Name: application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity
Uploaded: 2023-03-31T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (R35GM133581 إلى JC) ومركز السرطان في منحة الدراسات العليا في إلينوي (الممنوحة ل SG). تشكر JC مؤسسة Camille and Henry Dreyfus على الدعم. يشكر المؤلفون الدكتور توماس إي بيرود على مساهمته الأولية في إعداد مخزون AlDeSense و AlDeSense AM. بيشاردو بيغيرو والسيد جوزيف أ. فورزانو على مساعدتهما في إعداد مختلف السلائف الاصطناعية. نشكر البروفيسور إريك نيلسون (قسم علم وظائف الأعضاء الجزيئي والتكاملي ، UIUC) لخلايا Caov-3 و IGROV-1 و PEO4. نشكر البروفيسور بول هيرجنروثر (قسم الكيمياء ، UIUC) على خلايا BG-1. نشكر المرافق الأساسية في معهد Carl R. Woese لعلم الأحياء الجينومي للوصول إلى مجهر Zeiss LSM 700 Confocal والبرامج المقابلة. نشكر مرفق قياس التدفق الخلوي للوصول إلى BD LSR II CMtO Analyzer. نشكر الدكتورة ساندرا ماكماسترز ومرفق وسائط الخلية على المساعدة في إعداد وسائط زراعة الخلايا.

1. قياس إجمالي نشاط ALDH1A1 في تجانس خلايا سرطان المبيض عن طريق القياس الفلوري
<ol><li>ذوبان 1 × 106 خلايا في دورق زراعة الخلايا T25 في 5 مل من وسائط زراعة الخلايا التالية:<ol><li>IGROV-1 و PEO4: معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 متوسط مع مصل بقري جنيني 10٪ (FBS) و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين (P / S).</li>
...

