Name: generation of a mouse spontaneous autoimmune thyroiditis model
Uploaded: 2023-03-17T14:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model at JoVE.com

נוגדנים חד-שבטיים של עכברים ל-TPO אנושי (המשמשים כבקרות חיוביות) סופקו על ידי ד"ר פ. קאריון וד"ר ג'יי רוף (מרסיי, צרפת). המחברים מודים לכל המשתתפים במחקר זה ולחברי צוות המחקר שלנו. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענקים מקרן התמיכה לפוסט-דוקטורט של בית החולים מערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן, סין (2020HXBH057) ותוכנית התמיכה במדע וטכנולוגיה במחוז סצ'ואן (פרויקט מס '2021YFS0166)

הפרוטוקול המתואר להלן אושר על ידי הנחיות הטיפול והשימוש שנקבעו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת סצ'ואן.
1. הכנה
<ol><li>אכלסו את כל העכברים בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים במחזורי אור-חושך של 12 שעות (החל מהשעה 07:00 בבוקר ובשעה 19:00 בערב, בהתאמה). ...

<ol>
	<li>Ralli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hashimoto's+thyroiditis:+An+update+on+pathogenic+mechanisms,+diagnostic+protocols,+therapeutic+strategies,+and+potential+malignant+transformation.">Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation.</a> Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649 (2020).</li><li>Zhang, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+infiltration+and+thyrocyte+destruction+are+driven+by+stromal+and+immune+cell+components+in+Hashimoto's+thyroiditis.">Lymphocyte infiltration and thyrocyte destruction are driven by stromal and immune cell components in Hashimoto's thyroiditis.</a> Nature Communications. 13 (1), 775 (2022).</li><li>Ruggeri, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+comorbidities+in+Hashimoto's+thyroiditis:+different+patterns+of+association+in+adulthood+and+childhood/adolescence.">Autoimmune comorbidities in Hashimoto's thyroiditis: different patterns of association in adulthood and childhood/adolescence.</a> European Journal of Endocrinology. 176 (2), 133-141 (2017).</li><li>Resende de Paiva, C., Gr&#248;nh&#248;j, C., Feldt-Rasmussen, U., von Buchwald, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+Hashimoto's+thyroiditis+and+thyroid+cancer+in+64,628+patients.">Association between Hashimoto's thyroiditis and thyroid cancer in 64,628 patients.</a> Frontiers in Oncology. 7, 53 (2017).</li><li>Ehlers, M., Schott, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hashimoto's+thyroiditis+and+papillary+thyroid+cancer:+are+they+immunologically+linked.">Hashimoto's thyroiditis and papillary thyroid cancer: are they immunologically linked.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 25 (12), 656-664 (2014).</li><li>Medenica, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cell+and+gene+therapies+in+the+treatment+of+infertility+in+patients+with+thyroid+autoimmunity.">The role of cell and gene therapies in the treatment of infertility in patients with thyroid autoimmunity.</a> International Journal of Endocrinology. 2022, 4842316 (2022).</li><li>Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+autoimmune+thyroiditis:+the+first+decade.">The genetics of autoimmune thyroiditis: the first decade.</a> Journal of Autoimmunity. 37 (2), 88-94 (2011).</li><li>Kolypetri, P., King, J., Larijani, M., Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+and+environment+as+predisposing+factors+in+autoimmunity:+acceleration+of+spontaneous+thyroiditis+by+dietary+iodide+in+NOD.H2(h4)+mice.">Genes and environment as predisposing factors in autoimmunity: acceleration of spontaneous thyroiditis by dietary iodide in NOD.H2(h4) mice.</a> International Reviews of Immunology. 34 (6), 542-556 (2015).</li><li>Terplan, K. L., Witebsky, E., Rose, N. R., Paine, J. R., Egan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+thyroiditis+in+rabbits,+guinea+pigs+and+dogs,+following+immunization+with+thyroid+extracts+of+their+own+and+of+heterologous+species.">Experimental thyroiditis in rabbits, guinea pigs and dogs, following immunization with thyroid extracts of their own and of heterologous species.</a> The American Journal of Pathology. 36 (2), 213-239 (1960).</li><li>Alexopoulos, H., Dalakas, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunobiology+of+autoimmune+encephalitides.">The immunobiology of autoimmune encephalitides.</a> Journal of Autoimmunity. 104, 102339 (2019).</li><li>Noviello, C. M., Kreye, J., Teng, J., Pr&#252;ss, H., Hibbs, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+mechanisms+of+GABA+receptor+autoimmune+encephalitis.">Structural mechanisms of GABA receptor autoimmune encephalitis.</a> Cell. 185 (14), 2469-2477 (2022).</li><li>Pudifin, D. J., Duursma, J., Brain, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+thyroiditis+in+the+vervet+monkey.">Experimental autoimmune thyroiditis in the vervet monkey.</a> Clinical and Experimental Immunology. 29 (2), 256-260 (1977).</li><li>Esquivel, P. S., Rose, N. R., Kong, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+autoimmunity+in+good+and+poor+responder+mice+with+mouse+thyroglobulin+and+lipopolysaccharide.">Induction of autoimmunity in good and poor responder mice with mouse thyroglobulin and lipopolysaccharide.</a> The Journal of Experimental Medicine. 145 (5), 1250-1263 (1977).</li><li>Kong, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-DRB1+polymorphism+determines+susceptibility+to+autoimmune+thyroiditis+in+transgenic+mice:+definitive+association+with+HLA-DRB1*0301+(DR3)+gene.">HLA-DRB1 polymorphism determines susceptibility to autoimmune thyroiditis in transgenic mice: definitive association with HLA-DRB1*0301 (DR3) gene.</a> The Journal of Experimental Medicine. 184 (3), 1167-1172 (1996).</li><li>Kotani, T., Umeki, K., Hirai, K., Ohtakia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+murine+thyroiditis+induced+by+porcine+thyroid+peroxidase+and+its+transfer+by+the+antigen-specific+T+cell+line.">Experimental murine thyroiditis induced by porcine thyroid peroxidase and its transfer by the antigen-specific T cell line.</a> Clinical and Experimental Immunology. 80 (1), 11-18 (1990).</li><li>Ng, H. P., Banga, J. P., Kung, A. