Name: isolating and culturing vestibular and spiral ganglion somata from neonatal rodents for patch-clamp recordings
Uploaded: 2023-04-21T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Culturing Vestibular and Spiral Ganglion Somata from Neonatal Rodents for Patch-Clamp Recordings at JoVE.com

We erkennen Drs. Jing Bing Xue en Ruth Anne Eatock voor hun vroege bijdragen aan deze methoden. Dit werk werd ondersteund door NIH NIDCD R03 DC012652 en NIH NIDCD DC012653S, en R01 DC0155512 naar RK en T32 DC009975 naar DB, NN en KR.

Al het hier beschreven gebruik van dieren is goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van de University of Southern California. Dieren in dit protocol zijn P3- tot P25-gerijpte Long Evans-ratten van beide geslachten verkregen van Charles River Laboratories, maar deze methoden kunnen worden toegepast op andere knaagdierstammen. Bij alle procedures moeten een laboratoriumjas en handschoenen worden gedragen, evenals een spatbril bij het maken van oplossingen.
1. Voorb...

<ol>
	<li>Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-neuron+labeling+in+the+cat+auditory+nerve.">Single-neuron labeling in the cat auditory nerve.</a> Science. 216 (4551), 1239-1241 (1982).</li><li>Goldberg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Afferent+diversity+and+the+organization+of+central+vestibular+pathways.">Afferent diversity and the organization of central vestibular pathways.</a> Experimental Brain Research. 130 (3), 277-297 (2000).</li><li>Kalluri, R., Xue, J., Eatock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+channels+set+spike+timing+regularity+of+mammalian+vestibular+afferent+neurons.">Ion channels set spike timing regularity of mammalian vestibular afferent neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 104 (4), 2034-2051 (2010).</li><li>Smith, C. E., Goldberg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stochastic+afterhyperpolarizaton+model+of+repetitive+activity+in+vestibular+afferents.">A stochastic afterhyperpolarizaton model of repetitive activity in vestibular afferents.</a> Biological Cybernetics. 54 (1), 41-51 (1986).</li><li>Berglund, A. M., Ryugo, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+innervation+by+spiral+ganglion+neurons+in+the+mouse.">Hair cell innervation by spiral ganglion neurons in the mouse.</a> The Journal of Comparative Neurology. 255 (4), 560-570 (1987).</li><li>Jagger, D. J., Housley, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+properties+of+type+II+spiral+ganglion+neurones+identified+in+a+neonatal+rat+cochlear+slice.">Membrane properties of type II spiral ganglion neurones identified in a neonatal rat cochlear slice.</a> Journal of Physiology. 552, 525-533 (2003).</li><li>Reid, M. A., Flores-Otero, J., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firing+patterns+of+type+II+spiral+ganglion+neurons+in+vitro).">Firing patterns of type II spiral ganglion neurons in vitro).</a> The Journal of Neuroscience. 24 (3), 733-742 (2004).</li><li>Lv, P., Wei, D., Yamoah, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kv7-type+channel+currents+in+spiral+ganglion+neurons:+involvement+in+sensorineural+hearing+loss.">Kv7-type channel currents in spiral ganglion neurons: involvement in sensorineural hearing loss.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285 (45), 34699-34707 (2010).</li><li>Mo, Z. L., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+firing+patterns+of+murine+spiral+ganglion+neurons.">Endogenous firing patterns of murine spiral ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 77 (3), 1294-1305 (1997).</li><li>Almanza, A., Luis, E., Mercado, F., Vega, R., Soto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identity,+ontogeny,+and+cAMP+modulation+of+the+hyperpolarization-activated+current+in+vestibular+ganglion+neurons.">Molecular identity, ontogeny, and cAMP modulation of the hyperpolarization-activated current in vestibular ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 108 (8), 2264-2275 (2012).</li><li>Horn, R., Marty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscarinic+activation+of+ionic+currents+measured+by+a+new+whole-cell+recording+method.">Muscarinic activation of ionic currents measured by a new whole-cell recording method.</a> The Journal of General Physiology. 92 (2), 145-159 (1988).</li><li>Grant, L., Yi, E., Goutman, J. D., Glowatzki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+recordings+at+afferent+dendrites+contacting+cochlear+inner+hair+cells:+Monitoring+multivesicular+release+at+a+ribbon+synapse.">Postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: Monitoring multivesicular release at a ribbon synapse.</a> Journal of Visualized Experiments. (48), e2442 (2010).</li><li>Bronson, D., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscarinic+acetylcholine+receptors+modulate+HCN+channel+properties+in+vestibular+ganglion+neurons.">Muscarinic acetylcholine receptors modulate HCN channel properties in vestibular ganglion neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 43 (6), 902-917 (2023).</li><li>Hodgkin, A. L., Huxley, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+components+of+membrane+conductance+in+the+giant+axon+of+Loligo.">The components of membrane conductance in the giant axon of Loligo.</a> The Journal of Physiology. 116 (4), 473-496 (1952).</li><li>Chabbert, C., Chambard, J. M., Valmier, J., Sans, A., Desmadryl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-activated+sodium+currents+in+acutely+isolated+mouse+vestibular+ganglion+17eurons.">Voltage-activated sodium currents in acutely isolated mouse vestibular ganglion 17eurons.</a> Neuroreport. 8 (5), 1253-1256 (1997).</li><li>Bean, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+potential+in+mammalian+central+neurons.">The action potential in mammalian central neurons.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 8 (6), 451-465 (2007).