<ol>
	<li>Bonnet, D., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+acute+myeloid+leukaemia+is+organised+as+a+heirarchy+that+originates+from+a+primitive+haematopoetic+cell.">Human acute myeloid leukaemia is organised as a heirarchy that originates from a primitive haematopoetic cell.</a> Nature Medicine. 3 (7), 730-737 (1997).</li><li>Begicevic, R. R., Falasca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ABC+transporters+in+cancer+stem+cells:+Beyond+chemoresistance.">ABC transporters in cancer stem cells: Beyond chemoresistance.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (11), 2362 (2017).</li><li>Cojoc, M., M&#228;bert, K., Muders, M. H., Dubrovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+cancer+stem+cells+in+therapy+resistance:+Cellular+and+molecular+mechanisms.">A role for cancer stem cells in therapy resistance: Cellular and molecular mechanisms.</a> Seminars in Cancer Biology. 31, 16-27 (2015).</li><li>Islam, F., Gopalan, V., Smith, R. A., Lam, A. K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+potential+of+cancer+stem+cells:+A+review+of+the+detection+of+cancer+stem+cells+and+their+roles+in+cancer+recurrence+and+cancer+treatment.">Translational potential of cancer stem cells: A review of the detection of cancer stem cells and their roles in cancer recurrence and cancer treatment.</a> Experimental Cell Research. 335 (1), 135-147 (2015).</li><li>Li, F., Tiede, B., Massagu&#233;, J., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+tumorigenesis:+Cancer+stem+cells+in+metastasis.">Beyond tumorigenesis: Cancer stem cells in metastasis.</a> Cell Research. 17 (1), 3-14 (2007).</li><li>Kim, W. T., Ryu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+surface+markers+on+normal+stem+cells.">Cancer stem cell surface markers on normal stem cells.</a> BMB Reports. 50 (6), 285-298 (2017).</li><li>Pors, K., Moreb, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenases+in+cancer:+An+opportunity+for+biomarker+and+drug+development.">Aldehyde dehydrogenases in cancer: An opportunity for biomarker and drug development.</a> Drug Discovery Today. 19 (12), 1953-1963 (2014).</li><li>Jackson, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+aldehyde+dehydrogenase+gene+(ALDH)+superfamily.">Update on the aldehyde dehydrogenase gene (ALDH) superfamily.</a> Human Genomics. 5 (4), 283-303 (2011).</li><li>Vasiliou, V., Pappa, A., Petersen, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+aldehyde+dehydrogenases+in+endogenous+and+xenobiotic+metabolism.">Role of aldehyde dehydrogenases in endogenous and xenobiotic metabolism.</a> Chemico-Biological Interactions. 129 (1-2), 1-19 (2000).</li><li>Tomita, H., Tanaka, K., Tanaka, T., Hara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+stem+cells+and+cancer.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 in stem cells and cancer.</a> Oncotarget. 7 (10), 11018-11032 (2016).</li><li>Anorma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+of+cancer+stem+cell+plasticity+using+an+isoform-selective+fluorescent+probe+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1.">Surveillance of cancer stem cell plasticity using an isoform-selective fluorescent probe for aldehyde dehydrogenase 1A1.</a> ACS Central Science. 4 (8), 1045-1055 (2018).</li><li>Bearrood, T. E., Aguirre-Figueroa, G., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+red+fluorescent+sensor+for+ALDH1A1+displaying+enhanced+cellular+uptake+and+reactivity.">Rational design of a red fluorescent sensor for ALDH1A1 displaying enhanced cellular uptake and reactivity.</a> Bioconjugate Chemistry. 31 (2), 224-228 (2020).</li><li>Chan, J., Dodani, S. C., Chang, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction-based+small-molecule+fluorescent+probes+for+chemoselective+bioimaging.">Reaction-based small-molecule fluorescent probes for chemoselective bioimaging.</a> Nature Chemistry. 4 (12), 973-984 (2012).</li><li>East, A. K., Lucero, M. Y., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+directions+of+activity-based+sensing+for+in+vivo+NIR+imaging.">New directions of activity-based sensing for in vivo NIR imaging.</a> Chemical Science. 12 (10), 3393-3405 (2021).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-based+NIR+bioluminescence+probe+enables+discovery+of+diet-induced+modulation+of+the+tumor+microenvironment+via+nitric+oxide.">Activity-based NIR bioluminescence probe enables discovery of diet-induced modulation of the tumor microenvironment via nitric oxide.</a> ACS Central Science. 8 (4), 461-472 (2022).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+activity-based+sensing+approach+for+the+detection+of+cyclooxygenase-2+in+Live+Cells.">An activity-based sensing approach for the detection of cyclooxygenase-2 in Live Cells.</a> Angewandte Chemie. 59 (8), 3307-3314 (2020).</li><li>Ueno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+principles+for+modulating+fluorescence+properties+of+fluorescein.">Rational principles for modulating fluorescence properties of fluorescein.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (43), 14079-14085 (2004).</li><li>Tanaka, F., Mase, N., Barbas 3rd, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+use+of+fluorogenic+aldehydes+for+monitoring+the+progress+of+aldehyde+transformations.">Design and use of fluorogenic aldehydes for monitoring the progress of aldehyde transformations.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (12), 3692-3693 (2004).</li><li>Thurber, G. M., Schmidt, M. M., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tumor+penetration:+transport+opposed+by+systemic+and+antigen-mediated+clearance.">Antibody tumor penetration: transport opposed by systemic and antigen-mediated clearance.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (12), 1421-1434 (2008).</li><li>Marcato, P., Dean, C. A., Giacomantonio, C. A., Lee, P. W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+its+role+as+a+cancer+stem+cell+marker+comes+down+to+the+specific+isoform.">Aldehyde dehydrogenase its role as a cancer stem cell marker comes down to the specific isoform.</a> Cell Cycle. 10 (9), 1378-1384 (2011).</li><li>Meng, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1+maintains+ovarian+cancer+stem+cell-like+properties+by+altered+regulation+of+cell+cycle+checkpoint+and+DNA+repair+network+signaling.">ALDH1A1 maintains ovarian cancer stem cell-like properties by altered regulation of cell cycle checkpoint and DNA repair network signaling.</a> PLoS One. 9 (9), e107142 (2014).