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+murine+model+of+autoimmune+thyroiditis+induced+with+homologous+mouse+thyroid+peroxidase.">Development of a murine model of autoimmune thyroiditis induced with homologous mouse thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 145 (2), 809-816 (2004).</li><li>Ng, H. P., Kung, A. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+autoimmune+thyroiditis+and+hypothyroidism+by+immunization+of+immunoactive+T+cell+epitope+of+thyroid+peroxidase.">Induction of autoimmune thyroiditis and hypothyroidism by immunization of immunoactive T cell epitope of thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 147 (6), 3085-3092 (2006).</li><li>Ellis, J. S., Braley-Mullen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+by+which+B+cells+and+regulatory+T+Cells+influence+development+of+murine+organ-specific+autoimmune+diseases.">Mechanisms by which B cells and regulatory T Cells influence development of murine organ-specific autoimmune diseases.</a> Journal of Clinical Medicine. 6 (2), 13 (2017).</li><li>Fang, Y., Yu, S., Braley-Mullen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+roles+of+IFN-gamma+in+murine+models+of+autoimmune+thyroid+diseases.">Contrasting roles of IFN-gamma in murine models of autoimmune thyroid diseases.</a> Thyroid. 17 (10), 989-994 (2007).</li><li>Fang, Y., Zhao, L., Yan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+as+novel+therapeutic+targets+in+autoimmune+thyroiditis.">Chemokines as novel therapeutic targets in autoimmune thyroiditis.</a> Recent Patents on DNA &amp; Gene Sequences. 4 (1), 52-57 (2010).</li><li>Chen, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+thyroid+peroxidase+arise+spontaneously+with+age+in+NOD.H-2h4+mice+and+appear+after+thyroglobulin+antibodies.">Antibodies to thyroid peroxidase arise spontaneously with age in NOD.H-2h4 mice and appear after thyroglobulin antibodies.</a> Endocrinology. 151 (9), 4583-4593 (2010).</li><li>Ruf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+immunological+structure+and+biochemical+properties+of+human+thyroid+peroxidase.">Relationship between immunological structure and biochemical properties of human thyroid peroxidase.</a> Endocrinology. 125 (3), 1211-1218 (1989).</li><li>McLachlan, S. M., Aliesky, H. A., Chen, C. R., Chong, G., Rapoport, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+in+transgenic+mice+expressing+the+human+TSH+receptor+A-subunit:+thyroiditis,+epitope+spreading+and+adjuvant+as+a+'double+edged+sword'.">Breaking tolerance in transgenic mice expressing the human TSH receptor A-subunit: thyroiditis, epitope spreading and adjuvant as a 'double edged sword'.</a> PLoS One. 7 (9), e43517 (2012).</li><li>McLachlan, S. M., Aliesky, H. A., Chen, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+in+transgenic+mice+expressing+the+human+TSH+receptor+A-subunit:+thyroiditis,+epitope+spreading+and+adjuvant+as+a+'double+edged+sword’[J].">Breaking tolerance in transgenic mice expressing the human TSH receptor A-subunit: thyroiditis, epitope spreading and adjuvant as a 'double edged sword’[J].</a> PLoS One. 7 (9), e43517 (2012).</li><li>Hutchings, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Both+CD4(+)+T+cells+and+CD8(+)+T+cells+are+required+for+iodine+accelerated+thyroiditis+in+NOD+mice.">Both CD4(+) T cells and CD8(+) T cells are required for iodine accelerated thyroiditis in NOD mice.</a> Cellular Immunology. 192 (2), 113-121 (1999).</li><li>Xue, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+of+CD4+CD25+++regulatory+T+cells+in+NOD.H-2h4+mice+with+iodine-induced+autoimmune+thyroiditis.">Dynamic changes of CD4+CD25 + regulatory T cells in NOD.H-2h4 mice with iodine-induced autoimmune thyroiditis.</a> Biological Trace Element Research. 143 (1), 292-301 (2011).</li><li>Hou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+halofuginone+on+the+pathogenesis+of+autoimmune+thyroid+disease+in+different+mice+models.">Effect of halofuginone on the pathogenesis of autoimmune thyroid disease in different mice models.</a> Endocrine, Metabolic &amp; Immune Disorders Drug Targets. 17 (2), 141-148 (2017).</li><li>McLachlan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+between+iodide-induced+thyroiditis+and+antibody-mediated+hyperthyroidism+in+NOD.H-2h4+mice.">Dissociation between iodide-induced thyroiditis and antibody-mediated hyperthyroidism in NOD.H-2h4 mice.</a> Endocrinology. 146 (1), 294-300 (2005).</li><li>Danailova, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+management+of+thyroiditis+of+hashimoto.">Nutritional management of thyroiditis of hashimoto.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (9), 5144 (2022).</li><li>Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+parameters+linking+thyroglobulin+iodination+with+autoimmune+thyroiditis.">Molecular parameters linking thyroglobulin iodination with autoimmune thyroiditis.</a> Hormones. 10 (1), 27-35 (2011).</li><li>Verginis, P., Li, H. S., Carayanniotis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerogenic+semimature+dendritic+cells+suppress+experimental+autoimmune+thyroiditis+by+activation+of+thyroglobulin-specific+CD4+CD25++T+cells.">Tolerogenic semimature dendritic cells suppress experimental autoimmune thyroiditis by activation of thyroglobulin-specific CD4+CD25+ T cells.</a> Journal of Immunology. 174 (11), 7433-7439 (2005).</li><li>Flynn, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superiority+of+thyroid+peroxidase+DNA+over+protein+immunization+in+replicating+human+thyroid+autoimmunity+in+HLA-DRB1*0301+(DR3)+transgenic+mice.">Superiority of thyroid peroxidase DNA over protein immunization in replicating human thyroid autoimmunity in HLA-DRB1*0301 (DR3) transgenic mice.</a> Clinical and Experimental Immunology. 137 (3), 503-512 (2004).</li><li>Akeno, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFN-&#945;+mediates+the+development+of+autoimmunity+both+by+direct+tissue+toxicity+and+through+immune+cell+recruitment+mechanisms.">IFN-&#945; mediates the development of autoimmunity both by direct tissue toxicity and through immune cell recruitment mechanisms.</a> Journal of Immunology. 186 (8), 4693-4706 (2011).</li></ol>

