים קשר הדוק לטיפות שומנים באדיפוציטים החומים המובחנים, כך שלא ניתן היה להבחין במרחק ניכר בין הקרום החיצוני של המיטוכונדריה לבין פני השטח של טיפות השומנים, אפילו במיקרוסקופ אלקטרונים ברזולוציה גבוהה.הסרה כירורגית של רקמת שומן interscapular הוא קריטי. כמות לא יעילה של רקמה מגבילה את זמינות התאים שיתמיינו. טכניקת הדמיה זו מסייעת לאפיין את המורפולוגיה של אדיפוציטים חומים מובחנים במבחנה.ניתן לבצע בדיקות לתפקוד מיטוכונדריאלי, הפעלה בטא אנדרוגנית ועיכוב אוטופגי.

Research

JoVE Journal

Biology

Functional Imaging of Brown Fat in Mice with 18F-FDG micro-PET/CT

Functional Imaging of Brown Fat in Mice with 18F-FDG micro-PET/CT

הדמיה תפקודית של שומן חום בעכברים עם FDG micro-PET/CT

Brown adipose tissue (BAT) differs from white adipose  tissue (WAT) by its discrete location and a brown-red color due to rich  vascularization and high ...

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

בידוד והתמיינות של תאי כלי דם לתאי סטרומה בז&#39;ים / Brite

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-ברור: רקמה ניקוי שיטה עבור הדמיה תלת-ממדית של רקמת שומן

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Isolation and Differentiation of Primary White and Brown Preadipocytes from Newborn Mice

בידוד ובידול של Preadipocytes לבן וחום ראשוני מעכברים שזה עתה נולדו

The understanding of the mechanisms underlying adipocyte differentiation and function has greatly benefited from the use of immortalized white ...

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

Visualization and Quantification of Brown and Beige Adipose Tissues in Mice using [18F]FDG Micro-PET/MR Imaging

הדמיה וכימות של רקמות שומן חום ובז' בעכברים באמצעות [18F]FDG מיקרו-PET/MR הדמיה

Brown and beige adipocytes are now recognized as potential therapeutic targets for obesity and metabolic syndromes. Non-invasive molecular imaging methods ...

בידוד חצי אוטומטי של רקמת שומן לבנה מורין

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

מחבר זרקור: בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה מרקמת שומן לבן מורין באמצעות דיסוציאטור רקמות  

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

גידול פרא-אדיפוציטים שבודדו מרקמת שומן פרי-וסקולרית מורין

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Stromal Vascular Fraction-derived Preadipocytes from Mouse Periaortic Adipose Tissue

Author Spotlight: The Significance of Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of SVF-Derived Preadipocytes from Mouse Perivascular Edipose Tissue 