</li><li>Kaipio, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1-related+stemness+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+is+a+negative+prognostic+indicator+but+potentially+targetable+by+EGFR/mTOR-PI3K/aurora+kinase+inhibitors.">ALDH1A1-related stemness in high-grade serous ovarian cancer is a negative prognostic indicator but potentially targetable by EGFR/mTOR-PI3K/aurora kinase inhibitors.</a> The Journal of Pathology. 250 (2), 159-169 (2020).</li><li>Deng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+expression+levels+and+patterns+of+stem+cell+marker,+aldehyde+dehydrogenase+isoform+1+(ALDH1),+in+human+epithelial+cancers.">Distinct expression levels and patterns of stem cell marker, aldehyde dehydrogenase isoform 1 (ALDH1), in human epithelial cancers.</a> PLoS One. 5 (4), e10277 (2010).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1+expression+correlates+with+favorable+prognosis+in+ovarian+cancers.">ALDH1 expression correlates with favorable prognosis in ovarian cancers.</a> Modern Pathology. 22 (6), 817-823 (2009).</li><li>Gardner, S. H., Reinhardt, C. J., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+activity-based+sensing+probes+for+isoform-selective+imaging+of+enzymatic+activity.">Advances in activity-based sensing probes for isoform-selective imaging of enzymatic activity.</a> Angewandte Chemie. 60 (10), 5000-5009 (2021).</li><li>Reid, B. M., Permuth, J. B., Sellers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+ovarian+cancer:+a+review.">Epidemiology of ovarian cancer: a review.</a> Cancer Biology and Medicine. 14 (1), 9-32 (2017).</li><li>Tulake, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+stem+cell+markers+ALDH1A1+and+OCT4+as+potential+biomarkers+for+the+early+detection+of+cervical+carcinoma.">Upregulation of stem cell markers ALDH1A1 and OCT4 as potential biomarkers for the early detection of cervical carcinoma.</a> Oncology Letters. 16 (5), 5525-5534 (2018).</li><li>Nwani, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+ALDH1A1+inhibitor+targets+cells+with+stem+cell+characteristics+in+ovarian+cancer.">A novel ALDH1A1 inhibitor targets cells with stem cell characteristics in ovarian cancer.</a> Cancers. 11 (4), 502 (2019).</li><li>Roy, M., Connor, J., Al-Niaimi, A., Rose, S. L., Mahajan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+(ALDH1A1)+expression+by+immunohistochemistry+is+associated+with+chemo-refractoriness+in+patients+with+high-grade+ovarian+serous+carcinoma.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 (ALDH1A1) expression by immunohistochemistry is associated with chemo-refractoriness in patients with high-grade ovarian serous carcinoma.</a> Human Pathology. 73, 1-6 (2018).</li><li>Landen Jr, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+aldehyde+dehydrogenase+cancer+stem+cells+in+ovarian+cancer.">Targeting aldehyde dehydrogenase cancer stem cells in ovarian cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 9 (12), 3186-3199 (2010).</li><li>Condello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin-regulated+ALDH1A1+is+a+target+in+ovarian+cancer+spheroids.">&#946;-catenin-regulated ALDH1A1 is a target in ovarian cancer spheroids.</a> Oncogene. 34 (18), 2297-2308 (2015).</li><li>Storms, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+primitive+human+hematopoietic+progenitors+on+the+basis+of+aldehyde+dehydrogenase+activity.">Isolation of primitive human hematopoietic progenitors on the basis of aldehyde dehydrogenase activity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 96 (16), 9118-9123 (1999).</li><li>Duellman, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioluminescence+assay+for+aldehyde+dehydrogenase+activity.">A bioluminescence assay for aldehyde dehydrogenase activity.</a> Analytical Biochemistry. 434 (2), 226-232 (2013).</li><li>Minn, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red-shifted+fluorescent+substrate+for+aldehyde+dehydrogenase.">A red-shifted fluorescent substrate for aldehyde dehydrogenase.</a> Nature Communications. 5, 3662 (2014).</li><li>Doll&#233;, L., Boulter, L., Leclercq, I. A., van Grunsven, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+of+ALDH+substrates+and+their+potential+to+study+maturational+lineage+biology+in+stem+and+progenitor+cells.">Next generation of ALDH substrates and their potential to study maturational lineage biology in stem and progenitor cells.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 308 (7), 573-578 (2015).</li><li>Yagishita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+highly+selective+fluorescent+probe+enabling+flow-cytometric+isolation+of+ALDH3A1-positive+viable+cells.">Development of highly selective fluorescent probe enabling flow-cytometric isolation of ALDH3A1-positive viable cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 28 (2), 302-306 (2017).</li><li>Maity, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiophene+bridged+aldehydes+(TBAs)+image+ALDH+activity+in+cells:+Via+modulation+of+intramolecular+charge+transfer.">Thiophene bridged aldehydes (TBAs) image ALDH activity in cells: Via modulation of intramolecular charge transfer.</a> Chemical Science. 8 (10), 7143-7151 (2017).</li><li>Koenders, S. T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+retinal-based+probe+for+the+profiling+of+retinaldehyde+dehydrogenases+in+cancer+cells.">Development of a retinal-based probe for the profiling of retinaldehyde dehydrogenases in cancer cells.</a> ACS Central Science. 5 (12), 1965-1974 (2019).</li><li>Oe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep-red/near-infrared+turn-on+fluorescence+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+cancer+stem+cells.">Deep-red/near-infrared turn-on fluorescence probes for aldehyde dehydrogenase 1A1 in cancer stem cells.</a> ACS Sensors. 6 (9), 3320-3329 (2021).</li><li>Yagishita, A., Ueno, T., Tsuchihara, K., Urano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+BODIPY-based+blue+fluorescent+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1-expressing+cells.">Amino BODIPY-based blue fluorescent probes for aldehyde dehydrogenase 1-expressing cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 32 (2), 234-238 (2021).</li><li>Okamoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+breast+cancer+stem+cells+using+a+newly+developed+long-acting+fluorescence+probe,+C5S-A,+targeting+ALDH1A1.">Identification of breast cancer stem cells using a newly developed long-acting fluorescence probe, C5S-A, targeting ALDH1A1.</a> Anticancer Research. 42 (3), 1199-1205 (2022).</li></ol>

