Name: a rapid, simple, and standardized homogenization method to prepare antigen/adjuvant emulsions for inducing experimental autoimmune encephalomyelitis
Uploaded: 2022-12-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis at JoVE.c

저자는 룬드 대학교의 동물 주택 유닛인 카밀라 비외르클뢰프와 아그니에슈카 초펙의 지원과 영국 옥스퍼드 대학교 케네디 류마티스 연구소의 리처드 윌리엄스가 이 원고를 제작한 건설적인 비평과 언어적 지원에 대해 감사를 표하고 싶습니다.

모든 동물 절차는 스웨덴 동물 연구위원회의 관행에 따라 수행되었으며 스웨덴 룬드 말뫼의 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다(허가 번호: M126-16).
참고: 방법의 개략적인 흐름은 그림 1에 설명되어 있습니다.
1. 재료 준비
참고: 모든 시약을 멸균 후드에 무균 상태로 준비하고 부분 표본을 취하여 ?...

<ol>
	<li>Walton, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+prevalence+of+multiple+sclerosis+worldwide:+Insights+from+the+Atlas+of+MS,+third+edition.">Rising prevalence of multiple sclerosis worldwide: Insights from the Atlas of MS, third edition.</a> Multiple Sclerosis. 26 (14), 1816-1821 (2020).</li><li>van Langelaar, J., Rijvers, L., Smolders, J., van Luijn, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+and+T+cells+driving+multiple+sclerosis:+identity,+mechanisms+and+potential+triggers.">B and T cells driving multiple sclerosis: identity, mechanisms and potential triggers.</a> Frontiers in Immunology. 11, 760 (2020).</li><li>Sambucci, M., Gargano, F., Guerrera, G., Battistini, L., Borsellino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One,+No+One,+and+One+Hundred+Thousand:+T+Regulatory+Cells'+Multiple+Identities+in+Neuroimmunity.">One, No One, and One Hundred Thousand: T Regulatory Cells' Multiple Identities in Neuroimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2947 (2019).</li><li>Mix, E., Meyer-Rienecker, H., Hartung, H. P., Zettl, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+multiple+sclerosis--potentials+and+limitations.">Animal models of multiple sclerosis--potentials and limitations.</a> Progress in Neurobiology. 92 (3), 386-404 (2010).</li><li>Terry, R. L., Ifergan, I., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis+in+Mice.">Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1304, 145-160 (2016).</li><li>Topping, L. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+neuritis:+an+experimental+disease+of+rabbits+induced+by+the+injection+of+peripheral+nervous+tissue+and+adjuvants.">Allergic neuritis: an experimental disease of rabbits induced by the injection of peripheral nervous tissue and adjuvants.</a> The Journal of Experimental Medicine. 102 (2), 213-236 (1955).</li><li>Vladutiu, A. O., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+murine+thyroiditis+relation+to+histocompatibility+(H-2)+type.">Autoimmune murine thyroiditis relation to histocompatibility (H-2) type.</a> Science. 174 (4014), 1137-1139 (1971).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+uveoretinitis+in+the+rat+and+mouse.">Experimental autoimmune uveoretinitis in the rat and mouse.</a> Current Protocols in Immunology. , (2003).</li><li>Tuzun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+standard+preclinical+experiments+in+the+mouse+model+of+myasthenia+gravis+induced+by+acetylcholine+receptor+immunization.">Guidelines for standard preclinical experiments in the mouse model of myasthenia gravis induced by acetylcholine receptor immunization.</a> Experimental Neurology. 270, 11-17 (2015).</li><li>Brinckerhoff, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terminal+modifications+inhibit+proteolytic+degradation+of+an+immunogenic+MART-1(27-35)+peptide:+implications+for+peptide+vaccines.">Terminal modifications inhibit proteolytic degradation of an immunogenic MART-1(27-35) peptide: implications for peptide vaccines.</a> International Journal of Cancer. 83 (3), 326-334 (1999).</li><li>Kool, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alum+adjuvant+boosts+adaptive+immunity+by+inducing+uric+acid+and+activating+inflammatory+dendritic+cells.">Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 205 (4), 869-882 (2008).</li><li>Hasselmann, J. P. C., Karim, H., Khalaj, A. J., Ghosh, S., Tiwari-Woodruff, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+induction+of+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+for+the+longitudinal+study+of+pathology+and+repair.">Consistent induction of chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice for the longitudinal study of pathology and repair.</a> Journal of Neuroscience Methods. 284, 71-84 (2017).</li><li>Freund, J., Lipton, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+after+the+excision+of+the+injection+site+of+antigen-adjuvant+emulsion.">Experimental allergic encephalomyelitis after the excision of the injection site of antigen-adjuvant emulsion.</a> The Journal of Immunology. 75 (6), 454-459 (1955).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1810-1819 (2006).</li><li>Shaw, M. K., Zhao, X. Q., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+unresponsiveness+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+(EAE)+resistant+mouse+strains+by+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge.">Overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge.</a> Journal of Visualized Experiments. (62), e3778 (2012).</li><li>Arevalo-Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+clinical+trial+to+assess+the+protective+efficacy+of+a+Plasmodium+vivax+CS+synthetic+vaccine.">Randomized clinical trial to assess the protective efficacy of a Plasmodium vivax CS synthetic vaccine.</a> Nature Communications. 13 (1), 1603 (2022).</li><li>Jiang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+association+factors+for+developing+effective+peptide-based+cancer+vaccines.">Potential association factors for developing effective peptide-based cancer vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 13, 931612 (2022).</li><li>Neninger Vinageras, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+II+randomized+controlled+trial+of+an+epidermal+growth+factor+vaccine+in+advanced+non-small-cell+lung+cancer.">Phase II randomized controlled trial of an epidermal growth factor vaccine in advanced non-small-cell lung cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 26 (9), 1452-1458 (2008).</li></ol>

