Name: one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster
Uploaded: 2024-01-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

我们感谢 George Watase 和 Josie Clowney 在协议制定的初始阶段进行的讨论。这项工作得到了美国国立卫生研究院（授予 R35GM133737 号 S.Y.）、Alfred P. Sloan 奖学金（授予 S.Y.）和麦克奈特学者奖（授予 S.Y.）的资金支持。

1. 基因编辑试剂的设计与构建
注意：要进行内源性标记，必须鉴定所需基因的各种亚型。根据实验的具体目标，荧光标签可以在内部或在所选蛋白质亚型的 N 端或 C 端掺入。为了获得最佳的CRISPR介导的编辑，将两个sgRNA适当地定位在预期的敲入位点附近至关重要。随后，为了能够通过同源重组进行编辑，应制备包含与靶基因同源的序列以及荧光标签的供体载体。以下是这些过?...

<ol>
	<li>Chudakov, D. M., Matz, M. V., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+and+their+applications+in+imaging+living+cells+and+tissues.">Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues.</a> Physiol Rev. 90 (3), 1103-1163 (2010).</li><li>Costantini, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+palette+of+fluorescent+proteins+optimized+for+diverse+cellular+environments.">A palette of fluorescent proteins optimized for diverse cellular environments.</a> Nat Commun. 6, 7670 (2015).</li><li>Gibson, T. J., Seiler, M., Veitia, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transience+of+transient+overexpression.">The transience of transient overexpression.</a> Nat Methods. 10 (8), 715-721 (2013).</li><li>Huh, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+analysis+of+protein+localization+in+budding+yeast.">Global analysis of protein localization in budding yeast.</a> Nature. 425 (6959), 686-691 (2003).</li><li>Venken, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiMIC:+a+highly+versatile+transposon+insertion+resource+for+engineering+Drosophila+melanogaster+genes.">MiMIC: a highly versatile transposon insertion resource for engineering Drosophila melanogaster genes.</a> Nat Methods. 8 (9), 737-743 (2011).</li><li>Quinones-Coello, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+strategies+for+protein+trapping+in+Drosophila.">Exploring strategies for protein trapping in Drosophila.</a> Genetics. 175 (3), 1089-1104 (2007).</li><li>Sarov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+resource+for+the+analysis+of+protein+localisation+in+Drosophila.">A genome-wide resource for the analysis of protein localisation in Drosophila.</a> Elife. 5, e12068 (2016).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nat Protoc. 8, 2281-2308 (2013).</li><li>Port, F., Chen, H. M., Lee, T., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+germline+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient germline and somatic genome engineering in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), E2967-E2976 (2014).</li><li>Gratz, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+specific+and+efficient+CRISPR/Cas9-catalyzed+homology-directed+repair+in+Drosophila.">Highly specific and efficient CRISPR/Cas9-catalyzed homology-directed repair in Drosophila.</a> Genetics. 196 (4), 961-971 (2014).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+CRISPR-based+strategy+to+insert+small+and+large+fragments+of+DNA+using+short+homology+arms.">An efficient CRISPR-based strategy to insert small and large fragments of DNA using short homology arms.</a> Elife. 8, e51539 (2019).</li><li>Lamb, A. M., Walker, E. A., Wittkopp, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+and+strategies+for+scarless+allele+replacement+in+Drosophila+using+CRISPR/Cas9.">Tools and strategies for scarless allele replacement in Drosophila using CRISPR/Cas9.</a> Fly (Austin). 11 (1), 53-64 (2017).</li><li>Xiao, Y., Yuan, Y., Jimenez, M., Soni, N., Yadlapalli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+proteins+regulate+spatiotemporal+organization+of+clock+genes+to+control+circadian+rhythms.">Clock proteins regulate spatiotemporal organization of clock genes to control circadian rhythms.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (28), e2019756118 (2021).</li><li>Costantini, L. M., Fossati, M., Francolini, M., Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+tendency+of+fluorescent+proteins+to+oligomerize+under+physiologic+conditions.">Assessing the tendency of fluorescent proteins to oligomerize under physiologic conditions.</a> Traffic. 13 (5), 643-649 (2012).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19 (11), 649-655 (2009).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+toolkit+for+Drosophila+gene+tagging+using+synthesized+homology+donor+constructs+for+CRISPR-mediated+homologous+recombination.">An expanded toolkit for Drosophila gene tagging using synthesized homology donor constructs for CRISPR-mediated homologous recombination.</a> Elife. 11, e76077 (2022).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Curr Biol. 18 (2), R84-R93 (2008).</li><li>Carvalho, G. B., Ja, W. W., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-lethal+PCR+genotyping+of+single+Drosophila.">Non-lethal PCR genotyping of single Drosophila.</a> Biotechniques. 46 (4), 312-314 (2009).</li><li>Gummadova, J. O., Coutts, G. A., Glossop, N. R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Drosophila+Clock+promoter+reveals+heterogeneity+in+expression+between+subgroups+of+central+oscillator+cells+and+identifies+a+novel+enhancer+region.">Analysis of the Drosophila Clock promoter reveals heterogeneity in expression between subgroups of central oscillator cells and identifies a novel enhancer region.</a> J Biol Rhythms. 24 (5), 353-367 (2009).</li></ol>

