Name: generation of a mouse spontaneous autoimmune thyroiditis model
Uploaded: 2023-03-17T14:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model at JoVE.com

تم توفير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للفأر ل TPO البشري (المستخدمة كضوابط إيجابية) من قبل الدكتور P. Carayon والدكتور J. Ruf (مرسيليا ، فرنسا). يشكر المؤلفون جميع المشاركين في هذه الدراسة وأعضاء فريق البحث لدينا. تم دعم هذا العمل جزئيا بمنح من صندوق دعم ما بعد الدكتوراه لمستشفى غرب الصين ، جامعة سيتشوان ، الصين (2020HXBH057) وبرنامج دعم العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (رقم المشروع 2021YFS0166)

تمت الموافقة على البروتوكول الموضح أدناه من خلال إرشادات الرعاية والاستخدام التي وضعتها اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوان بجامعة سيتشوان.
1. التحضير
<ol><li>إيواء جميع الفئران في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض تحت دورات الضوء والظلام لمدة 12 ساعة (تبدأ في ا...

<ol>
	<li>Ralli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hashimoto's+thyroiditis:+An+update+on+pathogenic+mechanisms,+diagnostic+protocols,+therapeutic+strategies,+and+potential+malignant+transformation.">Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation.</a> Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649 (2020).</li><li>Zhang, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+infiltration+and+thyrocyte+destruction+are+driven+by+stromal+and+immune+cell+components+in+Hashimoto's+thyroiditis.">Lymphocyte infiltration and thyrocyte destruction are driven by stromal and immune cell components in Hashimoto's thyroiditis.</a> Nature Communications. 13 (1), 775 (2022).</li><li>Ruggeri, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+comorbidities+in+Hashimoto's+thyroiditis:+different+patterns+of+association+in+adulthood+and+childhood/adolescence.">Autoimmune comorbidities in Hashimoto's thyroiditis: different patterns of association in adulthood and childhood/adolescence.</a> European Journal of Endocrinology. 176 (2), 133-141 (2017).</li><li>Resende de Paiva, C., Gr&#248;nh&#248;j, C., Feldt-Rasmussen, U., von Buchwald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+Hashimoto's+thyroiditis+and+thyroid+cancer+in+64,628+patients.">Association between Hashimoto's thyroiditis and thyroid cancer in 64,628 patients.</a> Frontiers in Oncology. 7, 53 (2017).</li><li>Ehlers, M., Schott, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hashimoto's+thyroiditis+and+papillary+thyroid+cancer:+are+they+immunologically+linked.">Hashimoto's thyroiditis and papillary thyroid cancer: are they immunologically linked.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 25 (12), 656-664 (2014).</li><li>Medenica, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cell+and+gene+therapies+in+the+treatment+of+infertility+in+patients+with+thyroid+autoimmunity.">The role of cell and gene therapies in the treatment of infertility in patients with thyroid autoimmunity.</a> International Journal of Endocrinology. 2022, 4842316 (2022).</li><li>Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+autoimmune+thyroiditis:+the+first+decade.">The genetics of autoimmune thyroiditis: the first decade.</a> Journal of Autoimmunity. 37 (2), 88-94 (2011).</li><li>Kolypetri, P., King, J., Larijani, M., Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+and+environment+as+predisposing+factors+in+autoimmunity:+acceleration+of+spontaneous+thyroiditis+by+dietary+iodide+in+NOD.H2(h4)+mice.">Genes and environment as predisposing factors in autoimmunity: acceleration of spontaneous thyroiditis by dietary iodide in NOD.H2(h4) mice.</a> International Reviews of Immunology. 34 (6), 542-556 (2015).</li><li>Terplan, K. L., Witebsky, E., Rose, N. R., Paine, J. R., Egan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+thyroiditis+in+rabbits,+guinea+pigs+and+dogs,+following+immunization+with+thyroid+extracts+of+their+own+and+of+heterologous+species.">Experimental thyroiditis in rabbits, guinea pigs and dogs, following immunization with thyroid extracts of their own and of heterologous species.</a> The American Journal of Pathology. 36 (2), 213-239 (1960).