Name: methods for studying uterine contributions to pregnancy establishment in an ovariectomized mouse model
Uploaded: 2023-04-07T12:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model at JoVE.com

Dette arbejde blev muliggjort gennem Victorian State Government Operational Infrastructure Support og Australian Government National Health and Medical Research Council (NHMRC) IRIISS. Dette arbejde blev støttet af Monash University Faculty of Medicine, Nursing and Health Science Platform Access Grant til A.L.W. (Winship-PAG18-0343) for at få adgang til Monash Reproductive Services Platform. A.L.W. støttes af DECRA-finansiering DE21010037 fra Australian Research Council (ARC). JNH og LRA understøttes af et australsk regeringsforskningsuddannelsesprogramstipendium. LRA støttes af et Monash Graduate Excellence Scholarship. K.J.H. er støttet af et ARC Future Fellowship FT190100265.

Alle dyr blev anbragt i temperaturstyrede faciliteter med høje barrierer (Monash University Animal Research Laboratory) med gratis adgang til mad og vand og en 12 timers lys-mørk cyklus. Alle procedurer blev udført i overensstemmelse med godkendelse fra Monash Animal Research Platform Ethics Committee (#21908, 17971) og udført i overensstemmelse med National Health and Medical Research Council Code of Practice for pleje og brug af dyr.
1. Kirurgisk forberedelse
<ol><li>A...

