Name: one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster
Uploaded: 2024-01-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Мы благодарим Джорджа Ватасе и Джози Клоуни за дискуссии на начальных этапах разработки протокола. Работа была поддержана средствами NIH (грант No R35GM133737 для S.Y.), Alfred P. Sloan Fellowship (для S.Y.) и McKnight Scholar Award (для S.Y.).

1. Проектирование и конструирование реагентов для редактирования генов
ПРИМЕЧАНИЕ: Для проведения эндогенного мечения необходимо идентифицировать различные изоформы нужного гена. В зависимости от конкретных целей эксперимента, флуоресцентная метка может быть встроена...

<ol>
	<li>Chudakov, D. M., Matz, M. V., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+and+their+applications+in+imaging+living+cells+and+tissues.">Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues.</a> Physiol Rev. 90 (3), 1103-1163 (2010).</li><li>Costantini, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+palette+of+fluorescent+proteins+optimized+for+diverse+cellular+environments.">A palette of fluorescent proteins optimized for diverse cellular environments.</a> Nat Commun. 6, 7670 (2015).</li><li>Gibson, T. J., Seiler, M., Veitia, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transience+of+transient+overexpression.">The transience of transient overexpression.</a> Nat Methods. 10 (8), 715-721 (2013).</li><li>Huh, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+analysis+of+protein+localization+in+budding+yeast.">Global analysis of protein localization in budding yeast.</a> Nature. 425 (6959), 686-691 (2003).</li><li>Venken, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiMIC:+a+highly+versatile+transposon+insertion+resource+for+engineering+Drosophila+melanogaster+genes.">MiMIC: a highly versatile transposon insertion resource for engineering Drosophila melanogaster genes.</a> Nat Methods. 8 (9), 737-743 (2011).</li><li>Quinones-Coello, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+strategies+for+protein+trapping+in+Drosophila.">Exploring strategies for protein trapping in Drosophila.</a> Genetics. 175 (3), 1089-1104 (2007).</li><li>Sarov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+resource+for+the+analysis+of+protein+localisation+in+Drosophila.">A genome-wide resource for the analysis of protein localisation in Drosophila.</a> Elife. 5, e12068 (2016).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nat Protoc. 8, 2281-2308 (2013).</li><li>Port, F., Chen, H. M., Lee, T., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+germline+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient germline and somatic genome engineering in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), E2967-E2976 (2014).</li><li>Gratz, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+specific+and+efficient+CRISPR/Cas9-catalyzed+homology-directed+repair+in+Drosophila.">Highly specific and efficient CRISPR/Cas9-catalyzed homology-directed repair in Drosophila.</a> Genetics. 196 (4), 961-971 (2014).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+CRISPR-based+strategy+to+insert+small+and+large+fragments+of+DNA+using+short+homology+arms.">An efficient CRISPR-based strategy to insert small and large fragments of DNA using short homology arms.</a> Elife. 8, e51539 (2019).</li><li>Lamb, A. M., Walker, E. A., Wittkopp, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+and+strategies+for+scarless+allele+replacement+in+Drosophila+using+CRISPR/Cas9.">Tools and strategies for scarless allele replacement in Drosophila using CRISPR/Cas9.</a> Fly (Austin). 11 (1), 53-64 (2017).</li><li>Xiao, Y., Yuan, Y., Jimenez, M., Soni, N., Yadlapalli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+proteins+regulate+spatiotemporal+organization+of+clock+genes+to+control+circadian+rhythms.">Clock proteins regulate spatiotemporal organization of clock genes to control circadian rhythms.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (28), e2019756118 (2021).</li><li>Costantini, L. M., Fossati, M., Francolini, M., Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+tendency+of+fluorescent+proteins+to+oligomerize+under+physiologic+conditions.">Assessing the tendency of fluorescent proteins to oligomerize under physiologic conditions.</a> Traffic. 13 (5), 643-649 (2012).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19 (11), 649-655 (2009).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+toolkit+for+Drosophila+gene+tagging+using+synthesized+homology+donor+constructs+for+CRISPR-mediated+homologous+recombination.">An expanded toolkit for Drosophila gene tagging using synthesized homology donor constructs for CRISPR-mediated homologous recombination.</a> Elife. 11, e76077 (2022).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Curr Biol. 18 (2), R84-R93 (2008).</li><li>Carvalho, G. B., Ja, W. W., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-lethal+PCR+genotyping+of+single+Drosophila.">Non-lethal PCR genotyping of single Drosophila.</a> Biotechniques. 46 (4), 312-314 (2009).</li><li>Gummadova, J. O., Coutts, G. A., Glossop, N. R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Drosophila+Clock+promoter+reveals+heterogeneity+in+expression+between+subgroups+of+central+oscillator+cells+and+identifies+a+novel+enhancer+region.">Analysis of the Drosophila Clock promoter reveals heterogeneity in expression between subgroups of central oscillator cells and identifies a novel enhancer region.</a> J Biol Rhythms. 24 (5), 353-367 (2009).</li></ol>

