Name: application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity
Uploaded: 2023-03-31T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Institutes of Health (R35GM133581 till JC) och Cancer Center at Illinois Graduate Scholarship (tilldelas SG). JC tackar Camille och Henry Dreyfus Foundation för stöd. Författarna tackar Dr. Thomas E. Bearrood för hans första bidrag till att förbereda lager av AlDeSense och AlDeSense AM. Vi tackar Oliver D. Pichardo Peguero och Joseph A. Forzano för deras hjälp med att förbereda olika syntetiska prekursorer. Vi tackar professor Erik Nelson (Institutionen för molekylär och integrativ fysiologi, UIUC) för Caov-3-, IGROV-1- och PEO4-celler. Vi tackar Prof. Paul Hergenrother (Institutionen för kemi, UIUC) för BG-1-celler. Vi tackar Core Facilities vid Carl R. Woese Institute for Genomic Biology för tillgång till Zeiss LSM 700 konfokalmikroskop och motsvarande programvara. Vi tackar flödescytometrifaciliteten för tillgång till BD LSR II CMtO Analyzer. Vi tackar Dr. Sandra McMasters och Cell Media Facility för hjälp med att förbereda cellodlingsmedia.

1. Mät total ALDH1A1-aktivitet i äggstockscancercellhomogenat via fluorimetri
<ol><li>Tina 1 × 106 celler i en T25-cellodlingskolv i 5 ml av följande cellodlingsmedium:<ol><li>IGROV-1 och PEO4: Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium med 10% fetalt bovint serum (FBS) och 1% penicillin / streptomycin (P / S).</li>
		<li>BG-1 och Caov-3: Dulbeccos modifierade örnmedium (DMEM) med 10% FBS och 1% P/S.</li>
		<li>OVCAR-3: RPMI 1640 med 20% FBS, 1% P/S och 0,01 mg/ml insul...

