Name: application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity
Uploaded: 2023-03-31T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door The National Institutes of Health (R35GM133581 naar JC) en het Cancer Center at Illinois Graduate Scholarship (toegekend aan SG). JC bedankt de Camille and Henry Dreyfus Foundation voor de steun. De auteurs bedanken Dr. Thomas E. Bearrood voor zijn eerste bijdrage aan het voorbereiden van voorraden AlDeSense en AlDeSense AM. Wij danken de heer Oliver D. Pichardo Peguero en de heer Joseph A. Forzano voor hun hulp bij het bereiden van verschillende synthetische precursoren. We danken Prof. Erik Nelson (Department of Molecular and Integrative Physiology, UIUC) voor Caov-3, IGROV-1 en PEO4 cellen. Wij danken Prof. Paul Hergenrother (Vakgroep Chemie, UIUC) voor BG-1 cellen. We danken de Core Facilities van het Carl R. Woese Institute for Genomic Biology voor de toegang tot de Zeiss LSM 700 Confocal Microscope en bijbehorende software. We danken de Flow Cytometry Facility voor de toegang tot BD LSR II CMtO Analyzer. We danken Dr. Sandra McMasters en de Cell Media Facility voor hun hulp bij het voorbereiden van celkweekmedia.

1. Meet de totale ALDH1A1-activiteit in homogenaten van eierstokkankercellen via fluorimetrie
<ol><li>Ontdooi 1 × 106 cellen in een T25-celkweekkolf in 5 ml van de volgende celkweekmedia:<ol><li>IGROV-1 en PEO4: Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline/streptomycine (P/S).</li>
		<li>BG-1 en Caov-3: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) met 10% FBS en 1% P/S.</li>
		<li>OVCAR-3: RPMI 1640 met 20% FBS, 1% P/S en 0,01 ...