</li><li>Izhikevich, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dynamical Systems in Neuroscience. , (2018).</li><li>Chabbert, C., Chambard, J. M., Sans, A., Desmadryl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+depolarization-activated+potassium+currents+in+acutely+isolated+mouse+vestibular+neurons.">Three types of depolarization-activated potassium currents in acutely isolated mouse vestibular neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 85 (3), 1017-1026 (2001).</li><li>Risner, J. R., Holt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+potassium+conductances+contribute+to+the+diverse+firing+properties+of+postnatal+mouse+vestibular+ganglion+neurons.">Heterogeneous potassium conductances contribute to the diverse firing properties of postnatal mouse vestibular ganglion neurons.</a> Journal of Neurophysiology. 96 (5), 2364-2376 (2006).</li><li>Iwasaki, S., Chihara, Y., Komuta, Y., Ito, K., Sahara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-voltage-activated+potassium+channels+underlie+the+regulation+of+intrinsic+firing+properties+of+rat+vestibular+ganglion+cells.">Low-voltage-activated potassium channels underlie the regulation of intrinsic firing properties of rat vestibular ganglion cells.</a> Journal of Neurophysiology. 100 (4), 2192-2204 (2008).</li><li>Cervantes, B., Vega, R., Lim&#243;n, A., Soto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identity,+expression+and+functional+role+of+the+sodium-activated+potassium+current+in+vestibular+ganglion+afferent+neurons.">Identity, expression and functional role of the sodium-activated potassium current in vestibular ganglion afferent neurons.</a> Neuroscience. 240, 163-175 (2013).</li><li>Biel, M., Wahl-Schott, C., Michalakis, S., Zong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarization-activated+cation+channels:+From+genes+to+function.">Hyperpolarization-activated cation channels: From genes to function.</a> Physiological Reviews. 89 (3), 847-885 (2009).</li><li>Davis, R. L., Crozier, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+firing+properties+of+type+I+spiral+ganglion+neurons.">Dynamic firing properties of type I spiral ganglion neurons.</a> Cell and Tissue Research. 361 (1), 115-127 (2015).</li><li>Reijntjes, D. O. J., Pyott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+afferent+signaling+complex:+Regulation+of+type+I+spiral+ganglion+neuron+responses+in+the+auditory+periphery.">The afferent signaling complex: Regulation of type I spiral ganglion neuron responses in the auditory periphery.</a> Hearing Research. 336, 1-16 (2016).</li><li>Eatock, R. A., Christov, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ionic Conductances of Vestibular Afferent Neurons: Shaping Head Motion Signals From the Inner Ear. , (2020).</li><li>Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarities+in+the+biophysical+properties+of+spiral-ganglion+and+vestibular-ganglion+neurons+in+neonatal+rats.">Similarities in the biophysical properties of spiral-ganglion and vestibular-ganglion neurons in neonatal rats.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 710275 (2021).</li><li>Armstrong, C. E., Roberts, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+properties+of+frog+saccular+hair+cells:+distortion+by+enzymatic+dissociation.">Electrical properties of frog saccular hair cells: distortion by enzymatic dissociation.</a> The Journal of Neuroscience. 18 (8), 2962-2973 (1998).</li><li>Rocha-Sanchez, S. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+expression+of+Kcnq4+in+vestibular+neurons+and+neurosensory+epithelia.">Developmental expression of Kcnq4 in vestibular neurons and neurosensory epithelia.</a> Brain Research. 1139, 117-125 (2007).</li><li>Meredith, F. L., Rennie, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zonal+variations+in+K++currents+in+vestibular+crista+calyx+terminals.">Zonal variations in K+ currents in vestibular crista calyx terminals.</a> Journal of Neurophysiology. 113 (1), 264-276 (2015).</li><li>Cai, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+activity+of+primary+auditory+neurons+in+the+presence+of+neurotrophins+and+antibiotics.">Time-dependent activity of primary auditory neurons in the presence of neurotrophins and antibiotics.</a> Hearing Research. 350, 122-132 (2017).</li><li>Needham, K., Nayagam, B. A., Minter, R. L., O'Leary, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+application+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+and+its+impact+on+spiral+ganglion+neuron+firing+properties+and+hyperpolarization-activated+currents.">Combined application of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 and its impact on spiral ganglion neuron firing properties and hyperpolarization-activated currents.</a> Hearing Research. 291 (1-2), 1-14 (2012).</li><li>Adamson, C. L., Reid, M. A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+actions+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+on+firing+features+and+ion+channel+composition+of+murine+spiral+ganglion+neurons.">Opposite actions of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 on firing features and ion channel composition of murine spiral ganglion neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 22 (4), 1385-1396 (2002).</li><li>Zhou, Z., Liu, Q., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+regulation+of+spiral+ganglion+neuron+firing+patterns+by+neurotrophin-3.">Complex regulation of spiral ganglion neuron firing patterns by neurotrophin-3.</a> The Journal of Neuroscience. 25 (33), 7558-7566 (2005).</li><li>Liu, X. -. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+channel+diversity+in+the+vestibular+ganglion:+NaV1.5,+NaV1.8,+and+tetrodotoxin-sensitive+currents.">Sodium channel diversity in the vestibular ganglion: NaV1.5, NaV1.8, and tetrodotoxin-sensitive currents.</a> Journal of Neurophysiology. 115 (5), 2536-2555 (2016).</li></ol>