</li><li>Alexopoulos, H., Dalakas, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunobiology+of+autoimmune+encephalitides.">The immunobiology of autoimmune encephalitides.</a> Journal of Autoimmunity. 104, 102339 (2019).</li><li>Noviello, C. M., Kreye, J., Teng, J., Pr&#252;ss, H., Hibbs, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+mechanisms+of+GABA+receptor+autoimmune+encephalitis.">Structural mechanisms of GABA receptor autoimmune encephalitis.</a> Cell. 185 (14), 2469-2477 (2022).</li><li>Pudifin, D. J., Duursma, J., Brain, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+thyroiditis+in+the+vervet+monkey.">Experimental autoimmune thyroiditis in the vervet monkey.</a> Clinical and Experimental Immunology. 29 (2), 256-260 (1977).</li><li>Esquivel, P. S., Rose, N. R., Kong, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+autoimmunity+in+good+and+poor+responder+mice+with+mouse+thyroglobulin+and+lipopolysaccharide.">Induction of autoimmunity in good and poor responder mice with mouse thyroglobulin and lipopolysaccharide.</a> The Journal of Experimental Medicine. 145 (5), 1250-1263 (1977).</li><li>Kong, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-DRB1+polymorphism+determines+susceptibility+to+autoimmune+thyroiditis+in+transgenic+mice:+definitive+association+with+HLA-DRB1*0301+(DR3)+gene.">HLA-DRB1 polymorphism determines susceptibility to autoimmune thyroiditis in transgenic mice: definitive association with HLA-DRB1*0301 (DR3) gene.</a> The Journal of Experimental Medicine. 184 (3), 1167-1172 (1996).</li><li>Kotani, T., Umeki, K., Hirai, K., Ohtakia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+murine+thyroiditis+induced+by+porcine+thyroid+peroxidase+and+its+transfer+by+the+antigen-specific+T+cell+line.">Experimental murine thyroiditis induced by porcine thyroid peroxidase and its transfer by the antigen-specific T cell line.</a> Clinical and Experimental Immunology. 80 (1), 11-18 (1990).</li><li>Ng, H. P., Banga, J. P., Kung, A. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+murine+model+of+autoimmune+thyroiditis+induced+with+homologous+mouse+thyroid+peroxidase.">Development of a murine model of autoimmune thyroiditis induced with homologous mouse thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 145 (2), 809-816 (2004).</li><li>Ng, H. P., Kung, A. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+autoimmune+thyroiditis+and+hypothyroidism+by+immunization+of+immunoactive+T+cell+epitope+of+thyroid+peroxidase.">Induction of autoimmune thyroiditis and hypothyroidism by immunization of immunoactive T cell epitope of thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 147 (6), 3085-3092 (2006).</li><li>Ellis, J. S., Braley-Mullen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+by+which+B+cells+and+regulatory+T+Cells+influence+development+of+murine+organ-specific+autoimmune+diseases.">Mechanisms by which B cells and regulatory T Cells influence development of murine organ-specific autoimmune diseases.</a> Journal of Clinical Medicine. 6 (2), 13 (2017).</li><li>Fang, Y., Yu, S., Braley-Mullen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+roles+of+IFN-gamma+in+murine+models+of+autoimmune+thyroid+diseases.">Contrasting roles of IFN-gamma in murine models of autoimmune thyroid diseases.</a> Thyroid. 17 (10), 989-994 (2007).</li><li>Fang, Y., Zhao, L., Yan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+as+novel+therapeutic+targets+in+autoimmune+thyroiditis.">Chemokines as novel therapeutic targets in autoimmune thyroiditis.</a> Recent Patents on DNA &amp; Gene Sequences. 4 (1), 52-57 (2010).</li><li>Chen, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+thyroid+peroxidase+arise+spontaneously+with+age+in+NOD.H-2h4+mice+and+appear+after+thyroglobulin+antibodies.">Antibodies to thyroid peroxidase arise spontaneously with age in NOD.H-2h4 mice and appear after thyroglobulin antibodies.</a> Endocrinology. 151 (9), 4583-4593 (2010).