<ol>
	<li>Bonnet, D., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+acute+myeloid+leukaemia+is+organised+as+a+heirarchy+that+originates+from+a+primitive+haematopoetic+cell.">Human acute myeloid leukaemia is organised as a heirarchy that originates from a primitive haematopoetic cell.</a> Nature Medicine. 3 (7), 730-737 (1997).</li><li>Begicevic, R. R., Falasca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ABC+transporters+in+cancer+stem+cells:+Beyond+chemoresistance.">ABC transporters in cancer stem cells: Beyond chemoresistance.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (11), 2362 (2017).</li><li>Cojoc, M., M&#228;bert, K., Muders, M. H., Dubrovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+cancer+stem+cells+in+therapy+resistance:+Cellular+and+molecular+mechanisms.">A role for cancer stem cells in therapy resistance: Cellular and molecular mechanisms.</a> Seminars in Cancer Biology. 31, 16-27 (2015).</li><li>Islam, F., Gopalan, V., Smith, R. A., Lam, A. K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+potential+of+cancer+stem+cells:+A+review+of+the+detection+of+cancer+stem+cells+and+their+roles+in+cancer+recurrence+and+cancer+treatment.">Translational potential of cancer stem cells: A review of the detection of cancer stem cells and their roles in cancer recurrence and cancer treatment.</a> Experimental Cell Research. 335 (1), 135-147 (2015).</li><li>Li, F., Tiede, B., Massagu&#233;, J., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+tumorigenesis:+Cancer+stem+cells+in+metastasis.">Beyond tumorigenesis: Cancer stem cells in metastasis.</a> Cell Research. 17 (1), 3-14 (2007).</li><li>Kim, W. T., Ryu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+surface+markers+on+normal+stem+cells.">Cancer stem cell surface markers on normal stem cells.</a> BMB Reports. 50 (6), 285-298 (2017).</li><li>Pors, K., Moreb, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenases+in+cancer:+An+opportunity+for+biomarker+and+drug+development.">Aldehyde dehydrogenases in cancer: An opportunity for biomarker and drug development.</a> Drug Discovery Today. 19 (12), 1953-1963 (2014).</li><li>Jackson, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+aldehyde+dehydrogenase+gene+(ALDH)+superfamily.">Update on the aldehyde dehydrogenase gene (ALDH) superfamily.</a> Human Genomics. 5 (4), 283-303 (2011).</li><li>Vasiliou, V., Pappa, A., Petersen, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+aldehyde+dehydrogenases+in+endogenous+and+xenobiotic+metabolism.">Role of aldehyde dehydrogenases in endogenous and xenobiotic metabolism.</a> Chemico-Biological Interactions. 129 (1-2), 1-19 (2000).</li><li>Tomita, H., Tanaka, K., Tanaka, T., Hara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+stem+cells+and+cancer.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 in stem cells and cancer.</a> Oncotarget. 7 (10), 11018-11032 (2016).</li><li>Anorma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+of+cancer+stem+cell+plasticity+using+an+isoform-selective+fluorescent+probe+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1.">Surveillance of cancer stem cell plasticity using an isoform-selective fluorescent probe for aldehyde dehydrogenase 1A1.</a> ACS Central Science. 4 (8), 1045-1055 (2018).</li><li>Bearrood, T. E., Aguirre-Figueroa, G., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+red+fluorescent+sensor+for+ALDH1A1+displaying+enhanced+cellular+uptake+and+reactivity.">Rational design of a red fluorescent sensor for ALDH1A1 displaying enhanced cellular uptake and reactivity.</a> Bioconjugate Chemistry. 31 (2), 224-228 (2020).</li><li>Chan, J., Dodani, S. C., Chang, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction-based+small-molecule+fluorescent+probes+for+chemoselective+bioimaging.">Reaction-based small-molecule fluorescent probes for chemoselective bioimaging.</a> Nature Chemistry. 4 (12), 973-984 (2012).</li><li>East, A. K., Lucero, M. Y., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+directions+of+activity-based+sensing+for+in+vivo+NIR+imaging.">New directions of activity-based sensing for in vivo NIR imaging.</a> Chemical Science. 12 (10), 3393-3405 (2021).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-based+NIR+bioluminescence+probe+enables+discovery+of+diet-induced+modulation+of+the+tumor+microenvironment+via+nitric+oxide.">Activity-based NIR bioluminescence probe enables discovery of diet-induced modulation of the tumor microenvironment via nitric oxide.</a> ACS Central Science. 8 (4), 461-472 (2022).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+activity-based+sensing+approach+for+the+detection+of+cyclooxygenase-2+in+Live+Cells.">An activity-based sensing approach for the detection of cyclooxygenase-2 in Live Cells.</a> Angewandte Chemie. 59 (8), 3307-3314 (2020).</li><li>Ueno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+principles+for+modulating+fluorescence+properties+of+fluorescein.">Rational principles for modulating fluorescence properties of fluorescein.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (43), 14079-14085 (2004).</li><li>Tanaka, F., Mase, N., Barbas 3rd, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+use+of+fluorogenic+aldehydes+for+monitoring+the+progress+of+aldehyde+transformations.">Design and use of fluorogenic aldehydes for monitoring the progress of aldehyde transformations.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (12), 3692-3693 (2004).</li><li>Thurber, G. M., Schmidt, M. M., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tumor+penetration:+transport+opposed+by+systemic+and+antigen-mediated+clearance.">Antibody tumor penetration: transport opposed by systemic and antigen-mediated clearance.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (12), 1421-1434 (2008).</li><li>Marcato, P., Dean, C. A., Giacomantonio, C. A., Lee, P. W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+its+role+as+a+cancer+stem+cell+marker+comes+down+to+the+specific+isoform.">Aldehyde dehydrogenase its role as a cancer stem cell marker comes down to the specific isoform.</a> Cell Cycle. 10 (9), 1378-1384 (2011).</li><li>Meng, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1+maintains+ovarian+cancer+stem+cell-like+properties+by+altered+regulation+of+cell+cycle+checkpoint+and+DNA+repair+network+signaling.">ALDH1A1 maintains ovarian cancer stem cell-like properties by altered regulation of cell cycle checkpoint and DNA repair network signaling.</a> PLoS One. 9 (9), e107142 (2014).