Name: determination of vaccine immunogenicity using bovine monocyte-derived dendritic cells
Uploaded: 2023-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Vaccine Immunogenicity Using Bovine Monocyte-Derived Dendritic Cells at JoVE.com

हम जानवरों की स्वास्थ्य स्थिति का निर्धारण करने और बीटीवी प्रदान करने में उनके समर्थन के लिए डॉ एवलिन वोडक और डॉ एंजेलिका लोइस्च (एजीईएस), गोजातीय रक्त प्रदान करने के लिए डॉ बर्नहार्ड रीनेल्ट, और आईएईए के डॉ भरानी सेट्टीपल्ली और डॉ विलियम डुंडन को क्रमशः वास्तविक समय पीसीआर प्रयोगों और भाषा संपादन पर उपयोगी सलाह के लिए धन्यवाद देते हैं।

स्वास्थ्य और खाद्य सुरक्षा के लिए ऑस्ट्रियाई एजेंसी (एजीईएस) के नैतिक दिशानिर्देशों के अनुसार और स्वीकृत पशु कल्याण मानकोंके अनुपालन में एक प्रमाणित पशु चिकित्सा सेवा द्वारा रक्त संग्रह कि...

यह अध्ययन बोवाइन एमओडीसी को उत्पन्न करने और फेनोटाइपिंग के लिए एक मानकीकृत इन विट्रो विधि और एक वाणिज्यिक वैक्सीन (जैसे, आरवी) की वैक्सीन इम्युनोजेनेसिटी को मापने में उनके बाद के उपयोग को दर्शाता ह...