Результаты демонстрируют оптимизированную, простую одношаговую стратегию мечения эндогенных генов дрозофилы, основанную на CRISPR. В протоколе мы используем две гРНК для более эффективного индуцирования двухцепочечного разрыва ДНК и гомологичной рекомбинации. РНК и донорская пла?...

Флуоресцентные белки стали мощными инструментами для визуализации локализации, динамики и белок-белковых взаимодействий в клетках живых организмов 1,2. Мечение эндогенных генов флуоресцентными белками позволяет в течение длительного времени визуализировать клеточные процессы в реальном времени с субклеточным разрешением. Кроме того, эти эндогенные методы мечения генов имеют ряд преимуществ по сравнению с подходами к гиперэкспрессии и иммуноокрашиванию. Например, чрезмерная экспрессия белков может привести к неправильному сворачиванию белков, неспецифическим белок-белковым взаимодействиям и неправильной локализации3. На сегодняшний день исследователям удалось создать обширные библиотеки эндогенных генов, слитых с флуоресцентными белками для нескольких модельных организмов, таких как почковающиеся дрожжи, которые могут подвергаться эффективной гомологичнойрекомбинации. В случае с Drosophila melanogaster были разработаны различные инструменты, такие как MiMICs5, энхансерные ловушкина основе транспозонов 6 и fosmids7 для флуоресцентного мечения генов.
Разработка инструментов на основе CRISPR-Cas9 позволила эффективно выполнять редактирование генома, в том числе мечение эндогенных белков, в широком диапазоне модельных организмов 8,9. Cas9 представляет собой РНК-управляемый фермент, который расщепляет двухцепочечную ДНК высокоэффективным и специфичнымобразом8, которая затем может быть восстановлена с помощью негомологичного пути присоединения концов (NHEJ), приводящего к точечным мутациям или делециям. В качестве альтернативы, гомологический путь репарации (HDR) позволяет интегрировать гетерологичную ДНК в хромосому.
Прошлые методы мечения генов на основе CRISPR в модельном организме Drosophila melanogaster основывались на двухступенчатом процессе 10,11,12. Для этого используется различимый маркер цвета глаз Dsred для обнаружения успешных событий HDR. После этого маркер Dsred иссекался с помощью системы рекомбинации Cre/loxP. Чтобы упростить и ускорить этот процесс, мы представляем более простой и эффективный метод. Такой подход позволяет избежать необходимости в летальном генотипировании и позволяет проводить прямой скрининг отдельных мух. В частности, мы используем подход, основанный на ПЦР, для извлечения ДНК из небольшого сегмента средней ноги мухи, что позволяет нам генотипировать отдельных мух. Примечательно, что эта процедура не ставит под угрозу жизнеспособность, подвижность или репродуктивные возможности отобранной мухи. Только подходящие особи, выявленные с помощью этого метода, в дальнейшем развиваются в стабильные стаи.
Здесь мы представляем подробный протокол генерации мух, меченных флуоресцентными белками, у которых эндогенные гены помечены флуоресцентными репортерами. Этот метод использует редактирование генома CRISPR-Cas9 для слияния любой желаемой флуорофорной метки с N- или C-концом эндогенного гена. Ниже мы опишем проектирование и конструирование плазмид гРНК и плазмиды-донора, стратегию одноэтапного скрининга для отбора CRISPR-положительных мух и шаги по установлению стабильных линий. В частности, мы описываем стратегии маркировки эндогенных основных часов гена дрозофилы, и точка, с помощью флуорофора на С-конце. Мы также кратко описываем контрольные эксперименты, которые необходимо выполнить, чтобы подтвердить, что меченый белок является функциональным, и методы визуализации в реальном времени для визуализации белка Period в нейронах живых часов в интактном мозге дрозофилы 13. Протокол, описанный здесь, также широко применим для скрининга кандидатов на делеции и вставки определенных фрагментов ДНК путем редактирования генома CRISPR-Cas9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA pH8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9260G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-alpha Competent&#160;E. coli&#160;(High Efficiency)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>C2987H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well deep well plate</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>701354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3539S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DreamTaq Green PCR Master Mix (2X)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>K1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sucrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP220-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EcoRI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3101S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A142-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#39;s Drosophila Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21720001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XbaI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0145S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster

Изучение субклеточной локализации, динамики и регуляции белков в живых клетках претерпело глубокие изменения с появлением методов, позволяющих маркировать эндогенные гены для получения флуоресцентных белков слияния. Эти методы позволяют исследователям визуализировать поведение белков в режиме реального времени, предоставляя ценную информацию об их функциях и взаимодействиях в клеточной среде. Многие современные исследования по мечению генов используют двухступенчатый процесс, в котором видимые маркеры, такие как изменения цвета глаз, используются для идентификации генетически модифицированных организмов на первом этапе, а видимый маркер удаляется на втором этапе. Здесь мы представляем одноэтапный протокол для выполнения точной и быстрой эндогенной мечки генов у Drosophila melanogaster, который позволяет проводить скрининг инженерных линий без видимого маркера глаза, что дает значительное преимущество по сравнению с предыдущими методами. Для скрининга успешных событий генной мечки мы используем метод генотипирования отдельных мух на основе ПЦР, анализируя небольшой сегмент их средней ноги. Мухи, прошедшие отбор, затем используются для получения стабильных запасов. В этой статье мы подробно расскажем о проектировании и создании плазмид для редактирования CRISPR, а также о методах скрининга и подтверждения инженерных линий. В совокупности этот протокол значительно повышает эффективность эндогенного мечения генов у дрозофилы и позволяет изучать клеточные процессы in vivo.

В наших экспериментах мы обычно находили ~20%-30% успеха в скрининге различных эндогенных меченых генов на всех хромосомах (X, II, III). Эффективность этого процесса может варьироваться в зависимости от нескольких факторов, таких как отбор гРНК, природа гена и качество инъекц...

Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

В данной работе мы представляем упрощенный протокол эндогенного мечения генов дрозофилы, в котором используется метод на основе ПЦР для безмаркерной идентификации успешных генетических модификаций, способствующий развитию стабильных линий knock-in.

Одношаговая стратегия мечения эндогенных генов у Drosophila melanogaster на основе CRISPR

The study of protein subcellular localization, dynamics, and regulation in live cells has been profoundly transformed by the advent of techniques that ...