</li><li>Kaipio, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1-related+stemness+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+is+a+negative+prognostic+indicator+but+potentially+targetable+by+EGFR/mTOR-PI3K/aurora+kinase+inhibitors.">ALDH1A1-related stemness in high-grade serous ovarian cancer is a negative prognostic indicator but potentially targetable by EGFR/mTOR-PI3K/aurora kinase inhibitors.</a> The Journal of Pathology. 250 (2), 159-169 (2020).</li><li>Deng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+expression+levels+and+patterns+of+stem+cell+marker,+aldehyde+dehydrogenase+isoform+1+(ALDH1),+in+human+epithelial+cancers.">Distinct expression levels and patterns of stem cell marker, aldehyde dehydrogenase isoform 1 (ALDH1), in human epithelial cancers.</a> PLoS One. 5 (4), e10277 (2010).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1+expression+correlates+with+favorable+prognosis+in+ovarian+cancers.">ALDH1 expression correlates with favorable prognosis in ovarian cancers.</a> Modern Pathology. 22 (6), 817-823 (2009).</li><li>Gardner, S. H., Reinhardt, C. J., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+activity-based+sensing+probes+for+isoform-selective+imaging+of+enzymatic+activity.">Advances in activity-based sensing probes for isoform-selective imaging of enzymatic activity.</a> Angewandte Chemie. 60 (10), 5000-5009 (2021).</li><li>Reid, B. M., Permuth, J. B., Sellers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+ovarian+cancer:+a+review.">Epidemiology of ovarian cancer: a review.</a> Cancer Biology and Medicine. 14 (1), 9-32 (2017).</li><li>Tulake, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+stem+cell+markers+ALDH1A1+and+OCT4+as+potential+biomarkers+for+the+early+detection+of+cervical+carcinoma.">Upregulation of stem cell markers ALDH1A1 and OCT4 as potential biomarkers for the early detection of cervical carcinoma.</a> Oncology Letters. 16 (5), 5525-5534 (2018).</li><li>Nwani, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+ALDH1A1+inhibitor+targets+cells+with+stem+cell+characteristics+in+ovarian+cancer.">A novel ALDH1A1 inhibitor targets cells with stem cell characteristics in ovarian cancer.</a> Cancers. 11 (4), 502 (2019).</li><li>Roy, M., Connor, J., Al-Niaimi, A., Rose, S. L., Mahajan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+(ALDH1A1)+expression+by+immunohistochemistry+is+associated+with+chemo-refractoriness+in+patients+with+high-grade+ovarian+serous+carcinoma.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 (ALDH1A1) expression by immunohistochemistry is associated with chemo-refractoriness in patients with high-grade ovarian serous carcinoma.</a> Human Pathology. 73, 1-6 (2018).</li><li>Landen Jr, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+aldehyde+dehydrogenase+cancer+stem+cells+in+ovarian+cancer.">Targeting aldehyde dehydrogenase cancer stem cells in ovarian cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 9 (12), 3186-3199 (2010).</li><li>Condello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin-regulated+ALDH1A1+is+a+target+in+ovarian+cancer+spheroids.">&#946;-catenin-regulated ALDH1A1 is a target in ovarian cancer spheroids.</a> Oncogene. 34 (18), 2297-2308 (2015).</li><li>Storms, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+primitive+human+hematopoietic+progenitors+on+the+basis+of+aldehyde+dehydrogenase+activity.">Isolation of primitive human hematopoietic progenitors on the basis of aldehyde dehydrogenase activity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 96 (16), 9118-9123 (1999).</li><li>Duellman, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioluminescence+assay+for+aldehyde+dehydrogenase+activity.">A bioluminescence assay for aldehyde dehydrogenase activity.</a> Analytical Biochemistry. 434 (2), 226-232 (2013).</li><li>Minn, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red-shifted+fluorescent+substrate+for+aldehyde+dehydrogenase.">A red-shifted fluorescent substrate for aldehyde dehydrogenase.</a> Nature Communications. 5, 3662 (2014).</li><li>Doll&#233;, L., Boulter, L., Leclercq, I. A., van Grunsven, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+of+ALDH+substrates+and+their+potential+to+study+maturational+lineage+biology+in+stem+and+progenitor+cells.">Next generation of ALDH substrates and their potential to study maturational lineage biology in stem and progenitor cells.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 308 (7), 573-578 (2015).</li><li>Yagishita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+highly+selective+fluorescent+probe+enabling+flow-cytometric+isolation+of+ALDH3A1-positive+viable+cells.">Development of highly selective fluorescent probe enabling flow-cytometric isolation of ALDH3A1-positive viable cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 28 (2), 302-306 (2017).</li><li>Maity, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiophene+bridged+aldehydes+(TBAs)+image+ALDH+activity+in+cells:+Via+modulation+of+intramolecular+charge+transfer.">Thiophene bridged aldehydes (TBAs) image ALDH activity in cells: Via modulation of intramolecular charge transfer.</a> Chemical Science. 8 (10), 7143-7151 (2017).</li><li>Koenders, S. T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+retinal-based+probe+for+the+profiling+of+retinaldehyde+dehydrogenases+in+cancer+cells.">Development of a retinal-based probe for the profiling of retinaldehyde dehydrogenases in cancer cells.</a> ACS Central Science. 5 (12), 1965-1974 (2019).</li><li>Oe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep-red/near-infrared+turn-on+fluorescence+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+cancer+stem+cells.">Deep-red/near-infrared turn-on fluorescence probes for aldehyde dehydrogenase 1A1 in cancer stem cells.</a> ACS Sensors. 6 (9), 3320-3329 (2021).</li><li>Yagishita, A., Ueno, T., Tsuchihara, K., Urano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+BODIPY-based+blue+fluorescent+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1-expressing+cells.">Amino BODIPY-based blue fluorescent probes for aldehyde dehydrogenase 1-expressing cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 32 (2), 234-238 (2021).</li><li>Okamoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+breast+cancer+stem+cells+using+a+newly+developed+long-acting+fluorescence+probe,+C5S-A,+targeting+ALDH1A1.">Identification of breast cancer stem cells using a newly developed long-acting fluorescence probe, C5S-A, targeting ALDH1A1.</a> Anticancer Research. 42 (3), 1199-1205 (2022).</li></ol>