De hier gepresenteerde methoden zijn specifiek voor opnames van geïsoleerde neuronen; Eerdere studies hebben zich gericht op opnames van axonterminals in een semi-intact preparaat. In vergelijking met bestaande terminalopnametechnieken bieden geïsoleerde opnames een superieur ruimteklem- en isopotentiaalgedrag. Bovendien biedt dit protocol toegang tot een bredere steekproef van neuronen, aangezien alleen kelkdragende subpopulaties toegankelijk zijn in semi-intacte opnames van de vestibulaire epitheel. Ten slotte maken ...

De bipolaire neuronen van de vestibulocochleaire zenuw verbinden de sensorische haarcellen van het binnenoor met de hersenstam. Zij zijn de belangrijkste dragers van informatie over geluid en hoofdbewegingen; Schade aan deze belangrijke cellen leidt tot doofheid en evenwichtsstoornissen. De vestibulaire en auditieve delen van de zenuw bestaan elk uit verschillende celtypen die morfologisch en functioneel divers zijn 1,2. In het vestibulaire systeem vuren twee afferente subpopulaties spontaan met tussenpozen die regelmatig of onregelmatig zijn2. Afferente piektiming wordt verondersteld een onderliggende diversiteit in ionenkanaalsamenstelling te weerspiegelen 3,4. In het auditieve systeem zijn er twee belangrijke subpopulaties van spiraalvormige ganglionneuronen (SGN's); Terwijl Type I SGN's contact maken met individuele binnenste haarcellen5, komen Type II SGN's in contact met meerdere buitenste haarcellen5. In vitro opnames van semi-intacte en organotypische culturen suggereren verschillen in de membraaneigenschappen van Type I en Type II SGN's 6,7.
Veel ionkanalen en neurotransmitterreceptoren die aan de uiteinden van deze neuronen worden aangetroffen, worden ook in hun cellichamen aangetroffen. Als zodanig kunnen culturen van de geïsoleerde vestibulaire en de spiraalvormige ganglionsomata in vitro worden bestudeerd om te begrijpen hoe ionkanalen en neurotransmitterreceptoren bijdragen aan de respons van deze neuronen. De compacte morfologie van de geïsoleerde cellichamen maakt elektrische opnames van hoge kwaliteit mogelijk, geschikt voor gedetailleerde karakterisering van spanningsafhankelijke ionkanalen en neurotransmitterreceptoren. Gemakkelijke toegang tot een representatieve verscheidenheid aan neuronsubtypes maakt een high-throughput analyse van celdiversiteit mogelijk.
Dit artikel presenteert een methode voor het isoleren en kweken van gedissocieerde ganglioncellichamen uit het superieure deel van het vestibulaire ganglion bij ratten op postnatale dag (P)9 tot P20. Er worden ook suggesties gedaan om deze methoden uit te breiden naar het spiraalvormige ganglion, naast de stappen die nodig zijn voor het succesvol extraheren, dissociëren en plateren van de ganglioncellen. Deze methoden zijn een evolutie van de methoden die zijn bedacht in publicaties van verschillende laboratoria 8,9,10. In dit artikel zijn ook richtlijnen opgenomen voor het selecteren van gezonde cellen voor patch-clamp-opnames.
Ten slotte schetst het protocol de procedure voor het opnemen van patch-clamps met behulp van de geperforeerde patchconfiguratie11. Hoewel de configuratie met geperforeerde pleisters tijdrovender en technisch uitdagender is dan de meer gebruikelijke configuratie met gescheurde pleisters, is het beter voor het behoud van het cytoplasmatische milieu dat lange en stabiele opnamesessies mogelijk maakt. De voordelen van deze opnameconfiguratie worden hier geïllustreerd door de verbeterde stabiliteit van hyperpolarisatie-geactiveerde kationische stromen in geperforeerde pleisters ten opzichte van gescheurde pleisteropnamen.
Dit protocol is onderverdeeld in vijf secties. In de paragrafen 1-3 worden oplossingen en hulpmiddelen beschreven die van tevoren kunnen worden voorbereid en opgeslagen. Sectie 4 beschrijft de stappen voor het ontleden en plateren van de vestibulaire en SGN's. Sectie 5 beschrijft de stappen voor het opnemen van de neuronen na een periode in kweek. In onze handen worden sectie 4 en sectie 5 uitgevoerd over een periode van 2 opeenvolgende dagen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amphotericin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4888-100MG</td>
			<td>For perforated patch recordings.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATP di-sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7699</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x), serum free</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504044</td>
			<td>additive to culture medium, for SGN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beakers (1000, 100, 10) milliliter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bench-top centrifuge</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>2641-0016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>1311-01</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5318</td>
			<td>one out of three enzyme to digest tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass, rectangular, #1 thickness, 22x40&#160;</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>90082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I,from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>one out of three enzyme to digest tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #3 Forceps (Blunt)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11231-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps (Fine)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps (Fine)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E0396</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Puller</td>
			<td>Narashige</td>
			<td>PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epi-illumination light source&#160;</td>
			<td>Zeiss&#160;</td>
			<td>CL 1500 ECO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td>for cleaning head and around dissection bench</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filamented Borosilicate Capillaries for electrodes</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>BF140-117-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine-edged dissection blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur Pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14673-010</td>