</li><li>Ruf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+immunological+structure+and+biochemical+properties+of+human+thyroid+peroxidase.">Relationship between immunological structure and biochemical properties of human thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 125 (3), 1211-1218 (1989).</li><li>McLachlan, S. M., Aliesky, H. A., Chen, C. R., Chong, G., Rapoport, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+in+transgenic+mice+expressing+the+human+TSH+receptor+A-subunit:+thyroiditis,+epitope+spreading+and+adjuvant+as+a+'double+edged+sword'.">Breaking tolerance in transgenic mice expressing the human TSH receptor A-subunit: thyroiditis, epitope spreading and adjuvant as a 'double edged sword'.</a> PLoS One. 7 (9), e43517 (2012).</li><li>McLachlan, S. M., Aliesky, H. A., Chen, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+in+transgenic+mice+expressing+the+human+TSH+receptor+A-subunit:+thyroiditis,+epitope+spreading+and+adjuvant+as+a+'double+edged+sword’[J].">Breaking tolerance in transgenic mice expressing the human TSH receptor A-subunit: thyroiditis, epitope spreading and adjuvant as a 'double edged sword’[J].</a> PLoS One. 7 (9), e43517 (2012).</li><li>Hutchings, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Both+CD4(+)+T+cells+and+CD8(+)+T+cells+are+required+for+iodine+accelerated+thyroiditis+in+NOD+mice.">Both CD4(+) T cells and CD8(+) T cells are required for iodine accelerated thyroiditis in NOD mice.</a> Cellular Immunology. 192 (2), 113-121 (1999).</li><li>Xue, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+of+CD4+CD25+++regulatory+T+cells+in+NOD.H-2h4+mice+with+iodine-induced+autoimmune+thyroiditis.">Dynamic changes of CD4+CD25 + regulatory T cells in NOD.H-2h4 mice with iodine-induced autoimmune thyroiditis.</a> Biological Trace Element Research. 143 (1), 292-301 (2011).</li><li>Hou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+halofuginone+on+the+pathogenesis+of+autoimmune+thyroid+disease+in+different+mice+models.">Effect of halofuginone on the pathogenesis of autoimmune thyroid disease in different mice models.</a> Endocrine, Metabolic &amp; Immune Disorders Drug Targets. 17 (2), 141-148 (2017).</li><li>McLachlan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+between+iodide-induced+thyroiditis+and+antibody-mediated+hyperthyroidism+in+NOD.H-2h4+mice.">Dissociation between iodide-induced thyroiditis and antibody-mediated hyperthyroidism in NOD.H-2h4 mice.</a> Endocrinology. 146 (1), 294-300 (2005).</li><li>Danailova, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+management+of+thyroiditis+of+hashimoto.">Nutritional management of thyroiditis of hashimoto.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (9), 5144 (2022).</li><li>Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+parameters+linking+thyroglobulin+iodination+with+autoimmune+thyroiditis.">Molecular parameters linking thyroglobulin iodination with autoimmune thyroiditis.</a> Hormones. 10 (1), 27-35 (2011).</li><li>Verginis, P., Li, H. S., Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerogenic+semimature+dendritic+cells+suppress+experimental+autoimmune+thyroiditis+by+activation+of+thyroglobulin-specific+CD4+CD25++T+cells.">Tolerogenic semimature dendritic cells suppress experimental autoimmune thyroiditis by activation of thyroglobulin-specific CD4+CD25+ T cells.</a> Journal of Immunology. 174 (11), 7433-7439 (2005).</li><li>Flynn, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superiority+of+thyroid+peroxidase+DNA+over+protein+immunization+in+replicating+human+thyroid+autoimmunity+in+HLA-DRB1*0301+(DR3)+transgenic+mice.">Superiority of thyroid peroxidase DNA over protein immunization in replicating human thyroid autoimmunity in HLA-DRB1*0301 (DR3) transgenic mice.</a> Clinical and Experimental Immunology. 137 (3), 503-512 (2004).</li><li>Akeno, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFN-&#945;+mediates+the+development+of+autoimmunity+both+by+direct+tissue+toxicity+and+through+immune+cell+recruitment+mechanisms.">IFN-&#945; mediates the development of autoimmunity both by direct tissue toxicity and through immune cell recruitment mechanisms.</a> Journal of Immunology. 186 (8), 4693-4706 (2011).</li></ol>