<ol>
	<li>Bonnet, D., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+acute+myeloid+leukaemia+is+organised+as+a+heirarchy+that+originates+from+a+primitive+haematopoetic+cell.">Human acute myeloid leukaemia is organised as a heirarchy that originates from a primitive haematopoetic cell.</a> Nature Medicine. 3 (7), 730-737 (1997).</li><li>Begicevic, R. R., Falasca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ABC+transporters+in+cancer+stem+cells:+Beyond+chemoresistance.">ABC transporters in cancer stem cells: Beyond chemoresistance.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (11), 2362 (2017).</li><li>Cojoc, M., M&#228;bert, K., Muders, M. H., Dubrovska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+cancer+stem+cells+in+therapy+resistance:+Cellular+and+molecular+mechanisms.">A role for cancer stem cells in therapy resistance: Cellular and molecular mechanisms.</a> Seminars in Cancer Biology. 31, 16-27 (2015).</li><li>Islam, F., Gopalan, V., Smith, R. A., Lam, A. K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+potential+of+cancer+stem+cells:+A+review+of+the+detection+of+cancer+stem+cells+and+their+roles+in+cancer+recurrence+and+cancer+treatment.">Translational potential of cancer stem cells: A review of the detection of cancer stem cells and their roles in cancer recurrence and cancer treatment.</a> Experimental Cell Research. 335 (1), 135-147 (2015).</li><li>Li, F., Tiede, B., Massagu&#233;, J., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+tumorigenesis:+Cancer+stem+cells+in+metastasis.">Beyond tumorigenesis: Cancer stem cells in metastasis.</a> Cell Research. 17 (1), 3-14 (2007).</li><li>Kim, W. T., Ryu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+surface+markers+on+normal+stem+cells.">Cancer stem cell surface markers on normal stem cells.</a> BMB Reports. 50 (6), 285-298 (2017).</li><li>Pors, K., Moreb, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenases+in+cancer:+An+opportunity+for+biomarker+and+drug+development.">Aldehyde dehydrogenases in cancer: An opportunity for biomarker and drug development.</a> Drug Discovery Today. 19 (12), 1953-1963 (2014).</li><li>Jackson, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+the+aldehyde+dehydrogenase+gene+(ALDH)+superfamily.">Update on the aldehyde dehydrogenase gene (ALDH) superfamily.</a> Human Genomics. 5 (4), 283-303 (2011).</li><li>Vasiliou, V., Pappa, A., Petersen, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+aldehyde+dehydrogenases+in+endogenous+and+xenobiotic+metabolism.">Role of aldehyde dehydrogenases in endogenous and xenobiotic metabolism.</a> Chemico-Biological Interactions. 129 (1-2), 1-19 (2000).</li><li>Tomita, H., Tanaka, K., Tanaka, T., Hara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+stem+cells+and+cancer.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 in stem cells and cancer.</a> Oncotarget. 7 (10), 11018-11032 (2016).</li><li>Anorma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+of+cancer+stem+cell+plasticity+using+an+isoform-selective+fluorescent+probe+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1.">Surveillance of cancer stem cell plasticity using an isoform-selective fluorescent probe for aldehyde dehydrogenase 1A1.</a> ACS Central Science. 4 (8), 1045-1055 (2018).</li><li>Bearrood, T. E., Aguirre-Figueroa, G., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+red+fluorescent+sensor+for+ALDH1A1+displaying+enhanced+cellular+uptake+and+reactivity.">Rational design of a red fluorescent sensor for ALDH1A1 displaying enhanced cellular uptake and reactivity.</a> Bioconjugate Chemistry. 31 (2), 224-228 (2020).</li><li>Chan, J., Dodani, S. C., Chang, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction-based+small-molecule+fluorescent+probes+for+chemoselective+bioimaging.">Reaction-based small-molecule fluorescent probes for chemoselective bioimaging.</a> Nature Chemistry. 4 (12), 973-984 (2012).</li><li>East, A. K., Lucero, M. Y., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+directions+of+activity-based+sensing+for+in+vivo+NIR+imaging.">New directions of activity-based sensing for in vivo NIR imaging.</a> Chemical Science. 12 (10), 3393-3405 (2021).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-based+NIR+bioluminescence+probe+enables+discovery+of+diet-induced+modulation+of+the+tumor+microenvironment+via+nitric+oxide.">Activity-based NIR bioluminescence probe enables discovery of diet-induced modulation of the tumor microenvironment via nitric oxide.</a> ACS Central Science. 8 (4), 461-472 (2022).</li><li>Yadav, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+activity-based+sensing+approach+for+the+detection+of+cyclooxygenase-2+in+Live+Cells.">An activity-based sensing approach for the detection of cyclooxygenase-2 in Live Cells.</a> Angewandte Chemie. 59 (8), 3307-3314 (2020).</li><li>Ueno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+principles+for+modulating+fluorescence+properties+of+fluorescein.">Rational principles for modulating fluorescence properties of fluorescein.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (43), 14079-14085 (2004).</li><li>Tanaka, F., Mase, N., Barbas 3rd, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+use+of+fluorogenic+aldehydes+for+monitoring+the+progress+of+aldehyde+transformations.">Design and use of fluorogenic aldehydes for monitoring the progress of aldehyde transformations.</a> Journal of the American Chemical Society. 126 (12), 3692-3693 (2004).</li><li>Thurber, G. M., Schmidt, M. M., Wittrup, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+tumor+penetration:+transport+opposed+by+systemic+and+antigen-mediated+clearance.">Antibody tumor penetration: transport opposed by systemic and antigen-mediated clearance.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (12), 1421-1434 (2008).</li><li>Marcato, P., Dean, C. A., Giacomantonio, C. A., Lee, P. W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+its+role+as+a+cancer+stem+cell+marker+comes+down+to+the+specific+isoform.">Aldehyde dehydrogenase its role as a cancer stem cell marker comes down to the specific isoform.</a> Cell Cycle. 10 (9), 1378-1384 (2011).</li><li>Meng, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1+maintains+ovarian+cancer+stem+cell-like+properties+by+altered+regulation+of+cell+cycle+checkpoint+and+DNA+repair+network+signaling.">ALDH1A1 maintains ovarian cancer stem cell-like properties by altered regulation of cell cycle checkpoint and DNA repair network signaling.</a> PLoS One. 9 (9), e107142 (2014).