			<td>to pull trituration pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat-inactivated Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16140063</td>
			<td>additive to culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-100G</td>
			<td>for pH buffering all solutions in protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate / magnetic stirrers&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>76549-914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulated bucket filled with ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to keep all samples and solutions cool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2SO4, Potassium Sulfate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9458-250G</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P93333</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH (1 M)</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>319376-500ML</td>
			<td>To bring internal solution to desired pH.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14133-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz medium&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L4386</td>
			<td>dissection and bath solutions&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-profile-bath recording chamber for culture dishes</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>luer-lok syringes, 30 ml</td>
			<td>BD</td>
			<td>302832</td>
			<td>for drawing L-15/HEPES/HEPES solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM + Glutamax Supplement</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>41-090-101</td>
			<td>base of the culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2-Hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1028</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microFil needle for filling micropipettes - 34 gauge&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MF34G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Narashige</td>
			<td>MF-90</td>
			<td>For electrode polishing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement (100x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>additiive to culture medium, for SGN</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Additive to internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH (1 M)</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>319511-500ML</td>
			<td>for titration pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Advanced Instruments Inc.</td>
			<td>3320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen, Medical grade, with adequate regulator and tubing</td>
			<td>USC Material Management</td>
			<td>MEDOX200 (Identifier: 00015)</td>
			<td>for dissolving into dissection and bath solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette bulb (3 ml)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-25</td>
			<td>bulb for trituration pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>additive to prevent contamination of culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital based euthanasia solution (e.g., Fatal Plus. 50 &#8211; 60 mg/kg dosing)&#160;</td>
			<td>MWI Animal Health</td>
			<td>15199</td>
			<td>for euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PES membrane filters ,&#160; 0.2 micrometer&#160;</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>566-0020</td>
			<td>for filtering solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PES membrane sterile syringe filters, 0.22 um, 30 mm&#160;</td>
			<td>CELLTREAT</td>
			<td>229747</td>
			<td>for filtering solutions drawn into syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, 35 x 10 mm</td>
			<td>Genessee Scientific</td>
			<td>32-103</td>
			<td>for micro dissection and to hold Tip dip solution in perforated-patch configuration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes, 60 x 15 mm</td>
			<td>Midland Scientific</td>
			<td>P7455</td>
			<td>for gross dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>Model S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettors (1000, 200, 10) microliter</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-d-lysine coated glass bottomed culture dish</td>
			<td>Mattek</td>
			<td>P35GC-0-10-C</td>
			<td>to plate neurons for culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quick change platform, heated base, for 35 mm culture dishes</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reference Cell</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>RC1T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blade</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scientific Scale</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>XS64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes (10, 25) milliliter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Grease Kit (for sealing coverglass and chamber)</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Guillotine</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>DCAP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal guillotine</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>DCAP</td>
			<td>for decapitation if dissecting rats older than P15.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Dissection Microscope&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (3, 10, 30) milliliter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426</td>
			<td>one out of three enzyme to digest tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tuberculin syringe&#160;</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881500105</td>
			<td>for delivering euthanasia solution by intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissor, 2.5 mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric flask, 1000 milliliter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>VWR</td>
			<td>945300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, sterile u ltrapure, R&#62;18.18 megaOhms cm (e.g., filtered by a Millipore-Sigma water purification system)</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>CDUFBI001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolating and culturing vestibular and spiral ganglion somata from neonatal rodents for patch-clamp recordings