<ol>
	<li>Szamatowicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assisted+reproductive+technology+in+reproductive+medicine+-+Possibilities+and+limitations.">Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations.</a> Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).</li><li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertile+ground:+Human+endometrial+programming+and+lessons+in+health+and+disease.">Fertile ground: Human endometrial programming and lessons in health and disease.</a> Nature Reviews. Endocrinology. 12 (11), 654-667 (2016).</li><li>Norwitz, E. R., Schust, D. J., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+and+the+survival+of+early+pregnancy.">Implantation and the survival of early pregnancy.</a> The New England Journal of Medicine. 345 (19), 1400-1408 (2001).</li><li>Zinaman, M. J., Clegg, E. D., Brown, C. C., O'Connor, J., Selevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimates+of+human+fertility+and+pregnancy+loss.">Estimates of human fertility and pregnancy loss.</a> Fertility &amp; Sterility. 65 (3), 503-509 (1996).</li><li>Kupka, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assisted+reproductive+technology+in+Europe,+2010:+Results+generated+from+European+registers+by+ESHRE&#8224;.">Assisted reproductive technology in Europe, 2010: Results generated from European registers by ESHRE&#8224;.</a> Human Reproduction. 29 (10), 2099-2113 (2014).</li><li>Gleicher, N., Kushnir, V. A., Barad, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+decline+of+IVF+birth+rates+and+its+probable+causes.">Worldwide decline of IVF birth rates and its probable causes.</a> Human Reproduction Open. 2019 (3), (2019).</li><li>Diaz-Gimeno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genomic+diagnostic+tool+for+human+endometrial+receptivity+based+on+the+transcriptomic+signature.">A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature.</a> Fertility &amp; Sterility. 95 (1), 50-60 (2011).</li><li>Amin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personalized+embryo+transfer+outcomes+in+recurrent+implantation+failure+patients+following+endometrial+receptivity+array+with+pre-implantation+genetic+testing.">Personalized embryo transfer outcomes in recurrent implantation failure patients following endometrial receptivity array with pre-implantation genetic testing.</a> Cureus. 14 (6), e26248 (2022).</li><li>Patel, J. A., Patel, A. J., Banker, J. M., Shah, S. I., Banker, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personalized+embryo+transfer+helps+in+improving+in+vitro+fertilization/ICSI+outcomes+in+patients+with+recurrent+implantation+failure.">Personalized embryo transfer helps in improving in vitro fertilization/ICSI outcomes in patients with recurrent implantation failure.</a> Journal of Human Reproductive Sciences. 12 (1), 59-66 (2019).</li><li>Khan, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+differences+between+functionalis+and+basalis+endometria+in+women+with+and+without+adenomyosis.">Biological differences between functionalis and basalis endometria in women with and without adenomyosis.</a> European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 203, 49-55 (2016).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocrine Reviews. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Corciulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsed+administration+for+physiological+estrogen+replacement+in+mice.">Pulsed administration for physiological estrogen replacement in mice.</a> F1000Research. 10, 809 (2021).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Griffiths, M. J., Alesi, L. R., Winship, A. L., Hutt, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+embryo+transfer+model+to+study+uterine+contributions+to+pregnancy+in+vivo+in+mice.">Development of an embryo transfer model to study uterine contributions to pregnancy in vivo in mice.</a> Reproduction &amp; Fertility. 3 (1), 10-18 (2022).</li><li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+from+a+mouse+model+that+epithelial+cell+migration+and+mesenchymal-epithelial+transition+contribute+to+rapid+restoration+of+uterine+tissue+integrity+during+menstruation.">Evidence from a mouse model that epithelial cell migration and mesenchymal-epithelial transition contribute to rapid restoration of uterine tissue integrity during menstruation.</a> PLoS One. 9 (1), e86378 (2014).</li><li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+regulate+scarless+repair+of+the+endometrial+&amp;#34;wound&amp;#34;+in+a+mouse+model+of+menstruation.">Androgens regulate scarless repair of the endometrial &amp;#34;wound&amp;#34; in a mouse model of menstruation.</a> FASEB Journal. 30 (8), 2802-2811 (2016).</li><li>Fullerton, P. T., Monsivais, D., Kommagani, R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follistatin+is+critical+for+mouse+uterine+receptivity+and+decidualization.">Follistatin is critical for mouse uterine receptivity and decidualization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), E4772-E4781 (2017).</li><li>Rowland, R. R., Reyes, E., Chukwuocha, R., Tokuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid+and+immune+responses+of+mice+following+mini-osmotic+pump+implantation.">Corticosteroid and immune responses of mice following mini-osmotic pump implantation.</a> Immunopharmacology. 20 (3), 187-190 (1990).</li><li>Barton, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+steroid+hormones+in+oviductal+function.">Roles of steroid hormones in oviductal function.</a> Reproduction. 159 (3), R125-R137 (2020).</li><li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+regulates+embryonic+survival+during+delayed+implantation.">Autophagy regulates embryonic survival during delayed implantation.</a> Endocrinology. 152 (5), 2067-2075 (2011).</li><li>Hamatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+analysis+identifies+molecular+pathways+distinguishing+blastocyst+dormancy+and+activation.">Global gene expression analysis identifies molecular pathways distinguishing blastocyst dormancy and activation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (28), 10326-10331 (2004).</li><li>Cui, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcervical+embryo+transfer+in+mice.">Transcervical embryo transfer in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).</li></ol>

Denne artikel indeholder trinvise instruktioner om, hvordan man udfører OVX og giver eksogene hormoner til undersøgelser med fokus på at forstå livmoderbidragene til graviditet og fertilitet. Der gives to detaljerede protokoller om to eksperimentelle anvendelser af disse metoder, herunder udførelse af embryooverførsel og kunstig decidualisering.
Mens udførelse af OVX kan være udfordrende i starten - især for forskere, der er nye til gnavermodeller - er det en relativt enkel procedure,...