</li><li>Kaipio, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1A1-related+stemness+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+is+a+negative+prognostic+indicator+but+potentially+targetable+by+EGFR/mTOR-PI3K/aurora+kinase+inhibitors.">ALDH1A1-related stemness in high-grade serous ovarian cancer is a negative prognostic indicator but potentially targetable by EGFR/mTOR-PI3K/aurora kinase inhibitors.</a> The Journal of Pathology. 250 (2), 159-169 (2020).</li><li>Deng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+expression+levels+and+patterns+of+stem+cell+marker,+aldehyde+dehydrogenase+isoform+1+(ALDH1),+in+human+epithelial+cancers.">Distinct expression levels and patterns of stem cell marker, aldehyde dehydrogenase isoform 1 (ALDH1), in human epithelial cancers.</a> PLoS One. 5 (4), e10277 (2010).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1+expression+correlates+with+favorable+prognosis+in+ovarian+cancers.">ALDH1 expression correlates with favorable prognosis in ovarian cancers.</a> Modern Pathology. 22 (6), 817-823 (2009).</li><li>Gardner, S. H., Reinhardt, C. J., Chan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+activity-based+sensing+probes+for+isoform-selective+imaging+of+enzymatic+activity.">Advances in activity-based sensing probes for isoform-selective imaging of enzymatic activity.</a> Angewandte Chemie. 60 (10), 5000-5009 (2021).</li><li>Reid, B. M., Permuth, J. B., Sellers, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+ovarian+cancer:+a+review.">Epidemiology of ovarian cancer: a review.</a> Cancer Biology and Medicine. 14 (1), 9-32 (2017).</li><li>Tulake, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+stem+cell+markers+ALDH1A1+and+OCT4+as+potential+biomarkers+for+the+early+detection+of+cervical+carcinoma.">Upregulation of stem cell markers ALDH1A1 and OCT4 as potential biomarkers for the early detection of cervical carcinoma.</a> Oncology Letters. 16 (5), 5525-5534 (2018).</li><li>Nwani, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+ALDH1A1+inhibitor+targets+cells+with+stem+cell+characteristics+in+ovarian+cancer.">A novel ALDH1A1 inhibitor targets cells with stem cell characteristics in ovarian cancer.</a> Cancers. 11 (4), 502 (2019).</li><li>Roy, M., Connor, J., Al-Niaimi, A., Rose, S. L., Mahajan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1A1+(ALDH1A1)+expression+by+immunohistochemistry+is+associated+with+chemo-refractoriness+in+patients+with+high-grade+ovarian+serous+carcinoma.">Aldehyde dehydrogenase 1A1 (ALDH1A1) expression by immunohistochemistry is associated with chemo-refractoriness in patients with high-grade ovarian serous carcinoma.</a> Human Pathology. 73, 1-6 (2018).</li><li>Landen Jr, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+aldehyde+dehydrogenase+cancer+stem+cells+in+ovarian+cancer.">Targeting aldehyde dehydrogenase cancer stem cells in ovarian cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 9 (12), 3186-3199 (2010).</li><li>Condello, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin-regulated+ALDH1A1+is+a+target+in+ovarian+cancer+spheroids.">&#946;-catenin-regulated ALDH1A1 is a target in ovarian cancer spheroids.</a> Oncogene. 34 (18), 2297-2308 (2015).</li><li>Storms, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+primitive+human+hematopoietic+progenitors+on+the+basis+of+aldehyde+dehydrogenase+activity.">Isolation of primitive human hematopoietic progenitors on the basis of aldehyde dehydrogenase activity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 96 (16), 9118-9123 (1999).</li><li>Duellman, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioluminescence+assay+for+aldehyde+dehydrogenase+activity.">A bioluminescence assay for aldehyde dehydrogenase activity.</a> Analytical Biochemistry. 434 (2), 226-232 (2013).</li><li>Minn, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+red-shifted+fluorescent+substrate+for+aldehyde+dehydrogenase.">A red-shifted fluorescent substrate for aldehyde dehydrogenase.</a> Nature Communications. 5, 3662 (2014).</li><li>Doll&#233;, L., Boulter, L., Leclercq, I. A., van Grunsven, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+of+ALDH+substrates+and+their+potential+to+study+maturational+lineage+biology+in+stem+and+progenitor+cells.">Next generation of ALDH substrates and their potential to study maturational lineage biology in stem and progenitor cells.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 308 (7), 573-578 (2015).</li><li>Yagishita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+highly+selective+fluorescent+probe+enabling+flow-cytometric+isolation+of+ALDH3A1-positive+viable+cells.">Development of highly selective fluorescent probe enabling flow-cytometric isolation of ALDH3A1-positive viable cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 28 (2), 302-306 (2017).</li><li>Maity, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiophene+bridged+aldehydes+(TBAs)+image+ALDH+activity+in+cells:+Via+modulation+of+intramolecular+charge+transfer.">Thiophene bridged aldehydes (TBAs) image ALDH activity in cells: Via modulation of intramolecular charge transfer.</a> Chemical Science. 8 (10), 7143-7151 (2017).</li><li>Koenders, S. T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+retinal-based+probe+for+the+profiling+of+retinaldehyde+dehydrogenases+in+cancer+cells.">Development of a retinal-based probe for the profiling of retinaldehyde dehydrogenases in cancer cells.</a> ACS Central Science. 5 (12), 1965-1974 (2019).</li><li>Oe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep-red/near-infrared+turn-on+fluorescence+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1A1+in+cancer+stem+cells.">Deep-red/near-infrared turn-on fluorescence probes for aldehyde dehydrogenase 1A1 in cancer stem cells.</a> ACS Sensors. 6 (9), 3320-3329 (2021).</li><li>Yagishita, A., Ueno, T., Tsuchihara, K., Urano, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+BODIPY-based+blue+fluorescent+probes+for+aldehyde+dehydrogenase+1-expressing+cells.">Amino BODIPY-based blue fluorescent probes for aldehyde dehydrogenase 1-expressing cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 32 (2), 234-238 (2021).</li><li>Okamoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+breast+cancer+stem+cells+using+a+newly+developed+long-acting+fluorescence+probe,+C5S-A,+targeting+ALDH1A1.">Identification of breast cancer stem cells using a newly developed long-acting fluorescence probe, C5S-A, targeting ALDH1A1.</a> Anticancer Research. 42 (3), 1199-1205 (2022).</li></ol>