HT מתרחש עקב הפרעה אוטואימונית הנגרמת על ידי לימפוציטים החודרים לבלוטת התריס, ופוגעים עוד יותר בתפקוד בלוטת התריס, תוך ייצור נוגדנים ספציפיים לבלוטת התריס. רמות TSH, TgaB ו-TPOAb בסרום בחולי HT גבוהות משמעותית27. כיום, שני סוגים עיקריים של מודלים murine נמצאים בשימוש נרחב כדי ללמוד את האט?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64609">Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model</a>. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 &#181;g/100 &#181;L for sedation), medetomidine (7.5 &#181;g/100 &#181;L for sedation), and butorphanol tartrate (50 &#181;g/100 &#181;L for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 &#181;g/100 &#181;L for sedation), medetomidine (7.5 &#181;g/100 &#181;L for sedation), and butorphanol tartrate (50 &#181;g/100 &#181;L for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS). 
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33&#181;g/100&#181;L, medetomidine 2.5&#181;g/100&#181;L, and butorphanol 16.7&#181;g/100&#181;L. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4&#181;g/g, medetomidine 0.75&#181;g/g, and butorphanol 1.67&#181;g/g.&#160;Anesthesia depth was confirmed when the mouse&#39;s limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of&#160; pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64609">Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model</a>. The Protocol section was updated.

Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

דלקת בלוטת התריס של השימוטו (HT), הידועה גם בשם דלקת בלוטת התריס הלימפוציטית הכרונית או בלוטת התריס האוטואימונית, דווחה לראשונה בשנת 19121. HT מאופיין בחדירת לימפוציטים ופגיעה ברקמת זקיקי בלוטת התריס. בדיקות מעבדה מתבטאות בעיקר בהגדלת נוגדנים ספציפיים לבלוטת התריס, כולל נוגדן אנטי-תירוגלובולין (TgAb) ונוגדן פרוקסידאז נגד בלוטת התריס (TPOAb)2. שכיחות HT היא בטווח של 0.4%-1.5%, המהווה 20%-25% מכלל מחלות בלוטת התריס, וערך זה עלה בשנים האחרונות3. בנוסף, מספר רב של מחקרים דיווחו כי HT קשור עם אונקוגנזה והישנות של קרצינומה פפילרית של בלוטת התריס (PTC)4,5; המנגנונים האפשריים עדיין שנויים במחלוקת. דלקת אוטואימונית של בלוטת התריס היא גם גורם חשוב באי פוריות האישה6. לכן, הפתוגנזה של HT צריך להיות ברור, אשר מודל בעלי חיים יציב ופשוט הוא חיוני.
כדי לחקור את האטיולוגיה של HT, נעשה שימוש בשני סוגים עיקריים של מודלים של מורין, כולל דלקת אוטואימונית ניסיונית של בלוטת התריס (EAT) ודלקת אוטואימונית ספונטנית של בלוטת התריס (SAT) במחקרים הנוכחיים 7,8. עכברים רגישים חוסנו באנטיגנים ספציפיים של בלוטת התריס (כולל בלוטת התריס הגולמית, תירוגלובולין מטוהר [TG], פרוקסידז של בלוטת התריס [TPO], אקטודומיין TPO רקומביננטי ופפטידים נבחרים של TPO) כדי לבסס את מודל EAT murine. בנוסף, האדג'ובנטים, כולל lipopolysaccharide (LPS), אדג'ובנט של פרוינד מלא (CFA), ואדג'ובנטים יוצאי דופן אחרים, משמשים גם במהלך החיסון כדי לפרק את הסבילות החיסונית 9,10,11,12,13,14,15,16,17.
מודל SAT הוא מודל חשוב לחקר ההתפתחות הספונטנית של בלוטת התריס האוטואימונית, המבוססת על NOD. עכברי H-2h4. הנהון. עכבר H-2h4 הוא זן חדש המתקבל מצלב NOD ו- B10. עכברי A(4R), ואחריהם הצלבות אחוריות מרובות ל-NOD, עם הגן האוטואימוני לרגישות לבלוטת התריס IAk18,19. הנהון. עכברי H-2h4 אינם מפתחים סוכרת, אך יש להם שכיחות גבוהה של דלקת אוטואימונית של בלוטת התריס ותסמונת סיוגרן (SS)19. מחקרים מצאו כי מולקולת היצמדות תוך-תאית -1 (ICAM-1) מתבטאת מאוד ברקמת בלוטת התריס של NOD. עכברי H-2h4 בגיל 3-4 שבועות. יתר על כן, עם הגידול בצריכת יוד, האימונוגניות של מולקולת thyroglobulin משופרת, אשר עוד יותר upregulates את הביטוי של ICAM-1, אשר ממלא תפקיד חשוב בתהליך של חדירת מונוציטים21. מודל זה מדמה את התהליך האוטואימוני תוך אימות הקשר בין מינון היוד לחומרת המחלה. השיטה שנקבעה היא יציבה, עם הסתברות גבוהה להצלחה. מודל SAT יושם לגרימת דלקת אוטואימונית של בלוטת התריס במשך שנים רבות וממשיך להיות שיטה יעילה לחקר הפתוגנזה של בלוטת התריס האוטואימונית. עם זאת, שיטת הבנייה הנוכחית של מודל EAT מסובכת ויקרה יותר; מעבדות שונות משתמשות בשיטות חיסון שונות ובאתרי הזרקה. יתר על כן, לעכברים עם רקע גנטי שונה יש שיעורי השראה שונים, אשר זקוקים למחקר נוסף כדי לחשוף את המנגנון החזק.
עם זאת, התפתחות בלוטת התריס במודל SAT קשורה לנתרן יודי, דימורפיזם מיני ותנאי גידול. כדי לחשוף את ההליך המתאים של בלוטת התריס אוטואימונית במודל SAT, מאמר זה תיאר את שיטת השראת בלוטת התריס האוטואימונית במצבים שונים. בנוסף, הוא מאפשר ללמוד את הפתוגנזה ואת ההתקדמות החיסונית של בלוטת התריס אוטואימונית בשלבים שונים של המחלה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>L-044&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexmedetomidine hydrochloride&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>145108-58-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) well</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9410-1CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>macklin</td>
			<td>64-17-5&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#8217;s Adjuvant, Complete&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F5881&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#8217;s Adjuvant, Incomplete&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F5506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG&#160;</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>SA5-10275&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam solution&#160;</td>
			<td>Supelco</td>
			<td>M-908&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse/rat thyroxine (T4) ELISA</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>DKO045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>macklin</td>
			<td>30525-89-4&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Iodine</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>7681-82-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroglobulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>T1126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroglobulin&#160; ELISA Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>EHTGX5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSH ELISA</td>
			<td>Calbiotech</td>
			<td>DKO200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>macklin</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a mouse spontaneous autoimmune thyroiditis model