De compacte morfologie van geïsoleerde en gekweekte ganglionneuronen in het binnenoor maakt gedetailleerde karakteriseringen mogelijk van de ionkanalen en neurotransmitterreceptoren die bijdragen aan de celdiversiteit in deze populatie. Dit protocol schetst de stappen die nodig zijn voor het succesvol ontleden, dissociëren en op korte termijn kweken van de somata van bipolaire neuronen in het binnenoor met het oog op patch-clamp-opnames. Gedetailleerde instructies voor het voorbereiden van vestibulaire ganglionneuronen worden voorzien van de nodige aanpassingen die nodig zijn voor het plateren van spiraalvormige ganglionneuronen. Het protocol bevat instructies voor het uitvoeren van patch-clamp-opnames van hele cellen in de configuratie met geperforeerde patch. Voorbeeldresultaten die de spanningsklemopnames van hyperpolarisatie-geactiveerde cyclische nucleotide-gated (HCN)-gemedieerde stromen karakteriseren, benadrukken de stabiliteit van de opnameconfiguratie van geperforeerde pleisters in vergelijking met de meer standaard configuratie met gescheurde pleisters. De combinatie van deze methoden, geïsoleerde somata plus geperforeerde-patch-clamp-opnames, kan worden gebruikt om cellulaire processen te bestuderen die lange, stabiele opnames vereisen en het behoud van intracellulair milieu, zoals signalering via G-proteïne gekoppelde receptoren.