Panselektivitet är en stor begränsning av många ALDH-sonder; Flera isoformselektiva exempel har dock nyligen rapporterats 32,33,34,35,36,37,38,39,40,41. Den isoformselektiva fluorogena...

Cancerstamceller (CSC) är en subpopulation av tumörceller som uppvisar stamcellsliknande egenskaper1. I likhet med sina icke-cancerösa motsvarigheter har CSC den extraordinära förmågan att självförnya och föröka sig. Tillsammans med andra inbyggda mekanismer, såsom uppreglering av ATP-bindande kassetttransportörer, är CSC ofta förskonade från initiala kirurgiska debulkinginsatser, liksom efterföljande adjuvansbehandling2. På grund av deras kritiska roll i behandlingsresistens3, återfall4 och metastaser5 har CSC blivit en prioritet inom cancerforskningen. Även om det finns en mängd olika cellyteantigener (t.ex. CD133) som kan användas för att identifiera CSC6, har utnyttjande av den enzymatiska aktiviteten hos aldehyddehydrogenaser (ALDH) som finns i cytoplasman framkommit som ett attraktivt alternativ7. ALDH är en superfamilj av 19 enzymer som är ansvariga för att katalysera oxidationen av reaktiva endogena och xenobiotiska aldehyder till motsvarande karboxylsyraprodukter8.
I allmänhet är aldehydavgiftning avgörande för att skydda celler från oönskade tvärbindningshändelser och oxidativ stress som kan skada stamcellsintegriteten9. Dessutom kontrollerar 1A1-isoformen retinsyrametabolismen, vilket i sin tur påverkar stamhet via retinaldehydsignalering10. AlDeSense 11,12, en liten molekylär aktivitetsbaserad avkänningssond (ABS) för att selektivt detektera ALDH1A1-aktivitet, utvecklades nyligen. ABS-konstruktioner uppnår analytdetektering genom en kemisk förändring snarare än en bindningshändelse, vilket möjliggör hög selektivitet och minskade svar utanför målet13,14,15,16. Designprincipen för den isoformselektiva fluorogena sonden bygger på en donator-fotoinducerad elektronöverföring (d-PeT) släckningsmekanism17, härrörande från aldehydfunktionsgruppen, som tjänar till att undertrycka sondens fluorescerande signatur18. Vid ALDH1A1-medierad omvandling till karboxylsyran frigörs strålningsavslappning för att ge en mycket fluorescerande produkt. Eftersom d-PeT-släckning aldrig är 100% effektiv, beaktades den kvarvarande fluorescensen som kan leda till möjliga falska positiva resultat vid upprättandet av denna analys genom utveckling av Ctrl-AlDeSense, ett icke-responsivt reagens med matchande fotofysiska egenskaper (t.ex. kvantutbyte) och ett identiskt cytoplasmatiskt färgningsmönster i celler. När den används i tandem kan denna unika parning på ett tillförlitligt sätt skilja celler med hög ALDH1A1-aktivitet från de som uppvisar låga nivåer via fluorimetri, molekylär avbildning och flödescytometri. Flera viktiga fördelar är förknippade med användningen av isoformselektiva aktiverbara färgämnen jämfört med traditionella immunhistokemiska metoder. Till exempel antas CSC vara begravda djupt inne i en tumör och är därmed mer tillgängliga för en liten molekyl i förhållande till stora antikroppar19. Dessutom modifierar den välta fluorescerande produkten inte kovalent någon cellulär komponent, vilket innebär att den lätt kan avlägsnas via tvättcykler för att lämna en CSC i ett oförändrat tillstånd. Slutligen identifierar turn-on-svaret endast livskraftiga celler och funktioner, ungefär som MTT-analysen, på grund av dess beroende av NAD + -kofaktorn.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64713/64713fig01.jpg"> Figur 1: Schematisk demonstration av fluorescerande tändning av AlDeSense. Det isoformselektiva färgämnet aktiveras av ALDH1A1 och kan användas för att identifiera förhöjd ALDH1A1-aktivitet i äggstockscancerceller via fluorimetri, molekylär avbildning och flödescytometri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64713/64713fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna figur.</a>
I tidigare arbete stratifierade den isoformselektiva fluorogena sondanalysen framgångsrikt ALDH höga (ALDH +) celler från ALDH låga (ALDH-) celler i K562 humana kroniska leukemiceller, MDA-MB-231 humana bröstcancerceller och B16F0 murina melanomceller. Detta är viktigt eftersom högt ALDH1A1-proteinuttryck för många cancertyper innebär en sämre klinisk prognos20. Detta förutsätter att förhöjda nivåer av ALDH1A1 indikerar CSC som kan undvika behandling, utveckla resistens och sprida sig i hela kroppen. Men när det gäller äggstockscancer finns det studier som rapporterar motsatt resultat (högt ALDH1A1-uttryck är kopplat till förbättrad patientöverlevnad)21,22,23,24. Även om detta kan verka motsägelsefullt vid första anblicken, korrelerar uttrycket inte nödvändigtvis med enzymaktivitet, vilket kan påverkas av förändringar i tumörmikromiljön (t.ex. pH-flöde, syregradienter), tillgängligheten av NAD + -kofaktorn eller aldehydsubstraten, nivåer av karboxylsyror (produkthämning) och posttranslationella modifieringar som kan förändra enzymaktiviteten25 . Dessutom är äggstockscancer uppdelad i fem huvudsakliga histologiska typer (höggradig serös, låggradig serös, endometrioid, klar cell och mucinös), som vi antar kommer att innehålla varierande nivåer av ALDH1A1-aktivitet26. Med målet att undersöka ALDH1A1-aktivitet i äggstockstumörer användes en isoformselektiv fluorogen sondanalys för att identifiera ALDH1A1 + -populationer i en panel med fem äggstockscancercellinjer som tillhör de olika histologiska typerna som nämns ovan. Cellinjerna som testades i denna studie inkluderar BG-1, Caov-3, IGROV-1, OVCAR-3 och PEO4-celler, som täcker klarcelliga och serösa histotyper. Här betonades sondens mångsidighet och generaliserbarhet för att identifiera CSC för de forskare som försöker utföra liknande studier i andra odödliga cancercellinjer samt patientprover. Användningen av AlDeSense kommer att belysa de biokemiska vägar som är involverade i CSC-underhåll i komplexa vävnadsmikromiljöer och potentiellt fungera som ett kliniskt verktyg för att bestämma prognos och mäta canceraggressivitet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#160;0.25% Trypsin, 0.1% EDTA in HBSS w/o Calcium, Magnesium and Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>&#160;&#160;25-050-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Phosphate Buffer Saline</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CMX12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuSpin Micro 17R</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-100-675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BG-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Paul Hergenrother Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioLite 25cm2 Flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>130189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet 1300 series A2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caov-3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell homogenizer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5180R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22627040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contrl-AlDeSense</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Synthesized in-house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCS Express 6</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by UIUC CMtO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FL microscope</td>
			<td>EVOS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorometer</td>
			<td>Photon Technology International</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma Series II Water-Jacketed CO2&#160;Incubator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IGROV-1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Innova 42R Incubated Shaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 700</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSR II</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek Chambered #1.0 Borosicilate Coverglass System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>155383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVCAR-3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A gift provided by the Prof. Erik Nelson Lab, University of Illinois Urbana-Champaign</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce Protease Inhibitor Tablets</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A32963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Lysine</td>
			<td>Cultrex</td>
			<td>3438-100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 10% FBS, 1% P/S</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 20% FBS, 1% P/S, 0.01 mg/mL Insulin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepared by UIUC cell media facility</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of aldesense to stratify ovarian cancer cells based on aldehyde dehydrogenase 1a1 activity