الانتقائية الشاملة هي قيد رئيسي للعديد من تحقيقات ALDH. ومع ذلك ، فقد تم الإبلاغ مؤخرا عن العديد من الأمثلة الانتقائية للأشكالالمتماثلة 32،33،34،35،36،37،38،39،40</su...

الخلايا الجذعية السرطانية (CSCs) هي مجموعة فرعية من الخلايا السرطانية التي تظهر خصائص تشبه الخلايا الجذعية1. على غرار نظيراتها غير السرطانية ، تمتلك CSCs قدرة غير عادية على التجديد الذاتي والتكاثر. جنبا إلى جنب مع الآليات المدمجة الأخرى ، مثل تنظيم ناقلات الكاسيت المرتبطة ب ATP ، غالبا ما يتم تجنيب الخلايا الجذعية السرطانية من جهود إزالة الانتفاخ الجراحية الأولية ، بالإضافة إلى العلاج المساعداللاحق 2. نظرا لدورها الحاسم في مقاومة العلاج3 ، والانتكاس4 ، وورم خبيث5 ، أصبحت الخلايا الجذعية السرطانية أولوية في أبحاث السرطان. على الرغم من وجود مجموعة متنوعة من مستضدات سطح الخلية (على سبيل المثال ، CD133) التي يمكن استخدامها لتحديد CSCs6 ، إلا أن الاستفادة من النشاط الأنزيمي لنازعة هيدروجين الألدهيد (ALDHs) الموجودة في السيتوبلازم قد ظهرت كبديل جذاب7. ALDHs هي عائلة فائقة من 19 إنزيما مسؤولا عن تحفيز أكسدة الألدهيدات الداخلية والغريبة المنشأ التفاعلية مع منتجات حمض الكربوكسيل المقابلة8.
بشكل عام ، تعد إزالة سموم الألدهيد أمرا بالغ الأهمية في حماية الخلايا من أحداث التشابك غير المرغوب فيها والإجهاد التأكسدي الذي قد يضر بسلامة الخلايا الجذعية9. علاوة على ذلك ، يتحكم الشكل الإيزوفورم 1A1 في استقلاب حمض الريتينويك ، والذي بدوره يؤثر على الجذع عبر إشارات ريتينالديهيد10. تم مؤخرا تطوير AlDeSense 11,12 ، وهو مسبار استشعار قائم على نشاط جزيء صغير (ABS) للكشف بشكل انتقائي عن نشاط ALDH1A1. تحقق تصميمات ABS الكشف عن التحليل من خلال تغيير كيميائي بدلا من حدث ملزم ، مما يسمح بانتقائية عالية وتقليل الاستجابات خارج الهدف13،14،15،16. يعتمد مبدأ تصميم المسبار الفلوري الانتقائي للشكل المتماثل على آلية تبريد نقل الإلكترون المستحث ضوئيا (d-PeT)17 ، والتي تنشأ من المجموعة الوظيفية للألدهيد ، والتي تعمل على قمع التوقيع الفلوري للمسبار18. عند التحويل بوساطة ALDH1A1 إلى الحمض الكربوكسيلي ، يتم فتح الانحلال الإشعاعي لإنتاج منتج شديد الفلورسنت. نظرا لأن التبريد d-PeT ليس فعالا بنسبة 100٪ أبدا ، فقد تم النظر في التألق المتبقي الذي قد يؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة محتملة عند إنشاء هذا الفحص من خلال تطوير Ctrl-AlDeSense ، وهو كاشف غير مستجيب له خصائص فيزيائية ضوئية مطابقة (على سبيل المثال ، العائد الكمومي) ونمط تلطيخ سيتوبلازمي متطابق في الخلايا. عند استخدامه جنبا إلى جنب ، يمكن لهذا الاقتران الفريد أن يميز بشكل موثوق الخلايا ذات النشاط العالي ALDH1A1 عن تلك التي تظهر مستويات منخفضة عن طريق القياس الفلوري والتصوير الجزيئي وقياس التدفق الخلوي. ترتبط العديد من المزايا الرئيسية باستخدام الأصباغ القابلة للتنشيط الانتقائية للأشكال على الطرق الكيميائية المناعية التقليدية. على سبيل المثال ، يفترض أن تكون الخلايا الجذعية السرطانية مدفونة بعمق داخل الورم ، وبالتالي يمكن الوصول إليها بشكل أكبر لجزيء صغير بالنسبة للأجسام المضادة الكبيرة19. بالإضافة إلى ذلك ، لا يقوم منتج الفلورسنت المقلوب بتعديل أي مكون خلوي تساهميا ، مما يعني أنه يمكن إزالته بسهولة عبر دورات الغسيل لترك CSC في حالة غير معدلة. أخيرا ، تحدد استجابة التشغيل فقط الخلايا والوظائف القابلة للحياة ، مثل الكثير من مقايسة MTT ، نظرا لاعتمادها على العامل المساعد NAD +.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64713/64713fig01.jpg"> الشكل 1: تخطيطي يوضح تشغيل الفلورسنت ل AlDeSense. يتم تنشيط الصبغة الانتقائية للشكل الثابت بواسطة ALDH1A1 ويمكن استخدامها لتحديد نشاط ALDH1A1 المرتفع في خلايا سرطان المبيض عن طريق القياس الفلوري والتصوير الجزيئي وقياس التدفق الخلوي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64713/64713fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
في العمل السابق ، نجح فحص المسبار الفلوري الانتقائي للشكل المتماثل في تقسيم خلايا ALDH العالية (ALDH +) إلى طبقات من خلايا ALDH المنخفضة (ALDH-) في خلايا سرطان الدم المزمن البشرية K562 ، وخلايا سرطان الثدي البشرية MDA-MB-231 ، وخلايا سرطان الجلد B16F0 الفئران. هذا مهم لأنه بالنسبة للعديد من أنواع السرطان ، يشير التعبير البروتيني المرتفع ALDH1A1 إلى أسوأ المراجعالسريرية 20. هذا يفترض أن المستويات المرتفعة من ALDH1A1 تدل على الخلايا الجذعية السرطانية التي يمكن أن تتهرب من العلاج ، وتطور المقاومة ، وتنتشر في جميع أنحاء الجسم. ومع ذلك ، في حالة سرطان المبيض ، هناك دراسات تشير إلى نتيجة معاكسة (يرتبط تعبير ALDH1A1 المرتفع بتحسين بقاء المريض)21،22،23،24. في حين أن هذا قد يبدو متناقضا للوهلة الأولى ، إلا أن التعبير لا يرتبط بالضرورة بنشاط الإنزيم ، والذي قد يتأثر بالتغيرات في البيئة الدقيقة للورم (على سبيل المثال ، تدفق الأس الهيدروجيني ، وتدرجات الأكسجين) ، وتوافر العامل المساعد NAD + أو ركائز الألدهيد ، ومستويات الأحماض الكربوكسيلية (تثبيط المنتج) ، والتعديلات اللاحقة للترجمة التي يمكن أن تغير نشاط الإنزيم25 . بالإضافة إلى ذلك ، ينقسم سرطان المبيض إلى خمسة أنواع نسيجية رئيسية (مصلية عالية الدرجة ، مصلية منخفضة الدرجة ، بطانة الرحم ، خلية صافية ، ومخاطية) ، والتي نفترض أنها ستتميز بمستويات متغيرة من نشاط ALDH1A126. بهدف التحقيق في نشاط ALDH1A1 في أورام المبيض ، تم استخدام مقايسة مسبار فلوروجيني انتقائي للشكل لتحديد مجموعات ALDH1A1 + في لوحة من خمسة خطوط خلايا سرطان المبيض تنتمي إلى الأنواع النسيجية المختلفة المذكورة أعلاه. تشمل خطوط الخلايا التي تم اختبارها في هذه الدراسة خلايا BG-1 و Caov-3 و IGROV-1 و OVCAR-3 و PEO4 ، والتي تغطي الخلايا الصافية والأنماط النسيجية المصلية. هنا ، تم تسليط الضوء على تنوع وقابلية تعميم المسبار لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية للباحثين الذين يسعون إلى إجراء دراسات مماثلة في خطوط الخلايا السرطانية الخالدة الأخرى وكذلك عينات المرضى. سيلقي استخدام AlDeSense الضوء على المسارات الكيميائية الحيوية المشاركة في صيانة CSC في البيئات الدقيقة المعقدة للأنسجة ويحتمل أن يكون بمثابة أداة سريرية لتحديد التشخيص وقياس عدوانية السرطان.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#160;0.25% Trypsin, 0.1% EDTA in HBSS w/o Calcium, Magnesium and Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>&#160;&#160;25-050-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Phosphate Buffer Saline</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CMX12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuSpin Micro 17R</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-100-675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BG-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Paul Hergenrother Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioLite 25cm2 Flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>130189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet 1300 series A2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caov-3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5180R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22627040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contrl-AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCS Express 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by UIUC CMtO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FL microscope</td>
			<td>EVOS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorometer</td>
			<td>Photon Technology International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma Series II Water-Jacketed CO2&#160;Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGROV-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 42R Incubated Shaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 700</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSR II</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek Chambered #1.0 Borosicilate Coverglass System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>155383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVCAR-3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Lysine</td>
			<td>Cultrex</td>
			<td>3438-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 20% FBS, 1% P/S, 0.01 mg/mL Insulin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity

غالبا ما يعزى الانتكاس بعد علاج السرطان إلى استمرار مجموعة فرعية من الخلايا السرطانية المعروفة باسم الخلايا الجذعية السرطانية (CSCs) ، والتي تتميز بقدرتها الرائعة على بدء الورم وتجديده ذاتيا. اعتمادا على أصل الورم (على سبيل المثال ، المبايض) ، يمكن أن يختلف ملف تعريف العلامات الحيوية لسطح CSC بشكل كبير ، مما يجعل تحديد هذه الخلايا عن طريق تلطيخ المواد الكيميائية المناعية مسعى صعبا. على العكس من ذلك ، برز ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 (ALDH1A1) كعلامة ممتازة لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية ، نظرا لملف تعريف التعبير المحفوظ في جميع الخلايا السلفية تقريبا بما في ذلك الخلايا الجذعية السرطانية. ينتمي الشكل المتماثل ALDH1A1 إلى عائلة فائقة من 19 إنزيما مسؤولة عن أكسدة مختلف الألدهيدات الداخلية و xenobiotic إلى منتجات حمض الكربوكسيل المقابلة. قام Chan et al. مؤخرا بتطوير AlDeSense ، وهو مسبار "تشغيل" انتقائي للشكل للكشف عن نشاط ALDH1A1 ، بالإضافة إلى كاشف تحكم مطابق غير تفاعلي (Ctrl-AlDeSense) لحساب التلوين خارج الهدف. وقد ثبت بالفعل أن هذه الأداة الانتقائية للشكل الأيزوفورم هي أداة كيميائية متعددة الاستخدامات من خلال الكشف عن نشاط ALDH1A1 في خلايا ابيضاض الدم النقوي K562 ، والغلاف الثديي ، والطعوم الخارجية CSC المشتقة من سرطان الجلد. في هذه المقالة ، تم عرض فائدة المسبار من خلال القياس الفلوري الإضافي ، والفحص المجهري متحد البؤر ، وتجارب قياس التدفق الخلوي حيث تم تحديد نشاط ALDH1A1 النسبي في لوحة من خمسة خطوط خلايا سرطان المبيض.