Het uitvoeren van spanningsklemprotocollen door families van spanningsstappen toe te passen, onthult de spanningsafhankelijke activering van een verscheidenheid aan verschillende stroomfamilies. Representatieve voorbeelden van stromen van hele cellen die worden opgeroepen door een VGN en aangepast zijn aan de hand van gepubliceerde opnames13 worden weergegeven in figuur 1A,B. Het toepassen van depolariserende spanningen (Figuur 1B...

Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Culturing Vestibular and Spiral Ganglion Somata from Neonatal Rodents for Patch-Clamp Recordings at JoVE.com

Isolating and Culturing Vestibular and Spiral Ganglion Somata from Neonatal Rodents for Patch-Clamp Recordings

Hier worden methoden gepresenteerd die gedetailleerde instructies geven voor het ontleden, dissociëren, kweken en patch-clamp-opname van vestibulaire ganglion- en spiraalvormige ganglionneuronen van het binnenoor.

Isoleren en kweken van vestibulaire en spiraalvormige ganglion somata van neonatale knaagdieren voor patch-clamp opnames

The compact morphology of isolated and cultured inner ear ganglion neurons allows for detailed characterizations of the ion channels and neurotransmitter ...

Veel ionkanalen en neurotransmitterreceptoren die worden aangetroffen aan de uiteinden van auditieve en vestibulaire afferente neuronen worden ook aangetroffen in hun cellichamen. Culturen van geïsoleerde cellichamen kunnen in vitro worden bestudeerd om te begrijpen hoe deze ionkanalen en receptoren de reacties van de neuronen beïnvloeden. De compacte morfologie van de cellichamen maakt elektrische opnames van hoge kwaliteit mogelijk om de spanningsafhankelijke eigenschappen van de ionkanalen en neurotransmitterreceptoren te karakteriseren.Bovendien zorgt de gemakkelijke toegang tot een grote verscheidenheid aan celtypen voor een hoge doorvoer door een fysische analyse van de celdiversiteit. De procedures zullen worden gedemonstreerd door afgestudeerde student Katherine Regalado, samen met postdoctorale fellows, Dr. Daniel Bronson en Nathaniel Nowak van mijn laboratorium. Houd om te beginnen een glazen weidepipet tegen de vlam van een bunsenbrander om tritratiepipetten voor te bereiden op celdissociatie.Zodra de glazen punt begint te smelten, rekt u het glas uit tot de gewenste diameter van de punt. Trek het ene uiteinde van de pipet weg van de vlam om een kleine bocht te maken. Plaats de gebogen pipet onder een microscoop.Snijd en breek het glas met behulp van een scoretegel op de gewenste diameter. Haal de pipetpunt over de bovenkant van de brandervlam. Hierdoor worden de ruwe randen bij de punt snel gepolijst.Schep de hersenen van de geëuthanaseerde muis eruit met een gesloten chirurgische schaar. Snijd en verwijder de hersenzenuw om de hersenen volledig los te maken van de schedel. Begin aan de achterkant van het hoofd, trek het doorzichtige vliezige materiaal eraf met een tang en knip vervolgens de bovenkant van de schedel uit met een chirurgische schaar.Verwijder het overtollige weefsel van de achterkant van het hoofd en de nek om het dissectiegebied en het otische kapsel schoner en gemakkelijker toegankelijk te maken. Breng het weefsel over in een tweede petrischaal met verse L-15-oplossing. Lokaliseer vervolgens het otische kapsel en de auditieve, superieure, vestibulaire en inferieure vestibulaire zenuwen.Scheid de superieure en inferieure ganglia met een kleine veerschaar en knip de gehoorzenuw weg. Scheer met een scalpel voorzichtig de benige rand af om het benige gebied waaronder de zenuw in het benige kapsel duikt, te verzwakken. Verwijder het vuil voorzichtig met een scalpel, waarbij het hele gezwollen deel van het ganglion zichtbaar wordt.Gebruik de fijne veerschaar om het ganglion te knippen en te scheiden van de perifere zenuwtak die naar de utrikel duikt. Verwijder het superieure ganglion met een fijne pincet en breng het over in een petrischaal van 35 millimeter met verse L-15-oplossing. Giet na het voorverwarmen van de enzymoplossing het enzymmengsel in een petrischaal van 35 millimeter en plaats deze gedurende 10 tot 15 minuten in een incubator van 37 graden Celsius.Reinig het ganglion met een fijne pincet en een kleine veerschaar door bot, overtollig weefsel, zenuwvezels en andere overbodige structuren te verwijderen. Zorg ervoor dat u het verwijderen van ganglionweefsel tot een minimum beperkt. Breng de gereinigde ganglia over in de voorverwarmde enzymoplossing en plaats deze 10 tot 40 minuten terug in de incubator.Breng vervolgens de ganglia over naar de petrischaal van 35 millimeter met verse L-15-oplossing. Breng na twee tot drie minuten de ganglia over in een andere petrischaal van 35 millimeter gevuld met gefilterde kweekmedia. Breng ongeveer 150 microliter gefilterde kweekmedia over op een gecoate glazen bodemschaal.Breng vervolgens het gewenste aantal ganglia over op het dekglaasje. Zuig een kleine hoeveelheid kweekmedia uit het kweekschaaltje en spoel de tritratiepipet met medium om te voorkomen dat het weefsel aan de zijkanten van de glazen pipet blijft plakken. Tritureer door het weefsel voorzichtig en herhaaldelijk door de pipet te