Name: orthotopic implantation of patient-derived cancer cells in mice recapitulates advanced colorectal cancer
Uploaded: 2023-02-10T13:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer at JoVE.com

Nous remercions la Fondation Cellex, le réseau CIBERONC et l’Instituto de Salud Carlos III pour leur soutien. De plus, nous remercions également la plateforme d’imagerie préclinique de l’Institut de recherche Vall d’Hebron (VHIR), où les expériences ont été réalisées.

Le consentement éclairé écrit de tous les patients a été obtenu. Le projet a été approuvé par le Comité d’éthique de la recherche de l’hôpital universitaire Vall d’Hebron, Barcelone, Espagne (approbation ID : PR(IR)79/2009 PR(AG)114/2014, PR(AG)18/2018). Les échantillons de tissus du côlon humain étaient des biopsies provenant de zones non nécrotiques d’adénocarcinomes primitifs ou de métastases hépatiques, correspondant à des patients atteints de cancer du côlon et du rectum ayant subi une r...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Cancer+Statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: a Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Puig, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+personalized+preclinical+model+to+evaluate+the+metastatic+potential+of+patient-derived+colon+cancer+initiating+cells.">A personalized preclinical model to evaluate the metastatic potential of patient-derived colon cancer initiating cells.</a> Clinical Cancer Research. 19 (24), 6787-6801 (2013).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li><li>Byrne, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+open+issues+in+cancer+precision+medicine+with+patient-derived+xenografts.">Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts.</a> Nature Reviews. Cancer. 17 (4), 254-268 (2017).</li><li>Vatandoust, S., Price, T. J., Karapetis, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+cancer:+Metastases+to+a+single+organ.">Colorectal cancer: Metastases to a single organ.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (41), 11767-11776 (2015).</li><li>Cespedes, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+microinjection+of+human+colon+cancer+cells+in+nude+mice+induces+tumor+foci+in+all+clinically+relevant+metastatic+sites.">Orthotopic microinjection of human colon cancer cells in nude mice induces tumor foci in all clinically relevant metastatic sites.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 1077-1085 (2007).</li><li>Durkee, B. Y., Weichert, J. P., Halberg, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+animal+micro-CT+colonography.">Small animal micro-CT colonography.</a> Methods. 50 (1), 36-41 (2010).</li><li>Boll, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double-contrast+micro-CT+colonoscopy+in+live+mice.">Double-contrast micro-CT colonoscopy in live mice.</a> International Journal of Colorectal Disease. 26 (6), 721-727 (2011).</li><li>O'Brien, C. A., Pollett, A., Gallinger, S., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+colon+cancer+cell+capable+of+initiating+tumour+growth+in+immunodeficient+mice.">A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice.</a> Nature. 445 (7123), 106-110 (2007).</li><li>Jensen, M. M., Jorgensen, J. T., Binderup, T., Kjaer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+volume+in+subcutaneous+mouse+xenografts+measured+by+microCT+is+more+accurate+and+reproducible+than+determined+by+18F-FDG-microPET+or+external+caliper.">Tumor volume in subcutaneous mouse xenografts measured by microCT is more accurate and reproducible than determined by 18F-FDG-microPET or external caliper.</a> BMC Medical Imaging. 8, 16 (2008).</li><li>Herpers, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+patient-derived+organoid+screenings+identify+MCLA-158+as+a+therapeutic+EGFR+x+LGR5+bispecific+antibody+with+efficacy+in+epithelial+tumors.">Functional patient-derived organoid screenings identify MCLA-158 as a therapeutic EGFR x LGR5 bispecific antibody with efficacy in epithelial tumors.</a> Nature Cancer. 3 (4), 418-436 (2022).</li><li>Chicote, I., Camara, J. A., Palmer, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+colorectal+cancer+orthotopic+patient-derived+xenograft+models+for+cancer+and+stem+cell+research.">Advanced colorectal cancer orthotopic patient-derived xenograft models for cancer and stem cell research.</a> Methods in Molecular Biology. 2171, 321-329 (2020).</li></ol>

Au cours des dernières décennies, de nombreuses nouvelles thérapies anticancéreuses ont été développées et testées chez des patients atteints de différents types de tumeurs, y compris le cancer colorectal (CCR). Bien que des résultats prometteurs dans des modèles précliniques aient été observés dans de nombreux cas, l’efficacité thérapeutique chez les patients atteints d’un CCR métastatique avancé a souvent été limitée. Par conséquent, il y a un besoin urgent de modèles précliniques qui perm...