항원/프로인트 보조제와 같은 유중수 에멀젼은 EAE17을 유도하기 위해 반세기 이상 사용되어 왔습니다. 현재 인간의 영향과 무관한 항원 에멀젼을 제조하는 표준화된 방법은 없습니다. 주사기를 사용한 수동 혼합은 대부분의 실험실에서 표준이지만이 방법은 시간이 많이 걸리고 종종 과도한 재료 손실을 초래하며 품질은 준비하는 과학자에 따라 다릅니다.
?...

면역 학적 내성의 붕괴는 다발성 경화증 (MS)과 같은자가 면역 질환의 생성을 초래할 수 있습니다. 전 세계적으로 280만 명이 MS를 앓고 있는 것으로 추정됩니다1. MS의 정확한 원인은 아직 잘 알려져 있지 않지만자가 반응성 T 및 B 세포의 조절 장애와 Treg 기능의 결함은 질병의 발병 기전에 중요한 역할을합니다 2,3.
자가면역 질환의 동물 모델은 잠재적인 치료 양식을 조사하는 데 필수적인 도구입니다. 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델은 MS4에 관심이 있는 연구자들에 의해 거의 한 세기 동안 사용되어 왔다. 초기 실험에서이 질병의 발병률은 상대적으로 낮았습니다. 마이코박테리움 및 백일해 독소를 함유하는 완전한 프로인트 보조제(CFA)의 도입은 마우스4에서 EAE의 일관된 유도를 가능하게 하였다. 가장 중요한 것은 EAE를 유도하기 위한 균일한 유중수 에멀젼을 생성하기 위해 CFA를 중추신경계(CNS) 특이적 항원과 혼합하는 것이 필요하다는 것입니다. 현재 이용 가능한 가장 일반적인 EAE 모델은 뇌염 펩티드를 사용한 마우스의 활성 면역화에 기초한다. 마우스의 유전 적 배경은 각각 C57BL / 6J 및 SJL 마우스에서 EAE를 유도하기 위해 사용되는 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG35-55) 및 미엘린 프로테오리피드 단백질 (PLP139-151) 펩타이드와 함께 질병 감수성에 중요한 역할을합니다5. 그러나, 다른 마우스 균주 및 CNS-유래된 펩티드가 또한 사용될 수 있다.
CFA/펩타이드 에멀젼의 품질은 활성 면역화 EAE 모델6에서 질병 침투를 결정하는 중요한 요소입니다. 균질 한 유중수 에멀젼은 수성 완충액에 용해 된 뇌염 생성 펩타이드를 CFA와 혼합하여 준비해야하며, 그렇지 않으면 동물이 질병을 발병하지 않습니다. CFA/펩타이드 에멀젼의 제조에 대한 수많은 프로토콜이 발표되었습니다. 예로는 와류7, 초음파 처리8, 주사기 및 3 방향 T 커넥터9, 또는 하나의 주사기만 5의 사용이 포함됩니다. 그러나 이러한 모든 방법은 표준화하기 어렵고 종종 길고 복잡한 프로토콜과 관련이 있습니다.
위의 모든 방법과 비교하여 에멀젼 제조를 위해 여기에 설명된 간단한 방법은 사람 대 사람 차이가 없고 상대적으로 빠르다는 이점을 제공합니다. 에멀젼은 설정된 속도, 시간 및 온도로 시약을 흔드는 균질화기에 의해 생성되어 빠르고 일관된 결과를 보장합니다. EAE 모델에서 질병을 유도하는 것 외에도이 방법은 콜라겐 유도 관절염 (CIA) 및 항원 유발 관절염 (AIA)과 같은 다른자가 면역 질환 모델을 연구하는 데에도 사용할 수 있습니다6. 따라서, 이 방법은 실험적 자가면역 신경염(EAN)10, 실험적 자가면역 갑상선염(EAT)11, 자가면역 포도막염(EAU)12 및 중증 근무력증(MG)13과 같은 자가항원이 있는 유중수 에멀젼에 의존하는 다른 동물 모델에서 질병을 일관되게 유도하는 데 사용될 수 있을 것으로 예상된다. 이 방법은 또한 지연형 과민증(DTH)과 같은 일반적인 면역 반응을 일관되게 유도합니다.6, 따라서 암 및 말라리아 백신을 전달하는 데 사용할 수 있습니다(토론 참조).
따라서, 신속한(총 준비 시간 ~30분), 단순(모든 시약은 미리 제조 및 저장될 수 있음) 및 표준화된(에멀젼은 진탕 균질기를 사용하여 달성됨) 방법이 개발되어 여기에 제시된다. 이 프로토콜을 사용하여 제조된 CFA/항원 에멀젼은 자가면역 동물 모델에서 일관되게 질병을 유도합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Injection syringe</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>9166017V&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Injection syringe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z683531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7 ml empty tubes with caps</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>P000944LYSK0A.0</td>