Med den stigende brug af assisteret reproduktionsteknologi i de seneste årtier er mange barrierer for undfangelse blevet overvundet, hvilket gør det muligt for mange par at starte familier på trods af fertilitetsproblemer1. Oocyt- eller sædunderskud kan ofte omgås ved hjælp af in vitro-befrugtning eller intracytoplasmatisk sædinjektion; Imidlertid forbliver problemer relateret til livmoderen og endometriemodtagelighed en undvigende "sort boks" af reproduktionspotentiale2.
Graviditet etableres, når et embryo af høj kvalitet med succes interagerer med et modtageligt endometrium (livmoderforing). Chancerne for vellykket graviditet i en given menstruationscyklus er lave, omkring 30%3,4. Af dem, der er vellykkede, går kun 50% -60% forbi 20 ugers svangerskab, hvor implantationssvigt er ansvarlig for 75% af graviditeter, der ikke når 20 uger3. På trods af disse tal, der går tilbage til slutningen af 1990'erne, er feltet endnu ikke overvundet begrænsningerne forårsaget af et utilstrækkeligt modtageligt endometrium. Dette har resulteret i stagnerende - og undertiden faldende - IVF-succesrater i de senere år 5,6.
Kvinder med uforklarlig infertilitet har ofte et forskudt vindue af modtagelighed eller er ude af stand til at opnå modtagelighed af ukendte årsager. For nylig blev endometriemodtagelighedsarrayet udviklet, som vurderer ekspressionen af hundredvis af gener med det formål at skræddersy tidspunktet for embryooverførsel til en persons vindue af modtagelighed 7,8,9. Imidlertid mangler feltet stadig en forståelse af patogenesen af graviditetskomplikationer, der manifesterer sig efter implantationsprocessen er afsluttet.
Det kvindelige reproduktive system er meget dynamisk og under stram hormonel kontrol. Hypothalamus-hypofyse-gonadal (HPG) akse styrer frigivelsen af luteiniserende hormon og follikelstimulerende hormon, som regulerer aspekter af æggestokkens cyklus, herunder follikelmodning og østrogen- og progesteronaktivitet. Til gengæld reguleres livmoderens menstruationscyklus af østrogener og progesteron10,11. Således er undersøgelse af livmoderbiologiske mekanismer kompliceret af ovarieindflydelse. For eksempel, når man studerer, hvordan kræftbehandlinger kan påvirke livmoderen, kan det være svært at skelne, om nogen observeret livmoderfænotype (såsom graviditetstab eller menstruationsacyklicitet) er resultatet af en direkte fornærmelse mod livmoderen eller en følgevirkning fra skade på æggestokkene.
For omfattende forståelse af fertiliteten skal livmoderbidragene til graviditet karakteriseres. Det er vigtigt, at denne forståelse skal strække sig ud over livmoderfunktionen under ovariekontrol. Dette kan ikke undersøges hos mennesker; Derfor anvendes dyremodeller ofte. Som sådan er ovariektomi (OVX) almindeligt anvendt til at gøre det muligt for forskere at regulere gnaveres østruscyklusser (analogt med menstruationscyklussen) ved at levere hormoner eksogent. Derudover tillader OVX, at livmoderresponser undersøges uafhængigt af ovariepåvirkning12. Men hvis hormoner ikke straks leveres efter OVX, vil der opstå en overgangsalderfænotype, som skal overvejes nøje af forskerne.
OVX bruges ofte i gnavermodeller 13,14,15,16,17 og er relativt let at udføre efter tilstrækkelig træning. Metoderne varierer afhængigt af, om æggestokken alene eller æggestokken og ovidukten fjernes, samt afhængigt af dyrets alder (voksne, cyklende dyr har større æggestokke med et synligt corpus luteum på deres overflade, hvilket betyder, at deres æggestokke er lettere at visualisere). Tilsvarende, mange metoder til hormontilskud eksisterer, herunder subkutane injektioner14, langsom frigivelse pellets15, osmotiske mini pumper18, og ovarie podning.
I denne artikel gives detaljerede instruktioner om, hvordan man udfører ovariektomi og forbereder tre typer hormontilskud, herunder subkutane injektioner, pellets med langsom frigivelse og osmotiske minipumper. Der findes to detaljerede protokoller for eksperimentelle endepunkter, der drager fordel af OVX efterfulgt af eksogent hormontilskud (embryooverførsel og kunstig decidualisering). Denne artikel diskuterer styrker og svagheder ved hver tilgang med det formål at vejlede forskere om, hvordan man udfører undersøgelser for at isolere virkningerne på livmoderen, specifikt inden for graviditets- og fertilitetsforskningsområderne.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ALZET 1002 mini osmotic pumps</td>
			<td>BioScientifica</td>
			<td>1002</td>
			<td>Delivers 0.25 &#181;L/h for 14 days. Use for section 7 (Experimental procedure - Embryo transfer).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALZET 1003D mini osmotic pumps</td>
			<td>BioScientifica</td>
			<td>1003D</td>
			<td>Delivers 1 &#181;L/h for 14 days. Use for section 8 (Experimental procedure - Artificial decidualization).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALZET Reflex 7 mm clips</td>
			<td>BioScientifica</td>
			<td>0009971</td>
			<td>Either Reflex clips or Michel clips can be used for wound closure, depending on preference</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALZET Reflex clip applicator</td>
			<td>BioScientifica</td>
			<td>0009974</td>
			<td>Either Reflex clips or Michel clips can be used for wound closure, depending on preference</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALZET Reflex clip remover</td>
			<td>BioScientifica</td>
			<td>0009976</td>
			<td>Either Reflex clips or Michel clips can be used for wound closure, depending on preference</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivicaine injection</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>NA</td>
			<td>Stock 0.5%. Use at 0.05% in saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estradiol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>NA</td>
			<td>Active constituent 0.5 mg/mL. Use 3.5 mL per 200 mL cage bottle, or as your institutions vet prescribes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel clips</td>
			<td>Daniels</td>
			<td>NS-000242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi purpose sealant</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-surgical embryo transfer (NSET) device</td>
			<td>ParaTechs</td>
			<td>60010</td>
			<td>Contains 6 mm speculum. Single use only.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0130</td>
			<td>Soluble in ethanol. Use for&#160; section 3 (Hormone preparation - subcutaneous injection) and&#160; section 4 (Hormone preparation - slow-release pellets)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7556</td>
			<td>Soluble in water. Use for section 5 (Hormone preparation - osmotic mini pumps)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh eye ointment</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>NA</td>
			<td>42.5% w/v liquid paraffin, 57.3% w/v soft white paraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rimadyl Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>NA</td>
			<td>Stock 50 mg/mL. Use at 5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber tubing</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>508-008</td>
			<td>Washed in 100% ethanol and cut into 1 cm pieces. Inside diameter 1.57 mm &#177;&#160; 0.23 mm; outside diamater 3.18 mm &#177; 0.23 mm; wall 0.81 mm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sesame oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Silk sutures size 3-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>GS-832</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for studying uterine contributions to pregnancy establishment in an ovariectomized mouse model