पशु चिकित्सा टीकाकरण पशुपालन और स्वास्थ्य के एक महत्वपूर्ण पहलू का प्रतिनिधित्व करता है, क्योंकि यह विश्व स्तर पर पशुधन क्षेत्र को प्रभावित करने वाली बीमारियों के खिलाफ सुरक्षा प्रदान करके खाद्य सुरक्षा और पशु कल्याण में सुधार करने में योगदान देताहै। संभावित वैक्सीन उम्मीदवारों की इम्युनोजेनेसिटी का आकलन करने के लिए एक प्रभावी इन विट्रो विधि वैक्सीन के विकास और उत्पादन की प्रक्रिया को तेज करने में मदद करेगी। इसलिए, इन विट्रो अध्ययनों के आधार पर नवीन पद्धतियों के साथ प्रतिरक्षा परख के क्षेत्र का विस्तार करना आवश्यक है, क्योंकि इससे टीकाकरण और रोगज़नक़ संक्रमण से संबंधित प्रतिरक्षा प्रक्रियाओं की जटिलता का खुलासा करने में मदद मिलेगी। वर्तमान में, विवो पशु टीकाकरण और चुनौती अध्ययनों में , जिनके लिए आवधिक नमूने (जैसे, रक्त और प्लीहा) की आवश्यकता होती है, का उपयोग उम्मीदवार टीकों और सहायक दवाओं की इम्युनोजेनेसिटी को मापने के लिए किया जाता है। ये परख महंगे, समय लेने वाले हैं, और नैतिक निहितार्थ हैं, क्योंकि ज्यादातर मामलों में, परीक्षणों के अंत तक पशु इच्छामृत्यु की जाती है।
विवो परख के विकल्प के रूप में, परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) का उपयोग विट्रो2 में वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए किया गया है। पीबीएमसी कोशिकाओं की एक विषम आबादी है जो 70% -90% लिम्फोसाइटों, 10% -20% मोनोसाइट्स और सीमित संख्या में डेंड्राइटिक कोशिकाओं (डीसी, 1% -2%) से बनी होती है। पीबीएमसी एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाओं (एपीसी) जैसे बी कोशिकाओं, मोनोसाइट्स और डीसी को परेशान करते हैं, जो लगातार संक्रमण या ऊतक क्षति के संकेतों की तलाश में जीव को गश्त करते हैं। स्थानीय रूप से स्रावित केमोकाइन सेल सतह रिसेप्टर्स से बंधकर इन साइटों पर एपीआई की भर्ती और सक्रियण की सुविधा प्रदान करते हैं। मोनोसाइट्स के मामले में, केमोकाइन ्स अपने भाग्य को या तो डीसी या मैक्रोफेज4 में अंतर करने के लिए निर्देशित करते हैं। जैसे ही डीसी एक रोगज़नक़ का सामना करते हैं और पकड़ते हैं, वे द्वितीयक लिम्फोइड अंगों में चले जाते हैं, जहां वे क्रमशः सीडी 8 + टी कोशिकाओं या सीडी 4 + टी कोशिकाओं में प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स (एमएचसी) वर्ग I या वर्ग II सतह प्रोटीन का उपयोग करके संसाधित रोगज़नक़ पेप्टाइड एंटीजन पेश कर सकते हैं, इस प्रकार प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 5,6 को ट्रिगर कर सकते हैं।
विभिन्न रोगजनकों के खिलाफ एक सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को व्यवस्थित करने में डीसी द्वारा निभाई गई महत्वपूर्ण भूमिका उन्हें इंट्रासेल्युलर प्रतिरक्षा तंत्र को समझने के लिए एक दिलचस्प शोध लक्ष्य बनाती है, खासकर जब संक्रामक एजेंटोंके खिलाफ टीके और सहायक दवाओं को डिजाइन किया जाता है। चूंकि पीबीएमसी से प्राप्त किए जा सकने वाले डीसी का अंश छोटा (1% -2%) है, इसके बजाय मोनोसाइट्स का उपयोग विट्रो 8 में डीसी उत्पन्न करने के लिए किया गया है। इन मोनोसाइट-व्युत्पन्न डीसी (एमओडीसी) को शुरू में कैंसर इम्यूनोथेरेपी9 में संभावित उपचार रणनीति के रूप में विकसित किया गया था। हाल ही में, एमओडीसी का उपयोग वैक्सीन अनुसंधान10,11,12 के लिए किया गया है, और शास्त्रीय मोनोसाइट्स एमओडीसी उत्पादन 13 के लिए प्रमुख उपप्रकार (89%) हैं। इन विट्रो में एमओडीसी का उत्पादन पहले अन्य साइटोकिन्स जैसे इंटरल्यूकिन -4 (आईएल -4), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर α (टीएनएफ -α), या आईएल -13 14,15,16 जैसे अन्य साइटोकिन्स के संयोजन में दिए गए ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ) के संयोजन के माध्यम से प्राप्त किया गया है।
इन विट्रो एमओडीसी परख की सफलता एंटीजन-उत्तेजित परिपक्व एमओडीसी की क्षमता पर निर्भर करती हैजो एंटीजन के प्रकार के लिए विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की सीमा और प्रकार को संशोधित करती है। एमओडीसी द्वारा मान्यता प्राप्त और प्रस्तुत रोगज़नक़ का प्रकार सीडी 4 + टी हेल्पर (टीएच) कोशिकाओं के टीएच 1, टीएच 2, या टीएच 17 प्रभावक कोशिकाओं में भेदभाव को निर्धारित करता है और रोगज़नक़-विशिष्ट स्रावी साइटोकिन प्रोफाइल की विशेषता है। इंट्रासेल्युलर रोगजनकों के खिलाफ एक टीएच 1 प्रतिक्रिया प्राप्त होती है और इसके परिणामस्वरूप इंटरफेरॉन-गामा (आईएफएन -γ) और ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर बीटा (टीएनएफ -β) का स्राव होता है, जो फागोसाइटिक-निर्भर सुरक्षा को नियंत्रित करता है। एक टीएच 2 प्रतिक्रिया परजीवी जीवों के खिलाफ शुरू होती है और आईएल -4, आईएल -5, आईएल -10 और आईएल -13 स्राव की विशेषता है, जो फागोसाइटिक-स्वतंत्र ह्यूमोरल संरक्षण शुरू करती है। टीएच 17 आईएल -17, आईएल -17 एफ, आईएल -6, आईएल -22 और टीएनएफ -18, 19,20,21 के स्राव द्वारा मध्यस्थ बाह्य जीवाणु और फंगल संक्रमण के खिलाफ न्यूट्रोफिल-निर्भर सुरक्षा प्रदान करता α। पिछले अध्ययनों के आधार पर, यह ध्यान दिया गया है कि सभी रोगजनक अपेक्षित साइटोकिन प्रोफाइल के भीतर नहीं आते हैं। उदाहरण के लिए, लीशमैनिया परजीवी संक्रमण के जवाब में त्वचीय एमओडीसी, सीडी 4 + टी कोशिकाओं और सीडी 8 + टी कोशिकाओं से आईएफएन -γ स्राव को उत्तेजित करते हैं, इस प्रकार एक सुरक्षात्मक प्रोइन्फ्लेमेटरी टीएच 1 प्रतिक्रिया22 को प्रेरित करते हैं।