Återfall efter cancerbehandling tillskrivs ofta persistensen av en subpopulation av tumörceller som kallas cancerstamceller (CSC), som kännetecknas av deras anmärkningsvärda tumörinitierande och självförnyelsekapacitet. Beroende på tumörens ursprung (t.ex. äggstockar) kan CSC-ytans biomarkörprofil variera dramatiskt, vilket gör identifieringen av sådana celler via immunhistokemisk färgning till en utmanande strävan. Tvärtom har aldehyddehydrogenas 1A1 (ALDH1A1) framstått som en utmärkt markör för att identifiera CSC, på grund av dess bevarade uttrycksprofil i nästan alla stamceller inklusive CSC. ALDH1A1-isoformen tillhör en superfamilj av 19 enzymer som är ansvariga för oxidationen av olika endogena och xenobiotiska aldehyder till motsvarande karboxylsyraprodukter. Chan et al. utvecklade nyligen AlDeSense, en isoform-selektiv "turn-on" sond för detektering av ALDH1A1-aktivitet, samt ett icke-reaktivt matchande kontrollreagens (Ctrl-AlDeSense) för att ta hänsyn till färgning utanför målet. Detta isoformselektiva verktyg har redan visat sig vara ett mångsidigt kemiskt verktyg genom detektion av ALDH1A1-aktivitet i K562 myeloiska leukemiceller, mammosfärer och melanom-härledda CSC-xenotransplantat. I denna artikel visades sondens användbarhet genom ytterligare fluorimetri, konfokalmikroskopi och flödescytometriexperiment där den relativa ALDH1A1-aktiviteten bestämdes i en panel med fem äggstockscancercellinjer.

