इस प्रोटोकॉल में एक बहुलक उपकरण से प्राप्त एंटीबायोटिक दवाओं की वास्तविक समय जीवाणुरोधी प्रभावकारिता का परीक्षण करना शामिल है, जो उनके ट्रांसलेशनल मूल्य को बढ़ाने वाले प्रभावी योगों को सटीक रूप से निर्धारित करने में सहायता कर सकता है। यह विधि दवा-एल्यूटिंग सामग्री की अनुदैर्ध्य गतिविधि की निगरानी करने और किसी दिए गए प्रत्यारोपण सूत्रीकरण के लिए जीवाणुरोधी गतिविधि की सीमा को समझने के लिए वास्तविक समय जीवाणुरोधी प्रभावकारिता परीक्षण क्षमता को सक्षम करती है। इस बहुलक सामग्री का उपयोग कुल संयुक्त प्रतिस्थापन के 90% से अधिक में असर सतह के रूप में किया जाता है।
और इसके इन एंटीबायोटिक-एल्यूटिंग फॉर्मूलेशन को पेरिप्रोस्थेटिक संयुक्त संक्रमण के लिए संभावित उपचार के रूप में विकसित किया गया है। इस विधि का उपयोग किसी भी ड्रग-एल्यूटिंग डिवाइस के साथ किया जा सकता है, जैसे कि छिद्रपूर्ण धातु, डिग्रेडेबल और नॉन-डिग्रेडेबल पॉलिमर, जैल, और संभवतः सामग्री विशिष्ट प्रोटोकॉल संशोधनों के साथ कण सामग्री। शुरू करने के लिए, ट्राइप्टिक सोया शोरबा के एक मिलीलीटर में रात भर बैक्टीरिया को कल्चर करें।
फिर बाँझ म्यूलर हिंटन ब्रोथ, या एमएचबी में रात भर उगाए गए जीवाणु निलंबन को पतला करें, और पांडुलिपि में वर्णित प्रयोग की शुरुआत से पहले ल्यूमिनेसेंस इकाइयों का उपयोग करके व्यवहार्य जीवाणु गणना को सत्यापित करें। कुंवारी और दवा से भरे यूएचएमडब्ल्यूपीई स्ट्रिप्स को तीन मिलीलीटर सिरिंज के भीतर रखें। फिर 1.5 मिलीलीटर निशान तक संलग्न सुई के माध्यम से सिरिंज में एमएचबी युक्त बैक्टीरियल सस्पेंशन खींचें।
सिरिंज सेटअप को एक हिलने वाले इनक्यूबेटर पर छह घंटे के संकेतित समय बिंदु तक रखें, और फिर हर दिन सात दिन तक। प्रत्येक संकेतित समय बिंदु के बाद, सिरिंज सेटअप को बाहर निकालें और मीडिया को दो-मिलीलीटर ट्यूब में वितरित करें। 100 माइक्रोलीटर बैक्टीरियल सस्पेंशन का उपयोग करके पांडुलिपि में वर्णित एक वास्तविक समय माइक्रोबियल व्यवहार्यता परख करें।
व्यवहार्य बैक्टीरिया की गिनती का निर्धारण करने के बाद, संबंधित मानक वक्र का उपयोग करके ल्यूमिनेसेंस इकाइयों से प्रति मिलीलीटर कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों की गणना करें। नमूनों में व्यवहार्य बैक्टीरिया की अनुपस्थिति को सत्यापित करने के लिए जो पहचान की सीमा से नीचे ल्यूमिनेसेंस मान दिखाते हैं, ट्राइप्टिक सोया एगर प्लेटों पर संस्कृति फैलाएं। प्लेटों को रात भर 35 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
फिर अगले दिन कॉलोनियों की उपस्थिति की जांच करें। शेष जीवाणु निलंबन को सेंट्रीफ्यूज करें। धीरे से खर्च किए गए मीडिया को शांत करें।
अनदेखी छर्रों के साथ ट्यूबों में 100 माइक्रोलीटर सुपरनैटेंट छोड़ दें। ताजा एमएचबी में पेलेट बैक्टीरिया को फिर से निलंबित करें। पूर्ण पुन: निलंबन सुनिश्चित करने के लिए 10 सेकंड के लिए भंवर।