בשנים האחרונות, דלקת בלוטת התריס של השימוטו (HT) הפכה למחלה האוטואימונית הנפוצה ביותר של בלוטת התריס. הוא מאופיין על ידי חדירת לימפוציטים וזיהוי של נוגדנים עצמיים ספציפיים בסרום. למרות שהמנגנון הפוטנציאלי עדיין אינו ברור, הסיכון לדלקת בלוטת התריס של השימוטו קשור לגורמים גנטיים וסביבתיים. כיום, ישנם מספר סוגים של מודלים של תירואידיטיס אוטואימונית, כולל תירואידיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAT) ודלקת אוטואימונית ספונטנית של בלוטת התריס (SAT).
EAT בעכברים הוא מודל נפוץ עבור HT, אשר מחוסן עם lipopolysaccharide (LPS) בשילוב עם thyroglobulin (Tg) או בתוספת אדג'ובנט של פרוינד מלא (CFA). מודל עכבר EAT מבוסס באופן נרחב בסוגים רבים של עכברים. עם זאת, התקדמות המחלה קשורה ככל הנראה לתגובת נוגדני Tg, אשר עשויה להשתנות בניסויים שונים.
SAT נמצא בשימוש נרחב גם במחקר של HT ב- NOD. עכבר H-2H4. הנהון. עכבר H2h4 הוא זן חדש המתקבל מצלב של עכבר סוכרתי לא שמן (NOD) עם B10. A(4R), המושרה באופן משמעותי עבור HT עם או בלי יוד הזנה. במהלך הזירוז, ה- NOD. עכבר H-2h4 יש רמה גבוהה של TgAb מלווה חדירת לימפוציטים ברקמת זקיקי בלוטת התריס. עם זאת, עבור סוג זה של מודל העכבר, ישנם מעט מחקרים כדי להעריך באופן מקיף את התהליך הפתולוגי במהלך אינדוקציה של יוד.
במחקר זה נקבע מודל עכבר SAT לחקר HT, ותהליך השינוי הפתולוגי מוערך לאחר תקופה ארוכה של השראת יוד. באמצעות מודל זה, חוקרים יכולים להבין טוב יותר את ההתפתחות הפתולוגית של HT ולסנן שיטות טיפול חדשות עבור HT.