يحدث HT بسبب اضطراب في جهاز المناعة الذاتية الناجم عن الخلايا الليمفاوية التي تتسلل إلى الغدة الدرقية ، مما يزيد من ضعف وظيفة الغدة الدرقية ، مع إنتاج أجسام مضادة خاصة بالغدة الدرقية. مستويات مصل TSH و TgAb و TPOAb في مرضى HT مرتفعة بشكل ملحوظ27. في الوقت الحاضر ، يتم استخدام نوعين رئيس?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64609">Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model</a>. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 &#181;g/100 &#181;L for sedation), medetomidine (7.5 &#181;g/100 &#181;L for sedation), and butorphanol tartrate (50 &#181;g/100 &#181;L for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 &#181;g/100 &#181;L for sedation), medetomidine (7.5 &#181;g/100 &#181;L for sedation), and butorphanol tartrate (50 &#181;g/100 &#181;L for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS). 
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33&#181;g/100&#181;L, medetomidine 2.5&#181;g/100&#181;L, and butorphanol 16.7&#181;g/100&#181;L. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4&#181;g/g, medetomidine 0.75&#181;g/g, and butorphanol 1.67&#181;g/g.&#160;Anesthesia depth was confirmed when the mouse&#39;s limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of&#160; pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64609">Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

تم الإبلاغ عن التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو (HT) ، المعروف أيضا باسم التهاب الغدة الدرقية الليمفاوي المزمن أو التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي ، لأول مرة في عام 19121. يتميز HT بتسلل الخلايا اللمفاوية وتلف الأنسجة المسامية الدرقية. تتجلى الاختبارات المعملية بشكل أساسي في زيادة الأجسام المضادة الخاصة بالغدة الدرقية ، بما في ذلك الأجسام المضادة لهرمون الغدة الدرقية (TgAb) والأجسام المضادة للبيروكسيديز المضاد للغدة الدرقية (TPOAb) 2. يتراوح معدل الإصابة ب HT بين 0.4٪ -1.5٪ ، وهو ما يمثل 20٪ -25٪ من جميع أمراض الغدة الدرقية ، وقد زادت هذه القيمة في السنوات الأخيرة3. بالإضافة إلى ذلك ، أفاد عدد كبير من الدراسات أن HT يرتبط بتكوين الأورام وتكرار سرطان الغدة الدرقية الحليمي (PTC)4,5 ؛ الآليات المحتملة لا تزال مثيرة للجدل. التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي هو أيضا عامل مهم في العقم عند النساء6. لذلك ، يجب أن يكون التسبب في HT واضحا ، حيث يعد النموذج الحيواني المستقر والبسيط ضروريا.
لدراسة مسببات HT ، تم استخدام نوعين رئيسيين من نماذج الفئران ، بما في ذلك التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التجريبي (EAT) والتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي (SAT) في الدراسات الحالية 7,8. تم تحصين الفئران الحساسة بمستضدات الغدة الدرقية المحددة (بما في ذلك الغدة الدرقية الخام ، وثيروجلوبولين المنقى [TG] ، وبيروكسيديز الغدة الدرقية [TPO] ، والمجال الخارجي ل TPO المؤتلف ، وببتيدات TPO المختارة) لإنشاء نموذج الفئران EAT. بالإضافة إلى ذلك ، يتم أيضا استخدام المواد المساعدة ، بما في ذلك عديد السكاريد الشحمي (LPS) ، ومساعد فرويند الكامل (CFA) ، وغيرها من المواد المساعدة غير العادية ، أثناء التحصين لتحطيم التسامح المناعي9،10،11،12،13،14،15،16،17.