结果展示了一种简化的、简单的基于CRISPR的一步法策略，用于标记 果蝇的内源性基因。在方案中，我们使用两种gRNA来更有效地诱导DNA双链断裂和同源重组。将gRNA和供体质粒注射到果蝇胚胎中，果蝇胚胎在其种系中表达Cas9酶。这些胚胎随后在标准条件下培养直到成年，此时它们与平衡蝇杂交以产生第一代（F1）后代。对每个F1标本的中腿进行PCR基因分型，以筛选转基因果蝇。与目前使用两?...

荧光蛋白已成为可视化生物体内细胞中蛋白质定位、动力学和蛋白质-蛋白质相互作用的强大工具 1,2。用荧光蛋白标记内源性基因，可以对具有亚细胞分辨率的细胞过程进行长期实时成像。此外，与过表达和免疫染色方法相比，这些内源性基因标记技术具有多项优势。例如，蛋白质的过表达可能导致蛋白质错误折叠、非特异性蛋白质-蛋白质相互作用和错误定位3。迄今为止，研究人员已经能够为一些模式生物（例如出芽酵母）创建与荧光蛋白融合的大量内源性基因库，这些基因可以进行有效的同源重组4。在黑腹果蝇的情况下，已经设计了各种工具，如MiMICs5、基于转座子的增强子陷阱6和fosmids7来荧光标记基因。
基于 CRISPR-Cas9 的工具的开发使得在各种模式生物中有效地进行基因组编辑成为可能，包括标记内源性蛋白质 8,9。Cas9 是一种 RNA 引导的酶，它以高效和特异性的方式切割双链DNA8，然后可以通过非同源末端连接 （NHEJ） 通路进行修复，从而导致点突变或缺失。或者，同源定向修复 （HDR） 通路允许将异源 DNA 整合到染色体中。
过去在模式生物果蝇黑腹果蝇中基于CRISPR的基因标记方法依赖于两步过程10,11,12。这涉及使用可辨别的眼睛颜色标记 Dsred 来检测成功的 HDR 事件。之后，将使用 Cre/loxP 重组系统切除 Dsred 标记。为了简化和加快这一过程，在这里，我们提出了一种更简单、更有效的方法。这种方法避免了对致命基因分型的需要，并允许直接筛选单个果蝇。具体来说，我们采用基于PCR的方法从果蝇中腿的一小部分提取DNA，使我们能够对单个果蝇进行基因分型。值得注意的是，此过程不会损害采样苍蝇的活力、运动或繁殖能力。只有通过这种方法确定的适当个体才能进一步发展为稳定的种群。
在这里，我们提出了一个用于生成荧光蛋白标记果蝇的详细方案，其中内源性基因用荧光报告基因标记。该技术使用 CRISPR-Cas9 基因组编辑将任何所需的荧光团标签融合到内源性基因的 N 端或 C 端。下面，我们描述了gRNA质粒和供体质粒的设计和构建，选择CRISPR阳性果蝇的一步筛选策略，以及建立稳定细胞系的步骤。具体来说，我们描述了在C末端用荧光团标记内源性核心时钟 果蝇 基因 周期的策略。我们还简要描述了需要进行的对照实验，以确认标记的蛋白质是功能性的，以及实时成像技术，以可视化完整 果蝇 大脑中活时钟神经元中的周期蛋白13。这里描述的方案也广泛适用于通过CRISPR-Cas9基因组编辑筛选特定DNA片段的缺失和插入的候选者。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA pH8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9260G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-alpha Competent&#160;E. coli&#160;(High Efficiency)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>C2987H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well deep well plate</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>701354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3539S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DreamTaq Green PCR Master Mix (2X)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>K1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sucrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP220-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EcoRI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3101S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A142-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#39;s Drosophila Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21720001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XbaI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0145S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster

活细胞中蛋白质亚细胞定位、动力学和调控的研究已经随着允许标记内源性基因以产生荧光融合蛋白的技术的出现而发生了深刻的变化。这些方法使研究人员能够实时可视化蛋白质行为，从而为它们在细胞环境中的功能和相互作用提供有价值的见解。目前许多基因标记研究采用两步过程，其中在第一步中使用可见标记（例如眼睛颜色变化）来识别转基因生物，并在第二步中切除可见标记。在这里，我们提出了一种一步法方案，用于在 黑腹果蝇中进行精确和快速的内源性基因标记，从而可以筛选没有可见眼标记的工程系，与过去的方法相比具有显着优势。为了筛选成功的基因标记事件，我们采用基于PCR的技术，通过分析中腿的一小段来对个体果蝇进行基因分型。通过筛选标准的苍蝇随后用于生产稳定的种群。在这里，我们详细介绍了CRISPR编辑质粒的设计和构建，以及用于筛选和确认工程系的方法。总之，该协议显着提高了 果蝇 中内源性基因标记的效率，并能够研究体内细胞过程。

在我们的实验中，我们通常发现筛选所有染色体（X、II、III）上的各种内源性标记基因的成功率为 ~20%-30%。这个过程的效率可能因多种因素而异，例如gRNA选择、基因性质和注射质量。在这里，我们说明了我们用 mNeonGreen 荧光团13 标记内源期基因的策略的结果。位于黑腹果蝇X染色体上的周期基因在生物钟中起着关键作用。果蝇?...

Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

在这里，我们提出了一种简化的果蝇内源性基因标记方案，该方案利用基于PCR的技术对成功的基因修饰进行无标记鉴定，从而促进了稳定的敲入系的开发。

基于CRISPR的一步法黑腹果蝇内源性基因标记策略

The study of protein subcellular localization, dynamics, and regulation in live cells has been profoundly transformed by the advent of techniques that ...