Le cancer colorectal (CCR) est la deuxième cause de décès par cancer dans le monde1. La capacité de générer des modèles tumoraux in vitro ou in vivo dérivés de cellules tumorales individuelles de patients a fait progresser la médecine de précision en oncologie. Au cours de la dernière décennie, les organoïdes dérivés de patients (PDO) ou les xénogreffes (PDX) ont été utilisés par de nombreux groupes de recherche à travers le monde2. Les AOP sont des structures multicellulaires in vitro qui ressemblent aux caractéristiques du tissu tumoral d’origine et peuvent s’auto-organiser et s’auto-renouveler3. Ces modèles in vitro prometteurs peuvent être utilisés avec succès pour le criblage de médicaments et faciliter la recherche translationnelle. D’autre part, les modèles PDX récapitulent fidèlement le CCR original à tous les niveaux pertinents, de l’histologie aux traits moléculaires et à la réponse aux médicaments 2,4.
In vivo Les modèles PDX sont principalement cultivés sous forme de tumeurs sous-cutanées chez les souris immunodéficientes. Grâce à cette approche, les PDX sont devenus l’étalon-or de la recherche sur le cancer, en particulier pour l’étude de la sensibilité ou de la résistance aux médicaments. Cependant, les décès liés au CCR sont principalement associés à la présence de lésions métastatiques dans le foie, le poumon ou la cavité péritonéale, et aucune des deux approches (PDO ou PDX) ne peut récapituler le cadre clinique avancé. De plus, il a été démontré que le site spécifique de la croissance tumorale détermine des caractéristiques biologiques importantes qui ont un impact sur l’efficacité des médicaments et le pronostic de la maladie2. Par conséquent, il est urgent d’établir des modèles précliniques qui peuvent être utilisés pour évaluer l’efficacité des médicaments anticancéreux dans un contexte métastatique cliniquement pertinent6.
Les tomodensitomètres (μCT) peuvent fonctionner comme des tomodensitomètres cliniques réduits, fournissant une imagerie des tumeurs primaires et des métastases chez la souris à une résolution d’image à l’échelle proportionnelle à celle des images CT des patients atteints de cancer7. Pour contrer le faible contraste des tissus mous de la technique μCT, des agents de contraste iodés radiologiques peuvent être utilisés pour améliorer le contraste et évaluer la charge tumorale. À l’aide d’une approche à double contraste, l’iode par voie orale et intrapéritonéale est administré à des moments différents. Le produit de contraste administré par voie orale aide à définir les limites entre le tissu tumoral et le contenu en caecum à l’intérieur de l’intestin.  D’autre part, le produit de contraste administré par voie intrapéritonéale permet d’identifier les limites externes de la masse tumorale, qui se développe fréquemment et envahit le péritoine8.
Le manuscrit décrit un protocole pour effectuer l’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients dans la paroi du caecum de souris immunodéficientes, et la méthodologie pour surveiller la croissance tumorale intestinale à l’aide de la tomodensitométrie. Le présent manuscrit montre que le modèle récapitule le scénario clinique des tumeurs intestinales avancées et des maladies métastatiques chez les patients atteints de CCR qui ne peuvent pas être étudiés à l’aide de modèles PDO ou PDXO. Étant donné que les modèles PDX orthotopiques du CCR récapitulent le scénario clinique des patients atteints de CCR, nous concluons qu’ils sont les meilleurs à ce jour pour tester l’efficacité des médicaments antitumoraux dans les tumeurs intestinales avancées et les maladies métastatiques.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>REAGENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-Transferrin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>T1147-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Aqueous Solution 2%</td>
			<td>DH MATERIAL M&#201;DICO, S.L.</td>
			<td>1111696250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>C0130-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>G6152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM /F12&#160;</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>21331-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I&#160;&#160;</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>D4263-5VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>PEPRO TECH EC LTD.</td>
			<td>AF-100-15-500 &#181;g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF basic</td>
			<td>PEPRO TECH EC LTD.</td>
			<td>100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fungizone</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>15290026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>15750037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>H4784-250MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>I9278-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iopamiro</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane&#160;</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>15160047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>25030032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>CULTEK, S.L.U.</td>
			<td>356235/356234/354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metacam, 5 mg/mL</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-essential amino acids</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>11140035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>N4014-50MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Life Technologies S.A (Spain)</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS), sterile</td>
			<td>Labclinics S.A</td>
			<td>L0615-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>P0130-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>P5780-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC Lysis Buffer&#160;</td>
			<td>Labclinics S.A</td>
			<td>00-4333-57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES S.A.</td>
			<td>11360039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>MERCK LIFE SCIENCE S.L.U.</td>
			<td>S5261-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ESSENTIAL SUPPLIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 weeks-old NOD.CB17-Prkdcscid/NcrCrl mice</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Micro-Fine 0.5 ml U 100 needle 0.33 mm (29G) x 12.7 mm&#160;</td>
			<td>BECTON DICKINSON, S.A.U.</td>
			<td>320926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade #24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Cultek, SLU</td>
			<td>45352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps and Surgical scissors</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacryvisc, 3 mg/g, ophthalmic gel</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surfasafe</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture PROLENE 5-0&#160;</td>
			<td>JOHNSON&#38;JOHNSON S, A.</td>
			<td>8720H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT/SOFTWARE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantum FX &#181;CT Imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>http://www.perkinelmer.com/es/product/quantum-gx-instrument-120-240-cls140083</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic implantation of patient-derived cancer cells in mice recapitulates advanced colorectal cancer