यह भी दिखाया गया है कि, साल्मोनेला लिपोपॉलेसेकेराइड (एलपीएस) के साथ प्रमुख चिकन एमओडीसी में, टीएच 1 और टीएच 2 दोनों प्रतिक्रियाओं को सक्रिय करके साल्मोनेला टाइफीम्यूरियम के खिलाफ एक परिवर्तनीय प्रतिक्रिया को प्रेरित कर सकता है, जबकि साल्मोनेला गैलीनारम अकेले टीएच 2 प्रतिक्रिया को प्रेरित करता है, जो एमओडीसी क्लीयरेंस23 के प्रति उत्तरार्द्ध के उच्च प्रतिरोध की व्याख्या कर सकता है। ब्रूसेला कैनिस (बी कैनिस) के खिलाफ एमओडीसी की सक्रियता भी कैनाइन और मानव एमओडीसी दोनों में रिपोर्ट की गई है, जिसका अर्थ है कि यह एक जूनोटिक संक्रमण तंत्र24 का प्रतिनिधित्व कर सकता है। बी कैनिस के साथ मानव एमओडीसी एक मजबूत टीएच 1 प्रतिक्रिया को प्रेरित करते हैं जो गंभीर संक्रमण के लिए प्रतिरोध प्रदान करता है, जबकि कैनाइन एमओडीसी कम टीएच 1 प्रतिक्रिया के साथ एक प्रमुख टीएच 17 प्रतिक्रिया को प्रेरित करते हैं, जिससे बाद में क्रोनिक संक्रमण25 की स्थापना होती है। गोजातीय एमओडीसी अकेले गैर-संयुग्मित एफएमडीवी की तुलना में इम्युनोग्लोबुलिन जी (आईजीजी) के साथ संयुग्मित पैर और मुंह के रोग वायरस (एफएमडीवी) के लिए एक बढ़ी हुई आत्मीयता दिखाते हैं, क्योंकि एमओडीसी पूर्व10 के जवाब में एक वायरल-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनाते हैं। एक साथ लिया गया, इन अध्ययनों से पता चलता है कि रोगज़नक़ संक्रमण के दौरान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की जटिलता का विश्लेषण करने के लिए एमओडीसी का उपयोग कैसे किया गया है। अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन लिम्फोसाइट प्रसार से जुड़े विशिष्ट मार्करों की मात्रा का ठहराव करके किया जा सकता है। केआई -67, एक इंट्रासेल्युलर प्रोटीन जो केवल विभाजित कोशिकाओं में पाया जाता है, को प्रसार अध्ययन26 के लिए एक विश्वसनीय मार्कर माना जाता है, और इसी तरह, सक्रियण के अंतिम चरण के दौरान टी कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त सीडी 25 लिम्फोसाइट प्रसार27,28 से मेल खाती है।
यह अध्ययन मवेशियों के एमओडीसी की इन विट्रो पीढ़ी के लिए एक मानकीकृत विधि को प्रदर्शित करता है, जिसके बाद टीकों की इम्युनोजेनेसिटी का परीक्षण करने के लिए उपयोग किए जाने वाले इन विट्रो प्रतिरक्षा परख में उनका आवेदन होता है। इस परख की प्रभावकारिता को मान्य करने के लिए एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रेबीज वैक्सीन (आरवी) का उपयोग किया गया था। टी लिम्फोसाइट सक्रियण और प्रसार को फ्लो साइटोमेट्री, रियल-टाइम क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूपीसीआर), और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) द्वारा अच्छी तरह से स्थापित सेल सक्रियण मार्करों जैसे कि केआई -67 और सीडी 25 और आईएफएन -γ 28,29,30,31 के स्राव के विश्लेषण के माध्यम से मापा गया था। एमओडीसी परख के दौरान कोई पशु या मानव प्रयोगात्मक परीक्षण नहीं किया जाता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher</td>
			<td>A1049201</td>
			<td>Ammonium-Chloride-Potassium buffer for lysis of residual RBCs in harvested PBMC Fraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer Heparin Tubes</td>
			<td>Becton, Dickinson (BD) and Company</td>
			<td>366480</td>
			<td>10 mL, additive sodium heparin 158 USP units, glass tube, 16 x 100 mm size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Dendritic Cell Growth Kit</td>
			<td>Bio-Rad, UK</td>
			<td>PBP015KZZ</td>
			<td>Cytokine cocktail composed of recombinant bovine IL-4 and GM-CSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine IFN-&#947; ELISA Kit</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA5638KZZ</td>
			<td>Kit use for measuring IFN-&#947; expression in culture supernatant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD14 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA2678F</td>
			<td>Mouse anti-bovine CD14 monoclonal antibody, clone CC-G33, isotype IgG1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD25 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA2430PE</td>
			<td>Mouse anti bovine CD25 monoclonal antibody, clone IL-A11, isotype IgG1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA1653A647</td>