إجمالي نشاط ALDH1A1 لمتجانسات خلايا سرطان المبيض متوسط عمليات التشغيل للطي لكل خط خلية تم الحصول عليه من هذا الفحص هو: BG-1 (1.12 ± 0.01) ؛ IGROV-1 (1.30 ± 0.03) ؛ Caov-3 (1.72 ± 0.06) ؛ PEO4 (2.51 ± 0.29) ؛ و OVCAR-3 (10.25 ± 1.46) (الشكل 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_uplo...

Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity

تعد طرق قياس نشاط ALDH1A1 في الخلايا الحية أمرا بالغ الأهمية في أبحاث السرطان نظرا لوضعها كعلامة حيوية للجذع. في هذه الدراسة ، استخدمنا مسبارا فلوروجينيا انتقائيا للشكل لتحديد المستويات النسبية لنشاط ALDH1A1 في لوحة من خمسة خطوط خلايا سرطان المبيض.

تطبيق AlDeSense لتقسيم خلايا سرطان المبيض إلى طبقات على أساس نشاط ألدهيد ديهيدروجينيز 1A1

Relapse after cancer treatment is often attributed to the persistence of a subpopulation of tumor cells known as cancer stem cells (CSCs), which are ...

يسمح بروتوكولنا للمستخدمين بقياس نشاط ALDH1A1 ، وهو مؤشر حيوي للخلايا الجذعية باستخدام طرائق متنوعة تتراوح من قياس التدفق الخلوي إلى التصوير الجزيئي للخلايا الحية. تتمثل المزايا الرئيسية لهذا النهج في أن تنشيط المسبار ينطوي على استجابة تحول تتميز بنسبة إشارة عالية إلى الخلفية ، بالإضافة إلى الكشف الانتقائي عن الشكل المتماثل ALDH1A1. سيوضح هذا الإجراء طلاب الدراسات العليا مايكل لي وسارة جاردنر ورودريغو تابيا هيرنانديز من مختبري.للبدء ، قم باستنشاق وسائط النمو من الخلايا المستزرعة ذات الأهمية في شريحة غرفة البئر الثمانية. أضف 500 ميكرولتر لكل بئر من الوسائط الخالية من المصل المكملة بمسبار فلوروجيني انتقائي ثنائي الشكل أو مسبار تحكم غير تفاعلي. احتضان الشريحة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.بعد الحضانة ، انتقل إلى التصوير المجهري متحد البؤر على الفور. حدد موقع الخلايا عند تكبير 10 ×. قناة FITC وقنوات الضوء المرسلة مطلوبة لهذه التجربة.حدد موقع الخلايا وركزها باستخدام قناة الضوء المرسلة للتركيز على نفس المستوى Z طوال التجربة لإزالة التحيز. اضبط طاقة الليزر وكسب FITC على الإعداد المناسب حيث تكون الإشارة من عينات التحكم AlDeSense AM قابلة للاكتشاف إلى الحد الأدنى ، مع الاستمرار في رؤية الإشارة في عينات AlDeSense AM. اضبط كل معلمة عن طريق تحريك الشريط المقابل.قد يلزم ضبط الإعدادات عدة مرات لتحديد المعلمات الصحيحة. بمجرد التحسين ، أكمل بقية التجربة داخل خط الخلية هذا باستخدام معلمات متطابقة. التقط ثلاث صور لكل بئر ليصبح المجموع ثلاثة آبار لكل حالة معالجة واحفظ الصور.تأكد من التركيز باستخدام قناة الضوء المرسلة فقط أثناء التبديل بين الطائرات والآبار لتجنب التحيز. بعد ذلك ، باستخدام برنامج معالجة الصور ، قم بتقسيم ملف CZI إلى قنوات مختلفة وحساب العدد الإجمالي للخلايا وخلايا الفلورسنت. لتحديد النسبة المئوية للخلايا الموجبة لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1 ، قسم عدد خلايا الفلورسنت على إجمالي عدد الخلايا في كل صورة.عد بنفس الطريقة لكل صورة لتجنب المتغيرات المربكة. أخرج قارورة زراعة الخلايا T25 التي تحتوي على الخلايا المحفوظة في الحاضنة. أضف التربسين لانفصال الخلايا ، وعد الخلايا باستخدام عداد خلية آلي.ثم حبيبات الخلايا في أنبوب طرد مركزي 15 ملليلتر عن طريق الطرد المركزي في 180G لمدة خمس دقائق عند 25 درجة مئوية. أعد تعليق الخلايا في ملليلتر واحد من مسبار ميكرومولار أو محلول مسبار تحكم في برنامج تلفزيوني. هز الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 60 دقيقة لضمان التعرض المتساوي للصبغة.بعد فترة الحضانة ، بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 180 جم لمدة خمس دقائق عند 25 درجة مئوية. ثم أعد تعليق الخلايا في 0.5 ملليلتر من برنامج تلفزيوني. قم بتشغيل الخلايا من خلال مصفاة خلية شبكية من النايلون 35 ميكرومتر على أنبوب يوضع على الجليد لإزالة كتل الخلايا التي قد تسد مقياس التدفق الخلوي.