השינויים ההיסטולוגיים היו שונים להפליא אצל נקבות וזכרים, משך צריכת היוד והפתרון של NaI. כפי שניתן לראות באיור 1, ~10% מה-NOD. עכברי H-2h4 פיתחו SAT גם ללא השראת יוד בגיל 24 שבועות, וכל העכברים פיתחו בסופו של דבר בלוטת התריס. כאשר ניתנו להם מים רגילים, לא היה הבדל משמעותי בשינויים ההיסטו?...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model at JoVE.com

Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

נקבעו מספר סוגים של מודלים של בלוטת התריס של השימוטו, כמו גם דלקת אוטואימונית ספונטנית של בלוטת התריס בעכבר NOD. עכברי H-2h4 הם מודל פשוט ואמין להשראת HT. מאמר זה מתאר גישה זו ומעריך את התהליך הפתולוגי להבנה טובה יותר של מודל SAT murine.

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and ...

דלקת אוטואימונית של בלוטת התריס, תוצאה של מחלה המשפיעה קשות על בריאות האדם. למרות שאין כיום טיפול יעיל, המודלים של בעלי החיים מספקים פלטפורמה לחקר המחלה. מודל זה קל לבנייה בצעדים פשוטים ואחוזי הצלחה גבוהים.זה מגרה את התהליך האוטואימוני עם אימות הקשר בין המוות שלנו ואת חומרת המחלה. כדי להתחיל, תקן את העכבר בטבלת הנתיחה באמצעות סיכות. כדי להכין את דגימת רקמת בלוטת התריס, לנתח את קיר החזה ולחשוף את הלב.חותכים את האטריום הימני ומזריקים מלח תוך ורידי לחדר השמאלי, באמצעות מזרק 20 מיליליטר עד שהרקמה הופכת לבנה. לעקר את הצוואר עם 75% אתנול. בעזרת מספריים רקמות, לחתוך את עור העכבר לאורך הצוואר, קו האמצע מן החלק העליון של עצם החזה אל הלסת התחתונה, כדי לחשוף באופן מלא את רקמת הצוואר.אתר את הבלוטות התת לסתיות ואת שריר קנה הנשימה הקדמי והפרד ביניהם באמצעות מספריים ומלקחיים. לאחר חשיפת קנה הנשימה וסחוס בלוטת התריס, יש להסיר את הרקמה מתחת לסחוס באמצעות מלקחיים מעוקלים. לאחר הרמת הסחוס וקנה הנשימה, חותכים את העדשה הדיסטלית של הסחוס ואת העדשה הפרוקסימלית של קנה הנשימה.לאחר מכן להסיר את בלוטת התריס ואת קנה הנשימה. צביעת HE הראתה שינויים פתולוגיים בבלוטת התריס, תחת צריכת יוד. כל העכברים פיתחו בלוטת התריס, גם ללא השראת יוד.עם זאת, התפתחות מואצת של בלוטת התריס נצפתה עם עלייה בריכוז יודיד נתרן. נקבות עכברים נוטות לפתח דלקת בלוטת התריס חמורה יותר מאשר זכרים באותו מצב, אך ההבדלים בחומרת חדירת הלימפוציטים היו זניחים. רמות נוגדני תירוגלובולין לא עלו באופן משמעותי במים רגילים בגיל 16 שבועות.והואיל ותוספת נתרן יודיד הראתה עלייה דומה ברמות הנוגדנים בעכברים זכרים ונקבות. נוגדני פרוקסידז של בלוטת התריס נמצאו לאחר 24 שבועות במים רגילים; ועכברות נקבות הראו רמות גבוהות יותר מאשר זכרים לאחר 72 שבועות. עם זאת, מהדורת 0.05% נתרן יודיד הראתה את הנוגדנים הגבוהים ביותר לאחר 64 שבועות.בנוסף, רמות TSH היו גבוהות יותר בעכברים זכרים מאשר נקבות NODH2 H4;עם או בלי תוספת יודיד. יתר על כן, רמות T4 הראו ירידה בזמן ההשראות במי יוד. יש לציין כי 0.05% נתרן בריכוז המתאים ביותר כדי להפחית את מודל המלח.כמו כן, יש לנקוט משנה זהירות בעת בידוד הדגימות. מכיוון שתא העכבר קטן יחסית וניזוק בקלות. ביסוס מודל בעלי החיים מסייע לחקר הדרך לרצח עם ולטיפול במצב התא האוטואימוני.ומספק בסיס לפיתוח שיטת טיפול חדשה.