Total ALDH1A1-aktivitet av äggstockscancercellhomogenat De genomsnittliga vikningsvarven för varje cellinje erhållen från denna analys är: BG-1 (1,12 ± 0,01); IGROV-1 (1,30 ± 0,03); Caov-3 (1,72 ± 0,06); PEO4 (2,51 ± 0,29); och OVCAR-3 (10,25 ± 1,46) (figur 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64713/64713fig02.jpg"> Figur 2: F...

Watch this Scientific Journal Video about Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity at JoVE.com

Application of AlDeSense to Stratify Ovarian Cancer Cells Based on Aldehyde Dehydrogenase 1A1 Activity

Metoder för att mäta ALDH1A1-aktivitet i levande celler är kritiska inom cancerforskning på grund av dess status som en biomarkör för stamhet. I denna studie använde vi en isoformselektiv fluorogen sond för att bestämma de relativa nivåerna av ALDH1A1-aktivitet i en panel med fem äggstockscancercellinjer.

Tillämpning av AlDeSense för att stratifiera äggstockscancerceller baserat på aldehyddehydrogenas 1A1-aktivitet

Relapse after cancer treatment is often attributed to the persistence of a subpopulation of tumor cells known as cancer stem cells (CSCs), which are ...

Vårt protokoll tillåter användare att mäta ALDH1A1-aktivitet, en stamcellsbiomarkör med olika modaliteter som sträcker sig från flödescytometri till molekylär avbildning av levande celler. De största fördelarna med detta tillvägagångssätt är att sondaktivering involverar vändningsresponsen som kännetecknas av ett högt signal-bakgrundsförhållande, såväl som selektiv ALDH1A1-isoformdetektering. Demonstrera denna procedur kommer Michael Lee, Sarah Gardner och Rodrigo Tapia Hernandez doktorander från mitt laboratorium.Till att börja med, aspirera tillväxtmediet från de odlade cellerna av intresse i åtta brunnskammarglas. Tillsätt 500 mikroliter serumfria medier per brunn kompletterat med en selektiv fluorogen sond med två mikromolar isoformer eller en icke-reaktiv kontrollsond. Inkubera glaset vid rumstemperatur i 30 minuter.Efter inkubation, fortsätt omedelbart till konfokalmikroskopavbildning. Leta reda på cellerna med 10 x förstoring. FITC-kanalen och överförda ljuskanaler krävs för detta experiment.Lokalisera och fokusera cellerna med hjälp av den överförda ljuskanalen för att fokusera på samma Z-plan under hela experimentet för att ta bort bias. Justera lasereffekten och FITC-förstärkningen till lämplig inställning där signalen från AlDeSense AM-kontrollsamplingarna är minimalt detekterbar, samtidigt som signalen visas i AlDeSense AM-prover. Justera varje parameter genom att skjuta motsvarande stapel.Inställningarna kan behöva justeras några gånger för att identifiera rätt parametrar. När du har optimerat slutför du resten av experimentet inom den cellinjen med identiska parametrar. Ta tre bilder per brunn för totalt tre brunnar per behandlingstillstånd och spara bilderna.Se till att fokusera med den överförda ljuskanalen endast när du växlar mellan plan och brunnar för att undvika partiskhet. Därefter använder du bildbehandlingsprogrammet dela CZI-filen i olika kanaler och räkna det totala antalet celler och fluorescerande celler. För att bestämma procentandelen aldehyddehydrogenas 1A1-positiva celler, dela antalet fluorescerande celler med det totala antalet celler i varje bild.Räkna på samma sätt för varje bild för att undvika förvirrande variabler. Ta ut en T25-cellodlingskolv som innehåller cellerna i inkubatorn. Lägg till trypsin för cellavskiljning och räkna cellerna med en automatiserad cellräknare.Pellet sedan cellerna i ett 15 ml centrifugrör genom centrifugering vid 180G i fem minuter vid 25 grader Celsius. Återsuspendera cellerna i en milliliter av en två mikromolar sond eller kontrollsondlösning i PBS. Gunga cellerna vid rumstemperatur i 60 minuter för att säkerställa jämn exponering för färgämnet.Efter inkubationsperioden, pellet cellerna genom centrifugering vid 180 G i fem minuter vid 25 grader Celsius. Återsuspendera sedan cellerna i 0,5 ml PBS. Kör cellerna genom en 35 mikrometer nylonnätsil