For at graviditet kan etableres, skal en levedygtig blastocyst med succes interagere med en modtagelig livmoderforing (endometrium) for at lette implantation og placenta dannelse og muliggøre igangværende graviditet. Begrænsningerne for graviditetssucces forårsaget af embryonale defekter er velkendte og er stort set blevet overvundet i de seneste årtier med stigningen i in vitro-befrugtning (IVF) og assisteret reproduktionsteknologi. Indtil videre har feltet imidlertid ikke overvundet begrænsningerne forårsaget af et utilstrækkeligt modtageligt endometrium, hvilket resulterer i stagnerende IVF-succesrater. Ovarie- og endometriefunktioner er tæt sammenflettet, da hormoner produceret af æggestokken er ansvarlige for endometriums menstruationscyklus. Som sådan, når du bruger gnavermodeller af graviditet, kan det være svært at fastslå, om et observeret resultat skyldes en ovarie eller livmoderunderskud. For at overvinde dette blev der udviklet en ovariectomized musemodel med embryooverførsel eller kunstig decidualisering for at muliggøre undersøgelse af livmoderspecifikke bidrag til graviditet. Denne artikel vil give instruktioner om, hvordan man udfører ovariektomi og give indsigt i forskellige teknikker til levering af eksogene hormoner til støtte for vellykket kunstig decidualisering eller graviditet efter embryooverførsel fra raske donorer. Disse teknikker omfatter subkutan injektion, pellets med langsom frigivelse og osmotiske minipumper. De vigtigste fordele og ulemper ved hver metode vil blive diskuteret, så forskere kan vælge det bedste undersøgelsesdesign til deres specifikke forskningsspørgsmål.