generation-of-a-mouse-spontaneous-autoimmune-thyroiditis-model

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1. It has traditionally been considered a rare disease but reporting has increased markedly in recent years. Hypophysitis, in fact, develops not uncommonly as a "side effect" in cancer patients treated with antibodies that block inhibitory receptors expressed on T lymphocytes, such as CTLA-42 and PD-1 receptors. Autoimmune hypophysitis can be induced experimentally by injecting mice with pituitary proteins mixed with an adjuvant3. In this video article we demonstrate how to extract proteins from mouse pituitary glands and how to prepare them in a form suitable for inducing autoimmune hypophysitis in SJL mice.

Autoimmune hypophysitis can be reproduced in mice by injecting an extract of mouse pituitary proteins.

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases show Chagas disease up to three decades or later. Autoimmunity and parasite persistence are competing theories to explain the pathogenesis of Chagas disease 1, 2. To separate roles played by parasite persistence and autoimmunity in Chagas disease we inoculate the T. cruzi in the air chamber of fertilized eggs. The mature chicken immune system is a tight biological barrier against T. cruzi and the infection is eradicated upon development of its immune system by the end of the first week of growth 3. The chicks are parasite-free at hatching, but they retain integrated parasite mitochondrial kinetoplast DNA (kDNA) minicircle within their genome that are transferred to their progeny. Documentation of the kDNA minicircle integration in the chicken genome was obtained by a targeted prime TAIL-PCR, Southern hybridizations, cloning, and sequencing 3, 4. The kDNA minicircle integrations rupture open reading frames for transcription and immune system factors, phosphatase (GTPase), adenylate cyclase and phosphorylases (PKC, NF-Kappa B activator, PI-3K) associated with cell physiology, growth, and differentiation 3, 5-7, and other gene functions. Severe myocarditis due to rejection of target heart fibers by effectors cytotoxic lymphocytes is seen in the kDNA mutated chickens, showing an inflammatory cardiomyopathy similar to that seen in human Chagas disease. Notably, heart failure and skeletal muscle weakness are present in adult chickens with kDNA rupture of the dystrophin gene in chromosome 1 8. Similar genotipic alterations are associated with tissue destruction carried out by effectors CD45+, CD8&gamma;&delta;+, CD8&alpha; lymphocytes. Thus this protozoan infection can induce genetically driven autoimmune disease.

The inoculation of Trypanosoma cruzi in fertile eggs prior to incubation renders the parasite kDNA minicircle integration in embryo cells genome. Crossbreeding reveals the vertical transfer of the mutations to progeny. The kDNA integrates into coding regions at several chromosomes and the chickens die with an inflammatory autoimmune heart disease.

טפיל מושרה מונע גנטית אוטואימונית מחלות לב Chagas דגם עוף

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune cells in rodent models of skin inflammation. Here, we describe a protocol for the digestion of mouse skin in a nutrient-rich solution with collagenase D, followed by separation of hematopoietic cells using a discontinuous density gradient. Cells thus obtained can be used for in vitro studies, in vivo transfer, and other downstream cellular and molecular analyses including flow cytometry. This protocol is an effective and economical alternative to expensive mechanical dissociators, specialized separation columns, and harsher trypsin- and dispase-based digestion methods, which may compromise cellular viability or density of surface proteins relevant for phenotypic characterization or cellular function. As shown here in our representative data, this protocol produced highly viable cells, contained specific immune cell subsets, and had no effect on integrity of common surface marker proteins used in flow cytometric analysis.