Pan-selectiviteit is een belangrijke beperking van veel ALDH-sondes; Er zijn echter onlangs verschillende isovormselectieve voorbeelden gemeld 32,33,34,35,36,37,38,39,40,41. De isovormsel...

Kankerstamcellen (CSC's) zijn een subpopulatie van tumorcellen die stamcelachtige eigenschappen vertonen1. Net als hun niet-kankerachtige tegenhangers bezitten CSC's het buitengewone vermogen om zichzelf te vernieuwen en te vermenigvuldigen. Samen met andere ingebouwde mechanismen, zoals de upregulatie van ATP-bindende cassettetransporters, worden CSC's vaak gespaard van initiële chirurgische debulking-inspanningen, evenals daaropvolgende adjuvante therapie2. Vanwege hun cruciale rol in behandelingsresistentie3, terugval4 en metastase5, zijn CSC's een prioriteit geworden in kankeronderzoek. Hoewel er een verscheidenheid aan celoppervlakantigenen (bijv. CD133) zijn die kunnen worden gebruikt om CSC's6 te identificeren, is het benutten van de enzymatische activiteit van aldehydedehydrogenasen (ALDHs) in het cytoplasma naar voren gekomen als een aantrekkelijk alternatief7. ALDH's zijn een superfamilie van 19 enzymen die verantwoordelijk zijn voor het katalyseren van de oxidatie van reactieve endogene en xenobiotische aldehyden tot de overeenkomstige carbonzuurproducten8.
Over het algemeen is aldehyde-ontgifting cruciaal bij het beschermen van cellen tegen ongewenste crosslinking-gebeurtenissen en oxidatieve stress die de integriteit van stamcellen kunnen schaden9. Bovendien regelt de 1A1-isovorm het retinoïnezuurmetabolisme, dat op zijn beurt de stengelheid beïnvloedt via retinaldehyde-signalering10. AlDeSense 11,12, een kleine-molecuul activity-based sensing (ABS) sonde om selectief ALDH1A1-activiteit te detecteren, is onlangs ontwikkeld. ABS-ontwerpen bereiken analytdetectie door middel van een chemische verandering in plaats van een bindingsgebeurtenis, waardoor een hoge selectiviteit en verminderde off-target responsenmogelijk zijn 13,14,15,16. Het ontwerpprincipe van de isovormselectieve fluorogene sonde is gebaseerd op een donor-foto-geïnduceerde elektronenoverdracht (d-PeT) blusmechanisme17, afkomstig van de aldehyde-functionele groep, die dient om de fluorescerende handtekening van de sonde18 te onderdrukken. Bij ALDH1A1-gemedieerde omzetting naar carbonzuur wordt stralingsrelaxatie ontgrendeld om een zeer fluorescerend product te verkrijgen. Omdat d-PeT-blussing nooit 100% efficiënt is, werd de resterende fluorescentie die kan leiden tot mogelijke vals-positieve resultaten overwogen bij het vaststellen van deze test door de ontwikkeling van Ctrl-AlDeSense, een niet-responsief reagens met overeenkomende fotofysische kenmerken (bijv. Kwantumopbrengst) en een identiek cytoplasmatisch kleuringspatroon in cellen. Wanneer deze unieke koppeling in combinatie wordt gebruikt, kan deze op betrouwbare wijze cellen met een hoge ALDH1A1-activiteit onderscheiden van cellen die lage niveaus vertonen via fluorimetrie, moleculaire beeldvorming en flowcytometrie. Verschillende belangrijke voordelen zijn verbonden aan het gebruik van isoform-selectieve activatable kleurstoffen ten opzichte van traditionele immunohistochemische methoden. Er wordt bijvoorbeeld verondersteld dat CSC's diep in een tumor worden begraven en dus toegankelijker zijn voor een klein molecuul in vergelijking met grote antilichamen19. Bovendien wijzigt het omgedraaide fluorescerende product geen enkele cellulaire component, wat betekent dat het gemakkelijk kan worden verwijderd via wascycli om een CSC in een ongewijzigde toestand te laten. Ten slotte identificeert de turn-on respons alleen levensvatbare cellen en functies, net als de MTT-test, vanwege de afhankelijkheid van de NAD + -cofactor.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64713/64713fig01.jpg"> Figuur 1: Schematische weergave van de fluorescerende inschakeling van AlDeSense. De isovormselectieve kleurstof wordt geactiveerd door ALDH1A1 en kan worden gebruikt om verhoogde ALDH1A1-activiteit in eierstokkankercellen te identificeren via fluorimetrie, moleculaire beeldvorming en flowcytometrie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64713/64713fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
In eerder werk heeft de isovormselectieve fluorogene sondetest met succes ALDH-hoge (ALDH +) -cellen gestratificeerd van ALDH-lage (ALDH-) cellen in K562 menselijke chronische leukemiecellen, MDA-MB-231 menselijke borstkankercellen en B16F0-muizenmelanoomcellen. Dit is belangrijk omdat, voor veel soorten kanker, een hoge ALDH1A1-eiwitexpressie een slechtere klinische prognose betekent20. Dit veronderstelt dat verhoogde niveaus van ALDH1A1 indicatief zijn voor CSC's die de behandeling kunnen ontwijken, resistentie kunnen ontwikkelen en zich door het hele lichaam kunnen verspreiden. In het geval van eierstokkanker zijn er echter studies die de tegenovergestelde bevinding melden (hoge ALDH1A1-expressie is gekoppeld aan verbeterde overleving van de patiënt)21,22,23,24. Hoewel dit op het eerste gezicht tegenstrijdig lijkt, correleert expressie niet noodzakelijkerwijs met enzymactiviteit, die kan worden beïnvloed door veranderingen in de micro-omgeving van de tumor (bijv. pH-flux, zuurstofgradiënten), beschikbaarheid van de NAD + -cofactor of aldehydesubstraten, niveaus van carbonzuren (productremming) en posttranslationele modificaties die de enzymactiviteit kunnen veranderen25 . Bovendien is eierstokkanker verdeeld in vijf belangrijke histologische typen (hooggradig sereus, laaggradig sereus, endometrioïde, heldere cel en mucineus), waarvan we veronderstellen dat ze variabele niveaus van ALDH1A1-activiteit zullen hebben26. Met het doel om ALDH1A1-activiteit in eierstoktumoren te onderzoeken, werd een isovormselectieve fluorogene sondetest gebruikt om ALDH1A1 + -populaties te identificeren in een panel van vijf eierstokkankercellijnen die behoren tot de verschillende histologische typen die hierboven zijn genoemd. De cellijnen die in deze studie zijn getest, omvatten BG-1-, Caov-3-, IGROV-1-, OVCAR-3- en PEO4-cellen, die heldere cel- en sereuze histotypen omvatten. Hierin werd de veelzijdigheid en generaliseerbaarheid van de sonde benadrukt om CSC's te identificeren voor de onderzoekers die vergelijkbare studies willen uitvoeren in andere vereeuwigde kankercellijnen en patiëntenmonsters. Het gebruik van AlDeSense zal licht werpen op de biochemische routes die betrokken zijn bij CSC-onderhoud in complexe weefselmicro-omgevingen en mogelijk dienen als een klinisch hulpmiddel voor het bepalen van de prognose en het meten van de agressiviteit van kanker.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#160;0.25% Trypsin, 0.1% EDTA in HBSS w/o Calcium, Magnesium and Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>&#160;&#160;25-050-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Phosphate Buffer Saline</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CMX12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuSpin Micro 17R</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-100-675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BG-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Paul Hergenrother Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioLite 25cm2 Flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>130189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet 1300 series A2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caov-3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5180R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22627040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contrl-AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCS Express 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by UIUC CMtO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FL microscope</td>
			<td>EVOS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorometer</td>
			<td>Photon Technology International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma Series II Water-Jacketed CO2&#160;Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGROV-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 42R Incubated Shaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 700</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSR II</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek Chambered #1.0 Borosicilate Coverglass System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>155383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVCAR-3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Lysine</td>
			<td>Cultrex</td>
			<td>3438-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 20% FBS, 1% P/S, 0.01 mg/mL Insulin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity

Terugval na kankerbehandeling wordt vaak toegeschreven aan de persistentie van een subpopulatie van tumorcellen die bekend staat als kankerstamcellen (CSC's), die worden gekenmerkt door hun opmerkelijke tumor-initiërende en zelfvernieuwende vermogen. Afhankelijk van de oorsprong van de tumor (bijv. Eierstokken), kan het CSC-oppervlaktebiomarkerprofiel dramatisch variëren, waardoor de identificatie van dergelijke cellen via immunohistochemische kleuring een uitdagende onderneming wordt. Integendeel, aldehydedehydrogenase 1A1 (ALDH1A1) is naar voren gekomen als een uitstekende marker om CSC's te identificeren, vanwege het geconserveerde expressieprofiel in bijna alle voorlopercellen, inclusief CSC's. De ALDH1A1-isovorm behoort tot een superfamilie van 19 enzymen die verantwoordelijk zijn voor de oxidatie van verschillende endogene en xenobiotische aldehyden tot de overeenkomstige carbonzuurproducten. Chan et al. hebben onlangs AlDeSense ontwikkeld, een isovormselectieve "turn-on" probe voor de detectie van ALDH1A1-activiteit, evenals een niet-reactief matching control reagens (Ctrl-AlDeSense) om rekening te houden met off-target kleuring. Van dit isovormselectieve hulpmiddel is al aangetoond dat het een veelzijdig chemisch hulpmiddel is door de detectie van ALDH1A1-activiteit in K562 myelogene leukemiecellen, mammospheres en van melanoom afgeleide CSC-xenografts. In dit artikel werd het nut van de sonde aangetoond door middel van aanvullende fluorimetrie, confocale microscopie en flowcytometrie-experimenten waarbij de relatieve ALDH1A1-activiteit werd bepaald in een panel van vijf eierstokkankercellijnen.