En velkarakteriseret model for kunstig decidualisering er beskrevet i dette protokolpapir (figur 1A). Her gennemgik unge voksne hunmus (8 uger gamle) kirurgisk ovariektomi som beskrevet i afsnit 1 og 2. Musene blev derefter hvilet i 2 uger for at sikre, at de endogene ovariehormoner forsvandt, før de blev understøttet med eksogene hormoner som beskrevet i afsnit 3-7 og afsnit 9. Kunstig decidualisering blev induceret ved en intravaginal injektion af sesamolie, og dere...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model at JoVE.com

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

Graviditetsetablering er en dynamisk proces, der involverer kompleks embryo- og livmoderkrydstale. De præcise bidrag fra moderens livmodermiljø til disse processer forbliver et aktivt undersøgelsesområde. Her leveres detaljerede protokoller for at hjælpe med at designe in vivo dyremodeller til at løse disse forskningsspørgsmål.

Metoder til undersøgelse af livmoderbidrag til graviditetsetablering i en ovariektomiseret musemodel

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

Så det er svært at adskille rollen som livmoder og ovarie hormonelle påvirkninger på graviditet etablering som begge er tæt forbundet. Så denne protokol giver os mulighed for direkte at undersøge livmoderbidragene. Mens nogle af disse teknikker som ovariektomi er ret invasive, er de relativt enkle at udføre efter øvelse og træning, hvilket gør dem velegnede til forskere, der er nye til musemodeller.Så denne metode kan bruges til at forstå den bredere regulering af HPG-aksen, da både æggestokkene og livmoderen spiller en vigtig rolle i reguleringen af denne akse. Hvis du aldrig har udført disse teknikker før, skal du kontakte dit instituts dyrlægeteam for træning og support. Til at begynde med skal du anvende øjensmøremiddel generøst på en bedøvet mus ved forsigtigt at duppe det på øjet efter barbering af et lille område ved bule under rygsøjlen.Injicer 0,1 ml carprofen subkutant i halsen. Test om dyret bedøves ved at klemme ryggen og kontrollere for en refleks. Anvend derefter Betadine på det kirurgiske sted.Dæk det derefter med en kirurgisk drapering. Brug rottetandede tang til at trække huden væk ved fornemmelsen opad og lav et fem millimeter langsgående snit. Brug derefter stump tang til at dissekere huden væk fra det underliggende muskellag ned til den ene side mod nyrerne.Identificer nyre-, æggestok- og ovariefedtpuden gennem muskelvæggen. Grib og løft muskellaget med tangen. Brug derefter en saks til at lave et 0,5 til en centimeter langt snit og træk æggestokkens pude gennem snittet med et par stumpe tang.Brug derefter en buet nåleholder til at klemme under æggestokken og ovidukten i den distale ende af livmoderhornet og punktafgifter æggestokken med en saks. Efter 30 sekunder fjernes klemmen og dup med sterilt gasbind. For at lukke muskelvægssnittet skal du løfte toppen af snittet ved hjælp af tang.Bind derefter snittet med en kirurgknude ved hjælp af silkesuturer. Topisk påføres et par dråber bupivacain ved hjælp af en milliliter sprøjte uden nålefastgørelse, og dup overskydende med sterilt gaze. Efter tilsvarende udførelse af ovariektomi på den anden side skal du lukke hudsnittet ved at trykke de to sider af huden sammen og anvende et par syv millimeter kirurgiske klip, hvilket giver plads til sårhævelse.Placer alt nødvendigt udstyr på en folie inde i en laminær strømning eller klasse II biosikkerhedshætte og UV-steriliser i 20 minutter. Vask den silastiske slange i 100% desinol og lad den lufttørre inde i emhætten. Når den er tør, skal du skære slangen i en centimeter lange segmenter ved hjælp af en skalpel.Klem derefter ca. 200 mikroliter fugemasse i en sprøjte uden stempel. Sæt stemplet på igen, og skub en lille mængde fugemasse ud. Påfør tætningsmidlet i den ene ende af slangen, glat det over med en handskefinger.Og lad tætningsmidlet tørre natten over eller under UV-lys i 30 minutter i emhætten. Hæld derefter progesteronpulver i en steriliseret petriskål. Scoop pulveret i pellets ved hjælp af tang.Bank den forseglede ende af pelleten ned ad emhættens overflade for at kondensere pulveret. Derefter forsegles den åbne ende med tætningsmidlet. Pak petriskålen, der indeholder pillerne, ind i folie for at beskytte dem mod lys.Ca. 72 timer før subkutan indsættelse aktiveres pellets ved at inkubere dem i trækulstrippet FCS. Demonstrere denne procedure vil være Dr.Fiona Cousins, en tidlig karriere forsker fra Hudson Institute of Medical Research. Efter hormonpriming dyrene med subkutane østradiolinjektioner, prime dyrene med subkutane progesteronpiller to dage før kunstig decidualisering.Før operationen skal du bedøve musen og teste dybden af anæstesi ved at kontrollere tåklemmerefleksen. Placer derefter musen i en udsat position, løft halen og indsæt langsomt et seks millimeter spekulum i vagina. Placer musens underkrop mellem de to første fingre på den ikke-dominerende hånd.Brug derefter pegefingeren til forsigtigt at skubbe halen opad for at give bedre vaginal tilgængelighed. Overfør 20 mikroliter sesamolie til en ikke-kirurgisk embryooverførselsspids, og indsæt spidsen gennem vagina og livmoderhalsen i livmoderhornet. Udvis langsomt olien.Når du er færdig, fjern spekulumet fra vagina. I denne undersøgelse gennemgik 80% af musene en vellykket decidualisering, mens 20% ikke gjorde det. Så det er vigtigt at holde alt dit kirurgiske udstyr og arbejdsområder sterile og have patienter, når du indsætter NSAID-enheden gennem livmoderhalsen i musens livmoderhorn.Efter inducering af kunstig decidualisering kan progesteronganen fjernes for at efterligne menstruation og studere endometrienedbrydning. Ved hjælp af denne metode kan vi studere livmoderbiologi og regulering uafhængigt af æggestokkenes indflydelse. Dette er virkelig spændende inden for fertilitet og kvinders sundhed generelt.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Vurdering af Maternal Vascular Remodeling under graviditet i Mus livmoderen