نموذج SAT هو نموذج مهم لدراسة التطور التلقائي لالتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي ، والذي يعتمد على NOD. الفئران H-2H4. الإيماءة. الماوس H-2h4 هو سلالة جديدة تم الحصول عليها من صليب NOD و B10. الفئران A (4R) ، تليها عدة تهجينات خلفية إلى NOD ، مع جين الحساسية لالتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي IAk18,19. موافقه. لا تصاب الفئران H-2h4 بمرض السكري ، ولكن لديها نسبة عالية من التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي ومتلازمة سجوجرن (SS) 19. وقد وجدت الدراسات أن جزيء الالتصاق داخل الخلايا -1 (ICAM-1) يتم التعبير عنه بشكل كبير في أنسجة الغدة الدرقية من NOD. الفئران H-2h4 في 3-4 أسابيع من العمر. علاوة على ذلك ، مع زيادة تناول اليود ، يتم تعزيز مناعة جزيء ثيروجلوبولين ، مما يزيد من تنظيم التعبير عن ICAM-1 ، الذي يلعب دورا مهما في عملية تسلل الوحيدات21. يحاكي هذا النموذج عملية المناعة الذاتية مع التحقق من العلاقة بين جرعة اليود وشدة المرض. الطريقة المعمول بها مستقرة ، مع احتمال كبير للنجاح. تم تطبيق نموذج SAT للحث على التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي لسنوات عديدة ولا يزال وسيلة فعالة لدراسة التسبب في التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي. ومع ذلك ، فإن طريقة البناء الحالية لنموذج EAT أكثر تعقيدا وتكلفة. تستخدم المختبرات المختلفة طرق تحصين ومواقع حقن مختلفة. علاوة على ذلك ، فإن الفئران ذات الخلفيات الجينية المختلفة لديها معدلات مختلفة من الحث ، والتي تحتاج إلى مزيد من الدراسة للكشف عن الآلية القوية.
ومع ذلك ، يرتبط تطور التهاب الغدة الدرقية في نموذج SAT بيوديد الصوديوم ، وإزدواج الشكل الجنسي ، وظروف التربية. للكشف عن الإجراء المناسب لالتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي في نموذج SAT ، وصفت هذه المقالة طريقة تحريض التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي في ظروف مختلفة. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يسمح لدراسة التسبب والتقدم المناعي لالتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي في مراحل مختلفة من هذا المرض.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>L-044&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexmedetomidine hydrochloride&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>145108-58-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) well</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9410-1CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>macklin</td>
			<td>64-17-5&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#8217;s Adjuvant, Complete&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F5881&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#8217;s Adjuvant, Incomplete&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F5506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG&#160;</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>SA5-10275&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam solution&#160;</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>M-908&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse/rat thyroxine (T4) ELISA</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>DKO045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>macklin</td>
			<td>30525-89-4&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Iodine</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>7681-82-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroglobulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>T1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroglobulin&#160; ELISA Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>EHTGX5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSH ELISA</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>DKO200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>macklin</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a mouse spontaneous autoimmune thyroiditis model