قم بتشغيل أداة مقياس التدفق الخلوي وتشغيل بروتوكول بدء التشغيل. تحقق من وجود سائل غمد والخصر الفارغ. قم بتشغيل الخطوط باستخدام 10٪ مبيض وماء لمدة خمس دقائق لكل منها.ثم قم بتشغيل حبات مراقبة الجودة لضمان الوظيفة المناسبة. في علامة تبويب الإعدادات، حدد التشتت الجانبي المبعثر الأمامي وFITC لمرشح التألق. ارسم مساحة تشتت أمامية مقابل رسم مساحة تشتت جانبية لمحتوى الخلية الرئيسي بالقرب من مركز الرسم البياني.بعد ذلك ، ارسم منطقة تشتت أمامية ، مقابل رسم عرض تشتت أمامي للنطاقات الأفقية الضيقة التي تشير إلى المفردات. ثم ارسم منطقة FITC مقابل مخطط منطقة التشتت الأمامي لمراقبة توزيع الخلايا التي تم فرزها بواسطة مسبار الفلوروجينيك الانتقائي متساوي الشكل. بعد ذلك ، ارسم مدرجا تكراريا لمنطقة FITC لمراقبة التحول في عدد السكان بناء على FITC وحدد النسبة المئوية للخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1.لتحسين طاقة ليزر FITC ، قم بتشغيل عينة باستخدام المسبار بحيث يكون الذيل الأيمن لمنحنى الرسم البياني بالقرب من إشارة منطقة FITC القصوى. قد يتعين تكرار خطوة تحسين طاقة الليزر عدة مرات ، ولكن لا ينبغي تغيير طاقة الليزر عبر العينات ، بمجرد تعيين إعداد للتجربة. بعد ذلك ، أضف عينة إلى الغربلة ، وقم بتشغيلها باستخدام مسبار التحكم.يجب أن يكون التحول السكاني قابلا للملاحظة للكشف عن النطاق الديناميكي الأقصى. قم بتشغيل كل عينة لمدة 10،000 عدد تم إجراؤها في ثلاث نسخ. بعد الانتهاء من جمع العينات ، قم بتشغيل الخطوط بنسبة 10٪ مبيض وماء لمدة خمس دقائق لكل منها ، ثم أغلق الجهاز.معالجة البيانات باستخدام برنامج قياس التدفق الخلوي وتمشي عدد الخلايا المطلوب. باستخدام اختيار بوابة المستطيل ، اضبط المشية السلبية لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1 ، بحيث تحدث أكثر من 99.5٪ من الأحداث في عينات مسبار التحكم داخل هذه البوابة. سيتم اعتبار الخلايا المتبقية ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 إيجابية.ضع نفس البوابات على عينة المسبار. لتحديد عدد الأحداث التي تعتبر ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 سلبية و 1A1 إيجابية. تم تحديد متوسط عمليات تشغيل الطيات لكل خط خلية لتحديد إجمالي نشاط ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1.تم تحديد النسبة المئوية للخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1 في كل خط خلية عن طريق ضبط قوة الليزر وكسبه. لتقليل الإشارة في عينة التحكم المعالجة AlDeSense AM ، تم تحسين إشارة التألق في الخلايا المعالجة AlDeSense AM. من خلال حساب عدد الخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد A1A ، تم تحديد النسبة المئوية للخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد A1A.مع تطبيق مسبار الفلوروجينيك الانتقائي isoform ، تم تحديد عدد الخلايا الإيجابية لألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 داخل كل خط خلية عن طريق بوابات لأعلى 0.5٪ من ألمع الخلايا داخل مجموعة التحكم في AlDeSense AM. كشف تحليل لوحة خلايا سرطان المبيض عن النسبة المئوية للخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1. من النتائج التي تم الحصول عليها من خطوط الخلايا السرطانية المختبرة ، يمكن الاستنتاج أن BG-1 لديه أدنى نشاط ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 وأقل عدد إيجابي من ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1.بالإضافة إلى ذلك ، كشف التصوير البؤري وقياس التدفق الخلوي عن أكبر نسبة من الخلايا الإيجابية لنازعة هيدروجين الألدهيد 1A1 في خلايا Caov-3. لكن النشاط الكلي لخط الخلية كان ثالث أعلى نشاط فقط. بدلا من ذلك ، احتوت خلايا OVCAR-3 على ثالث أعلى عدد إيجابي من ألدهيد ديهيدروجيناز 1A1 ، لكنها أظهرت أعلى نشاط عام.AlDeSense هو مسبار متعدد الاستخدامات وقابل للتعميم لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية في خطوط الخلايا الخالدة وفي عينات المرضى. نأمل أن نراها كأداة تنبؤية في الإعداد السريري.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