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Udvikling af en Ethanol-induceret Fibrotiske Lever Model i Zebrafisk at studere progenitorcelle-medieret hepatocyt Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

En roman brug af tre-dimensionelle høj frekvens ultralyd for tidlig graviditet karakterisering i mus

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering af larve zebrafisk som en dyr Model til at undersøge Trypanosoma cruzi motilitet In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro Model af en Parallel-plade Perfusion System at studere bakteriel tilslutning til at pode væv

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

En In Vivo -metode til at studere mus blod-Testis barriere integritet

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster

Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster

Metoder til test endokrine forstyrrelser i Drosophila melanogaster

In recent years there has been growing evidence that all organisms and the environment are exposed to hormone-like chemicals, known as endocrine disruptor ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Vurdering af oxidative skader i den primære mus okulære overfladeceller / stamceller som reaktion på Ultraviolet-C (UV-C) Skader

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

An Enhanced Green Fluorescence Protein-based Assay for Studying Neurite Outgrowth in Primary Neurons

En forbedret grøn fluorescens protein-baseret assay til at studere Neurite udvækst i primære neuroner

Neurite outgrowth is a fundamental event in the formation of the neural circuits during nervous system development. Severe neurite damage and synaptic ...

Analysis of Congenital Heart Defects in Mouse Embryos Using Qualitative and Quantitative Histological Methods

Analyse af medfødte hjertefejl i museembryoner ved hjælp af kvalitative og kvantitative histologiske metoder

Congenital heart defects (CHD) are the most common type of birth defect in humans, affecting up to 1% of all live births. However, the underlying causes ...