på ett rör placerat på is för att avlägsna cellklumpar som kan täppa till flödescytometern.Slå på flödescytometerinstrumentet och kör startprotokollet. Kontrollera om mantelvätska och tom midja. Kör linjerna med 10% blekmedel och vatten i fem minuter vardera.Kör sedan kvalitetskontrollpärlor för att säkerställa korrekt funktion. På inställningsfliken väljer du framåtriktad spridning av sidospridning och FITC för fluorescensfiltret. Rita ett spridningsområde framåt jämfört med ett sidospridningsområdesdiagram för huvudcellpopulationen nära mitten av diagrammet.Rita sedan ett spridningsområde framåt jämfört med ett diagram med spridningsbredd framåt för de smala horisontella band som indikerar singletter. Rita sedan ett FITC-område kontra ett framåtspridningsområdesdiagram för att observera fördelningen av celler sorterade efter den isoformselektiva fluorogena sonden. Därefter ritar du ett FITC-områdeshistogram för att observera befolkningsskiftet baserat på FITC och bestämma procentandelen aldehyddehydrogenas 1A1-positiva celler.För att optimera FITC-lasereffekten, kör ett prov med sonden så att histogramkurvans högra svans ligger nära den maximala FITC-områdessignalen. Lasereffektoptimeringssteget kan behöva upprepas flera gånger, men lasereffekten bör inte ändras mellan prover när en inställning har utsetts för ett experiment. Lägg sedan till ett prov i sikten och kör det med kontrollsonden.En befolkningsförändring bör kunna observeras för att avslöja det maximala dynamiska omfånget. Kör varje prov för 10 000 räkningar gjorda i tre exemplar. Efter avslutad provinsamling, kör linjerna med 10% blekmedel och vatten i fem minuter vardera och stäng sedan av instrumentet.Bearbeta data med hjälp av flödescytometriprogramvara och gång den önskade cellpopulationen. Använd rektangelgrindvalet och ställ in aldehyddehydrogenas 1A1 negativ gång, så att mer än 99,5% av händelserna i kontrollsondproverna inträffar inom denna grind. De återstående cellerna kommer att betraktas som aldehyddehydrogenas 1A1-positiva.Applicera samma grindar på sondprovet. Att kvantifiera antalet händelser som anses vara aldehyddehydrogenas 1A1-negativa och 1A1-positiva. De genomsnittliga vikningsvarven för varje cellinje bestämdes för att kvantifiera den totala aldehyddehydrogenas 1A1-aktiviteten.Procentandelen aldehyddehydrogenas 1A1-positiva celler bestämdes i varje cellinje genom att ställa in lasereffekten och förstärkningen. För att minimera signalen i det AlDeSense AM-behandlade provet optimerades fluorescenssignalen i de AlDeSense AM-behandlade cellerna. Genom att räkna antalet aldehyddehydrogenas A1A-positiva celler bestämdes andelen aldehyddehydrogenas A1A-positiva celler.Med applicering av den isoformselektiva fluorogena sonden kvantifierades aldehyddehydrogenas 1A1-positiva cellpopulationen inom varje cellinje genom grindning för de översta 0,5% av de ljusaste cellerna inom kontrollpopulationen AlDeSense AM-behandlad. Analys av panelen av äggstockscancerceller har avslöjat andelen aldehyddehydrogenas 1A1-positiva celler. Från de erhållna resultaten av de testade cancercellinjerna kan man dra slutsatsen att BG-1 har den lägsta aldehyddehydrogenas 1A1-aktiviteten och den lägsta aldehyddehydrogenas-1A1-positiva befolkningen.Dessutom avslöjade konfokal avbildning och flödescytometri den största andelen aldehyddehydrogenas 1A1-positiva celler i Caov-3-celler. Men cellinjens totala aktivitet var bara den tredje högsta. Alternativt innehöll OVCAR-3-celler den tredje högsta aldehyddehydrogenas 1A1-positiva populationen, men uppvisade den högsta totala aktiviteten.AlDeSense är en mångsidig och generaliserbar sond för att identifiera CSC i odödliga cellinjer och i patientprover. Vi hoppas kunna se det som ett prognostiskt verktyg i klinisk miljö.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murina Experimentellt av ursprungliga tumören utveckling och peritonealdialys metastasering<em&gt; via</em&gt; Orthotopic Ympning med ovarialcancer celler