			<td>Mouse anti bovine CD4 monoclonal antibody, clone CC8, isotype IgG2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD40 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA2431F</td>
			<td>Mouse anti-bovine CD40 monoclonal antibody, clone IL-A156, isotype IgG1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA837F</td>
			<td>Mouse anti bovine CD8 monoclonal antibody, clone CC63, isotype IgG2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD86 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA2437PE</td>
			<td>Mouse anti-bovine CD86 monoclonal antibody, clone IL-A190, isotype IgG1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>-</td>
			<td>Thermal cycler PCR machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Centrifuge Tube</td>
			<td>Falcon Corning&#160;</td>
			<td>352096 &#38; 352070</td>
			<td>15 mL and 50 mL, high-clarity poypropylene conical bottom, graduated, sterial, seal screw cap, falcon tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytofix/Cytoperm Plus</td>
			<td>BD Bio Sciences</td>
			<td>555028</td>
			<td>Fixation/permeabilization kit with BD golgiPlug, use for flow cytometer cell staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1009832500</td>
			<td>Absolute for analysis EMSURE&#160;ACS,ISO, Reag. Ph Eur</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher</td>
			<td>10500064</td>
			<td>Qualified, heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll Plaque PLUS</td>
			<td>GE Health care Life Sciences, USA</td>
			<td>341691</td>
			<td>Lymphocyte-isolation medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowClean Cleaning Agent</td>
			<td>Beckman Coulter, Life Sciences</td>
			<td>A64669</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo</td>
			<td>FlowJo, Becton, Dickinson (BD) and Company, LLC, USA</td>
			<td>-</td>
			<td>Flow cytometer Histogram software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowTubes/ FACS&#160; (Fluorescence-activated single-cell sorting) Tube</td>
			<td>Falcon Corning&#160;</td>
			<td>352235</td>
			<td>5 mL, sterial, round bottom polystyrene test tube with cell strainer snap cap, use in flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceinisothiocynat-Dextran</td>
			<td>Sigma Aldrich, Germany</td>
			<td>60842-46-8</td>
			<td>FITC-dextran MW</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallios Flow Cytometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>-</td>
			<td>Flow cytometer machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hard-Shell 96-Well PCR Plates</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>HSP9601</td>
			<td>96 well, low profile, thin wall, skirted, white/clear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human CD14 MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Bioteck, Germany</td>
			<td>130-050-201</td>
			<td>2 mL microbeads conjugated to monoclonal anti-human CD14 antibody isotype IgG2a, used for selection of bovine monocytes from PBMCs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kaluza</td>
			<td>Beckman Coulter, Germany</td>
			<td>-</td>
			<td>Flow cytometer multicolor data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Column</td>
			<td>Miltenyi Bioteck, Germany</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Magnetic activated cell sorting or immune magentic cell separation colum for separation of various CD14 cell population based on cell surface antigens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MHC Class II DQ DR Polymorphic Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA2228F</td>
			<td>Mouse anti-sheep MHC Class II DQ DR Polymorphic:FITC, clone 49.1, isotype IgG2a, cross reactive with bovine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HS4325</td>
			<td>1.5 mL, conical bottom, graduated, sterial tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Power Point</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>The graphical illustrations of experimental design</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control:FITC for CD14, CD40 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928F</td>
			<td>Isotype control CD14 and CD40 monoclonal antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control:PE for CD86 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928PE</td>