Au cours de la dernière décennie, des modèles précliniques plus sophistiqués de cancer colorectal (CCR) ont été établis à l’aide de cellules cancéreuses dérivées de patients et de tumoroïdes 3D. Étant donné que les organoïdes tumoraux dérivés du patient peuvent conserver les caractéristiques de la tumeur d’origine, ces modèles précliniques fiables permettent le dépistage des médicaments anticancéreux et l’étude des mécanismes de résistance aux médicaments. Cependant, la mortalité liée au CCR chez les patients est principalement associée à la présence d’une maladie métastatique. Il est donc essentiel d’évaluer l’efficacité des thérapies anticancéreuses dans des modèles in vivo pertinents qui récapitulent véritablement les principales caractéristiques moléculaires des métastases cancéreuses humaines. Nous avons établi un modèle orthotopique basé sur l’injection de cellules cancéreuses dérivées de patients atteints de CCR directement dans la paroi du caecum de souris. Ces cellules tumorales développent des tumeurs primaires dans le caecum qui métastasent dans le foie et les poumons, ce qui est fréquemment observé chez les patients atteints d’un CCR avancé. Ce modèle murin de CCR peut être utilisé pour évaluer les réponses aux médicaments surveillées par microtomodensitométrie (μCT), une méthode d’imagerie à petite échelle cliniquement pertinente qui permet d’identifier facilement les tumeurs primaires ou les métastases chez les patients. Nous décrivons ici l’intervention chirurgicale et la méthodologie requise pour implanter des cellules cancéreuses dérivées du patient dans la paroi du caecum de souris immunodéficientes.

Des souris implantées orthotopiquement avec des cellules cancéreuses dérivées de patients ont été surveillées chaque semaine par μCT. À la fin de l’expérience, les animaux ont été euthanasiés. Les intestins, le cèca (Figure 1A,B), le foie, les poumons et toute autre lésion possible ont été recueillis, inclus dans une cassette et fixés avec du formol à 4 % pendant la nuit. Le tissu intestinal d’une souris sans tumeur dans le caecum a été utilisé comm...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer at JoVE.com

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Ce protocole décrit l’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients dans la paroi du caecum de souris immunodéficientes. Le modèle récapitule la maladie métastatique du cancer colorectal avancé et permet l’évaluation de nouveaux médicaments thérapeutiques dans un scénario cliniquement pertinent de métastases pulmonaires et hépatiques.

L’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients chez la souris récapitule le cancer colorectal avancé