فأري موديل التجريبية التنمية الورم الأصلي والبريتوني ورم خبيث<em&gt; عبر</em&gt; مثلي تلقيح مع خلايا المبيض سرطان

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

كريسبر/Cas9 باستخدام الجينات للتحقيق في نشاط النمطان Calreticulin المسخ في الخلايا المكونة للدم سيتوكين تعتمد على تحرير

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

تحديد خصائص الخلايا السرطانية باستخدام سلك طبي لالتقاط تعميم الخلايا السرطانية: نهجاً ثلاثي الأبعاد استناداً إلى الفلورة والأسماك الحمض النووي

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

تحليل لغزو خلايا السرطان والمنتشر لمكافحة المخدرات فحص استخدام صفيف المائية الصغيرة-الدائرة (همكا)-على أساس لوحات

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

نظام ثقافة ثيميك ثلاثي الأبعاد لتوليد المهاجرين الثيمة المضادة للخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القوى

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

باستخدام الإنسان المستحثة الخلايا الجذعية مستحث لتوليد خلايا T الأورام مستضد محدده

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

اعداد الميتوكوندريا من انسجه سرطان المبيض والتحكم في انسجه المبيض للتحليل الكمي للبروبروتيميكس

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

زرع تقويم العظام للخلايا السرطانية المشتقة من المريض في الفئران يلخص سرطان القولون والمستقيم المتقدم

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Quantifying Replication Stress in Ovarian Cancer Cells Using Single-Stranded DNA Immunofluorescence

قياس إجهاد النسخ المتماثل في خلايا سرطان المبيض باستخدام التألق المناعي للحمض النووي أحادي الشريط

Replication stress is a hallmark of several ovarian cancers. Replication stress can emerge from multiple sources, including double-strand breaks, ...

قياس طول التيلومير باستخدام الكشف عن التلألؤ الكيميائي غير المشع

Optimization of Performance Parameters of the TAGGG Telomere Length Assay

تسليط الضوء على المؤلف: تحسين معلمات الأداء لمقايسة طول التيلومير TAGGG  

تحسين معلمات الأداء لمقايسة طول التيلومير TAGGG

Telomeres are repetitive sequences which are present at chromosomal ends; their shortening is a characteristic feature of human somatic cells. Shortening ...