halen totdat de ganglia voldoende gedissocieerd zijn.Controleer na vijf minuten onder een lichtmicroscoop of de cellen zich op het dekglaasje hebben genesteld. Plaats een kweekschaal voorzichtig gedurende 12 tot 24 uur in een incubator van 37 graden Celsius. Zoek vervolgens het otische kapsel na het doorsnijden van het hoofd en haal het uit de schedel door de randen weg te hakken met een pincet.Het spiraalvormige gedeelte van het otische kapsel herbergt het slakkenhuis met het orgaan van Corti. Snijd het bot weg, over de cochleaire bochten met een fijne pincet evenwijdig aan de kromming van het bot. Gebruik een kleine veerschaar om de modiolus aan de basis van het slakkenhuis door te snijden om het te bevrijden van de rest van het otische kapsel.Knip het orgaan van Corti in twee of drie windingen met behulp van een kleine veerschaar zodat het plat ligt, en snijd de modiolus uit elke omwenteling. Verwijder de stria vascularis door met een fijne pincet in de stria aan de basis te knijpen. Wikkel rond de spiraal en tot aan de top om deze los te pellen van het orgaan van Corti.Verwijder het spiraalvormige ganglion door te snijden aan de rand van waar de spiraalvormige ganglion-neuronvezelbanen uitsteken in de richting van de haarcellen en reinig vervolgens het ganglion zoals eerder getoond. Na enzymatische behandeling van het spiraalganglion, tritrate het spiraalganglion in het kweekmedium aangevuld met N2 en B27. Plaats de kweekschaal met de gedissocieerde ganglia gedurende 12 tot 24 uur in een incubator van 37 graden Celsius en 5% kooldioxide.Doop de punt van de pipet in de schone oplossing van de kweekschaal om deze te vullen met een schone oplossing die geen amfotericine bevat. Vul de achterkant van de pipet met de inwendige oplossing die amfotericine bevat. Doop de punt van de pipet terug in de schone oplossing van de kweekschaal terwijl de amfotericine langzaam vanaf de achterkant van de pipet in de punt komt.Vul vervolgens de pipet met de amfotericine-oplossing van maximaal tweederde van de pipet. Laat de pipet in het bad van de opnamekamer zakken en plaats de pipetpunt in het midden van het gezichtsveld. Zorg ervoor dat de punt vrij is van luchtbellen of ander vuil.Plaats de pipet dicht bij het membraan en land stevig op het midden van de cel. Oefen negatieve druk of afzuiging uit met behulp van een spuit of mondpipet. Schakel het houdpotentiaal van min 60 millivolt in.De afdichtingsweerstand moet toenemen totdat deze een giga-ohm passeert. Zodra zich een giga ohm-afdichting vormt, laat u de onderdruk los. Voordat tyrosine begint te werken, neemt de ingangsweerstand langzaam af en neemt de stroom die vloeit als reactie op de spanningsstap van vijf millivolt geleidelijk toe naarmate het amfotericine het membraan binnendringt.De representatieve voorbeelden van hele celstromen die worden opgeroepen door een vestibulair ganglionneuron worden weergegeven in deze figuur. De netto inkomende natriumstromen worden hier geïdentificeerd door hun voorbijgaande activering en inactivering. De netto uitgaande stromen worden grotendeels gedragen door kaliumionen en hebben een veel langzamere activerings- en inactiveringskinetiek dan natriumstromen.De door hyperpolarisatie geactiveerde cyclische nucleotide-gated currents, of HCN-stromen, worden geactiveerd door een familie van langdurige hyperpolariserende spanningen. De stabiliteit van de karakterisering van het ionenkanaal in de geperforeerde pleister op verschillende tijdstippen tijdens de opname wordt weergegeven in deze afbeelding. De spanningsafhankelijke activeringscurven van HCN-stromen werden gemeten in een geperforeerde patchconfiguratie.De curve heeft een sigmoïdale vorm en was stabiel gedurende een lange opname. De relatieve instabiliteit van de gescheurde pleistermodus wordt geïllustreerd door niet-overlappende sigmoïdale krommen van verschillende tijdstippen. De activeringscurven van HCN-stromen tijdens een gescheurde patchconfiguratie worden hier weergegeven.De vuurpatronen in vijf vestibulaire ganglionsomara, vijf spiraalvormige ganglionneuronen en de bijbehorende huidige stappen worden hier weergegeven. Deze heterogeniteit in vuurpatronen weerspiegelt een fundamentele diversiteit in de samenstelling van onderliggende natrium- en kaliumkanalen in zowel vestibulaire ganglionneuronen als spiraalvormige ganglionneuronen. Om de overleving van de cellen tijdens deze procedure te maximaliseren, moet u de vorming van luchtbellen vermijden, het weefsel niet overbelasten en de cellen laten bezinken voordat u monsters in de incubator plaatst.Geperforeerde patchklem maakt de studie mogelijk van ionkanalen die worden gemoduleerd door cytosolische tweede boodschappers, wat van cruciaal belang is voor het onderzoeken van de effecten van efferente neurotransmitters op ganglionneuronen. Patchklemopnames van deze bipolaire neuronen hebben een belangrijke rol gespeeld bij het onthullen hoe biofysische diversiteit bijdraagt aan functionele diversiteit in sensorische neuronen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Patch Clamp Opnamen van Mouse Retinal Neuronen in een donker aangepaste Slice Voorbereiding