			<td>7 mL tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile centrifuge tube&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10788561</td>
			<td>50 mL tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bordetella pertussis toxin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2980</td>
			<td>Store at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispersant, light mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emulsion kit</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>D34200.10 ea</td>
			<td>Containing a tube, cap, and plunger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incomplete Freund&#39;s Adjuvant</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;F5506</td>
			<td>Store at +4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium tuberculosis, H37RA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF3114-33-8</td>
			<td>Store at +4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastersizer 2000&#160;</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Particle size analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minilys-Personal homogenizer</td>
			<td>Bertin-Instruments</td>
			<td>P000673-MLYS0-A</td>
			<td>Shaking homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MOG 35-55 Peptide&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Innovagen</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Montanide ISA 51 VG</td>
			<td>Seppic</td>
			<td>36362Z</td>
			<td>FDA-approved oil adjuvant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pall Acrodisc Syringe Filters 0.2 &#956;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17124381</td>
			<td>Sterlie filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, Ca2+/Mg2+ free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phase-Constrast Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX40-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel Beads 3.2 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0445832</td>
			<td>Autoclave and store at RT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>648463</td>
			<td>Store at RT</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid, simple, and standardized homogenization method to prepare antigen/adjuvant emulsions for inducing experimental autoimmune encephalomyelitis