This protocol describes enzymatic digestion of mouse skin in nutrient-rich medium followed by gradient separation to isolate leukocytes. Cells thus derived can be used for diverse downstream applications. This is an effective, economical, and improved alternative to tissue dissociation machines and harsher trypsin and dispase-based tissue digestion protocols.

בידוד של ההסתננות Leukocytes מעור העכבר באמצעות אנזימתי לעכל והפרדת צבע

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. However, they are difficult to isolate in sufficient numbers to study them in detail, therefore, in vitro models have been developed. In vitro cultures of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells are well-established and valuable methods for immunological studies. Here, a method for culturing and identifying both DCs and macrophages from a single culture of primary mouse bone marrow cells using the cytokine granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is described. This protocol is based on the established procedure first developed by Lutz et al. in 1999 for bone marrow-derived DCs. The culture is heterogeneous, and MHCII and fluoresceinated hyaluronan (FL-HA) are used to distinguish macrophages from immature and mature DCs. These GM-CSF derived macrophages provide a convenient source of in vitro derived macrophages that closely resemble alveolar macrophages in both phenotype and function.

Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages.

דור וזיהוי GM-CSF נגזר מכתשיים דמוי מאקרופאגים דנדריטים תאי עכבר מח עצם

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

ייצור טיהור פשוט ויעיל של עכבר המיאלין Oligodendrocyte גליקופרוטאין עבור ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis מחקרים

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

Cefoperazone שטופל עכבר דגם של קליני רלוונטי<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 הזנים

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable dry eye animal model to test novel therapeutics to treat autoimmune dry eye conditions. This protocol describes a chronic autoimmune dry eye rat model. Lewis rats were immunized with an emulsion containing lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund&#39;s adjuvant. A second immunization with the same antigens in incomplete Freund&#39;s adjuvant was administered two weeks later. These immunizations were administered subcutaneously at the base of the tail. To boost the immune response at the ocular surface and lacrimal glands, lacrimal gland extract and ovalbumin were injected into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands 6 weeks after the first immunization. The rats developed dry eye features, including reduced tear production, decreased tear stability, and increased corneal damage. Immune profiling by flow cytometry showed a preponderance of CD3+ effector memory T cells in the eyeball.

This report describes a method to induce chronic experimental autoimmune dry eye in Lewis rats through immunization with an emulsion of rat lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund's adjuvant, followed by the injection of lacrimal gland extract and ovalbumin into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands six weeks later.

כרוני אוטואימונית יבש עין עכברוש דגם עם הגדלת זיכרון תאי זיכרון T ב Eyeball רקמות

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone considering direct medical and hospitalization expenses and work absenteeism2. Animal models are crucial in Influenza A virus (IAV) studies to evaluate viral pathogenesis, host-pathogen interactions, immune responses, and the efficacy of current and/or novel vaccine approaches as well as antivirals. Mice are an advantageous small animal model because their immune system is evolutionarily similar to that found in humans, they are available from commercial vendors as genetically identical subjects, there are multiple strains that can be exploited to evaluate the genetic basis of infections, and they are relatively inexpensive and easy to manipulate. To recapitulate IAV infection in humans via the airways, mice are first anesthetized prior to intranasal inoculation with infectious IAVs under proper biosafety containment. After infection, the pathogenesis of IAVs is determined by monitoring daily the morbidity (body weight loss) and mortality (survival) rate. In addition, viral pathogenesis can also be evaluated by assessing virus replication in the upper (nasal mucosa) or lower (lungs) respiratory tract of infected mice. Humoral responses upon IAV infection can be rapidly evaluated by non-invasive bleeding and secondary antibody detection assays aimed at detecting the presence of total or neutralizing antibodies. Here, we describe the common methods used to infect mice intranasally (i.n) with IAV and evaluate pathogenesis, humoral immune responses and protection efficacy.

Influenza A viruses (IAVs) are important human respiratory pathogens. To understand the pathogenicity of IAVs and to perform preclinical testing of novel vaccine approaches, animal models mimicking human physiology are required. Here, we describe techniques to evaluate IAV pathogenesis, humoral responses and vaccine efficacy using a mouse model of infection.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

דגם עכבר מבוקר Neonatal אלח דם Polymicrobial

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...