Name: one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster
Uploaded: 2024-01-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Vi tackar George Watase och Josie Clowney för diskussionerna under de inledande stadierna av protokollutvecklingen. Arbetet finansierades av medel från NIH (anslag nr R35GM133737 till S.Y.), Alfred P. Sloan Fellowship (till S.Y.) och McKnight Scholar Award (till S.Y.).

1. Design och konstruktion av genredigeringsreagenser
OBS: För att utföra endogen märkning är det viktigt att identifiera de olika isoformerna av den önskade genen. Beroende på experimentets specifika mål kan en fluorescerande märkning införlivas antingen internt eller vid N- eller C-terminalerna för den eller de valda proteinisoformerna. För optimal CRISPR-medierad redigering är det avgörande att placera de två sgRNA:erna lämpligt nära den avsedda knock-in-platsen. För att möj...

<ol>
	<li>Chudakov, D. M., Matz, M. V., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+and+their+applications+in+imaging+living+cells+and+tissues.">Fluorescent proteins and their applications in imaging living cells and tissues.</a> Physiol Rev. 90 (3), 1103-1163 (2010).</li><li>Costantini, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+palette+of+fluorescent+proteins+optimized+for+diverse+cellular+environments.">A palette of fluorescent proteins optimized for diverse cellular environments.</a> Nat Commun. 6, 7670 (2015).</li><li>Gibson, T. J., Seiler, M., Veitia, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transience+of+transient+overexpression.">The transience of transient overexpression.</a> Nat Methods. 10 (8), 715-721 (2013).</li><li>Huh, W. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+analysis+of+protein+localization+in+budding+yeast.">Global analysis of protein localization in budding yeast.</a> Nature. 425 (6959), 686-691 (2003).</li><li>Venken, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MiMIC:+a+highly+versatile+transposon+insertion+resource+for+engineering+Drosophila+melanogaster+genes.">MiMIC: a highly versatile transposon insertion resource for engineering Drosophila melanogaster genes.</a> Nat Methods. 8 (9), 737-743 (2011).</li><li>Quinones-Coello, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+strategies+for+protein+trapping+in+Drosophila.">Exploring strategies for protein trapping in Drosophila.</a> Genetics. 175 (3), 1089-1104 (2007).</li><li>Sarov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+resource+for+the+analysis+of+protein+localisation+in+Drosophila.">A genome-wide resource for the analysis of protein localisation in Drosophila.</a> Elife. 5, e12068 (2016).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+engineering+using+the+CRISPR-Cas9+system.">Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.</a> Nat Protoc. 8, 2281-2308 (2013).</li><li>Port, F., Chen, H. M., Lee, T., Bullock, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+germline+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient germline and somatic genome engineering in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), E2967-E2976 (2014).</li><li>Gratz, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+specific+and+efficient+CRISPR/Cas9-catalyzed+homology-directed+repair+in+Drosophila.">Highly specific and efficient CRISPR/Cas9-catalyzed homology-directed repair in Drosophila.</a> Genetics. 196 (4), 961-971 (2014).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+CRISPR-based+strategy+to+insert+small+and+large+fragments+of+DNA+using+short+homology+arms.">An efficient CRISPR-based strategy to insert small and large fragments of DNA using short homology arms.</a> Elife. 8, e51539 (2019).</li><li>Lamb, A. M., Walker, E. A., Wittkopp, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tools+and+strategies+for+scarless+allele+replacement+in+Drosophila+using+CRISPR/Cas9.">Tools and strategies for scarless allele replacement in Drosophila using CRISPR/Cas9.</a> Fly (Austin). 11 (1), 53-64 (2017).</li><li>Xiao, Y., Yuan, Y., Jimenez, M., Soni, N., Yadlapalli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+proteins+regulate+spatiotemporal+organization+of+clock+genes+to+control+circadian+rhythms.">Clock proteins regulate spatiotemporal organization of clock genes to control circadian rhythms.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (28), e2019756118 (2021).</li><li>Costantini, L. M., Fossati, M., Francolini, M., Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+tendency+of+fluorescent+proteins+to+oligomerize+under+physiologic+conditions.">Assessing the tendency of fluorescent proteins to oligomerize under physiologic conditions.</a> Traffic. 13 (5), 643-649 (2012).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19 (11), 649-655 (2009).</li><li>Kanca, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+toolkit+for+Drosophila+gene+tagging+using+synthesized+homology+donor+constructs+for+CRISPR-mediated+homologous+recombination.">An expanded toolkit for Drosophila gene tagging using synthesized homology donor constructs for CRISPR-mediated homologous recombination.</a> Elife. 11, e76077 (2022).</li><li>Nitabach, M. N., Taghert, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+circadian+control+circuit.">Organization of the Drosophila circadian control circuit.</a> Curr Biol. 18 (2), R84-R93 (2008).</li><li>Carvalho, G. B., Ja, W. W., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-lethal+PCR+genotyping+of+single+Drosophila.">Non-lethal PCR genotyping of single Drosophila.</a> Biotechniques. 46 (4), 312-314 (2009).</li><li>Gummadova, J. O., Coutts, G. A., Glossop, N. R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Drosophila+Clock+promoter+reveals+heterogeneity+in+expression+between+subgroups+of+central+oscillator+cells+and+identifies+a+novel+enhancer+region.">Analysis of the Drosophila Clock promoter reveals heterogeneity in expression between subgroups of central oscillator cells and identifies a novel enhancer region.</a> J Biol Rhythms. 24 (5), 353-367 (2009).</li></ol>