Totale ALDH1A1-activiteit van homogenaten van eierstokkankercellen De gemiddelde fold turn-ons voor elke cellijn verkregen uit deze test zijn: BG-1 (1,12 ± 0,01); IGROV-1 (1,30 ± 0,03); Caov-3 (1,72 ± 0,06); PEO4 (2,51 ± 0,29); en OVCAR-3 (10.25 ± 1.46) (figuur 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64713/64713fig02.jpg"> Figuur 2: D...

Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity

Methoden om ALDH1A1-activiteit in levende cellen te meten zijn van cruciaal belang in kankeronderzoek vanwege de status als biomarker van stam. In deze studie gebruikten we een isovormselectieve fluorogene sonde om de relatieve niveaus van ALDH1A1-activiteit te bepalen in een panel van vijf eierstokkankercellijnen.

Toepassing van AlDeSense om eierstokkankercellen te stratificeren op basis van aldehydedehydrogenase 1A1-activiteit

Relapse after cancer treatment is often attributed to the persistence of a subpopulation of tumor cells known as cancer stem cells (CSCs), which are ...

Ons protocol stelt gebruikers in staat om ALDH1A1-activiteit te meten, een stamcelbiomarker met behulp van verschillende modaliteiten, variërend van flowcytometrie tot moleculaire beeldvorming van levende cellen. De grote voordelen van deze aanpak zijn dat sondeactivering de turnaround-respons omvat die wordt gekenmerkt door een hoge signaal-achtergrondverhouding, evenals selectieve ALDH1A1-isovormdetectie. Michael Lee, Sarah Gardner en Rodrigo Tapia Hernandez promovendi van mijn laboratorium zullen deze procedure demonstreren.Om te beginnen, zuig de groeimedia uit de gekweekte cellen van belang in acht putkamerdia. Voeg 500 microliter per putje serumvrije media toe, aangevuld met een twee micromolaire isovormselectieve fluorogene sonde of een niet-reactieve controlesonde. Incubeer de glijbaan gedurende 30 minuten op kamertemperatuur.Ga na incubatie onmiddellijk over op confocale microscoopbeeldvorming. Lokaliseer de cellen met een vergroting van 10 x. Het FITC-kanaal en de uitgezonden lichtkanalen zijn vereist voor dit experiment.Lokaliseer en focus de cellen met behulp van het uitgezonden lichtkanaal om gedurende het hele experiment op hetzelfde Z-vlak scherp te stellen om vertekening te verwijderen. Pas het laservermogen en de FITC-versterking aan op de juiste instelling waarbij het signaal van de AlDeSense AM-monsters minimaal detecteerbaar is, terwijl u nog steeds signaal ziet in AlDeSense AM-monsters. Pas elke parameter aan door de bijbehorende balk te schuiven.De instellingen moeten mogelijk een paar keer worden aangepast om de juiste parameters te identificeren. Eenmaal geoptimaliseerd, voltooit u de rest van het experiment binnen die cellijn met identieke parameters. Maak drie beelden per put voor een totaal van drie putjes per behandelingsconditie en sla de beelden op.Zorg ervoor dat u alleen scherpstelt met behulp van het doorgelaten lichtkanaal tijdens het schakelen tussen vlakken en putten om vertekening te voorkomen. Vervolgens splitst u met behulp van de beeldverwerkingssoftware het CZI-bestand in verschillende kanalen en telt u het totale aantal cellen en fluorescerende cellen. Om het percentage aldehydedehydrogenase 1A1-positieve cellen te bepalen, deelt u het aantal fluorescerende cellen door het totale aantal cellen in elke afbeelding.Tel op dezelfde manier voor elke afbeelding om verstorende variabelen te voorkomen. Haal een T25-celkweekkolf eruit met daarin de cellen die in de couveuse worden bewaard. Voeg trypsine toe voor celonthechting en tel de cellen met behulp van een geautomatiseerde celteller.Pellet vervolgens de cellen in een centrifugebuis van 15 milliliter door centrifugeren bij 180G gedurende vijf minuten bij 25 graden Celsius. Suspensie van de cellen in één milliliter van een twee micromolaire sonde of controlesondeoplossing in PBS. Rock de cellen gedurende 60 minuten op kamertemperatuur om een gelijkmatige blootstelling aan de kleurstof te garanderen.Na de incubatietijd pellet je de cellen door centrifugeren bij 180 G gedurende vijf minuten bij 25 graden Celsius. Suspensie vervolgens de cellen opnieuw in 0,5 milliliter PBS. Laat de cellen door een 35 micrometer nylon gaascelzeef op een buis op ijs lopen om celklonten te verwijderen die de flowcytometer kunnen verstoppen.Schakel het flowcytometerinstrument in en voer het opstartprotocol uit. Controleer