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증(MS)과 유사한 면역학적 및 임상적 특징을 공유하므로 더 나은 환자 치료를 위한 신약 표적을 식별하는 모델로 널리 사용됩니다. MS는 재발성 완화 MS (RRMS), 원발성 진행성 MS (PPMS), 이차성 진행성 MS (SPMS) 및 희귀 진행성 재발 형태의 MS (PRMS)와 같은 여러 가지 질병 과정을 특징으로합니다. 동물 모델이 이러한 대조적인 인간 질병 표현형을 모두 정확하게 모방하지는 않지만, MS의 상이한 임상 증상 중 일부를 반영하는 EAE 모델이 있다. 예를 들어, C57BL/6J 마우스에서 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG) 유도 EAE는 인간 PPMS를 모방하는 반면, SJL/J 마우스에서 미엘린 프로테오리피드 단백질(PLP) 유도 EAE는 RRMS와 유사합니다. 다른 자가항원, 예컨대 미엘린 염기성 단백질 (MBP) 및 다수의 상이한 마우스 균주도 EAE를 연구하는데 사용된다. 이들 자가항원-면역화 EAE 모델에서 질환을 유도하기 위해, 유중수 에멀젼을 제조하고 피하 주사한다. EAE 모델의 대부분은 또한 질병이 발병하기 위해 백일해 독소의 주사를 필요로합니다. 일관되고 재현 가능한 EAE 유도를 위해서는 항원/보조 에멀젼을 생성하기 위한 시약을 준비하기 위한 상세한 프로토콜이 필요합니다. 여기에 설명된 방법은 표준화된 방법을 활용하여 유중수 에멀젼을 생성합니다. 간단하고 빠르며 주사기 대신 흔들리는 균질화기를 사용하여 품질 관리 에멀젼을 준비합니다.

CFA/MOG 에멀젼 제조를 위한 빠르고 간단하며 표준화된 프로토콜이 그림 1에 나와 있습니다. 이 방법은 최근에 다른 곳에서 설명되었다6. CFA/MOG 에멀젼은 기존의 주사기 방법 또는 와류 방법과 같은 다른 방법으로도 제조할 수 있습니다. 이들 방법은 에멀젼의 품질을 평가함으로써 여기에서 비교되었다. 모든 방법은 유중수 에멀젼을 생산했습니다. 이러한 에?...

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A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

다발성 경화증의 동물 모델인 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하기 위해, 마우스를 자가항원 및 완전한 프로인트 보조제를 함유하는 유중수 에멀젼으로 면역화시킨다. 이러한 에멀젼의 제조를 위한 여러 프로토콜이 존재하지만, 에멀젼 제조를 위한 빠르고 간단하며 표준화된 균질화 프로토콜이 여기에 제시된다.

실험적 자가면역 뇌척수염 유도를 위한 항원/보조 에멀젼을 제조하기 위한 빠르고 간단하며 표준화된 균질화 방법

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely ...