Resultaten visar på en strömlinjeformad, enkel CRISPR-baserad strategi i ett steg för att märka endogena gener i Drosophila. I protokollet använder vi två gRNA för att inducera DNA-dubbelsträngsbrott och homolog rekombination mer effektivt. GRNA och donatorplasmiden injiceras i bananflugeembryon, som uttrycker Cas9-enzymet i könscellerna. Dessa embryon odlas sedan under standardförhållanden fram till vuxen ålder, då de korsas med balansflugor för att producera den första generationens (F1) avkomma...

Fluorescerande proteiner har visat sig vara kraftfulla verktyg för att visualisera proteinlokalisering, dynamik och protein-proteininteraktioner i celler i levande organismer 1,2. Märkning av endogena gener med fluorescerande proteiner möjliggör långtidsavbildning av cellulära processer med subcellulär upplösning. Dessutom har dessa endogena genmärkningstekniker flera fördelar jämfört med överuttryck och immunfärgningsmetoder. Till exempel kan överuttryck av proteiner leda till felveckning av proteiner, ospecifika protein-proteininteraktioner och fellokalisering3. Hittills har forskare kunnat skapa stora bibliotek av endogena gener sammansmälta med fluorescerande proteiner för ett fåtal modellorganismer, såsom spirande jäst, som kan genomgå effektiv homolog rekombination4. När det gäller Drosophila melanogaster har olika verktyg som MiMICs5, transposonbaserade förstärkarfällor6 och fosmider7 tagits fram för att fluorescerande märka gener.
Utvecklingen av CRISPR-Cas9-baserade verktyg har gjort det möjligt att effektivt utföra genomredigering, inklusive taggning av kroppsegna proteiner, i ett brett spektrum av modellorganism 8,9. Cas9 är ett RNA-styrt enzym som klyver dubbelsträngat DNA på ett mycket effektivt och specifikt sätt8, som sedan kan repareras genom en icke-homolog ändsammanfogningsväg (NHEJ) som leder till punktmutationer eller deletioner. Alternativt möjliggör den homologiriktade reparationsvägen (HDR) integration av heterologt DNA i kromosomen.
Tidigare metoder för CRISPR-baserad genmärkning i modellorganismen, Drosophila melanogaster, har förlitat sig på en tvåstegsprocess 10,11,12. Detta innebär att man använder en urskiljbar ögonfärgsmarkör, Dsred, för att upptäcka lyckade HDR-händelser. Efteråt skulle Dsred-markören skäras ut med hjälp av Cre/loxP-rekombinationssystemet. För att effektivisera och påskynda denna process presenterar vi här en enklare och effektivare metod. Detta tillvägagångssätt kringgår behovet av dödlig genotypning och möjliggör direkt screening av enskilda flugor. Specifikt använder vi en PCR-baserad metod för att extrahera DNA från ett litet segment av flugans mellanben, vilket gör att vi kan genotypa enskilda flugor. Noterbart är att denna procedur inte äventyrar vitaliteten, rörelsen eller reproduktionsförmågan hos den provtagna flugan. Endast de lämpliga individer, som identifieras med hjälp av denna metod, vidareutvecklas till stabila bestånd.
Här presenterar vi ett detaljerat protokoll för att generera fluorescerande proteinmärkta flugor där endogena gener märks med fluorescerande rapportörer. Denna teknik använder CRISPR-Cas9-genomredigering för att smälta samman önskad fluorofortagg med N- eller C-terminalen i en endogen gen. Nedan beskriver vi design och konstruktion av gRNA-plasmider och en donatorplasmid, enstegs screeningstrategi för att välja CRISPR-positiva flugor och steg för att etablera stabila linjer. Specifikt beskriver vi strategier för att märka en endogen Drosophila-gen, punkt, med en fluorofor vid C-terminalen. Vi beskriver också kortfattat de kontrollexperiment som behöver utföras för att bekräfta att det märkta proteinet är funktionellt och live-avbildningstekniker för att visualisera Period-proteinet i levande klockneuroner i intakta Drosophila-hjärnor 13. Protokollet som beskrivs här är också allmänt tillämpligt för att screena kandidater för radering och insättning av specifika bitar av DNA genom CRISPR-Cas9-genomredigering.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5M EDTA pH8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9260G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-alpha Competent&#160;E. coli&#160;(High Efficiency)</td>
			<td>NEB</td>
			<td>C2987H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well deep well plate</td>
			<td>BRAND</td>
			<td>701354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3539S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DreamTaq Green PCR Master Mix (2X)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>K1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Sucrose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP220-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EcoRI-HF</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3101S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A142-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Glass Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>19131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#39;s Drosophila Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21720001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>NEB</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XbaI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0145S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