			<td>Isotype control CD86 monoclonal antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 Negative Control:RPE for CD25 Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA928PE</td>
			<td>Isotype control CD25 monoclonal antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG2a Negative Control:FITC for MHC Class II Antibody</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MCA929F</td>
			<td>Isotype control for MHC class II monoclonal antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nobivac Rabies</td>
			<td>MSD Animal Health, UK</td>
			<td>-</td>
			<td>1 &#181;L/mL of cell cultured inactivated vaccine containing &#62; 2 I.U./mL Rabies virus strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical seals</td>
			<td>Bi0-Rad</td>
			<td>TCS0803</td>
			<td>0.2 mL flat PCR tube 8-cap strips, optical, ultraclear, compatible for qPCR machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher</td>
			<td>10010023</td>
			<td>pH 7.4, 1x concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism - GraphPad 5 Software&#160;</td>
			<td>Dotmatics</td>
			<td>-</td>
			<td>Statistical software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-human Ki-67 antibody</td>
			<td>Biolegend, USA</td>
			<td>350501</td>
			<td>Monoclonal antibody, cross reactive with cow, clone ki-67</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Mouse IgG1 k Isotype Ctrl Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>400101</td>
			<td>Isotype control for Ki-67 monoclonal antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>READIDROP Propidium Iodide</td>
			<td>BD Bio Sciences</td>
			<td>1351101</td>
			<td>Live/dead cell marker used for flow cytometry, amine reactive dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-2 Protein</td>
			<td>R&#38;D System, USA</td>
			<td>202-IL-010/CF</td>
			<td>Interleukin-2, 20 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74106</td>
			<td>Kit use for extraction of total RNA; RLT buffer = lysis buffer; RW1 buffer = stringent guanidine-containing washing buffer; RDD buffer = DNase buffer; RPE buffer = mild wash buffer; RNaseOUT = RNase inhibitor.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R8758</td>
			<td>Cell culture media with L-glutamine and sodium bicarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMART-servier medical art&#160;</td>
			<td>Les Laboratories Servier</td>
			<td>-</td>
			<td>Licensed under a creative commons attribution 3.0 unported license</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>172-5270</td>
			<td>2x qPCR mix conatins dNTPs, Ss07d fusion polymerase, MgCl2, SYBR Green I supermix = supermix, ROX normalization dyes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III First-Strand Synthesis System</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Fisher</td>
			<td>18080051</td>
			<td>Kit for cDNA synthsis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Test plate 24</td>
			<td>TPP, Switzerland</td>
			<td>92024</td>
			<td>24 well plate, sterilized by radiation , growth enhanced treated, volume 3.18 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution</td>
			<td>Gibco, Thermo Fisher</td>
			<td>15250061</td>
			<td>0.4%, 100 mL, dye to assess cell viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td>
			<td>Invitrogen, Thermo Fisher</td>
			<td>10977023</td>
			<td>0.1 &#181;m membrane filtered distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VACUETTE Heparin Blood Collection Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15206067</td>
			<td>VACUETTE Heparin Blood Collection Tubes have a green top and contain spray-dried lithium, sodium or ammonium heparin on the inner walls and are usedin clinical chemistry, immunology and serology. The anticoagulant heparin activates antithrombin, which blocks the clotting cascade and thus produces a whole blood/plasma sample.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>W3500-1L</td>
			<td>Sterile-filtered, bioReagent suitable for cell culture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of vaccine immunogenicity using bovine monocyte-derived dendritic cells