في السنوات الأخيرة ، أصبح التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو (HT) أكثر أمراض الغدة الدرقية المناعية الذاتية شيوعا. يتميز بتسلل الخلايا اللمفاوية والكشف عن الأجسام المضادة الذاتية المحددة في الدم. على الرغم من أن الآلية المحتملة لا تزال غير واضحة ، إلا أن خطر الإصابة بالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو مرتبط بعوامل وراثية وبيئية. في الوقت الحاضر ، هناك عدة أنواع من نماذج التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي ، بما في ذلك التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التجريبي (EAT) والتهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي (SAT).
EAT في الفئران هو نموذج شائع ل HT ، والذي يتم تحصينه مع عديد السكاريد الدهني (LPS) جنبا إلى جنب مع ثيروجلوبولين (Tg) أو تستكمل مع مساعد فرويند الكامل (CFA). تم تأسيس نموذج الماوس EAT على نطاق واسع في العديد من أنواع الفئران. ومع ذلك ، من المرجح أن يرتبط تطور المرض باستجابة الأجسام المضادة Tg ، والتي قد تختلف في التجارب المختلفة.
يستخدم SAT أيضا على نطاق واسع في دراسة HT في NOD. ماوس H-2H4. الإيماءة. الماوس H2h4 هو سلالة جديدة تم الحصول عليها من صليب فأر السكري غير البدين (NOD) مع B10. A (4R) ، والذي يتم تحريضه بشكل كبير ل HT مع أو بدون تغذية اليود. أثناء الحث ، NOD. يحتوي فأر H-2h4 على مستوى عال من TgAb مصحوبا بتسلل الخلايا الليمفاوية في الأنسجة المسامية الدرقية. ومع ذلك ، بالنسبة لهذا النوع من نماذج الماوس ، هناك عدد قليل من الدراسات لتقييم شامل للعملية المرضية أثناء تحريض اليود.
تم إنشاء نموذج فأر SAT لأبحاث HT في هذه الدراسة ، ويتم تقييم عملية التغيير المرضي بعد فترة طويلة من تحريض اليود. من خلال هذا النموذج ، يمكن للباحثين فهم التطور المرضي ل HT بشكل أفضل وفحص طرق العلاج الجديدة ل HT.