该协议的目的是生成内源性编辑的飞线。我们以荧光蛋白敲入为例，但它也可以应用于其他敲入、敲除以及突变生成。我们的方案是基于CRISPR同源重组的方法，因此对突变位点几乎没有限制。此外，我们的方案大大减少了基因分型步骤所涉及的时间和精力。首先，打开苍蝇CRISPR网站，为果蝇设计sgRNA，并输入围绕所需敲入位置的大约100个碱基对序列。使用五个主要鸟嘌呤选项选择 CRISPR 靶标。单击“查找 CRISPR 靶标”按钮以生成可能的 sgRNA 序列列表。然后单击每个序列的评估按钮，并选择两个脱靶为零的 sgRNA。由于天然蛋白质表达水平通常要低得多，因此请选择明亮且光稳定且适合实验设置的荧光标签。接下来，设计一个接头，将表位标签连接到荧光标记物以进行生化分析。使用2至20个氨基酸的连接肽，包括甘氨酸和丝氨酸等氨基酸。为了设计果蝇的供体载体，组织连接肽和荧光标签的DNA序列，并确保两端的同源序列。修改供体质粒内的任何PAM序列，以维持所得蛋白质氨基酸序列。接下来，根据标签位置定位起始密码子和终止密码子。对于内部标记，请确保荧光标记与靶基因的编码序列在框架中。对于 N 末端标记，将荧光标签放在内源性起始密码子之后。对于 C 末端标记，将荧光标签放在自然终止密码子之前。确保只保留一个起始密码子，以避免潜在的翻译问题。使用基于替代限制性内切酶的克隆方法将 sgRNA 序列插入质粒 U6 Bbs1-chiRNA 质粒中。创建sgRNA质粒后，按照制造商的说明在DH5-α大肠杆菌中转化质粒。使用 T3 或 T7 标准测序引物通过 Sanger 测序验证所得克隆。要创建供体质粒，请使用具有所需序列的双链 DNA，并将其整合到质粒 Bluesript 2SK 阴性多克隆位点中。对供体质粒进行测序，以确保 sgRNA 或 PAM 序列被正确修饰，并且质粒中不存在 SNP。接下来，取注射有构建的gRNA和供体质粒的Cas9果蝇。用二氧化碳麻醉苍蝇，并将雄性苍蝇和处女雌性分开。要建立苍蝇杂交，将每个 G 零雄性与至少两个 FM7L 处女雌性配对在单独的窄 CT 食品瓶中。将交叉的小瓶放入通风的培养箱中，保持在25摄氏度和60%湿度下，直到F1苍蝇关闭。然后麻醉并从G zero雄性和雌性杂交中收集至少10个处女雌性后代。确保每只 F1 苍蝇都标有其亲本的详细信息并单独存储。为了筛选果蝇进行PCR，设计熔解温度约为55摄氏度的引物，包括靶基因的编辑位点。为每个苍蝇样品准备裂解缓冲液，并将 10 μL 分配到 96 孔 PCR 板的每个孔中。在腿部解剖过程中将缓冲液保持在低温。接下来，准备玻璃毛细管，一端填充蔗糖琼脂食物。将这些管子放在一个 96 孔深的孔板中，称为苍蝇旅馆。对于腿部夹层，将二氧化碳麻醉垫置于立体显微镜下。麻醉候选苍蝇，并切断它的一条中腿。之后，将腿浸入裂解缓冲液中。用一把细金属镊子握住飞翼。将苍蝇移至苍蝇旅馆，并立即用纱线密封管子。将苍蝇酒店安置在通风的培养箱中，保持在 25 摄氏度和 60% 湿度。将断腿浸没在热循环仪中的裂解缓冲溶液中。按照制造商的指示组织PCR反应，使用1.5微升蝇腿裂解物作为DNA源。对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，并根据条带大小解释结果。根据凝胶结果，从苍蝇旅馆中选择阳性果蝇，并将它们与平衡苍蝇单独杂交以产生 F2 代。使用纯合母液对编辑位点进行 Sanger 测序，以确保准确性。与野生型苍蝇进行回交验证的飞线，以去除背景突变。使用单腿PCR方案筛选每一代。成年果蝇大脑的共聚焦显微镜图像显示，在整个深夜和清晨的时间点，周期蛋白被组织成谨慎的核病灶。总体而言，如果您的基因分型PCR引物具有特异性，则该协议是稳健的。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic刺激的逃避行为<em&gt;果蝇</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

科研

神经科学

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

在自发活动的测定<em&gt;果蝇</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

简单的检测方法的社交回避的量化<em&gt;果蝇</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

在条件影响社会空间<em&gt;果蝇</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

在气味引导行为的高分辨率定量<em&gt;果蝇</em&gt;使用<em&gt; Flywalk</em&gt;范式

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

一个行为分析对机械感觉MARCM为基础的克隆<em&gt;果蝇</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

觅食路径长度协议<em&gt;果蝇</em&gt;幼虫

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

毛细管馈线分析测量的摄食<em&gt;果蝇</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

一个简单的一步解剖协议成人全安装准备<em&gt;果蝇</em&gt;脑

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

分析突触调制<em&gt;果蝇</em&gt;曝光时间延长后，光光感受器

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...