डेंड्राइटिक कोशिकाएं (डीसी) प्रतिरक्षा प्रणाली के भीतर सबसे शक्तिशाली एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाएं (एपीसी) हैं। वे रोगजनकों की तलाश में जीव को गश्त करते हैं और जन्मजात और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को जोड़कर प्रतिरक्षा प्रणाली के भीतर एक अनूठी भूमिका निभाते हैं। ये कोशिकाएं फैगोसाइट कर सकती हैं और फिर प्रभावी प्रतिरक्षा कोशिकाओं को कैप्चर किए गए एंटीजन पेश कर सकती हैं, जिससे प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की एक विविध श्रृंखला शुरू हो जाती है। यह पेपर मवेशी परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) से अलग गोजातीय मोनोसाइट-व्युत्पन्न डेंड्राइटिक कोशिकाओं (एमओडीसी) की इन विट्रो पीढ़ी और वैक्सीन इम्युनोजेनेसिटी के मूल्यांकन में उनके आवेदन के लिए एक मानकीकृत विधि प्रदर्शित करता है।
चुंबकीय-आधारित सेल सॉर्टिंग का उपयोग पीबीएमसी से सीडी 14+ मोनोसाइट्स को अलग करने के लिए किया गया था, और इंटरल्यूकिन (आईएल) -4 और ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ) के साथ पूर्ण संस्कृति माध्यम के पूरक का उपयोग सीडी 14 + मोनोसाइट्स के भेदभाव को प्रेरित करने के लिए किया गया था। अपरिपक्व एमओडीसी की पीढ़ी की पुष्टि प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स II (MHC II), CD86, और CD40 सेल सतह मार्करों की अभिव्यक्ति का पता लगाकर की गई थी। एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रेबीज वैक्सीन का उपयोग अपरिपक्व एमओडीसी को पल्स करने के लिए किया गया था, जिसे बाद में भोले लिम्फोसाइटों के साथ सह-सुसंस्कृत किया गया था।
एंटीजन-स्पंदित एमओडीसी और लिम्फोसाइट सह-संस्कृति के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण ने केआई -67, सीडी 25, सीडी 4 और सीडी 8 मार्करों की अभिव्यक्ति के माध्यम से टी लिम्फोसाइट प्रसार की उत्तेजना का खुलासा किया। मात्रात्मक पीसीआर का उपयोग करके आईएफएन -γ और केआई -67 की एमआरएनए अभिव्यक्ति के विश्लेषण से पता चला है कि एमओडीसी इस इन विट्रो सह-संस्कृति प्रणाली में लिम्फोसाइटों के एंटीजन-विशिष्ट प्राइमिंग को प्रेरित कर सकते हैं। इसके अलावा, एलिसा का उपयोग करके मूल्यांकन किए गए आईएफएन -γ स्राव ने गैर-एंटीजन-स्पंदित एमओडीसी-लिम्फोसाइट सह-संस्कृति की तुलना में रेबीज वैक्सीन-स्पंदित एमओडीसी-लिम्फोसाइट सह-संस्कृति में काफी अधिक टिटर (*पी < 0.01) दिखाया। ये परिणाम वैक्सीन इम्युनोजेनेसिटी को मापने के लिए इस इन विट्रो एमओडीसी परख की वैधता दिखाते हैं, जिसका अर्थ है कि इस परख का उपयोग विवो परीक्षणों में आगे बढ़ने से पहले मवेशियों के लिए संभावित वैक्सीन उम्मीदवारों की पहचान करने के साथ-साथ वाणिज्यिक टीकों के वैक्सीन इम्युनोजेनेसिटी आकलन में किया जा सकता है।