Целью этого протокола является генерация эндогенной отредактированной линии мухи. В качестве примера мы показываем флуоресцентный нокаут белка, но он также может быть применен к другим нокаутам, нокаутам, а также к генерации мутаций. Наш протокол основан на гомологичной рекомбинации CRISPR, поэтому практически нет ограничений на сайты мутаций.Более того, наш протокол значительно сократил время и усилия, затрачиваемые на этапы генотипирования. Для начала откройте веб-сайт fly CRISPR, чтобы спроектировать sgRNA для дрозофилы, и введите примерно 100 последовательностей пар оснований, окружающих желаемое место вбивания. Выберите мишени CRISPR с опцией с пятью простыми гуанинами.Нажмите кнопку найти мишени CRISPR, чтобы сгенерировать список возможных последовательностей sgRNA. Затем нажмите кнопку оценки для каждой последовательности и выберите две сгРНК, которые не имеют отклонений от целей. Поскольку естественные уровни экспрессии белка, как правило, намного ниже, выбирайте флуоресцентные метки, которые являются яркими и фотографическими, и подходят для экспериментальной установки.Затем разработайте линкер для связывания эпитопных меток с флуоресцентным маркером для биохимического анализа. Используйте пептид-линкер, содержащий от двух до 20 аминокислот, включающий такие аминокислоты, как глицин и серин. Чтобы спроектировать донорский вектор для дрозофилы, организуйте последовательность ДНК пептида-линкера и флуоресцентной метки и обеспечьте гомологичные последовательности, фланкирующие оба конца.Модифицируйте любые последовательности PAM в донорской плазмиде, чтобы сохранить полученную аминокислотную последовательность белков. Далее расположите начальный и конечный кодоны в зависимости от расположения метки. Для внутреннего мечения убедитесь, что флуоресцентная метка находится в кадре с кодирующей последовательностью целевого гена.Для мечения N-конца расположите флуоресцентную метку после эндогенного стартового кодона. Для маркировки С-конца расположите флуоресцентную метку перед естественным стоп-кодоном. Убедитесь, что сохранен только один начальный кодон, чтобы избежать потенциальных проблем с переводом.Используйте альтернативный подход к клонированию на основе фермента рестрикции для вставки последовательности sgRNA в плазмиду U6 Bbs1-chiRNA. После создания плазмиды sgRNA трансформируют плазмиду в DH5-Alpha Escherichia coli в соответствии с инструкциями производителя. Проверьте полученные клоны с помощью секвенирования по Сэнгеру, используя стандартные праймеры секвенирования Т3 или Т7.Для создания донорской плазмиды используют двухцепочечную ДНК с нужной последовательностью и интегрируют ее в плазмиду Bluesript 2SK отрицательный сайт множественного клонирования. Секвенирование плазмиды-донора, чтобы убедиться, что последовательности sgRNA или PAM правильно модифицированы и в плазмиде отсутствуют SNP. Затем берут мух Cas9, которым вводят сконструированную гРНК и донорские плазмиды.Обезболивайте мух углекислым газом и отделяйте самцов мух от девственных самок. Чтобы установить скрещивание мух, соедините каждого самца с нулевым уровнем G по крайней мере с двумя девственными самками FM7L в отдельных узких пищевых флаконах CT. Поместите скрещенные флаконы в вентилируемый инкубатор при температуре 25 градусов Цельсия и влажности 60% до тех пор, пока F1 не закроется.Затем обезболивают и собирают не менее 10 девственных потомков женского пола от скрещивания самцов и самок G zero. Убедитесь, что каждая муха F1 помечена сведениями о ее происхождении и хранится отдельно. Для скрининга мух для ПЦР разработайте праймеры с температурой плавления около 55 градусов по Цельсию, которые охватывают место редактирования целевого гена.Приготовьте лизисный буфер для каждого образца мухи и выдайте 10 микролитров в каждую лунку 96-луночного ПЦР-планшета. Поддерживайте буфер при низкой температуре во время процесса рассечения ноги. Далее подготовьте стеклянные капиллярные трубочки, заполнив один конец пищей из сахарозо-агара.Поместите эти трубки в глубокую тарелку глубиной 96 лунок, называемую гостиницей для мух. Для рассечения ноги поместите прокладку для углекислого наркоза под стереомикроскоп. Обезболите муху-кандидата и отрежьте ей одну из средних ног.После этого погрузите ножку в лизисный буфер. Удерживайте крыло мухи тонкими металлическими щипцами. Переместите муху в гостиницу для мух и сразу же запечатайте трубку пряжей.Разместите муху в вентилируемом инкубаторе, поддерживаемом при температуре 25 градусов по Цельсию и влажности 60%. Погрузите отрубленные ножки в лизисный буферный раствор в термоамплификаторе. Организуйте реакцию ПЦР в соответствии с инструкциями производителя, используя 1,5 микролитра лизата муховых лапок в качестве источника ДНК.Подвергнуть продукты ПЦР электрофорезу в агарозном геле и интерпретировать результаты в зависимости от размера полосы. Основываясь на результатах гелевых тестов, выберите положительные мушки из флай-отеля и по отдельности скрестите их с балансирными мухами, чтобы получить поколение F2. Используйте гомозиготные подвои для секвенирования по Сэнгеру сайта редактирования, чтобы обеспечить точность.Обратное скрещивание линий мух с мухами дикого типа для удаления фоновых мутаций. Скрининг каждого поколения с использованием протокола ПЦР с одной ногой. Конфокальные микроскопические изображения мозга взрослых дрозофил показали, что менструальный белок организован в дискретные ядерные очаги в течение поздней ночи и раннего утра.В целом, этот протокол надежен, если ваши праймеры для генотипирования ПЦР специфичны.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Стимулирование Побег поведения в<em&gt; Дрозофилы</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Определение спонтанную двигательную активность в<em&gt; Дрозофилы</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Простой Анализ для количественного определения социального избегания у<em&gt; Дрозофилы</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Условия, влияющие на социальное пространство в<em&gt; Дрозофилы</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Высокое разрешение Количественное запаха, руководствуясь поведения в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Использование<em&gt; Flywalk</em&gt; Парадигма

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Поведенческая Анализ на Mechanosensation из MARCM основе Клоны в<em&gt; Дрозофилы</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Протокол Путь длиной для<em&gt; Дрозофилы</em&gt; личинки

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

Капиллярных фидерных Анализ мер по обеспечению продовольственной приема внутрь<em&gt; Дрозофилы</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Простой Одношаговый Вскрытие Протокол целом монтажа подготовки взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt; Мозги

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Анализ Synaptic модуляция<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Фоторецепторы после экспозиции продолжительному воздействию света

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...