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Med hjälp av CRISPR/Cas9 gen redigering för att undersöka onkogena aktiviteten av muterade Calreticulin i cytokin beroende av hematopoetiska celler

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Karakterisering av tumörceller med hjälp av en medicinsk tråd för att fånga cirkulerande tumörceller: en 3D strategi baserad på immunofluorescens och DNA fisk

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analys av Cancer Cell Invasion och anti metastaserande Drug Screening med hjälp av Hydrogel Micro-kammare Array (HMCA)-baserade plattor

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Ett tredimensionellt thymic kultur system för att generera murin inducerad pluripotenta stamcells härledda tumör antigen-specifika thymic emigranter

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Använda humana inducerade pluripotenta stamceller för generering av tumör antigen-specifika T-celler

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Beredning av Mitokona från äggstocks cancer vävnader och kontrollera äggstocksvävnad för kvantitativ proteomik analys

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...

Orthotopic Implantation of Patient-Derived Cancer Cells in Mice Recapitulates Advanced Colorectal Cancer

Ortotopisk implantation av patienthärledda cancerceller hos möss rekapitulerar avancerad kolorektal cancer

Over the last decade, more sophisticated preclinical colorectal cancer (CRC) models have been established using patient-derived cancer cells and 3D ...

Quantifying Replication Stress in Ovarian Cancer Cells Using Single-Stranded DNA Immunofluorescence

Kvantifiering av replikationsstress i äggstockscancerceller med hjälp av enkelsträngad DNA-immunofluorescens

Replication stress is a hallmark of several ovarian cancers. Replication stress can emerge from multiple sources, including double-strand breaks, ...

Kvantifiering av telomerlängd med hjälp av icke-radioaktiv kemiluminescensdetektion

Optimization of Performance Parameters of the TAGGG Telomere Length Assay

Författare i fokus: Optimering av prestandaparametrar för TAGGG telomerlängdsanalys  

Optimering av prestandaparametrar för TAGGG-telomerlängdanalysen

Telomeres are repetitive sequences which are present at chromosomal ends; their shortening is a characteristic feature of human somatic cells. Shortening ...