यह पद्धति विवो अध्ययनों में प्रदर्शन करने से पहले उम्मीदवार वैक्सीन एंटीजन के मूल्यांकन के लिए मवेशी एमओडीसी की इन विट्रो पीढ़ी का वर्णन करती है। चित्र 1 गोजातीय एमओडीसी उत्पादन की ?...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Vaccine Immunogenicity Using Bovine Monocyte-Derived Dendritic Cells at JoVE.com

Determination of Vaccine Immunogenicity Using Bovine Monocyte-Derived Dendritic Cells

कार्यप्रणाली गोजातीय मोनोसाइट-व्युत्पन्न डेंड्राइटिक कोशिकाओं (एमओडीसी) की पीढ़ी और मवेशियों में संभावित पशु चिकित्सा टीकों के विकास के दौरान एंटीजेनिक उम्मीदवारों के इन विट्रो मूल्यांकन के लिए उनके आवेदन का वर्णन करती है।

गोजातीय मोनोसाइट-व्युत्पन्न डेंड्राइटिक कोशिकाओं का उपयोग करके वैक्सीन इम्युनोजेनेसिटी का निर्धारण

Dendritic cells (DCs) are the most potent antigen-presenting cells (APCs) within the immune system. They patrol the organism looking for pathogens and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

माउस फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं का अलगाव

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Generation of a Novel Dendritic-cell Vaccine Using Melanoma and Squamous Cancer Stem Cells

मेलानोमा और स्क्वैमस कैंसर स्टेम सेल का उपयोग करके एक उपन्यास डेंड्रिटिक-सेल वैक्सीन की पीढ़ी

We identified cancer stem cell (CSC)-enriched populations from murine melanoma D5 syngeneic to C57BL/6 mice and the squamous cancer SCC7 syngeneic to C3H ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

सक्रियण और मानव monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं में आईएल 1β का प्रयोग NLRP3 inflammasome गतिविधि की माप

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Characterization of Human Monocyte-derived Dendritic Cells by Imaging Flow Cytometry: A Comparison between Two Monocyte Isolation Protocols

इमेजिंग से फ्लो द्वारा मानव monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं की विशेषता: दो Monocyte अलगाव प्रोटोकॉल के बीच एक तुलना

Dendritic cells (DCs) are antigen presenting cells of the immune system that play a crucial role in lymphocyte responses, host defense mechanisms, and ...

Generation of Human Monocyte-derived Dendritic Cells from Whole Blood

पूरे रक्त से मानव monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं की पीढ़ी

Dendritic cells (DCs) recognize foreign structures of different pathogens, such as viruses, bacteria, and fungi, via a variety of pattern recognition ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

विकास और एक Ultrasensitive एकल अणु सरणी डिजिटल एंजाइम के सत्यापन-मानव इंटरफेरॉन के लिए Immunosorbent परख से जुड़े-α

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...

siRNA Electroporation to Modulate Autophagy in Herpes Simplex Virus Type 1-Infected Monocyte-Derived Dendritic Cells

सिरियाना इलेक्ट्रोपोरिओशन हरपीज सिंप्लेक्स वायरस प्रकार 1-संक्रमित मोनोसाइट-रिडेरिड डेन्ड्रिटिक सेल में ऑटोफैगी को मॉडूलेट करने के लिए

Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) induces autophagy in both, immature dendritic cells (iDCs) as well as mature dendritic cells (mDCs), whereas ...

In Vitro Stimulation and Visualization of Extracellular Trap Release in Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

विट्रो उत्तेजना और विक्षेत मानव मोनोसाइट व्युत्पन्न मैक्रोफेज में extracellular ट्रैप रिलीज के दृश्य

The release of extracellular traps (ETs) by neutrophils has been identified as a contributing factor to the development of diseases related to chronic ...

Visualization of Inflammatory Caspases Induced Proximity in Human Monocyte-Derived Macrophages

मानव मोनोसाइट-व्युत्पन्न मैक्रोफेज में भड़काऊ प्रेरित निकटता का विज़ुअलाइज़ेशन

Inflammatory caspases include caspase-1, -4, -5, -11, and -12 and belong to the subgroup of initiator caspases. Caspase-1 is required to ensure correct ...

De-Sialylated मोनोसाइट-व्युत्पन्न-DCs Sialidase उपचार का उपयोग कर पृथक PBMC से

Generation of Monocyte-Derived Dendritic Cells with Differing Sialylated Phenotypes

लेखक स्पॉटलाइट: कोशिका की सतह के sialidases आधारित एंजाइमी उपचार का उपयोग वृक्ष के समान कोशिकाओं परिपक्वता 

"अलग-अलग सिलीलेटेड फेनोटाइप्स के साथ मोनोसाइट-व्युत्पन्न डेंड्राइटिक कोशिकाओं की पीढ़ी"

Sialic acids are negatively charged monosaccharides typically found at the termini of cell surface glycans. Due to their hydrophilicity and biophysical ...