one-step crispr-based strategy for endogenous gene tagging in drosophila melanogaster

Studiet av proteiners subcellulära lokalisering, dynamik och reglering i levande celler har förändrats i grunden genom tillkomsten av tekniker som gör det möjligt att märka endogena gener för att producera fluorescerande fusionsproteiner. Dessa metoder gör det möjligt för forskare att visualisera proteiners beteende i realtid, vilket ger värdefulla insikter om deras funktioner och interaktioner i den cellulära miljön. Många nuvarande genmärkningsstudier använder en tvåstegsprocess där synliga markörer, såsom ögonfärgsförändringar, används för att identifiera genetiskt modifierade organismer i det första steget, och den synliga markören tas bort i det andra steget. Här presenterar vi ett enstegsprotokoll för att utföra exakt och snabb endogen genmärkning i Drosophila melanogaster, vilket möjliggör screening för konstruerade linjer utan synlig ögonmarkör, vilket ger en betydande fördel jämfört med tidigare metoder. För att screena för framgångsrika genmärkningshändelser använder vi en PCR-baserad teknik för att genotypa enskilda flugor genom att analysera ett litet segment från deras mellanben. Flugor som klarar screeningkriterierna används sedan för att producera stabila bestånd. Här beskriver vi design och konstruktion av CRISPR-redigeringsplasmider och metoder för screening och bekräftelse av konstruerade linjer. Sammantaget förbättrar detta protokoll effektiviteten av endogen genmärkning i Drosophila avsevärt och möjliggör studier av cellulära processer in vivo.

I våra experiment fann vi vanligtvis en framgångsfrekvens på ~20%-30% vid screening för olika endogena märkta gener på alla kromosomer (X, II, III). Effektiviteten i denna process kan variera beroende på flera faktorer, såsom gRNA-selektion, genens natur och injektionskvalitet. Här illustrerar vi resultaten från vår strategi att märka den endogena periodgenen med mNeonGreen fluorophore13. Mensgenen , som är placerad på X-kromosomen h...

Watch this Scientific Journal Video about One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster at JoVE.com

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

Här presenterar vi ett förenklat endogent genmärkningsprotokoll för Drosophila, som använder en PCR-baserad teknik för markörfri identifiering av framgångsrika genetiska modifieringar, vilket underlättar utvecklingen av stabila knock-in-linjer.

Enstegs CRISPR-baserad strategi för endogen genmärkning i Drosophila melanogaster

The study of protein subcellular localization, dynamics, and regulation in live cells has been profoundly transformed by the advent of techniques that ...