फिर संलग्न सुई के माध्यम से उसी सिरिंज सेटअप में बैक्टीरियल सस्पेंशन खींचें। सातवें दिन अध्ययन पूरा होने के बाद सिरिंज सेटअप से कुंवारी और ड्रग-लोडेड यूएचएमडब्ल्यूपीई सतहों को पुनः प्राप्त करके शुरू करें। फिर सतहों को 1.5-मिलीलीटर ट्यूबों में स्थानांतरित करें और एक मिलीलीटर बाँझ पीबीएस के साथ तीन बार कुल्ला करें।
बाँझ पीबीएस के एक मिलीलीटर में सतह को 40 मिनट के लिए सोनिकेट करें। सोनिकेटेड नमूने के 100 माइक्रोलीटर पर एक ल्यूमिनेस परख करके अनुयायी बैक्टीरिया व्यवहार्यता निर्धारित करें। वैनकोमाइसिन और जेंटामाइसिन-लोडेड यूएचएमडब्ल्यूपीई से दवा रिलीज ने छह घंटे में एक विस्फोट रिलीज का प्रदर्शन किया, जिसके बाद सात दिनों तक न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता से अधिक एकाग्रता के साथ एक स्थिर रिलीज दर हुई।
वैनकोमाइसिन और जेंटामाइसिन के साथ यूएचएमडब्ल्यूपीई ने छह घंटे से शुरू होने वाले अतिसंवेदनशील एटीसीसी 12600 के लिए तीन-लॉग से अधिक कमी का प्रदर्शन किया और तीसरे दिन पूर्ण उन्मूलन देखा गया। जेंटामाइसिन-अतिसंवेदनशील और वैनकोमाइसिन-मध्यवर्ती स्ट्रेन, एल 1163 के लिए, दोनों ड्रग-एल्यूटिंग सामग्री ने छह घंटे में तीन-लॉग से अधिक की कमी का कारण बना और पहले दिन कोई कॉलोनी वृद्धि नहीं देखी गई। यूएचएमडब्ल्यूपीई से जेंटामाइसिन क्षालन ने जेंटामाइसिन-प्रतिरोधी और वैनकोमाइसिन-मध्यवर्ती तनाव, एल 1101 की जीवाणु व्यवहार्यता को प्रभावित नहीं किया।
इसके विपरीत, यूएचएमडब्ल्यूपीई से वैनकोमाइसिन क्षालन ने छह घंटे में बैक्टीरिया की व्यवहार्यता को काफी कम कर दिया। जेंटामाइसिन और वैनकोमाइसिन-एल्यूटिंग यूएचएमडब्ल्यूपीई दोनों की सतहों ने सातवें दिन के बाद अतिसंवेदनशील और मध्यवर्ती प्रतिरोध उपभेदों के संपर्क में आने पर कोई व्यवहार्य अनुयायी बैक्टीरिया नहीं दिखाया। हालांकि, जेंटामाइसिन-एल्यूटिंग यूएचएमडब्ल्यूपीई पर कुछ व्यवहार्य बैक्टीरिया मौजूद थे, जो जेंटामाइसिन-प्रतिरोधी एल 1101 के संपर्क में थे।
नियंत्रण कुंवारी पॉलीथीन की सतह ने प्रत्येक तनाव के संपर्क में आने पर व्यवहार्य अनुयायी बैक्टीरिया दिखाए। एंटीबायोटिक दवाओं के निरंतर जोखिम का अनुकरण करने के लिए माइक्रोबियल आबादी के कैरीओवर की सुविधा के लिए प्रत्येक समय बिंदु पर खर्च किए गए मीडिया का पृथक्करण महत्वपूर्ण है। स्थैतिक तरीकों पर सुधार करते हुए, इस अर्ध-स्थैतिक सिमुलेशन विधि को संक्रमण के खिलाफ नई दवा योगों की गतिविधि कैनेटीक्स को समझने के लिए एक निरंतर सेटअप के साथ पालन किया जा सकता है।
प्रोटोकॉल ने हमें तनाव-निर्भर जीवाणु गतिशीलता पर दवा क्षालन के प्रभाव को पकड़ने में सक्षम बनाया है। यह निरंतर एंटीबायोटिक वितरण उपकरणों की प्रभावकारिता मूल्यांकन के लिए उपकरणों को बढ़ाता है।