실험적 자가면역 뇌척수염 또는 EAE는 다발성 경화증 환자에 대한 새롭고 개선된 치료법을 개발하기 위해 사용되는 동물 모델이다. EAE에서 질병을 유도하려면 일관된 결과를 얻기 위해 완벽한 오일 및 물 에멀젼이 필요합니다. 여기에 제시된 에멀젼 제조 방법은 인간의 영향을받지 않으므로 한 실험에서 다른 실험으로의 불일치를 제한합니다.이 방법은 EAE에 최적화되었지만 다른자가 면역 질환 모델 및 암 백신 테스트에도 사용할 수 있습니다. CFA 슬러리를 100 밀리그램의 동결건조된 M 결핵 H37 RA 및 5개, 3.2 밀리미터 스틸 비드를 7 밀리리터 튜브로 제조하였다. 최고 속도 설정에서 60 초 동안 균질 기의 튜브를 흔 듭니다.튜브에 5 밀리리터의 IFA 보조제를 넣고 최고 속도로 60 초 동안 다시 흔 듭니다. 그런 다음 슬러리를 피펫으로 새 튜브로 옮기고 비드를 남기고 사용할 때까지 섭씨 4도에서 보관하십시오. CFA/펩타이드 에멀젼을 준비하려면 보충 파일 1을 다운로드하여 각 시약에 필요한 양을 계산하십시오.그런 다음 스크류 캡핑 튜브와 사용할 시약을 얼음 위에 놓습니다. 다음으로 에멀젼 성분을 첨가하십시오. 먼저 PBS, 이어서 펩타이드, CFA 슬러리.마지막으로 IFA입니다. 튜브를 여러 번 조이고 풀어 캡으로 단단히 닫습니다. 시약을 미리 혼합하기 위해 손으로 5-10초 동안 튜브를 세게 흔듭니다.튜브를 흔들리는 균질화기에 넣고 막대로 고정합니다. 속도를 최고 설정으로 설정하고 시간을 60초로 설정합니다. 달리기가 끝나면 튜브를 얼음 위에 3 분 동안 놓고 동일한 설정으로 한두 번 더 달리기를 반복하십시오.튜브를 300G에서 1분에서 원심분리하여 갇힌 공기를 제거하고 에멀젼을 압축합니다. 튜브에서 캡을 제거하십시오. 플런저를 튜브에 삽입하고 에멀젼 상단에 도달 할 때까지 천천히 아래로 누릅니다.튜브 바닥에 있는 스냅 오프 인클로저를 비틀어 제거합니다. 다음으로 모든 주사기에서 플런저를 제거하고 주사기에 바늘을 추가합니다. 그런 다음 주사기 뒷면을 튜브 바닥의 전용 잠금 장치에 부착하고 짧게 비틀어 잠급니다.플런저를 부드럽게 밀어 튜브에서 주입 주사기로 에멀젼을 옮깁니다. 에멀젼이 주사기의 0.15 밀리리터 눈금에 도달하면 중지하십시오. 튜브에서 주사기를 분리하고 이 주사기에 공기가 들어가지 않도록 주의하면서 플런저를 조심스럽게 삽입합니다.에멀젼이 바늘에서 나올 때까지 플런저를 밀고 튜브에 존재하는 나머지 에멀젼에 대해 이 과정을 반복합니다. 물과 기름 입자의 크기를 분석하려면 현미경 슬라이드에 에멀젼의 작은 방울을 추가하고 커버 슬립으로 번진 다음 원을 그리며 세게 밀어 에멀젼을 평평하게 만듭니다. 400배 배율의 위상차 현미경으로 얼룩진 에멀젼을 검사하고 에멀젼의 단층이 있는 필드에 초점을 맞춥니다.작고 균일 한 회색 또는 흰색 입자가 보이는지 확인하십시오. 균질화 방법에 의해 생성 된 에멀젼은 물과 오일 에멀젼의 작은 방울을 나타내는 회색 또는 흰색 콩 모양의 입자를 표시했습니다. 대조적으로, 주사기 방법을 사용하여 생성 된 에멀젼 방울은 더 크고 넓었다.와류 방법에서, 에멀젼에 갇힌 기포에 상응하는 큰 회색 또는 검은 색 입자가 관찰되었다. 물 및 오일 에멀젼에 대한 레이저 굴절 입자 크기 분석기를 사용하여 측정한 시간 경과에 따른 입자 크기 분포의 변화는 6주 동안 입자 크기의 변화를 나타내지 않았습니다. 신선한 3주령 및 15주령의 에멀젼은 모두 실험 전반에 걸쳐 시험된 모든 동물에서 유사한 EAE 질환을 유도하였다.마우스는 모든 실험에서 유사한 질병 패턴을 개발하여 여기에 제시된 균질화 방법이 일관되고 재현 가능한 방식으로 EAE를 유도하는 에멀젼을 생성한다는 것을 밝혔습니다. 실험을 위해 에멀젼을 만들기 전에 보충 파일 번호 1을 다운로드하여 낭비를 최소화하는 데 필요한 각 구성 요소의 양을 계산하십시오. 여기에 제시된 방법은 전임상 연구뿐만 아니라 향후 클리닉에서 암 백신을 준비하기 위해 에멀젼 제제를 표준화하는 데 사용될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

연구

면역학 및 감염병학

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

입양 이전 및 Antigenic 챌린지에 의해 실험적 면역 Encephalomyelitis (EAE) 모성 마우스 변종에 응답하지 않는 문제를 극복

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

실험자가 면역 뇌척수염 연구 간단하고 효율적인 생산 및 마우스 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질의 정제

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

실험적인 자가면역 뇌척수염 중 중추신경계에서 림프구 침투의 흐름 세포 분석

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

자가면역뇌척수염에서 Mycobacterium paratuberculosis에 의한 면역원성 향상

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

저자 스포트라이트: 실험적 자가면역 뇌척수염 중 자가항원의 면역원성 향상에 대한 Mycobacterium paratuberculosis의 보조 활성  

실험적 자가면역 뇌척수염 동안 자가항원의 면역원성을 향상시키는 Mycobacterium paratuberculosis 의 보조 활성

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...