Syftet med detta protokoll är att generera en endogen redigerad fluglina. Vi visar ett fluorescerande protein knock-in som ett exempel, men det skulle också kunna tillämpas på annan knock-in, knockout, samt mutationsgenerering. Vårt protokoll är en CRISPR-homolog rekombinationsbaserad metod, så det finns nästan ingen begränsning på mutationsställen.Dessutom minskade vårt protokoll avsevärt den tid och ansträngning som krävs för att genotypa stegen. Till att börja med, öppna flugans CRISPR-webbplats för att designa sgRNA för Drosophila och ange cirka 100 basparsekvenser som omger den önskade knock-in-platsen. Välj CRISPR-mål med alternativet fem prima guanin.Klicka på knappen hitta CRISPR-mål för att generera en lista över möjliga sgRNA-sekvenser. Klicka sedan på utvärderingsknappen för varje sekvens och välj två sgRNA som har noll off-targets. Eftersom de naturliga proteinuttrycksnivåerna vanligtvis är mycket lägre, välj fluorescerande taggar som är ljusa och fotostabila och passar den experimentella uppställningen.Designa sedan en länkare för att länka epitoptaggar till den fluorescerande markören för biokemisk analys. Använd en länkpeptid som sträcker sig från två till 20 aminosyror, bestående av aminosyror som glycin och serin. För att designa donatorvektorn för Drosophila, organisera DNA-sekvensen för länkningspeptiden och den fluorescerande taggen, och säkerställa homologa sekvenser som flankerar båda ändarna.Modifiera eventuella PAM-sekvenser i donatorplasmiden för att bibehålla de resulterande proteinernas aminosyrasekvens. Placera sedan start- och stoppkodon beroende på taggens plats. För intern märkning, se till att den fluorescerande taggen är i ram med målgenens kodande sekvens.För N-terminus-märkning, placera den fluorescerande taggen efter det endogena startkodonet. För C-terminus taggning, placera fluorescerande tag före det naturliga stoppkodonet. Se till att bara behålla ett enda startkodon för att undvika potentiella översättningsproblem.Använd den alternativa restriktionsenzymbaserade kloningsmetoden för att föra in sgRNA-sekvensen i plasmiden U6 Bbs1-chiRNA-plasmiden. Efter att ha skapat sgRNA-plasmiden, transformera plasmiden i DH5-Alpha Escherichia coli enligt tillverkarens instruktioner. Verifiera de resulterande klonerna genom Sanger-sekvensering med hjälp av antingen T3- eller T7-standardsekvenseringsprimers.För att skapa donatorplasmiden, använd dubbelsträngat DNA med önskad sekvens och integrera det i plasmiden Bluesript 2SK negativ multipel kloningsplats. Sekvensera donatorplasmiden för att säkerställa att sgRNA- eller PAM-sekvenser är korrekt modifierade och att det inte finns några SNP:er i plasmiden. Ta sedan Cas9-flugor som injicerats med det konstruerade gRNA- och donatorplasmiderna.Bedöva flugorna med koldioxid och separera hanflugor och jungfruliga honor. För att etablera flugkorsningar, para ihop varje G zero-hane med minst två FM7L jungfruliga honor i individuella smala CT-foderflaskor. Placera korsade injektionsflaskor i en ventilerad inkubator som hålls vid 25 grader Celsius och 60 % luftfuktighet tills F1 flyger slut.Bedöva sedan och samla in minst 10 jungfruliga kvinnliga avkommor från både G noll han- och honkorsningar. Se till att varje F1-fluga är märkt med information om dess härkomst och lagras separat. För att screena flugor för PCR, designa primers med en smälttemperatur på cirka 55 grader Celsius som omfattar redigeringsstället för målgenen.Förbered lysbuffert för varje flugprov och dispensera 10 mikroliter i varje brunn på en 96-brunns PCR-platta. Håll bufferten vid en kall temperatur under bendissektionsprocessen. Förbered sedan kapillärrör av glas och fyll ena änden med sackarosagarmat.Placera dessa rör i en 96 brunnar djup brunnsplatta, kallad flughotellet. För bendissektion, placera koldioxidanestehetiseringsdynan under ett stereomikroskop. Bedöva en kandidatfluga och skär av ett av dess mittben.Sänk sedan ner benet i lysbufferten. Håll i vingen med en pincett i fin metall. Flytta flugan till flughotellet och försegla tuben med garn omedelbart.Inhyser flughotellet i en ventilerad inkubator som hålls vid 25 grader Celsius och 60 % luftfuktighet. Sänk ner de avhuggna benen i lysbuffertlösningen i en termocykler. Organisera PCR-reaktionen enligt tillverkarens instruktioner, med 1,5 mikroliter av flugbenlysatet som DNA-källa.Utsätt PCR-produkterna för agarosgelelektrofores och tolka resultaten baserat på bandstorlek. Baserat på gelresultaten, välj de positiva flugorna från flughotellet och korsa dem individuellt med balansflugor för att producera F2-generationen. Använd homozygota lager för Sanger-sekvensering av redigeringsplatsen för att säkerställa noggrannhet.Back-cross-validerade fluglinor med vildtypsflugor för att ta bort bakgrundsmutationer. Screena varje generation med hjälp av PCR-protokollet med ett ben. Konfokalmikroskopbilder av vuxna Drosophila-hjärnor visade mensprotein organiserat i diskreta kärnfoci under de sena kvällarna och tidiga morgnarna.Sammantaget är detta protokoll robust om dina genotypande PCR-primers är specifika.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

One-step CRISPR-based Strategy for Endogenous Gene Tagging in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulering av Escape Beteende i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Bestämning av spontan rörelseaktivitet i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Enkel analys för kvantifiering av social Undvikande i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

Villkor som påverkar Social Space i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Högupplöst Kvantifiering av Lukt styrd Beteende i<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Använda<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

En Beteende Analys för Mechanosensation av MARCM baserade Kloner i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Födosök Path längd protokoll för<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larver

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

Kapillären Feeder analysen mäter matkonsumtionen i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel steg Dissection protokoll för hel-mount Framställning av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analysera Synaptic Modulering av<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Fotoreceptorer Efter exponering för Förlängd ljus

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...