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish

Gepaarde Patch Clamp Recordings van Motor-neuron en Target Skeletal Muscle in de zebravis

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle.  ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

Isoleren neus Olfactorische stamcellen van Knaagdieren of mensen

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Culturing and Electrophysiology of Cells on NRCC Patch-clamp Chips

Kweken en Elektrofysiologie van cellen op NRCC Patch-clamp Chips

Due to its exquisite sensitivity and the ability to monitor and control individual cells at the level of ion channels, patch-clamping is the gold standard ...

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish

Patch Clamp Opnamen in Binnen-oorhaar cellen geïsoleerd uit zebravis

Patch  clamp analyses of the voltage-gated channels in sensory hair cells isolated  from a variety of species have been described previously1-4 but this  ...

F1FO ATPase Vesicle Preparation and Technique for Performing Patch Clamp Recordings of Submitochondrial Vesicle Membranes

F1FO ATPase Vesicle Preparation and Technique for Performing Patch Clamp Recordings of Submitochondrial Vesicle Membranes

<sub&gt; 1</sub&gt; F<sub&gt; O</sub&gt; ATPase Vesicle Voorbereiding en Techniek for Performing Patch Clamp Recordings van Submitochondrial Vesicle Membranen

Mitochondria are involved in many important cellular  functions including metabolism, survival1, development and, calcium signaling2. Two of the most ...

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

Isolatie van sensorische neuronen van<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Voor Patch Clamp Recordings van Glutamaterge Currents

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable  history as a model of nervous system function, with particular significance in  studies ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

Patch Clamp Recordings van embryonale zebravis Mauthner Cells

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons

Whole-cell patch-clamp opnamen van Morphologically- en neurochemisch-geïdentificeerde hippocampus Interneurons

GABAergic inhibitory interneurons play a central role within neuronal circuits of the brain. Interneurons comprise a small subset of the neuronal ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Elektrofysiologische en morfologische analyse van neuronale Microschake in Acute Brain Slices Met behulp Paired Patch-Clamp Recordings

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...