op schedevocht en lege taille. Voer de lijnen uit met 10% bleekmiddel en water gedurende vijf minuten elk.Voer vervolgens kwaliteitscontrolekralen uit om een goede werking te garanderen. Selecteer op het tabblad Instellingen de forward scatter side scatter en FITC voor het fluorescentiefilter. Teken een voorwaarts spreidingsgebied versus een zijspreidingsgebiedsplot voor de hoofdcelpopulatie in de buurt van het midden van de grafiek.Teken vervolgens een voorwaarts spreidingsgebied, versus een voorwaartse spreidingsbreedteplot voor de smalle horizontale banden die singlets aangeven. Teken vervolgens een FITC-gebied versus een voorwaartse verstrooiingsgebiedplot om de verdeling van cellen te observeren die zijn gesorteerd door de isovormselectieve fluorogene inschakelsonde. Teken vervolgens een FITC-gebiedshistogram om de verschuiving in populatie op basis van FITC te observeren en het percentage aldehydededehydrogenase 1A1-positieve cellen te bepalen.Om het FITC-laservermogen te optimaliseren, voert u een monster uit met de sonde, zodat de rechterstaart van de histogramcurve zich in de buurt van het maximale FITC-gebiedssignaal bevindt. De optimalisatiestap van het laservermogen moet mogelijk meerdere keren worden herhaald, maar het laservermogen mag niet worden gewijzigd in monsters, zodra een instelling is aangewezen voor een experiment. Voeg vervolgens een monster toe aan de zeef en voer het uit met de controlesonde.Een populatieverschuiving moet waarneembaar zijn om het maximale dynamische bereik te onthullen. Voer elk monster uit voor 10.000 tellingen in drievoud. Nadat het monster is verzameld, voert u de lijnen uit met 10% bleekmiddel en water gedurende vijf minuten elk en sluit u het instrument vervolgens af.Verwerk de gegevens met behulp van flowcytometriesoftware en ga de gewenste celpopulatie gangen. Stel met behulp van de rechthoekige poortselectie de aldehydedehydrogenase 1A1-negatieve gang in, zodat meer dan 99,5% van de gebeurtenissen in de controlesondemonsters binnen deze poort plaatsvindt. De overige cellen worden als aldehydedehydrogenase 1A1-positief beschouwd.Breng dezelfde poorten aan op het sondemonster. Om het aantal voorvallen te kwantificeren dat als aldehydededehydrogenase wordt beschouwd, 1A1 negatief en 1A1 positief. De gemiddelde fold turn-ons voor elke cellijn werden bepaald om de totale aldehydededehydrogenase 1A1-activiteit te kwantificeren.Het percentage aldehydededehydrogenase 1A1-positieve cellen werd in elke cellijn bepaald door het laservermogen en de versterking af te stemmen. Om het signaal in het met AlDeSense AM behandelde monster te minimaliseren, werd het fluorescentiesignaal geoptimaliseerd in de met AlDeSense AM behandelde cellen. Door het aantal aldehydededehydrogenase A1A-positieve cellen te tellen, werd het percentage aldehydededehydrogenase A1A-positieve cellen bepaald.Met de toepassing van de isovormselectieve fluorogene sonde werd de aldehydedehydrogenase 1A1-positieve celpopulatie binnen elke cellijn gekwantificeerd door te gapen naar de bovenste 0,5% van de helderste cellen binnen de controle AlDeSense AM behandelde populatie. Analyse van het panel van eierstokkankercellen heeft het percentage aldehydedehydrogenase 1A1-positieve cellen onthuld. Uit de verkregen resultaten van de geteste kankercellijnen kan worden geconcludeerd dat BG-1 de laagste aldehydedehydrogenase 1A1-activiteit en de laagste aldehydededehydrogenase 1A1-positieve populatie heeft.Bovendien onthulden confocale beeldvorming en flowcytometrie het grootste percentage aldehydededehydrogenase 1A1-positieve cellen in Caov-3-cellen. Maar de totale activiteit van de cellijn was slechts de op twee na hoogste. Als alternatief bevatten OVCAR-3-cellen de op twee na hoogste aldehydededehydrogenase 1A1-positieve populatie, maar vertoonden de hoogste algehele activiteit.AlDeSense is een veelzijdige en generaliseerbare sonde om CSC's in onsterfelijke cellijnen en in patiëntmonsters te identificeren. We hopen het te zien als een prognostisch hulpmiddel in de klinische setting.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase<em&gt; via</em&gt; Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Met behulp van CRISPR/Cas9 Gene bewerken om te onderzoeken de oncogene activiteit van Mutant Calreticulin in Cytokine afhankelijke hematopoietische cellen