كانت التغيرات النسيجية مختلفة بشكل لافت للنظر في الإناث والذكور ، ومدة تناول اليود ، وحل NaI. كما هو موضح في الشكل 1 ، ~ 10٪ من NOD. طورت الفئران H-2h4 SAT حتى بدون تحريض اليود في عمر 24 أسبوعا ، وطورت جميع الفئران في النهاية التهاب الغدة الدرقية. عند إعطاء الماء العادي ، لم يكن هناك فرق...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model at JoVE.com

Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

تم إنشاء عدة أنواع من النماذج الحيوانية لالتهاب الغدة الدرقية هاشيموتو ، وكذلك التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي في فأر NOD. الفئران H-2h4 هي نموذج بسيط وموثوق لتحريض HT. توضح هذه المقالة هذا النهج وتقيم العملية المرضية لفهم أفضل لنموذج الفئران SAT.

جيل من الفأر نموذج التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي التلقائي

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and ...

التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي ، نتيجة المرض الذي يؤثر بشكل خطير على صحة الإنسان. على الرغم من عدم وجود علاج فعال حاليا ، إلا أن النماذج الحيوانية توفر منصة لدراسة هذا المرض. هذا النموذج سهل البناء بخطوات بسيطة ومعدل نجاح مرتفع.إنه يحفز عملية المناعة الذاتية بالتحقق من العلاقة بين موتنا وشدة المرض. للبدء ، قم بإصلاح الماوس على طاولة التشريح باستخدام المسامير. لتحضير عينة أنسجة الغدة الدرقية ، قم بتشريح جدار الصدر وكشف القلب.افتح الأذين الأيمن وحقن المحلول الملحي عن طريق الوريد في البطين الأيسر ، باستخدام حقنة 20 ملليلتر حتى يتحول النسيج إلى اللون الأبيض. تعقيم الرقبة مع 75 ٪ من الإيثانول. باستخدام مقص الأنسجة ، قم بقص جلد الفأر على طول الرقبة ، خط الوسط من أعلى القص إلى الفك السفلي ، لفضح أنسجة الرقبة بالكامل.حدد موقع الغدد تحت الفك السفلي وعضلة القصبة الهوائية الأمامية وافصلها باستخدام مقص العيون والملقط. بمجرد تعرض القصبة الهوائية وغضروف الغدة الدرقية ، قم بإزالة الأنسجة الموجودة أسفل الغضروف باستخدام ملقط منحني. بعد التقاط الغضروف والقصبة الهوائية ، قم بقطع العدسة البعيدة للغضروف والعدسة القريبة من القصبة الهوائية.ثم قم بإزالة الغدة الدرقية والقصبة الهوائية. أظهر تلطيخ HE تغيرات مرضية في الغدة الدرقية ، تحت تناول اليود. طورت جميع الفئران التهاب الغدة الدرقية ، حتى بدون تحريض اليود.ومع ذلك ، لوحظ تطور متسارع لالتهاب الغدة الدرقية مع زيادة تركيز يوديد الصوديوم. تميل إناث الفئران إلى الإصابة بالتهاب الغدة الدرقية أكثر حدة من الذكور تحت نفس الحالة ، لكن الاختلافات في شدة تسلل الخلايا اللمفاوية كانت ضئيلة. لم يتم زيادة مستويات الأجسام المضادة لثيروجلوبولين بشكل ملحوظ في الماء العادي في عمر 16 أسبوعا.في حين أن مكملات يوديد الصوديوم أظهرت ارتفاعا مماثلا في مستويات الأجسام المضادة لدى ذكور وإناث الفئران. تم العثور على الأجسام المضادة لبيروكسيديز الغدة الدرقية في 24 أسبوعا في الماء العادي ؛ وأظهرت الفئران الإناث مستويات أعلى من الذكور في 72 أسبوعا. ومع ذلك ، أظهر إصدار يوديد الصوديوم 0.05٪ أعلى الأجسام المضادة في 64 أسبوعا.بالإضافة إلى ذلك ، كانت مستويات TSH أعلى في ذكور الفئران من إناث NODH2 H4 ؛ مع أو بدون مكملات اليوديد. علاوة على ذلك ، أظهرت مستويات T4 انخفاضا في الميل إلى وقت الحث في ماء اليود. وتجدر الإشارة إلى أن 0.05٪ صوديوم في أنسب تركيز لتقليل نموذج الملح.أيضا ، يجب توخي المزيد من الحذر أثناء عزل العينات. لأن خلية الماوس صغيرة نسبيا ويمكن إتلافها بسهولة. إن إنشاء النموذج الحيواني مفيد لدراسة مسار الإبادة الجماعية ومعالجة حالة خلايا المناعة الذاتية.ويوفر أساسا لتطوير طريقة علاج جديدة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

إعداد مستمنع ماوس النخامية للتحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبي

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

المستحث الطفيلي قيادة وراثيا القلب المناعة الذاتية ومرض شاغاس في نموذج الدجاج

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

عزل التسلل الكريات البيض من ماوس الجلد عن طريق الأنزيمية دايجست والفصل التدرج

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

جيل وتحديد GM-CSF المشتقة مثل السنخية الضامة والخلايا الجذعية من الفأر نخاع العظم

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

المعالجة سيفوبيرازون ماوس نموذج سريريا ذات صلة<em&gt; المطثية العسيرة</em&gt; سلالة R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

A المناعة الذاتية الجفاف العين الفئران نموذج مع زيادة في المفعول الذاكرة خلايا T في الأنسجة مقلة العين

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

فيروس الإنفلونزا أ الفيروس دراسات في نموذج ماوس للإصابة

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

نموذج التحكم ماوس لأنه الانتان الوليدي

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

توليد عالي الكفاءة من الخلايا T السامة للماوس الأولية الخاصة بالمستضد للاختبار الوظيفي في نموذج مرض السكري المناعي الذاتي

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...