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Ce protocole décrit l’implantation orthotopique de cellules cancéreuses dérivées de patients dans la paroi du caecum de souris immunodéficientes. Ce modèle récapitule la maladie métastatique du cancer colorectal avancé. Le modèle orthotopique de cancer colorectal présenté ici récapitule le scénario clinique des tumeurs intestinales avancées et de la maladie métastatique chez les patients atteints d’un cancer colorectal qui ne peut pas être étudié à l’aide d’organoïdes dérivés du patient ou de modèles de xénogreffe dérivés du patient.À partir d’une souris euthanasiée, extrayez la tumeur en la retirant soigneusement de la peau et des tissus non tumoraux environnants à l’aide de ciseaux et de pinces. Placez les tumeurs récoltées dans du PBS à quatre degrés Celsius. À l’aide d’une lame, dissocier les tumeurs dans une plaque de culture de 10 centimètres contenant un millimètre de milieu.Placez l’échantillon dissocié homogène dans un tube conique de 15 millilitres. Ensuite, ajoutez le médium jusqu’à obtenir un volume final de cinq millilitres. Ensuite, ajoutez le milieu de digestion dans le tube.Placez le tube à 45 degrés à l’intérieur d’un incubateur de culture cellulaire pendant une heure à 37 degrés Celsius. Pendant l’incubation d’une heure, mélangez la solution toutes les 15 minutes avec une pipette de cinq millilitres. Après l’incubation, ajoutez cinq millilitres de milieu et mélangez bien.Ensuite, triez la solution à l’aide d’une crépine cellulaire de 100 micromètres à l’aide d’un tube stérile de 50 millilitres. Centrifuger les cellules triées à 500g pendant 10 minutes à température ambiante. Aspirer le surnageant et remettre la pastille en suspension dans trois millilitres de solution tampon de lyse des globules rouges 1x.Incuber pendant 10 minutes à température ambiante. Ensuite, ajoutez trois millilitres de milieu et mélangez l’échantillon. Centrifuger à 500g pendant 10 minutes à température ambiante et aspirer le surnageant.Remettre la pastille en suspension avec cinq à 10 millilitres de milieu et utiliser un compteur de cellules pour calculer le nombre total de cellules. Après avoir centrifugé les cellules à 500g pendant 10 minutes à température ambiante, remettez en suspension 10 millilitres de PBS. Répétez la centrifugation et lavez avec 10 millilitres de PBS.Remettre la pastille en suspension pour obtenir une concentration de 20 fois 10 à six cellules par millilitre et bien mélanger pour obtenir une suspension cellulaire homogène. Ensuite, préparez une seringue de 29 g pour l’injection de caecum. Chargez 50 microlitres de suspension de cellules tumorales dans la seringue et assurez-vous qu’il ne reste pas de bulles d’air dans la seringue.Placez la seringue sur de la glace. Tout d’abord, stérilisez le site chirurgical en pulvérisant un détergent désinfectant et en essuyant. Ensuite, épilez l’abdomen à l’aide d’une machine d’épilation de souris.Placez la souris en décubitus dorsal et désinfectez l’abdomen en frottant avec de la chlorhexidine ou de la povidone iodée. Faites une incision longitudinale d’un centimètre sur le bas-ventre à l’aide de ciseaux chirurgicaux. Séparez soigneusement la peau sur les côtés pour exposer le péritoine.Ensuite, faites une incision de 0,5 à un centimètre dans la membrane du péritoine, suffisante pour extérioriser le caecum. À l’aide d’une gaze stérile prédécoupée, isolez soigneusement le caecum de la souris. Humidifier le caecum sous forme de solution saline tout au long de la procédure.Immobiliser le caecum en le tenant soigneusement avec une pince, puis introduisez l’aiguille superficiellement dans la paroi du caecum. Lentement, injectez la totalité du volume de 50 microlitres de suspension de cellules tumorales. Ce processus prend environ 10 secondes.Après l’injection, retirez lentement l’aiguille du caecum et appliquez une légère pression sur le site d’injection à l’aide d’un applicateur coton-tige. Nettoyez le caecum avec une solution saline pour éliminer tous les débris et remettez le caecum dans l’abdomen de l’animal. Fermez le péritoine à l’aide de sutures 5/0, puis fermez la peau de l’abdomen à l’aide de sutures 5/0.Des tumeurs orthotopiques CRC-PDX ont été observées dans l’intestin de souris implantées avec des cellules cancéreuses dérivées de patients. L’analyse histologique par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine sur le caecum a montré la présence de cellules tumorales. L’analyse histologique a également révélé des métastases pulmonaires et hépatiques chez les souris implantées.Les souris porteuses de tumeurs orthotopiques ont été traitées soit avec le véhicule, soit avec le médicament de test, soit avec l’irinotécan, un médicament de chimiothérapie. L’analyse des images de micro-tomodensitométrie a montré que, par rapport au véhicule, le médicament testé induisait une réduction du volume tumoral, qui a été encore réduite en association avec le traitement par irinotécan. Ce modèle permettra d’étudier la biologie des métastases dans les tumeurs cancéreuses colorectales.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Avancée Modèle animal de colorectal métastatique du foie: Techniques d&#39;imagerie et propriétés des métastatiques Clones

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolation des cellules tumorales circulantes dans un modèle de souris orthotopique du cancer colorectal

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Mise en place d’une Culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de Patient

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolement et caractérisation des cellules initiatrices de tumeurs des xénogreffes dérivées du sarcome

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopique l’Injection de cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de souris

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modèles de xénogreffe orthopiques dérivés du patient pour le carcinome humain de cellules urotheliales et la croissance de tumeur de cancer colorectal et la métastasie spontanée

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Établissement de modèles de xénogreffe dérivés du cancer gastrique et de lignées cellulaires primaires

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Implantation orthotopique guidée par ultrasons de l'adénocarcinome ductal pancréatique murine

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Translational Orthotopic Models of Glioblastoma Multiforme

Modèles orthotopiques translationnels de glioblastome multiforme

Genetically engineered mouse (GEM) models for human glioblastoma multiforme (GBM) are critical to understanding the development and progression of brain ...