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Karakterisering van tumorcellen met behulp van een medische draad voor het vastleggen van de circulerende tumorcellen: een 3D aanpak gebaseerd op immunofluorescentie en DNA vis

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse van kanker cel invasie en anti-metastatische Drug Screening met behulp van Hydrogel Micro-kamer Array (HMCA)-op basis van platen

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Een driedimensionaal Thymic cultuur systeem voor het genereren van Murine geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige tumor antigen-specifieke Thymic emigranten

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Met behulp van menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen voor het genereren van tumor-antigeen-specifieke T-cellen

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Bereiding van mitochondriën van ovariële kanker weefsels en controle ovariële weefsels voor kwantitatieve Proteomics analyse

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Orthotope implantatie van patiënt-afgeleide kankercellen bij muizen recapituleert gevorderde colorectale kanker

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Quantifying Replication Stress in Ovarian Cancer Cells Using Single-Stranded DNA Immunofluorescence

Kwantificering van replicatiestress in eierstokkankercellen met behulp van enkelstrengs DNA-immunofluorescentie

Replication stress is a hallmark of several ovarian cancers. Replication stress can emerge from multiple sources, including double-strand breaks, ...

Kwantificering van de telomeerlengte met behulp van niet-radioactieve chemiluminescentiedetectie

Optimization of Performance Parameters of the TAGGG Telomere Length Assay

Auteur in de schijnwerpers: optimalisatie van de prestatieparameters van de TAGGG-telomeerlengtetest  

Optimalisatie van prestatieparameters van de TAGGG-telomeerlengtetest

Telomeres are repetitive sequences which are present at chromosomal ends; their shortening is a characteristic feature of human somatic cells. Shortening ...